Técnicas para visualización de parásitos mediante microscopia

CAPÍTULO 43

PARASITOLOGÍA MÉDICA, 4ª. ED. MCGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES / Todos los derechos reservados

Figura 43-1. Visualización de quistes y trofozoítos de Giardia lamblia mediante los microscopios optofluídico (OFM) y convencional. A) Comparación del tamaño del chip en el que se colocan las muestras con el de una moneda. B) Comparación de la morfología y

el tamaño de quistes detectados por el OFM (a-d) con los obtenidos mediante microscopia convencional bajo un objetivo 20X (e-f). (Continúa)

PARASITOLOGÍA MÉDICA, 4ª. ED. MCGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES / Todos los derechos reservados

Figura 43-1. Visualización de quistes y trofozoítos de Giardia lamblia mediante los microscopios optofluídico (OFM) y convencional. C) Comparación de la morfología y el

tamaño de trofozoítos detectados por el OFM (g-j) con los obtenidos mediante microscopia convencional bajo un objetivo 20X (k-l). (Cortesía del Dr. Lap Man Lee.)

PARASITOLOGÍA MÉDICA, 4ª. ED. MCGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES / Todos los derechos reservados

Figura 43-2. Expresión de proteínas fluorescentes en parásitos de Trypanosoma cruzi transfectados. Se muestran parásitos que expresan a la proteína verde fluorescente (A-C) y a los que expresan a la

proteína roja fluorescente (D-F). Se observan células VERO infectadas con los parásitos transfectados con GFP (en verde; B y C) y con RFP (en rojo; E y F). Los núcleos están teñidos de azul con DAPI.

En C y F se muestra la combinación de fluorescencia y dic. Tomada de Pires SF et al. (2008).

PARASITOLOGÍA MÉDICA, 4ª. ED. MCGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES / Todos los derechos reservados

Figura 43-3. Expresión de GFP en parásitos de Leishmania panamensis transfectados. Los parásitos que expresan a la proteína fluorescente y observados por MC se muestran en B, D, F y H. Los mismos, observados por DIC, se muestran en A, C, E y G. Tomada de Varela MRE et al. (2009).

PARASITOLOGÍA MÉDICA, 4ª. ED. MCGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES / Todos los derechos reservados

Figura 43-4. Observaciones por diferentes tipos de microscopia y reconstrucción 3D de Trypanosoma cruzi. A) Colocalización por MC de tres tipos de marcaje

fluorescente: DAPI (azul); fluoresceína (verde) y rodhamina (roja).

PARASITOLOGÍA MÉDICA, 4ª. ED. MCGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES / Todos los derechos reservados

Figura 43-4. Observaciones por diferentes tipos de microscopia y reconstrucción 3D de Trypanosoma cruzi. B) Identificación de las estructuras

marcadas fluorescentemente mediante microscopia electrónica de transmisión con ensayos de inmunooro.

PARASITOLOGÍA MÉDICA, 4ª. ED. MCGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES / Todos los derechos reservados

Figura 43-4. Observaciones por diferentes tipos de microscopia y reconstrucción 3D de Trypanosoma cruzi. C) Reconstrucción tridimensional. Las escalas corresponden a 5 y 3.3 mm. Tomada de Sant’Anna C et al. (2008).

PARASITOLOGÍA MÉDICA, 4ª. ED. MCGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES / Todos los derechos reservados

Figura 43-5. Principio de la microscopia de epifluorescencia con tecnología de LED. Tomada de Jones D et al. (2007).

PARASITOLOGÍA MÉDICA, 4ª. ED. MCGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES / Todos los derechos reservados

Figura 43-6. Reconstrucción tridimensional de tomografía crioelectrónica del sistema flagelar de Trypanosoma brucei. En A se muestra la reconstrucción tridimensional en la que se esquematizan los diferentes planos en Z en que se sitúan las observaciones de

microscopia presentadas en la imagen B. Tomada de Lacomble S et al. (2009).

PARASITOLOGÍA MÉDICA, 4ª. ED. MCGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES / Todos los derechos reservados

Figura 43-7. Imágenes de MFA y sus correspondientes imágenes teñidas con Giemsa de eritrocitos infectados por Plasmodium falciparum en distintas etapas de infección. Se observa la superficie de los eritrocitos mediante MFA y la correlación con la progresión de la infección, de acuerdo con las imágenes de tinción con Giemsa anexas. Tomada de Li A et al. (2006).

PARASITOLOGÍA MÉDICA, 4ª. ED. MCGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES / Todos los derechos reservados

Figura 43-8. Cisticercos de Taenia crassiceps ORF. Se presentan tres distintos tipos de observaciones:

A) MEB a bajo aumento.

PARASITOLOGÍA MÉDICA, 4ª. ED. MCGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES / Todos los derechos reservados

Figura 43-8. Cisticercos de Taenia crassiceps ORF. Se presentan tres distintos tipos de observaciones: B) MC con inmunocitoquímica para tres diferentes marcadores fluorescentes localizados en la pared vesicular y la

capa germinal de los cisticercos.

PARASITOLOGÍA MÉDICA, 4ª. ED. MCGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES / Todos los derechos reservados

Figura 43-8. Cisticercos de Taenia crassiceps ORF. Se presentan tres distintos tipos de observaciones: C) Ultraestructura de la superficie de las larvas vistas

por MEB y MET, en donde se observan las microvellosidades (en MET alcanza a observarse parte del tegumento), y por MFA, del ápice de un penacho de cilios de una célula flama (*). Al nivel de MC, las células flama se indican con flechas, en donde los penachos se revelaron con anticuerpos antitubulina conjugados a fluoresceína (verde), mientras que la actina se reveló con faloidina conjugada a

rodamina (roja) y los núcleos con DAPI (azul). Cortesía de QFB América Pérez (MC) y de la Dra. Teresa Fortoul y el Biól. Armando Zepeda (MEB).

PARASITOLOGÍA MÉDICA, 4ª. ED. MCGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES / Todos los derechos reservados

Figura 43-9. Microscopia confocal y reconstrucción 3D de trofozoítos de Giardia intestinalis. A) En las imágenes coloridas obtenidas por MC que se muestran en el lado izquierdo de la figura, se presenta el marcaje fluorescente de tubulina (verde) y de núcleos (azul), y en las imágenes en blanco y negro se muestran los mismos parásitos observados por dic.

PARASITOLOGÍA MÉDICA, 4ª. ED. MCGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES / Todos los derechos reservados

Figura 43-9. Microscopia confocal y reconstrucción 3D de trofozoítos de Giardia intestinalis. B) Reconstrucción en 3D, con el paquete computacional AMIRA, de las

imágenes de los trofozoítos presentados en las imágenes de A. Se mantienen los colores originales; el color rojo sólo se usó para mostrar la reconstrucción del resto del cuerpo

celular que no fue marcado fluorescentemente. Cortesía de Vania Galván Loredo.