รายงานวิ�ชา

เร�อง

“การวิ�เคราะห์�ค�ณภาพ Salbutamol pressurized inhalation (Ventolin®)”

น�าเสนอ

อาจารย� ดร.สวิรรยา บู�รณะผลิ�น

แลิะอาจารย�ประจ�าผ�!ร"วิมสอน

ภาควิ�ชาเภส$ชเคม% คณะเภส$ชศาสตร� มห์าวิ�ทยาลิ$ยมห์�ดลิ

จ$ดท�าโดย

นางสาวิ สโรช�น ส$นต�วิรางก�ร 4903052 PYPY/B

นาย ณ$ฐรณ สายแก!วิ 4903083 PYPY/B

นางสาวิ พ�ช�บูลิ พรรณากรณ� 4903110 PYPY/B

1

นางสาวิ เพ�อนขวิ$ญ น�ตรมร 4903111 PYPY/B

รายงานน%-เป.นส"วินห์น/�งของวิ�ชา การควิบูค�มมาตรฐานยา 1 (PYPC 553)

ประจ�าภาคการศ/กษาต!น ป1การศ/กษา 2553

คณะเภส$ชศาสตร� มห์าวิ�ทยาลิ$ยมห์�ดลิ

ค�าน�าการควบค�มค�ณภาพเภสั�ชภ�ณฑ์� เพ��อให้�ได้�ผลิ�ตภ�ณฑ์�ที่ �ปลิอด้ภ�ยต#อผ$�

บร�โภค ต�องเร��มต�'งแต#การต�'งระบบแลิะว�ธี การตรวจสัอบมาตรฐานของว�ตถุ�ด้�บ (Raw materials) ที่ �จะน0ามาผลิ�ต การตรวจสัอบระห้ว#างการผลิ�ต (In-process control) ก า ร ค ว บ ค� ม ม า ต ร ฐ า น ข อ ง ว� สั ด้� บ ร ร จ� (Packaging) กระบวนการบรรจ�จนกระที่��งยาน�'นออกมาเป1นเภสั�ชภ�ณฑ์�สั0าเร2จร$ป (Finished products) ตามข�อก0าห้นด้-มาตรฐานที่ �ระบ�ในต0ารายา รวมถุ3งการต�ด้ตามตรวจสัอบสัภาพความคงต�ว (Stability) ของเภสั�ชภ�ณฑ์�น�'นๆในระยะเวลิาต#างๆ ผ$�ม บที่บาที่สั0าค�ญในควบค�มค�ณภาพเภสั�ชภ�ณฑ์�ให้�ม ค�ณภาพแลิะความปลิอด้ภ�ยต#อผ$�บร�โภค ค�อ เภสั�ชกรฝ่7ายควบค�มค�ณภาพ ผ$�เป1นห้ลิ�กประก�นค�ณภาพมาตรฐานของยาสั0าห้ร�บโรงงานอ�ตสัาห้กรรมยา

นอกเห้น�อจากการบร�ห้ารระบบ แลิะการว�เคราะห้�ควบค�มค�ณภาพยาแลิ�ว การพ�ฒนาว�ธี การว�เคราะห้�ยาเป1นอ กห้น3�งงานสั0าค�ญที่ �เภสั�ชกรฝ่7ายควบค�มค�ณภาพได้�เข�ามาม บที่บาที่สั0าค�ญ เพ��อที่0าให้�ว�ธี การว�เคราะห้�ยาเห้มาะสัมก�บ

2

สัภาวะแวด้ลิ�อมในการที่0างาน เคร��องม�อ แลิะบ�คลิากรที่ �ม ข�อจ0าก�ด้ โด้ยอาศั�ยข�อม$ลิที่างว�ชาการจากที่�'งต0ารายามาตรฐาน ต0าราที่างว�ชาการ แลิะวารสัารเลิ#มต#างๆ ที่0า ให้�ผลิว�เคราะห้�แสัด้งถุ3งปร�มาณต�วยา สัามารถุสั�� อถุ3งค�ณภาพมาตรฐานยาอย#างแที่�จร�ง

รายงานเลิ#มน 'ได้�น0าเสันอการว�เคราะห้� Salbutamol pressurized

inhalation (Ventolin®) ซึ่3�งเป1นยาในร$ปแบบยาพ#นสั$ด้ (Inhalers) โด้ยม รายลิะเอ ยด้เก �ยวก�บการพ�ฒนาว�ธี ว�เคราะห้� ผลิว�เคราะห้� แลิะการว�จารณ�ผลิว�เคราะห้� ให้�เป1นแนวที่างต�วอย#างสั0าห้ร�บน�กศั3กษาร� #นต#อไป ในการพ�ฒนาว�ธี ว�เคราะห้�ยาร$ปแบบต#างๆ โด้ยใช�ว�ธี ว�เคราะห้�แลิะเคร��องม�อที่ �เห้มาะสัม เพ��อให้�ผลิว�เคราะห้�สัามารถุแสัด้งถุ3งปร�มาณต�วยา อ�นบ#งบอกถุ3งค�ณภาพมาตรฐานยาได้�อย#างแที่�จร�ง

ห้ากรายงานน 'ม ข�อผ�ด้พลิาด้ประการ คณะผ$�จ�ด้ที่0าขออภ�ย ณ ที่ �น 'ด้�วย

คณะผ�!จ$ดท�ารายงาน

สโรช�น, ณ$ฐรณ, พ�ช�บูลิ,

เพ�อนขวิ$ญ

สารบู$ญค0าน0า 2

Assay 4

อ�ปกรณ�แลิะสัารเคม 4

Standard preparation5

3

Sample preparation 6

Procedure 7

Results and Discussion8

ประโยชน�ที่ �ได้�ร�บ 15

ข�อเสันอแนะ 15

ภาคผนวก 16

Monograph of Salbutamol Pressurised Inhalation, BP 2010 16

Sampling apparatus for pressurized metered-dose inhalers 22

HPLC chromatogram23

Assay

อ�ปกรณ�แลิะสารเคม%

สารเคม% Standard Salbutamol BP

4

Ammonium acetate

Methanol (MeOH), HPLC grade

Water, DI type

อ�ปกรณ�

เคร��อง HPLC

Transferring pipette ขนาด้ 10, 25 mL

Volumetric flask

ขนาด้ 50, 250 mL

Mobile phase glass tank

Beaker ขนาด้ 50, 100, 250, 1000 mL

Cylinder ขนาด้ 50, 100 mL

Glass funnel

Watch glass

Dropper

Vacuum filter

Sonicator

5

Standard preparation

Stock solution: เตร ยมที่ �ความเข�มข�น 0.5 mg/mL

1.) ช��ง Standard salbutamol BP 125 mg ลิะลิายด้�วย Mobile phase (0.1% W/V Ammonium acetate:MeOH = 20:80) แลิ�วปร�บปร�มาตรจนครบ 250

mL ใน Volumetric flask จะได้�สัารลิะลิายที่ �ม ความเข�มข�น 2.5mg/mL

2.) ป<เปตสัารลิะลิายจาก 1.) มา 10 mL ปร�บปร�มาตรจนครบ 50 mL ใน Volumetric flask จะได้� Stock solution ความเข�มข�น 0.5 mg/mL

Standard solution: เตร ยมที่ �ความเข�มข�นด้�งต#อไปน '

1.) Standard salbutamol 0.020 mg/mLPipette stock solution 2 mL ปร�บปร�มาตรจนครบ 50

mL ใน volumetric flask2.) Standard salbutamol 0.015 mg/mL

Pipette stock solution 1.5 mL ปร�บปร�มาตรจนครบ 50mL ใน volumetric flask

3.) Standard salbutamol 0.010 mg/mL Pipette stock solution 1 mL ปร�บปร�มาตรจนครบ 50mL ใน volumetric flask

4.) Standard salbutamol 0.005 mg/mL Pipette stock solution 0.5 mL ปร�บปร�มาตรจนครบ 50mL ใน volumetric flask

Sample preparation: เ ต ร ย ม ใ ห้� ไ ด้� ค ว า ม เ ข� ม ข� น ข อ ง Salbutamol 0.01 mg/mL จ0านวน 4 Samples

Step 1

Step 1

Step 2

Step 2

Step 3

Step 3

ผสม

Methanol 44 mL

น�-า 44 mL

0.1% w/v Ammonium

acetate 56 mL

ลิงใน Beaker

250 mL

ผสม

Methanol 44 mL

น�-า 44 mL

0.1% w/v Ammonium

acetate 56 mL

ลิงใน Beaker

250 mL

พ"นยาลิงไป 25

คร$-ง

(ภาพท%� 1)

พ"นยาลิงไป 25

คร$-ง

(ภาพท%� 1)

แลิ!วิปร$บูปร�มาตรด!วิยน�-าจนครบู 250 ml

ในvolumetric

flask

แลิ!วิปร$บูปร�มาตรด!วิยน�-าจนครบู 250 ml

ในvolumetric

flask

ภาพท%� 1: ว�ธี การพ#นยาต�วอย#างในบ กเกอร�

Procedure

วิ�เคราะห์�ด!วิย HPLC method

Mobile phase: 0.1% W/V Ammonium acetate: MeOH = 20:80

Column: C-18 reversed phase column ความยาว 20 cm

Standard curve เปร%ยบูเท%ยบู Peak area ก$บูควิามเข!มข!นข อ ง Standard: ฉี ด้ Standard solution ผ# า น HPLC โ ด้ ย duplicate ที่�กความเข�มข�น แลิ�วห้าค#าเฉีลิ �ยของ Peak area ที่ �แต#ลิะความเข�มข�น น0าไป plot Standard curve, ค0านวณสัมการ Linear

regression แลิะค#า Relation coefficient

Assay: ฉี ด้แต#ลิะ Sample ผ#าน HPLC โด้ย duplicate ที่�กความเข�มข�น แลิ�วห้าค#าเฉีลิ �ยของ Peak area ที่ �แต#ลิะความเข�มข�น น0าค#าเฉีลิ �ย Peak area ไปค0านวณในสัมการ Linear regression เพ��อห้าปร�มาณยาต#อการพ#นห้น3�งคร�'ง

Results and Discussion

ผลิการทดลิองคร$-งท%� 1

Standard

solution (mg/mL)

Potency

99.24%

Retention

time

Peak area

Average peak area

0.005 0.0054.29

4.29

38980

3964439312

0.010 0.0104.30

4.29

79029

7856878798.5

0.015 0.0154.29

4.29

115431

120507117969

0.020 0.0204.29

4.29

152328

151541151934.5

No. of Sample

Retention time

Peak area Average peak area

Sample I4.30 244278

2456804.30 247082

Sample II4.30 217782

2180114.30 218240

Sample III4.30 130231

1268954.30 123559

Sample IV4.30 86066

872224.30 88378

สร�ปผลิการทดลิองคร$-งท%� 1

จากผลิการที่ด้ลิองข�างต�น พ�จารณาจาก Retention time พบว#าที่�ก Sample ม Major peak ณ เวลิา 4.30 นาที่ ซึ่3�งม ค#า Retention time

ใกลิ�เค ยงก�บ Standard Salbutamol โด้ย Major peak ของ Standard

Salbutamol ม ค# า Retention time อย$#ที่ � 4.29 เป1นการย�นย�นว#าที่�ก

Calibration curve of standard salbutamol

39312

78798.5

117969

151934.5

y = 7540760x + 2744R2 = 0.9988

0

20000

40000

60000

80000

100000

120000

140000

160000

180000

0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025Concentration (mg/mL)

Pea

k ar

ea

Sample ม Salbutamol ในต�วอย#างที่ �น0ามาที่ด้สัอบ เม��อพ�จารณาที่ � Peak

area พบว#า ใน Sample เด้ ยวก�นม peak area ใกลิ� เค ยงก�น แต# เม�� อพ�จารณาเที่ ยบระห้ว#าง Sample พบว#า Peak area ม ค#าลิด้ลิงเร��อยๆ เป1นไปได้�ว#าที่�กคร�'งที่ �ม การพ#นยาออก ต�วยาในขวด้ลิด้ลิง แลิะถุ$กข�บด้�นออกมาจากขวด้ได้�ลิด้ลิงที่�กคร�'งที่ �ใช�

ป4ญห์าท%� เก�ดข/-น: Ventolin® เป1นยาพ#นร$ปแบบ Metered-dose

inhalers ที่างบร�ษ�ที่ได้�ออกแบบให้�ผลิ�ตภ�ณฑ์�น 'สัามารถุข�บด้�นต�วยาสั0าค�ญให้�ออกมาเที่#าก�นที่�กคร�'งที่ �พ#น ซึ่3�งไม#สัอด้คลิ�องก�บผลิการที่ด้ลิอง เพ��อห้าสัาเห้ต�ของป>ญห้าที่ �เก�ด้ข3'น จ3งม การที่บที่วนข�'นตอนการที่ด้ลิอง พบว#าข�'นตอน Carry out

sample อาจก#อเก�ด้ป>ญห้า เน��องจากม การถุอด้ขวด้ยาออกมาจากกระบอกพลิาสัต�ก ห้ลิ�งจากที่0าการพ#นยาลิงใน Solvent แลิะรอเวลิา 5 ว�นาที่ ก#อนพ#น Sample คร�'งต#อไป จากข�อม$ลิที่ �ได้�ศั3กษาพบว#า การถุอด้ขวด้ยาพ#นออกจากกระบอกพลิาสัต�ก อาจที่0าให้�ก?าซึ่ภายในขวด้ยาร��วออกมา ที่0าให้�ความด้�นภายในขวด้ยาลิด้ลิง สั#งผลิต#อแรงข�บด้�นยาที่ �ลิด้ลิง เม�� อพ#นยาออกมา จ3งได้�ต�วยาสั0าค�ญลิด้ลิง สัอด้คลิ�องก�บ Peak area ที่ �ลิด้ลิง

การแก!ไขป4ญห์า : จากป>ญห้าที่ �เก�ด้ข3'น เน��องจากความด้�นภายในขวด้ไม#เห้มาะสัม จ3งข�บด้�นยาออกมาได้�ลิด้ลิง จ3งเปลิ �ยนว�ธี การ Carry out sample

โด้ยการพ#นยาแต#ลิะคร�'งจะไม#ม การถุอด้ขวด้ยาพ#นออกจากกระบอกพลิาสัต�ก แลิะเว�นระยะเวลิาการพ#นห้#างก�นประมาณ 30 ว�นาที่ จ3งที่0าการที่ด้ลิองซึ่0'า

ผลิการทดลิองคร$-งท%� 2

No. of Sample

Peak area Average Peak Area

mcg/mL mcg/puff

Sample I134532

134645.5 17 175134759

Sample II97370

96726.5 12 12596083

Sample III

121913123393 16 160

124873

สร�ปผลิการทดลิองคร$-งท%� 2

จากการที่ด้ลิองพบว#า Peak area ของ Sample 1 แลิะ Sample 3 ม ค#าใกลิ�เค ยงก�น ซึ่3�งเป1นการย�นย�นได้�ว#า เม��อใช�ยาพ#นไปแลิ�ว ที่�กๆคร�'งยาที่ �พ#นออกมาควรม ขนาด้ของต�วยาสั0าค�ญเที่#าก�น แต#เม��อพ�จารณาที่�'ง 3 sample

ร#วมก�น พบว#า Precision ในการ Carry out sample ไม#ด้ น�ก แลิะเม��อค0านวณ Average peak area เที่ ยบก�บ standard curve แลิะค0านวณปร�มาณเป1น mcg/puff โด้ย พบว#า ปร�มาณยาที่ �ว�เคราะห้�ได้�ม เก�นกว#าที่ �ระบ�ไว�บนฉีลิาก โด้ยบนฉีลิากระบ�ว#าในการพ#น 1 คร�'งจะม ต�วยา salbutamol 100 mcg/puff

ป4ญห์าท%� เก�ดข/-น : เน�� องจากในคร�'งแรกผ$�ที่0า การที่ด้ลิองเตร ยมเพ ยง 2

sample เม�� อโครมาโตแกรมที่ �ได้�ไม#เพ ยงพอที่ �จะสัร�ปผลิ จ3งต�องม การเตร ยม sample เพ��ม แต#ห้ลิ�งจากเตร ยม sample ที่ � 2 เสัร2จแลิ�ว ม การด้3งขวด้ออกจากกระบอกพลิาสัต�กถุ3ง 2 คร�'ง แต#วางที่�'งไว�เป1นเวลิาค#อนข�างนานก#อนจะเตร ยม sample ที่ � 3 เม��อผลิการที่ด้ลิองของ sample ที่ � 3 ออกมาในแนวโน�มที่ �ด้ ข3'น ที่0าให้�เราพบว#า ในความเป1นจร�งแลิ�วเราสัามารถุถุอด้ขวด้ยาพ#นออกจากกระบอกพลิาสัต�กเพ��อที่0าความสัะอาด้ได้�ตามที่ �บร�ษ�ที่แนะน0า แต#ต�องวางที่�'งไว�สั�กคร$ #ก#อนน0ามาใช�งาน เพ��อให้�ระบบความด้�นภายในขวด้พ#นยาอย$#ในสัมด้�ลิ แลิะม แรงด้�นเพ ยงพอที่ �จะด้�นยาออกมา

จากผลิการที่ด้ลิองที่�'ง 2 คร�'ง จ3งที่0า ให้�เราสัามารถุสัร�ปได้�ว#า ความด้�นภายในขวด้พ#นยาม ความสั0าค�ญต#อปร�มาณยาที่ �พ#นออกมาแต#ลิะคร�'ง จ3งเป1นเห้ต�ผลิว#าที่0าไมผ$�ป7วยที่ �พ#นยา 2 คร�'ง จ3งต�องพ#นห้#างก�นประมาณ 5 นาที่ น��นค�อเพ��อให้�ระบบความด้�นภายในขวด้ยาพ#นเก�ด้สัมด้�ลิ แลิะม แรงด้�นเพ ยงพอที่ �จะข�บด้�นยาออกมาในปร�มาณที่ �ก0าห้นด้ แลิะการถุอด้ขวด้ออกจากกระบอกพลิาสัต�ก

เพ��อลิ�างที่0าความสัะอาด้สัามารถุที่0าได้� แต#เม��อที่0าความสัะอาด้แลิ�ว ไม#ควรน0ามาใช�ที่�นที่ ต�องรอเวลิาเพ��อให้�ระบบความด้�นภายในขวด้เข�าสั$#สัมด้�ลิ

System suitability

ก#อนที่0าการว�เคราะห้� ต�องม การตรวจสัอบสัภาพความพร�อมของเคร��อง HPLC แลิะระบบที่ �ใช�งาน เพ��อให้�ผลิการว�เคราะห้�ถุ$กต�อง แม#นย0า เป1นที่ �ยอมร�บได้� สั��งที่ �ตรวจสัอบม ด้�งน '

- Plate count or Column efficiency (N) เป1นการว�ด้ประสั�ที่ธี�ภาพของคอลิ�มน�ในการว�เคราะห้� คอลิ�มน�ที่ �ใช�งานได้�ด้ จะม ค#า N สั$งกว#า 2,000 จะให้�พ คที่ �ม ร$ปร#างแห้ลิมสั$ง

พ�จารณา Chromatogram จากการฉี ด้สัารคร�'งที่ � 1 ของ Sample ที่ � 1 ในการที่ด้สัอบคร�'งที่ � 1

h = 5.3 cm จะได้� ½h = 2.7 cm สัามารถุว�ด้ค#า W1/2 = 0.3 cm

แลิะ Ve = 8.3 cm แลิ�วค0านวณได้�ค#า N เที่#าก�บ 4,200 แสัด้งว#าคอลิ�มน�ย�งม ประสั�ที่ธี�ภาพในการว�เคราะห้�ต�วยา

ห้ากใช�สั$ตรค0านวณค#า N ของ USP ด้�งสัมการ

พ#นยา

แลิ�วปร�บ

Wb = 0.65 cm จะได้�ค#า N = 2,600 เป1นการย�นย�นผลิว#าคอลิ�มน�ย�งคงสัามารถุใช�ว�เคราะห้�สัารได้�

- Tailing factor (T) เป1นค#าที่ �ว�ด้ห้ร�อบอกถุ3งความสัมมาตรของพ ค พ คที่ �สัมมาตรควรม ค#า T เที่#าก�บ 1 ถุ�ามากกว#า 1 พ คจะม ลิ�กษณะเป1นห้าง ที่0าให้�ผลิว�เคราะห้�ขาด้ความน#าเช��อถุ�อ ถุ�า T สั$งกว#า 1.5 แสัด้งว#าคอลิ�มน�ม ประสั�ที่ธี�ภาพต0�า

พ�จารณา Chromatogram จากการฉี ด้สัารคร�'งที่ � 1 ของ Sample ที่ � 1 ในการที่ด้สัอบคร�'งที่ � 1

h = 5.3 cm แลิ�ว 1/20 h = 0.3 cm สัามารถุว�ด้ได้� a = 0.3 cm

แลิะ b = 0.5 cm สัามารถุค0านวณได้�ค#า T เที่#าก�บ 1.3 แสัด้งว#าพ คไม#ม สัมมาตร สัามารถุย�นย�นผลิจากการสั�งเกต Chromatogram พบว#าพ คม ลิ�กษณะเบ�ไปที่างซึ่�าย Chromatogram อ��นๆก2พบลิ�กษณะพ คเบ�ซึ่�ายเช#นก�น แสัด้งว#าระบบ Mobile phase ซึ่3�งอ�างอ�งตาม BP 2010 (0.1%

Ammonium acetate: MeOH = 20:80) ย�งไม#เห้มาะสัมต#อการว�เคราะห้�ด้�วยคอลิ�มน� C-18

- Resolution (R) เป1นค#าที่ �บอกให้�ที่ราบว#าพ คสัองพ ค ที่ �อย$#ต�ด้ก�นแยกออกจากก�นได้�ด้ เพ ยงใด้ พ คที่ �แยกสัมบ$รณ�ม ค#า R สั$งกว#า 1.5

เน��องจากสัารที่ �ว�เคราะห้�ม เฉีพาะ Salbutamol พ คที่ �พบใน Chromatogram จะม เฉีพาะพ คของ Salbutamol ด้�งน�'นจ3งไม#ม การค0านวณค#า Resolution ในการว�เคราะห้�

- Capacity factor (k’) ใช�พ�จารณาระยะเวลิาที่ �สัารอย$#ใน Column

เที่ ยบก�บ Mobile phase โด้ยเที่ ยบค#า Retention time ของที่�'งสัารว�เคราะห้�ก�บ Mobile phase ค#าที่ �เห้มาะสัมควรอย$#ระห้ว#าง 1 -10

พ�จารณา Chromatogram จากการฉี ด้สัารคร�'งที่ � 1 ของ Sample ที่ � 1 ในการที่ด้สัอบคร�'งที่ � 1

tR = 4.308 min แลิะ tm = 2.401 min จะได้�ค#า k’ = (4.308 –

2.401) / (2.401) = 0.79 แสัด้งว#าระบบ Mobile phase ย�งไม#เห้มาะสัมในการว�เคราะห้� Salbutamol เที่#าที่ �ควร เน��องจากพ คของ Mobile

phase ก�บ Salbutamol ย�งไม#แยกห้#างจากก�นมากน�ก

- Selectivity factor (α) เป1นอ�ตราสั#วนของค#า k’ ของสัารสัองชน�ด้ ใช�บอกระยะห้#างระห้ว#างพ คของสัารที่�'งสัองชน�ด้ ค#า α ที่ �เห้มาะสัมควรอย$#ระห้ว#าง 1.5 – 4

.ในกรณ เด้ ยวก�นก�บ Resolution สัารที่ �ว�เคราะห้�ม เฉีพาะ Salbutamol

พ คที่ �พบใน Chromatogram จะม เฉีพาะพ คของ Salbutamol ด้�งน�'นจ3งไม#ม การค0านวณค#า α ในการว�เคราะห้�

- Relative standard deviation (RSD) เป1นการตรวจสัอบความแม#นย0า (Precision) ของเคร��อง HPLC โด้ยฉี ด้สัารมาตรฐานที่ �ใช�ว�เคราะห้�ซึ่0'าๆก�น 5 คร�'ง แลิ�วค0านวณค#า RSD ค#าที่ �ได้�ต�องไม#เก�น 2% ถุ�าเก�นต�องค0านวณค#าจากการฉี ด้ 6 คร�'ง

ในการว�ด้ RSD เราใช�ผลิการฉี ด้ Sample ที่ � 1 ในการที่ด้สัอบคร�'งที่ � 2

จ0านวน 5 คร�'ง เพ��อว�เคราะห้�ผลิ RSD Mean of peak area เที่#าก�บ 133,577.6 แลิะค#า SD เที่#าก�บ 2,048.79 สัามารถุค0านวณค#า RSD ได้�เที่#าก�บ 1.53 แสัด้ง HPLC ม ความแม#นย0าที่ �ด้ ในการว�เคราะห้�สัาร

ประโยชน�ท%�ได!ร$บู

เร ยนร$ �ห้ลิ�กการพ�ฒนาว�ธี ว�เคราะห้�ยาจากการปฏิ�บ�ต�จร�งในห้�องที่ด้ลิอง

ฝ่Aกห้ลิ�กการค�ด้แลิะแก�ไขป>ญห้าเช�งว�ที่ยาศัาสัตร�สั0าห้ร�บการว�เคราะห้�ยาในร$ปแบบต#างๆ

เร ยนร$ �แลิะน0าห้ลิ�กการสั�#มต�วอย#างมาใช�ในการเตร ยมต�วอย#างว�เคราะห้�

%RSD =

(SD/Mean of Peak area) X 100

ข!อเสนอแนะ

นอกจากว�ธี ว�เคราะห้�แลิะชน�ด้ของต�วอย#าง การเตร ยมต�วอย#างเป1นอ กสั��งสั0าค�ญที่ �ม อ�ที่ธี�พลิต#อผลิว�เคราะห้�ยา เน��องจากต�วอย#างอย$#ในร$ปของยาสั$ด้พ#น ที่ �ใช�แรงด้�นของก?าซึ่เห้ลิวภายในขวด้ยา ข�บด้�นยาที่ �พ#นออกมาแต#ลิะคร�'ง ในการพ#นแต#ลิะคร�'ง ต�องเว�นระยะห้#างของเวลิาการพ#น เพ��อให้�ความด้�นภายในขวด้ยากลิ�บมาสั$#ปกต� เพ�� อให้�มาปร�มาณยาที่ �ถุ$กพ#นออกมาเที่#าๆก�น โด้ยการเตร ยมห้น3�งต�วอย#าง จะต�องพ#นยา 25 คร�'ง น0าไปเตร ยมเป1นสัารลิะลิายให้�ได้�ความเข�มข�นตามต�องการ การพ#นยาในบ กเกอร�ที่ �ม สัารลิะลิาย Mobile phase แลิะป<ด้ด้�วยอลิ$ม�เน ยม ฟอยลิ� ม ว�ตถุ�ประสังค�เพ��อลิะลิายอน�ภาคยาแลิะก?าซึ่ที่ �พ#น แต#ที่0าให้�เก�ด้กระฉีอกของสัารลิะลิาย เน�� องจากแรงด้�นก?าซึ่ภายในขวด้ ด้�งน�'นสั��งที่ �ต�องพ�จารณาในการเตร ยมต�วอย#าง ค�อ ความด้�นภายในขวด้ห้ลิ�งจากพ#นยาแต#ลิะคร�'ง แลิะแต#ลิะต�วอย#าง น�กว�เคราะห้�ต�องพ�จารณาเวลิาที่ �ให้�ความด้�นก?าซึ่เห้ลิวในขวด้เข�าสั$#สัมด้�ลิ แลิะวางแผนการเตร ยมต�วอย#างให้ม# เพ��อลิด้การสั$ญเสั ยต�วยาสั0าค�ญที่ �ออกมาจากชวด้ยาพ#น แลิะที่0าให้�ผลิว�เคราะห้�ม ความแม#นย0า แลิะตรวจซึ่0'าได้�

ภาคผนวิก

Monograph of Salbutamol Pressurized Inhalation from BP

2010

Salbutamol Pressurized Inhalation

Action and useBeta2-adrenoceptor agonist; bronchodilator.

Definition Salbutamol Pressurized Inhalation is a suspension of either Salbutamol or Salbutamol Sulphate in a suitable liquid in a suitable pressurized container. The pressurized inhalation complies with the requirements stated under Preparations for Inhalation and with the following requirements.

Content of salbutamol, C13H21NO3

80.0 to 120.0% of the amount stated to be delivered by actuation of the valve.

Identification

A.  The infrared absorption spectrum, Appendix II A, in the range 1650  to 400  cm-1 is concordant with the reference spectrum of either salbutamol (RS 314) or salbutamol sulphate (RS 315), as appropriate. Examine the substance as dispersion in potassium bromide prepared in the following manner. Discharge the inhaler a sufficient number of times into a mortar to obtain 2 mg of Salbutamol, grind the residue thoroughly with 0.1 g of potassium bromide, add a further 0.2 g of potassium bromide and mix thoroughly.

B.  In the test for related substances, the principal peak in the chromatogram obtained with solution (2) corresponds

to the peak due to salbutamol in the chromatogram obtained with solution (3).

Tests

Related substances

Carry out the method for liquid chromatography, Appendix III D, using the following solutions.

For pressurized inhalations containing Salbutamol use the following solution as solution (1). Discharge the inhaler a sufficient number of times into a small, dry beaker to obtain 5 mg of Salbutamol and dissolve the residue in 10 ml of the mobile phase; mix with the aid of ultrasound until the solution is clear.

For pressurized inhalations containing Salbutamol Sulphate use the following solution as solution (1). Discharge the inhaler a sufficient number of times into a small, dry beaker to obtain the equivalent of 5 mg of salbutamol and dissolve the residue in 10 ml of the mobile phase; mix with the aid of ultrasound until the solution is clear.

For solution (2) dilute 1 volume of solution (1) to 100 volumes with the mobile phase. Solution (3) contains 0.0004% w/v of salbutamol impurity B EPCRS and 0.0005% w/v of salbutamol sulphate EPCRS in the mobile phase. For solution (1) allow the chromatography to proceed for 25 times the retention time of salbutamol (retention time of salbutamol, about 1.9 minutes).

The chromatographic procedure may be carried out using (a) a stainless steel column (15 cm × 3.9 mm) packed with spherical end-capped octylsilyl silica gel for

chromatography (5 µm) with a specific surface area of 335 m2 per g, a pore size of 10 nm and a carbon loading of 11.7% (Waters Symmetry C8 is suitable), (b) as the mobile phase with a flow rate of 1 ml per minute a mixture of 22 volumes of acetonitrile and 78 volumes of a solution containing 0.287% w/v of sodium heptanesulphonate and 0.25% w/v of potassium dihydrogen orthophosphate adjusted to pH 3.65 with 2M orthophosphoric acid and (c) a detection wavelength of 220 nm.

The test is not valid unless, in the chromatogram obtained with solution (3), the resolution factor between the two principal peaks is at least 3.0.

In the chromatogram obtained with solution (1) the area of any secondary peak is not greater than half the area of the principal peak in the chromatogram obtained with solution (2) (0.5%) and the sum of the areas of any such peaks is not greater than the area of the principal peak in the chromatogram obtained with solution (2) (1%).

Salbutamol ketone

Carry out the method for liquid chromatography, Appendix III D, using the following solutions. For solution (1) dilute a quantity of solution (1) prepared above in the test for related substances, with sufficient water to produce a solution containing the equivalent of 0.050% w/v of salbutamol. Solution (2) contains 0.00025% w/v of salbutamol ketone impurity BPCRS in water.

The chromatographic procedure may be carried out using (a) a stainless steel column (25 cm × 4.6 mm) packed with end-capped octylsilyl silica gel for chromatography (5 µm)

(Hypersil BDS C8 is suitable) maintained at 30°, (b) as the mobile phase with a flow rate of 1 ml per minute the changing proportions of mobile phases A and B described below and (c) a detection wavelength of 276 nm.

Mobile phase A a mixture of 1.5 volumes of propan-2-ol and 98.5 volumes of 0.1m ammonium acetate adjusted to pH 4.5 with glacial acetic acid.

Mobile phase B propan-2-ol.

In the chromatogram obtained with solution (1) the area of any peak corresponding to salbutamol ketone is not greater than the area of the principal peak in the chromatogram obtained with solution (2) (0.5%).

Deposition of the emitted dose

Carry out the test for aerodynamic assessment of fine particles, Appendix XII C7, using Apparatus A but determining the content of active ingredient as described below.

For pressurized inhalations containing Salbutamol use 7 ml of methanol in the upper impingement chamber and 30 ml of methanol in the lower impingement chamber. Use methanol to wash the coupling tube, E, and transfer the combined solution and washings in the lower impingement chamber to a 100  ml graduated flask containing 22.5  ml of a 0.1% w/v solution of ammonium acetate, rinsing the

chamber with methanol, and dilute the combined solution and washings to 100  ml with methanol.

For pressurized inhalations containing Salbutamol Sulphate use 7 ml of water in the upper impingement chamber and 30 ml of water in the lower impingement chamber. Use a mixture of equal volumes of methanol and water to wash the coupling tube, E, and transfer the combined solution and washings in the lower impingement chamber to a 100  ml graduated flask containing 22.5  ml of a 0.1% w/v solution of ammonium acetate, rinsing the chamber with a mixture of equal volumes of methanol and water, and dilute the combined solution and washings to 100  ml with water.

Carry out the method for liquid chromatography, Appendix III D, using the following solutions. Solution (1) contains 0.0006% w/v of 2-tert-butylamino-1-(4-hydroxy-3-methylphenyl) ethanol sulphate BPCRS and 0.0005% w/v of salbutamol BPCRS in the mobile phase. Solution (2) is a 0.0005% w/v solution of salbutamol BPCRS in the mobile phase. For solution (3) use the diluted solution from the lower impingement chamber.

The chromatographic procedure may be carried out using (a) a stainless steel column (10  cm × 5  mm) packed with octadecylsilyl silica gel for chromatography (5 µm) (Spherisorb ODS 1 is suitable), (b) a mixture of 225  volumes of a 0.1% w/v solution of ammonium acetate and 800  volumes of methanol as the mobile phase with a flow rate of 2  ml per minute and (c) a detection wavelength of 276  nm.

The test is not valid unless the resolution factor between the two principal peaks in the chromatogram obtained with

solution (1) is at least 1.5.

Calculate the amount of salbutamol, C13H21NO3, delivered to the lower impingement chamber per actuation of the valve using the declared content of C13H21NO3 in salbutamol BPCRS. Not less than 35% of the average amount of salbutamol delivered per actuation of the valve, calculated as the average of the three results determined in the Assay, is deposited in the lower impingement chamber.

Assay

Determine the content of active ingredient delivered by the first 10 successive combined actuations of the valve after priming.

For pressurized inhalations containing Salbutamol carry out the procedure for Content of active ingredient delivered by actuation of the valve described under Pressurized Inhalations, beginning at the words 'Remove the pressurized container from the actuator…' and ending at the words '… to the volume specified in the monograph', using 35  ml of methanol in the vessel. Add 22.5 ml of a 0.1% w/v solution of ammonium acetate to the combined solution and washings obtained from the set of 10 combined actuations and dilute to 100 ml with methanol (solution A).

For pressurized inhalations containing Salbutamol Sulphate carry out the procedure for Content of active ingredient delivered by actuation of the valve described under Pressurized Inhalations, beginning at the words 'Remove the pressurized container from the actuator…' and ending at the words '… to the volume specified in the monograph', using 35  ml of a mixture of equal volumes of methanol and water

in the vessel. Add 22.5 ml of a 0.1% w/v solution of ammonium

acetate to the combined solution and washings obtained from the set of 10 combined actuations and dilute to 100 ml with water (solution A).

Determine the amount of active ingredient in the 10 combined actuations using the following method of analysis. Carry out the method for liquid chromatography, Appendix III D, using the following solutions. Solution (1) contains 0.0012% w/v of 2-tert-butylamino-1-(4-hydroxy-3-methylphenyl) ethanol sulphate BPCRS and 0.001% w/v of salbutamol BPCRS in the mobile phase. Solution (2) contains 0.001% w/v of salbutamol BPCRS in the mobile phase. For solution (3) use solution A.

The chromatographic conditions described under Deposition of the emitted dose may be used.

The test is not valid unless the resolution factor between the two principal peaks in the chromatogram obtained with solution (1) is at least 1.5.

Calculate the average content of C13H21NO3 delivered by a single actuation of the valve using the declared content of C13H21NO3 in salbutamol BPCRS.

Determine the content of active ingredient a second and a third time by repeating the procedure on the middle 10 and on the last 10 successive combined actuations of the valve, as estimated from the number of deliveries available from the container as stated on the label. For each of the three determinations the average content of C13H21NO3 delivered by a single actuation of the valve is within the limits stated under Content of salbutamol.

Labelling

The label on the container states (1) whether the preparation contains Salbutamol or Salbutamol Sulphate; (2) where applicable, that the preparation does not contain chlorofluorocarbon propellants (CFCs).

When the active ingredient is Salbutamol Sulphate, the quantity is stated in terms of the equivalent amount of salbutamol

Sampling apparatus for pressurized metered-dose inhalers

Reference: United States of Pharmacopeia 32/National Formulary 27, 2009.

.