Pruebas Bioquímicas de Gram Positivos y Negativos

7/26/2019 Pruebas Bioqumicas de Gram Positivos y Negativos

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PRUEBAS DE

IDENTIFICACIN DECOCOS GRAMPOSITIVOSY GRAMNEGATIVOS

Yessenia UchupailleJos Ugalde


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Introduccin

Para identifcar microorganismos implicados en procesosclnicos, se necesitan tcnicas que permitan reconocer elaente responsable de infecciones y enfermedades de losseres humanos.

a identifcaci!n bacteriana se "asaen las caracter#sticas$"ser%a"&es de las bacterias! '$r($&$#a) *r$*iedades"i$+,#'icas - 'eta"!&icas - s,s reacci$nes (rente a&'edi$ de c,&ti%$.

"stas tcnicas permiten el ais&a'ient$ de&'icr$$ranis'$, su identi#cacin, determina la sensibilidad

a los antimicrobianos, (aci&itan &a di(erenciaci!n."s esencial la correctae&ecci!n de& 'edi$ de creci'ient$ yde unas buenas c$ndici$nespara la incubacin.


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$b%eti&os

'onocer las tcnicas para cada pruebabioqumica.

(eterminar el fundamento de cadaprueba.

Interpretar los resultados.

)elacionar los resultados con la clnica delpaciente.


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Justi#cacin

C$n$cer &as*r,e"as

"i$+,#'icas esde gran

importanciapara as$ciaralas "acterias

c$n &$s

*r$ces$sin(ecci$s$s enel hombre.

as pruebasbioqumicasindican e&ner$ -

es*ecie de &a"acteria

aislada.


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ENTIFICACIN DE UNA BACTERIA

M$r($&$#a'acr$sc!*icade &a c$&$nia

Descri*ci!nde

re+,eri'ient$s

at'$s(ric$s-

n,trici$na&es

M$r($&$#aMicr$sc!*ica

Pr,e"as"i$+,#'icas

A-,darn$s de&aar de

MacC$n.e-

A-,darn$s de&a in($r'aci!n

e/istente

Pr,e"as

es*ec#fcas0

Gra' neati%$s* +erealia la prueba dela O/idasa

Gra' *$siti%$s* +erealia la prueba dela cata&asa

-ene#cios de un proceso*

)educcin decostoshorro de tiempo


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1AS PRUEBAS B2SICASDE IDENTIFICACINPARACOCOS GRAM

POSITIVOS


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'/+


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+taphylococcus producencatalasa que es una enimaque*

$b%eti&o

(iferencia +taphylococcus012 de los Estre*t$c$c$s

032

4undamento

"l desprendimiento de",r",3asprocedentes del$/#en$indica que laprueba es *$siti%a0

565$5$51565$.


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7ateriales

'ulti&o con8

positi&os09:35; h2

sa de

siembra8otero

Per.

Portaob%etos

/ubo de"nsayo


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Procedimiento

"n elPortaob%etoscolocar con elgotero 9 gota

de 65$5.

/omar lamuestra delculti&o y

emulsionar con

el 65$5.


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Interpretacin

+i se realia en c,&ti%$o t,"$ deensa-$ con el inoculo colocardirectamente el 4 '& 56O6 a& 7 80

+i la colonia se encuentra en agarsangre, aseg?rese de n$ t$car e&'edi$0

"rroral usar asas de 'eta&.

-urbu%as o efer&escencia

@o hay cambio

1 "sta#lococos

3 "streptococos

O9O


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'$8U+


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$b%eti&o

(iferencia al Staphylococcusaureus :;< de esta#lococos

Staphylococcus epidermidis ysaprofticum:= U'I,cefalosporinas, &ancomicina,trimetoprim sulfato @unca se asla en la

circulacin sangunea.

Pri'er$s cas$s en 1atin$a'ricafueron reportados por Uruguay en elao 6@@7


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@$$-I$'I@


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4undamentoUna cepa de +taphylococcus coagulasa negati&o, sesiembra en plateado para realiar antibiograma pordifusin, se coloca un disco de @o&obiocina, se

incuba a =Eo ' durante 5; horas.

+i presenta halo de inhibicin es sensible0+taphylococcus epidermidis2

+i hay resistencia 0+taphylococcus sapro#ticum2.


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7ateriales

'ulti&o conesta#lococos coagulasa

K.

/ubo deensayo. 6isopos.

gar. +angre.(isco de

@o&obiocina

.


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Procedimiento

'olocar elinculo en

tubo deensayo.

+embrar lacoloniausando elhisopo en

agarsangre.

'olocar eldisco de

@o&obiocina.

Incubar a=EF' por

5;h.


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Interpretacin

6alo de inhibicin L 9Mmm

6alo N o O a 9Mmm

+ensible

+. epidermidisotros coagulasa 3

)esistente

Staphylococcussaproticum

+ensible +epidermidis yotros

cuagulasa 3

"s

resistenteStaphylococ

cussaproticum

.


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Stre*t$c$cc,s *-$enes essensi"&e a ba%asconcentraciones deBacitracina 0discos D,D;U2,los $tr$s grupos son

resistentes0

$b%eti&o

+eparar el Streptococcuspyogenes de los demAsestreptococos beta hemolticos:Streptococcusagalactiae)

4undamento

-'I/)'I@


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Materia&es9. 'ulti&o puro

deestreptococos

-3hemolticos aidenti#car.

5. /ubo de

ensayo

=. sas desiembra06isopo

saturado consuspensinmicrobiana2.

=. Placa garsangre.

;. (isco debacitracina de

D.D; U


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'olocar elinculo en

tubo deensayo

'on unasa

esteriliada, sembraren estrasdos o tres

coloniassospechos

aspro&enientes de unculti&o

puro deuna placade agarsangre .

'olocar un

disco debacitracin

a en elprimer

cuadrante.

Incubar la

placadurante95 a 5;horas a=CF' en

aerobiosis

"&aluar la

presenciade halo deinhibicinalrededordel disco.

Pr$ces$


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Interpretacin

'ualquier halo deinhibicin alrededordel disco.

usencia de 6alo deinhibicin.

+ensible Streptococcuspyogenes

)esistente

S. Agalactiae


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OPTOUINA

os Ne,'$c$c$s sonsensi"&es a la optoquina y losE0 %iridans $ a&(a e'$tic$sson resistentesa la optoquina

$b%eti&o

4undamento

(iferencia al E0 ne,'$niae:Ne,'$c$c$< de los E0%iridans $ E0 a&(a e'$tic$s0


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7ateriales

C,&ti%$ c$nestre*t$c$c$

s

Disc$s dec&$ridrat$de

eti&idr$c,*reina

$*t$+,ina

Aar M,e&&er5int$n $

ti$&ic$&at$

Asas desie'"ra

T,"$ deensa-$ Sa&es "i&iares

Inc,"ad$ra


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Procedimiento


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Interpretacin

6alo L 9;mm

6alo :mm

+ensible +. @eumoniae

)esistente

S. Viridans

6alo G K 9= mm Prueba de disolucin de sales biliares


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+"+ -II)"+

a "i&is &isa c$n ra*ide lascolonias de neumococos porquedisminuyen la tensinsuper#cial entre la membrana

de la clula bacteriana y elmedio de culti&o.

$b%eti&o

4undamento

(iferencia al E0 ne,'$niae:Ne,'$c$c$< de los E0%iridans $ E0 a&(a e'$tic$s0


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Procedimiento"


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Interpretacin

/ransparente, isis,es soluble

/urbide de7c4arland. @o hay

lisis o no es soluble

1 S. Pneumoniae

3"s cualquier otro Qhemoltico

o S.viridans.


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"ntoncesB.


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@eumona


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@eumonaFact$res *resdis*$nentes>

Infecciones res*irat$rias%ira&es, alcoholismo, diabetesmellitus, enfermedad crnicarenal, cAncer.

Trans'isi!n> +ecreciones respiratoria

os ne,'$c$c$s semultiplican en los a&%$&$s y*r$d,cen ,n ,id$ ser$s$que fa&orece el crecimiento dela bacteria.De(ensas> polimorfonuclearesy anticuerpos anticapsulares

"scalofros 4iebre alta /os con

presencia deesputosanguinolento

(olor de pecho

S#nt$'as>

Rpocas llu&iosas yh?medas.

E*ide'i$&$#a> @ios

'en$res de aH$s yad,&t$s 'a-$res a

Ec,ad$r 6@44> *ri'era ca,sade ',erte enera& y 5F ennios.

Tasa de '$r"i&idad>8uayas con el 5D,=>Pichincha el 9:,G>A,a- J)?8para el resto de pro&incias este&alor estA por deba%o del C,D>.


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1AS PRUEBAS B2SICASDE IDENTIFICACIN

PARACOCOS GRAM

NEGATIVOS


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4undamento"nima citocromo c3o


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Utilidad

+olo paraaerobios,aerobios

facultati&os y

microaero#los

Identi#ca@eisserias sono


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7ateriales)eacti&o de

So&acs

'ulti&o de 5;horas del

microorganismo.

Papel de #ltrode =


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Proceso Indirecto con papel #ltro

"


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"n caso de que el reacti&o estelio#liado en el papel #ltro

6umedecer el papel.

4rotar con la cepa usando el asa. @o usar asas de nichrome porriesgos de obtener resultados falsos positi&os pro&enientes delmetal reducido.

$bser&ar cambio de color en 9D seg.


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Interpretacin

'olor *Kr*,raen 9D segundos.

@o se producecambio decoloracin.

1

Pse,d$'$nasM$ra/e&&aVi"ri$Aer$'$naNeisserias

3 "nterobacteria

'olor *Kr*,raentre9D3MD segundos.


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8onorrea


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8onorrea"s una ina'aci!n a,dade& e*ite&i$ transici$na& de

&a ,retra, el cuello uterino, elrecto, la faringe y lacon%unti&a ocular.a g$n$c$ce'ia diseminada0sangre2 puede ser gra&e,&arios das a 5 semanas

despus de la infeccin degonorrea primaria.

Ma-$ren los drogadictos,migrantes, pobres, personasque tienen &arias pare%asse


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V X


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")7"@/'IV@ (" $+ WX')"+

a identifcaci!n de lasdistintas especies sedeterminarA por la capacidadde fermentar ademAs otroscarbohidratos.

+i (er'enta car"$idrat$s*r$d,cen Lcid$, el p6 serAmenor a M,: y cambiarA elcolor! pero si no fermenta el

p6 estarA igual o aumentarA.

$b%eti&o

(eterminar si la bacteria puedeutiliar ese car"$idrat$ enes*ec#fc$0

4undamento


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Bater#a deaKcares en ca&d$

de c,&ti%$ c$n ,nindicad$r :r$3$ de(en$& &,c$sa)'a&t$sa) &act$sa)

etc

T,"$ de D,ra'C,&ti%$ *,r$ deNeissserias a

identifcar0

Asas de sie'"ra:5is$*$ sat,rad$c$n s,s*ensi!n

'icr$"iana


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Interpretacin

4ermenta?nicamente laglucosa4ermenta sologlucosa y maltosa

es Neisseriagonorreae

es Neisseriameningitidis

4ermenta glucosa ylactosa

es

"l color amarillo indica acide ysigni#ca fermentacin del a?car.

Neisseria lactamica

'olor original naran%ao ro%o la fermentacines negati&a 0p6 se

qued igual2.

posible

N. #atarralis


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+/$

as partculas de lAte e


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"nfermedades con +/$ ele&ado.Farinitis

estre*t$c!cica* mAs

com?n, sntomas son#ebre, dolor abdominal einamacin de las

amgdalas.

End$carditis"acteriana. Infeccin delas paredes internas del

coran.

G&$'er,&$ne(ritis0Infeccin del rin por

comple%os inmunesdepositados, presenta

proteinas y sangre en laorina, y reduccin del

#ltrado del rin.

Fie"re re,'Ltica>"nfermedad inamatoriaautoinmune que afecta a

las articulaciones y alcoran.

Escar&atina>

"nfermedad infecciosa,afecta sobre todo a nios.


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C$ntr$& ;> +uero humano, con una concentracinde +$ L5DD U[ml..

C$ntr$& => +uero animal con +$ normal.1Lte/> +uspensin de partculas de lAte< cubiertascon +$.

Reacti%$s>

Pr$cedi'ient$>


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Interpretacin

Infeccin reciente

Infeccin noreciente

1

'oncentracin de

+$ igual o superiora 5DD UI[m

C$ntr$& de Ca&idadSensi"i&idaddian!stica> G:>.Es*ecifcidaddian!stica> GE>.

3 @o nos indica hace quetiempo estu&o en contacto.

3 @o informacin su#cienteacerca del estado actual de la

enfermedad.3(ebe considerarse al mismotiempo los datos clnicos delpaciente.

imitaciones del mtodo*


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"ntoncesB


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PACIENTE.

.

6aca 4 das presentaba procesocatarral, habiendo recibido 48

horas

antes del ingreso una dosis de

ceftriaxona.

Nia de ! ao de edad.

Cuadro de fiebre de

"#$C % &'(itos

E)P*+ACI+N E -IT+IA C)


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E)P*+ACI+N E -IT+IA C)

Pes$ ?07@@

Ta&&a EC cmTe'*erat,ra =G F'TA :C[;C mm6gEn &ae/*&$raci!nne,r$&!ica

Inamacin de lasmeninges

Antecedentes(a'i&iares

+in antecedentesfamiliares de inters


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Estudios5e'$&$"ina ?) d&5e'at$crit$ 5G,;>

1e,c!cit$s=ne,tr!f&$s=ca-ad$s=&in($cit$s='$n$cit$s

59.;DD[mm=E;>95>95>5>

P&a+,etas ;=E.DDD[mm=VSG 99C mmPCR GG,C mg[1#+,id$ ce(a&$rra+,#de$ 5.MDD clulas[mm= 0P7@*

:C>2.G&,c$sa G= mg[dl

A&"K'ina 5E mg[dl.

Tinci!n de Gra'> 'ocos 8ram positi&os.C,&ti%$ 1CR> +treptococcus pneumoniaeC,&ti%$ gar +angreCata&asa @egati&oO*t$+,ina +ensible

Tinci!n de Gra'> C$c$s Gra' *$siti%$s0C,&ti%$ 1CR> +treptococcus pneumoniaeC,&ti%$ gar +angreCata&asa @egati&oO*t$+,ina +ensible

)"+U/($+* +e aislaron neumococos.


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E/+*0CI+N1

Trata(iento con1

2 Cefotaxi(a 355

(g67g6da

2 9exa(etasona 35,:(g67g6da

Cada : horas.

48 hr. despu;s reali


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Al > da la paciente

continuaba febril, con (a%or

deterioro clnico % en el *C

su citologa (ostraba una

persistencia de cocos =ra(positi&os por lo @ue se

procedi' a reali


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9os se(anas (s tarde la paciente

estaba clnica(ente curada,

con un *C nor(al.

A los : (eses dee&oluci'n la nia

est asinto(tica % el

electroencefalogra(a

es nor(al.


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C+NC*0I+N1

*a asociaci'n de &anco(icina % rifa(picina es

una opci'n &lida para el trata(iento de las

(eningitis por neu(ococos resistentes a

cefalosporinas de tercera generaci'n.


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)"+U7"@


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