PRUEBAS DE PERMANENCIA Y ANÁLISIS MICROBIOLOGICOS …

PRUEBAS DE PERMANENCIA Y ANÁLISIS MICROBIOLOGICOS DEL

DESINFECTANTE RSE-19 EN VEHÍCULOS DEL SECTOR TRANSPORTE EN

BOGOTÁ

Departamento de Innovación, Desarrollo e Investigación

Con el apoyo de Laboratorios M&G SAS

Multinsa 1A SA Industria Química en Evolución

Carrera 19 No 73-65 Barrio La libertad Barrancabermeja

Colombia

PRUEBAS DE PERMANENCIA Y ANÁLISIS MICROBIOLOGICOS DEL

DESINFECTANTE RSE-19 EN VEHÍCULOS DEL SECTOR TRANSPORTE EN

BOGOTÁ

RESUMEN ................................................................................................................................................................... 3

JUSTIFICACIÓN ............................................................................................................................................................ 3

OBJETIVOS .................................................................................................................................................................. 4

METODOLOGÍA ........................................................................................................................................................... 5

Prueba de presencia sobre superficie por medio de fluoresceína sódica: ................................ 5

Prueba de presencia sobre superficie por medio de anclajes de enzimas: .............................. 6

Análisis microbiológicos de superficies y ambientes: ............................................................... 6

RESULTADOS ............................................................................................................................................................... 6

Pruebas de Revelado en Superficie........................................................................................... 6

Día 1 ...................................................................................................................................... 6

Vehículo # 1 ....................................................................................................................... 7

Día 2 .................................................................................................................................... 12

Vehículo # 1 ..................................................................................................................... 12

Vehículo # 2 ..................................................................................................................... 20

Análisis Microbiológicos ......................................................................................................... 31

Día 2 .................................................................................................................................... 31

Día 3 .................................................................................................................................... 34

Análisis de ambientes ..................................................................................................... 36

Sillas ................................................................................................................................ 38

Pasamanos ...................................................................................................................... 39

Ventana ........................................................................................................................... 40

Piso .................................................................................................................................. 41

Fuelle ............................................................................................................................... 43

DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES .................................................................................................................................... 44

REFERENCIAS ............................................................................................................................................................ 46

Resumen

El Coronavirus es un virus que ha presentado una alta tasa de transmisión por aerosoles y contacto con superficies contaminadas (1). La enfermedad que produce puede llegar a tener sintomatología severa y llegar a la muerte y desde el 11 de marzo del 2020, la Organización Mundial de la salud la declaró Pandemia por su amplia distribución alrededor del mundo (2). Los países han tomado diferentes medidas para la contención de la enfermedad y disminuir el número de personas infectadas en un mismo momento (3). En Colombia se han tomado medidas como el cierre temporal del transporte intermunicipal y de los aeropuertos, y de mantener el aforo de los sistemas de transporte masivo al 35% en Bogotá (4). Todos estos sistemas de transporte deben seguir con rigurosidad las normas de bioseguridad y desinfección establecidas por el gobierno para su operación; descritas en la resolución número 677 del 24 de abril del 2020: “Por medio de la cual se adopta el protocolo de bioseguridad para el manejo y control del riesgo del Coronavirus COVID-19 en el sector transporte” (5); siendo estos protocolos complementarios a los presentados en la resolución 666 del 24 de abril del 2020: “Por medio de la cual se adopta el protocolo general de bioseguridad para mitigar, controlar y realizar el adecuado manejo de la pandemia del coronavirus COVID-19” (6). Dentro de este protocolo se encuentra establecidos los requerimientos de desinfección y limpieza periódicos de los vehículos que han sido adoptados y llevados a cabo según las recomendaciones de los entes regulatorios.

Justificación

Para efectos del presente documento es necesario aclarar las definiciones de agente limpiador y agente desinfectante. La limpieza está definida como “un procedimiento mecánico que remueve el material extraño u orgánico de las superficies que puedan preservar bacterias al oponerse a la acción de biodegrabilidad de las soluciones antisépticas o desinfectantes” (7); por lo tanto, los limpiadores tienen un tensioactivo que elimina la suciedad, pero no mata los gérmenes (8). La desinfección “es la destrucción de microorganismos (excepto esporas) de una superficie por medio de agentes químicos o físicos” (7); y un desinfectante “es un germicida que inactiva prácticamente todos los microorganismos patógenos reconocidos, pero no necesariamente todas las formas de vida microbiana, ejemplo esporas” (7, 8). Los agentes limpiadores como detergentes y los químicos desinfectantes no actúan inmediatamente, sino que necesitan un determinado tiempo para ejercer su acción germicida o de limpieza; el tiempo de permanencia de un desinfectante es el tiempo que un agente debe permanecer húmedo en la superficie objetivo para tener el efecto deseado, a medida que se va secando el efecto germicida se comenzará a deteriorar (8). Para los procesos de limpieza los materiales más usados son jabones junto con procedimientos para retirar la materia orgánica acumulada. En tanto a la desinfección, uno de los químicos más utilizados es el hipoclorito de sodio que presenta un efecto rápido sobre gran variedad de microorganismos y es el más apropiado para desinfección en general (7), además de ser aprobado por diferentes entes regulatorios como eficaz para inactivación del Coronavirus (8, 9). Las desventajas de este químico se centran en que el pH alcalino disminuye su actividad y lo mismo ocurre con la presencia de materia orgánica, por lo que al aplicarlo sobre una superficie que no

se ha limpiado previamente no permitirá que ejerza su acción germicida (10). Además, este grupo de desinfectantes es altamente corrosivo y produce además decoloración de los materiales propensos de perder esta propiedad (8), puede ser inestable frente a la luz y el calor y puede generar vapores tóxicos y degradarse; puede generar vapores tóxicos al mezclarse con otros detergentes, solventes o amoniacos; y puede causar quemaduras, ampollas, irritación ocular grave que puede llegar a la pérdida de tejidos y puede producir irritación de las vías respiratorias por sus vapores altamente tóxicos (11). El RSE-19 se presenta como una alternativa no tóxica y completamente segura a la aplicación de estos químicos en los sistemas de transporte. Este desinfectante no es tóxico, es biodegradable, no presenta efectos adversos en piel, ojos o por inhalación, tiene un amplio espectro microbicida, es multiusos y multi-aplicación y se desarrolló implementando nanotecnología para brindarle amplia residualidad y permanencia en las superficies, haciendo que su eficacia se extienda en el tiempo. El RSE-19 es un co-desarrollo con la Universidad de Los Andes y fue creado como una estrategia en la mitigación del contagio de enfermedades transmitidas por contacto. Los componentes activos tienen efecto validado por separado contra virus como H1N1, H5N1, H3N2 y Coronavirus, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Aspergillus y Bacillus spp (9, 12). El RSE-19 tiene efecto validado, hasta el momento, contra virus como Fagos; bacterias como Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp. Bacillus subtilis, Klebsiella pneumonie, Listeria monocytogenes, hongos como Penicillium spp. y Aspergillus brasiliensis, y levaduras como Saccharomyces spp y Candida albicans. Estas validaciones se siguen trabajando día a día para aumentar las especies de microorganismos contra las que el RSE-19 tiene efectividad. El RSE-19 tiene un tiempo de acción microbiológico que comienza a hacer efecto desde los primeros 4 minutos desde su aplicación y presenta efecto duradero. Esto es posible por la acción de su componente nanotecnológico permite el anclaje de los compuestos activos a las superficies mostrando un efecto residual permanente por curado hasta de 72 horas después de su aplicación, por medio de la formación química de una película protectora y estable, que es efectiva y duradera en superficies como metales (pasamanos, barandas, equipo quirúrgico), vidrios (ventanas, espejos, pantallas), pisos (cerámicos o de granito), plástico (sillas, envases) y textiles (mobiliario, trajes).

Objetivos

• Realizar pruebas de permanencia después de varios lapsos de tiempo en vehículos del sistema de transporte sometidos a alto tránsito de personas y a protocolos de desinfección con hipoclorito 24 horas post-aplicación del RSE-19.

• Realizar pruebas microbiológicas antes y después de usar el protocolo de desinfección con RSE-19, usando como base la desinfección con hipoclorito.

Metodología

Las pruebas se realizaron sobre vehículos de transporte de pasajeros a nivel masivo en la ciudad de Bogotá, durante tres días consecutivos. El primer día (viernes 12 de junio de 2020) se evaluó la permanencia sobre las superficies 30 minutos después de la aplicación por aspersión en el vehículo #1, el revelado se realizó por medio de fluorescencia por luz ultravioleta. El segundo día (sábado 13 de junio de 2020), se realizaron dos tipos de pruebas en dos vehículos diferentes, en el Vehículo #1, el mismo del día anterior, se realizan pruebas de permanencia con enzimas. Es importante recalcar que el vehículo transitó normalmente después de ser aplicado el RSE-19. El vehículo #2 es un vehículo que estuvo transitando y trabajando de manera normal, se toman pruebas microbiológicas de superficie y ambiente antes de realizar cualquier proceso de desinfección o limpieza. Posterior a esto se realiza la desinfección de medio vehículo con RSE-19 a una dilución 1:5, se esperan 30 minutos y se toman muestras microbiológicas de superficies y ambiente. El tercer día (domingo 14 de junio de 2020) solamente se trabajó en el vehículo #2. Se realizaron muestreos microbiológicos de superficies y ambientes en la porción del bus que fue desinfectada por aspersión el día anterior con RSE-19 (cumplidas las 24 horas de aplicación) y se realizaron pruebas de permanencia sobre las superficies con el protocolo de anclaje de enzimas. En este bus se tomaron pruebas control de permanencia en los lugares que no fueron desinfectados con RSE-19 para comprobación del revelado. Una vez tomadas estas pruebas el vehículo fue desinfectado con el protocolo habitual que sigue la empresa con hipoclorito, se dejó actuar 20 minutos y luego se tomaron muestras microbiológicas de superficies y ambientes de la porción que solo presentaba desinfección con el protocolo habitual, sin RSE-19. Además, se realizaron pruebas de permanencia del RSE-19 aún después de realizar el protocolo de desinfección normal en el vehículo. Los procedimientos se llevaron a cabo siguiendo los siguientes protocolos:

Prueba de presencia sobre superficie por medio de fluoresceína sódica:

La presencia del RSE-19 sobre las superficies puede ser medida por medio del uso de fluoresceína sódica, ya que puede ser usada como como indicador en la presencia de compuestos nitrados, como el gluconato de clorhexidina, compuesto activo del RSE. La reacción se basa en la reacción química entre estos compuestos con sustancias de carácter básicas, por lo cual se intensifica el color de la fluorescencia en medio de luz ultravioleta, pasando de un color amarillo a una tonalidad verde fluorescente.

Prueba de presencia sobre superficie por medio de anclajes de enzimas:

Se marca el lugar de la toma de la muestra y se agrega un volumen de una solución de glutaraldehído 0.25%v/v, se deja actuar durante 5 minutos. Una vez termine el tiempo de incubación, se procede a hacer de dos a tres lavados usando agua potable y una pipeta estéril. Luego, se agrega un volumen de la enzima Lacasa sobre la superficie tratada con glutaraldehído y se deja actuar durante 15 minutos. Después, se retira el exceso de la enzima por medio de lavados con agua potable. Finalmente, se agrega un volumen de la solución ABTS (Sal de di amonio 2,2′-azino-bis (ácido 3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico)) 1% p/v y se hace una observación continua del cambio colorimétrico.

Análisis microbiológicos de superficies y ambientes:

La toma de muestras de superficies se realizó con el método hisopado, se toma la muestra de la mayor superficie posible de acuerdo con el tamaño del objeto. El método de detección de Aerobios Mesófilos se realizó por medio del recuento en placa estándar de superficie, como detector se usó el medio de cultivo Standard Plate Count, a una temperatura de incubación de 35°C +/- 2°C y un tiempo de incubación de 24h. El método de detección de mohos y levaduras se realizó por medio del recuento en placa estándar en superficie, como detector se usó el medio de cultivo Sabouraud, con una temperatura de incubación de 20 a 25°C y un tiempo de incubación de 5 días. El análisis de presencia o ausencia de coliformes se realizó por medio del recuento en placa estándar en superficie, usando como detector el medio de cultivo VRBA+MUG, a una temperatura de incubación de 35°C +/- 2°C y un tiempo de incubación de 24h. Las muestras microbiológicas de ambientes de tomaron por el método de sedimentación y se dejaron en exposición por 30 minutos. El método de detección de aerobios mesófilos se realizó por recuento en placa usando como detector el medio de cultivo Standard Plate Count, a una temperatura de incubación de 35°C +/- 2°C y un tiempo de incubación de 24h. El método de detección de mohos y levaduras se realizó por medio del recuento en placa estándar en superficie, como detector se usó el medio de cultivo Sabouraud, con una temperatura de incubación de 20 a 25°C y un tiempo de incubación de 5 días.

Resultados

Pruebas de Revelado en Superficie

Los resultados serán expuestos por día de trabajo, vehículo analizado y tipo de material sobre el

que se realizaron las pruebas por separado.

Día 1

El primer día de trabajo se realizó la desinfección con apersión a un vehículo que llevaba

transitando 24 horas después de tener una desinfección habitual con hipoclorito y el mismo

método de aplicación. La nueva desinfección se realizó con el desinfectante RSE-19 sin diluir.

Vehículo # 1

La aplicación se realizó con RSE-19 sin diluir ya que el revelado con fluoresceína requiere un espacio oscuro para la visualización. Al no tener un espacio adecuado para el protocolo se decidió hacerlo sin diluir para poder evidenciar la presencia de los compuestos activos sobre la superficie en un espacio iluminado. Se procedió a aplicar el RSE-19 siguiendo el protocolo habitual de aspersión. Estos resultados fueron tomados media hora después de la aplicación del RSE-19 dentro del vehículo. El protocolo con fluoresceína sódica al momento del revelado mostró la influencia negativa de la cantidad de luz ambiental sobre la visibilidad de los cambios en la coloración de fluorescencia. El vehículo fue llevado al túnel de pintura, donde la disminución de la iluminación permitió la evidencia del desinfectante RSE-19 en las superficies. En las imágenes de puede observar el brillo verdoso al momento de acercar la luz UV a la superficie. Por la cantidad de luz ambiental, el brillo observado se reduce a espacios determinados de la superficie, lo que indica la presencia del desinfectante anclado por su nanotecnología. Las imágenes muestran revelados de sillas, techos, pisos, barandas, esquinas y el fuelle central del vehículo, donde se puede observar el brillo creado por la fluoresceína con poca intensidad. En la Imagen 1 se puede ver que el brillo se da con mayor intensidad en la superficie de la silla, donde en diferentes posiciones de la lámpara UV se presentan diferentes patrones de brillo. En la imagen 2 se puede ver parte del fuelle central del vehículo con rastros visibles del desinfectante tanto en su interior con en el reborde metálico. Las imágenes 3 y 4 muestran las barandas del bus, todas con presencia de fluorescencia en su superficie, en la imagen 4 también se muestra el piso debajo de las sillas con brillo característico dado por la presencia del RSE-19. La imagen 5 muestra el brillo en el techo del vehículo y en el reborde que limita la pared con las ventanas. La imagen 6 muestra el suelo con brillo tanto en el caucho de los seguros, como el material sintético que recubre el piso, así como en el reborde metálico que limita la pared y el piso en el borde esquinero del vehículo. La imagen 7 presenta revelado sobre la comisura del asegurador de la baranda. La imagen 8 muestra otra baranda de soporte y una imagen del techo del vehículo con brillos de mayor intensidad.

Imagen 1. Vista frontal de una silla con la luz en diferentes posiciones.

Imagen 2. Izquierda: vista interior del fuelle central; derecha: fuelle central.

Imagen 3. Varillas de soporte de usuarios Izquierda: altura media; derecha: cerca del techo.

Imagen 4. Izq: varilla de soporte de usuarios del techo; der: soporte de las sillas inferior.

Imagen 5. Izquierda: Techo del vehículo; derecha: marco y ventana interiores.

Imagen 6. Izquierda: Piso central; derecha: borde metálico entre el suelo y las paredes laterales.

Imagen 7. Barandas con soporte del vehículo.

Imagen 8. Izquierda: baranda de soporte; derecha: techo del vehículo. Como se puede observar en las imágenes anteriores, la visibilidad de los reactivos anclados a la superficie es positiva, pero es necesario utilizar otro método de revelado en estas condiciones de iluminación. Es posible notar que el RSE-19 queda anclado a las superficies de diferentes materiales como plástico, vidrio, pintura, metal, tela y caucho, incluyendo lugares de difícil acceso como comisuras, hendiduras y en la superficie de los pasamanos. Se puede observar también que la mayor cantidad de brillo observada en la superficie es en donde se acumuló la mayor cantidad de desinfectante, no se observa la película completa por la alta iluminación presente en el sitio de revelado.

Día 2

Los primeros ensayos realizados fueron los relacionados con la validación del funcionamiento de la enzima sobre una superficie previamente limpiada con alcohol. Se cuenta con dos alícuotas de Lacasa, se prueban las dos y se trabaja con la que presenta mejor resultado sobre esta prueba. En la Imagen 9 se pueden ver 3 gotas que corresponden a: arriba: alícuota 1, medio solamente revelador sin enzima, abajo: alícuota 2. Se puede ver que las dos alícuotas presentan cambios de coloración positivos, pero la alícuota 2 reacciona más rápido. Se decide trabajar con esta enzima. El revelado se realizó con el método enzimático, que tiene una duración de revelado más larga, pero permite observar los resultados en un medio con alta iluminación.

Imagen 9: Prueba de acción de revelado de la enzima Lacasa, arriba: alícuota 1, medio solamente revelador sin enzima, abajo: alícuota 2.

Vehículo # 1

El vehículo 1 estuvo trabajando en las calles por 24 horas después de la aplicación del RSE-19, estas pruebas de revelado se tomaron el sábado 13 de junio de 2020. La preparación de protocolo de revelado se llevó a cabo directamente en el sitio de medición, se ubicaron los implementos y se realizó un marcaje de los sitios a evaluar.

Imagen 10. Montaje, reactivos y materiales usados durante el revelado del RSE-19 en superficies interiores del vehículo. Se muestra el punto #1: Piso y punto #2: silla del proceso de revelado.

A este vehículo no se le realizó desinfección el sábado por ningún medio hasta que se terminó el revelado. El control se ubicó en una silla presente en la mitad del vehículo #1 que no fue desinfectada con RSE-19 el día anterior. Se puede observar en la imagen 11 que no se presenta un cambio de color representativo una vez realizado el protocolo de revelado.

Imagen 11. Control de revelado sobre superficie sin RSE-19 después de 15 minutos de incubación. En el control se puede observar que no hay cambio de coloración sobre la superficie después de 15 minutos de incubación, lo que indica que no hay presencia de los compuestos activos del RSE-19 sobre la superficie. En la imagen 12 muestra el punto #1 de revelado, se puede observar el paso 2 del protocolo, donde se deja incubando la enzima Lacasa por 15 minutos, se puede ver de coloración café porque es la enzima sin procesar. Esta debe ser retirada en su totalidad para continuar con el proceso de lavado y el paso siguiente. Desde la imagen 13 a la imagen 17 se puede observar que ya ha realizado el lavado y se muestra la línea de tiempo desde que se agrega la solución ABTS en el tiempo 0 y de deja incubar 15 minutos. Se puede observar el cambio colorimétrico demostrando la presencia del RSE-19 sobre la superficie 24 horas después de su aplicación y en un vehículo sometido a trabajo continuo de transporte de personas.

Imagen 12. Punto #1 (Piso) de análisis de presencia del RSE durante la fase 2 de revelado, incubación con la enzima Lacasa.

Imagen 13. Tiempo 0 Min de incubación durante la fase 3 de revelado, solución ABTS que cambia colorimétricamente si hay reacción por la presencia del RSE-19 en la superficie Punto #1.





Imagen 18. Punto #2 (Silla) de análisis de presencia del RSE durante la fase 2 de revelado, incubación con la enzima Lacasa.

Imagen 19. Izquierda y Mitad: Tiempo 3 Min de incubación durante la fase 3 de revelado, solución ABTS que cambia colorimétricamente si hay reacción por la presencia del RSE-19 en la superficie. Derecha: Tiempo 5 Min de incubación durante la fase 3 de revelado Punto #2.



Imagen 22. Izquierda: Tiempo 3 Min de incubación durante la fase 3 de revelado, solución ABTS que cambia colorimétricamente si hay reacción por la presencia del RSE-19 en la superficie Punto #2. Mitad: Tiempo 5 Min de incubación durante la fase 3 de revelado. Derecha: Tiempo 10 Min de incubación durante la fase 3 de revelado.

Imagen 23. Izquierda: Tiempo 3 Min de incubación durante la fase 3 de revelado, solución ABTS que cambia colorimétricamente si hay reacción por la presencia del RSE-19 en la superficie Punto #2.

Las imágenes 19, 20 y 21 muestran los análisis de revelado en el punto #2: silla que se encuentra en la parte media del bus con una línea de tiempo. La imagen 18 muestra la fase 2 del proceso de revelado donde se tienen en incubación la enzima Lacasa, la imagen 19 muestra el revelado después de agregar la solución de ABTS en los tiempos 3 minutos y 5 minutos de incubación, la imagen 20 muestra 10 minutos después de agregar la solución ABTS y la imagen 21 muestra 15 minutos después de la incubación. Se puede observar el cambio de coloración en la solución ABTS que revela la presencia del desinfectante RSE-19 sobre la superficie 24 horas después de su aplicación y en un vehículo sometido a trabajo continuo de transporte de personas. La imagen 22 muestra los análisis de revelado en el punto #3: silla que se encuentra en la parte anterior del bus con una línea de tiempo. La imagen de la izquierda muestra el tiempo de incubación de 3 minutos durante la fase 3 de revelado, la imagen de la mitad muestra el tiempo de incubación de 5 minutos de incubación durante la fase 3 de revelado. , la imagen de la derecha muestra el tiempo de incubación de 10 minutos durante la fase 3 de revelado. En todas las imágenes se puede observar la presencia del RSE-19 a las 24 horas de aplicación y después de que el vehículo estuvo en circulación transportando pasajeros. Lo que indica que los compuestos activos del desinfectante siguen presentes en la superficie después de someter el vehículo a un alto tráfico de transporte de personas.

Vehículo # 2

Un vehículo diferente que acaba de llegar de transportar pasajeros durante las 24 horas anteriores fue sometido a muestreo microbiológico de ambientes y superficies antes de la aplicación del desinfectante RSE-19. Luego se le realizó la aspersión con RSE-19 a la mitad anterior incluyendo en fuelle de la mitad a una dilución 1:5. Después de la aplicación del desinfectante por medio del protocolo habitual se esperó 30 minutos y se procedió a realizar las evaluaciones de permanencia de los compuestos activos en las diferentes superficies encontradas en el interior. Como se puede ver en la imagen 27, los puntos de revelado son marcados con cinta de seguridad y se sigue el protocolo de incubación por fases descrito anteriormente. Los implementos y suministros de trabajo se mantienen sobre una superficie estéril mientras se realizan los procesos de evaluación. La incubación de lleva a cabo con los tiempos estipulados y se mide con cronómetro. Luego se realizan los lavados con agua potable y se recogen los desechos en un tubo separado para llevar de vuelta al laboratorio. Las imágenes 28 a 32 muestran una línea de tiempo durante el revelado en la silla que se puso a prueba, según los resultados se puede observar un cambio de coloración en la solución ATBS que muestra la presencia del desinfectante RSE-19 anclado sobre la superficie.

Imagen 27. Sitios de revelado en el vehículo #2 del día 2 sin realizar proceso de desinfección estándar.

Imagen 28. Silla del vehículo #2 bajo el proceso de revelado 24 horas después de ser aplicado el RSE-19 y en un vehículo que no fue sujeto a trabajo.


Imagen 30. Izquierda: Tiempo 5 Min de incubación durante la fase 3 de revelado, solución ABTS que cambia colorimétricamente si hay reacción por la presencia del RSE-19 en la superficie Punto #2. Mitad: Tiempo 10 Min de incubación durante la fase 3 de revelado. Derecha: Tiempo 15 Min de incubación durante la fase 3 de revelado.

Imagen 31. Punto #2 (baranda) de análisis de presencia del RSE. Izquierda: imagen durante la fase 2 de revelado, incubación con la enzima Lacasa. Mitad: Tiempo 0 Min de incubación durante la fase 3 de revelado. Derecha: Tiempo 3 Min de incubación durante la fase 3 de revelado.

Imagen 32. Izquierda: Tiempo 5 Min de incubación durante la fase 3 de revelado. Mitad: Tiempo 10 Min de incubación durante la fase 3 de revelado. Derecha: Tiempo 15 Min de incubación durante la fase 3 de revelado.

Imagen 33. Punto #3 (piso) de análisis de presencia del RSE, imagenes durante la fase 3 de revelado. Izquierda: Tiempo 3 Min de incubación. Mitad: Tiempo 5 Min de incubación. Derecha: Tiempo 10 Min de incubación.

Imagen 34. Piso del vehículo #2 bajo el proceso de revelado 24 horas después de ser aplicado el RSE-19 y en un vehículo que no fue sujeto a trabajo. Tiempo 15 Min de incubación. Derecha: Tiempo 10 Min de incubación.

Todos los procesos de revelado realizados 24 horas después de la aplicación del desinfectante RSE-19 en el vehículo #2 mostraron un resultado positivo a la presencia de los componentes activos en la superficie, mostrados por el cambio de color en la solución ABTS a un color verde oscuro. La próxima prueba de revelado enzimático fue realizada sobre una superficie que fue muestreada por la técnica especializada al momento de la toma de muestras de superficies, este proceso incluye humedecer un hisopo estéril en solución blanco, luego frotar la superficie de manera homogénea y poner dentro de la solución blanco el hisopo, a temperatura controlada hasta llevar a cultivo. Este proceso de frotis puede llegar a retirar cualquier tipo de materia orgánica presente sobre la superficie, ya que funciona como limpiador. Es por eso que las pruebas de permanencia se realizaron sobre la superficie posterior a la toma de muestra por frotis. La superficie que se escogió fue una silla que fue muestreada previamente para análisis de superficie, se esperó que se secara completamente y se procedió a realizar el revelado enzimático en su superficie, los resultados se pueden observar en las imágenes 35 y 36, donde el revelado muestra la presencia del desinfectante RSE-19 aún después de la limpieza con el hisopo y solución salina.

Imagen 35. Punto #4 (silla limpiada con hisopo y solución salina) de análisis de presencia del RSE, imagenes durante la fase 3 de revelado. Izquierda: Tiempo 3 Min de incubación. Mitad: Tiempo 5 Min de incubación. Derecha: Tiempo 10 Min de incubación.

Imagen 36. Silla del vehículo #2 bajo el proceso de revelado después del proceso de toma de muestra por frotis. Tiempo 15 Min de incubación. Después de la toma de muestras microbiológicas y de permanencia del RSE-19 en la mitad del bus que fue sometido a desinfección por este químico, se solicitó la desinfección con el protocolo habitual con hipoclorito de sodio a todo el bus, siguiendo el método de aplicación habitual definido por la compañía. Se esperaron 15 minutos a que el hipoclorito secara y tuviera efectos de desinfección y luego se tomaron muestras microbiológicas solamente de la mitad posterior del bus que no fue aspersada 24 horas antes con RSE-19, para poder tener un control y comparación entre los dos desinfectantes en el sector de transporte de pasajeros. Además, se realizaron pruebas de permanencia del RSE-19 en la parte anterior del vehículo para comprobar el anclamiento de los componentes activos aún después de realizar una desinfección con hipoclorito de sodio. Se realizaron revelados enzimáticos en silla, piso y baranda del bus, en puntos diferentes a los realizados previamente. Desde la imagen 37 a la 42 se pueden observar los resultados del revelado, todos con cambio de coloración positivo indicando que los componentes activos del RSE-19 continúan presentes en la superficie aún después de la aplicación de hipoclorito por aspersión sobre las superficies. Estos resultados muestran que los compuestos activos siguen presentes en la superficie aún después de realizar los protocolos de desinfección por aspersión dentro del vehículo. La prueba de permanencia en las superficies silla, piso y baranda mostró un cambio de coloración de la solución ABTS de verde claro a verde oscuro con el paso del tiempo de la incubación y después de terminar los tratamientos de fase 1 y pase 2 del protocolo. Esto demuestra que los componentes activos del RSE-19 siguen presentes y anclados en las superficies evaluadas.

Imagen 37. Punto #5 (silla después de realizado el protocolo de desinfección habitual) de análisis de presencia del RSE, imagenes durante la fase 3 de revelado. Izquierda: Tiempo 3 Min de incubación. Mitad: Tiempo 5 Min de incubación. Derecha: Tiempo 10 Min de incubación.

Imagen 38. Silla del vehículo #2 bajo el proceso de revelado después del proceso desinfección habitual con hipoclorito de sodio a 500ppm Tiempo 15 Min de incubación.

Imagen 39. Punto #6 (baranda después de realizado el protocolo de desinfección habitual) de análisis de presencia del RSE, imagenes durante la fase 3 de revelado. Tiempo 0 Min de incubación

Imagen 37. Punto #6 (baranda después de realizado el protocolo de desinfección habitual) de análisis de presencia del RSE, imagenes durante la fase 3 de revelado. Izquierda: Tiempo 3 Min de incubación. Mitad: Tiempo 5 Min de incubación. Derecha: Tiempo 10 Min de incubación.

Imagen 38. Punto #7 (Piso después de realizado el protocolo de desinfección habitual) de análisis de presencia del RSE durante la fase 2 de revelado, incubación con la enzima Lacasa.

Imagen 39. Punto #7 (piso después de realizado el protocolo de desinfección habitual) de análisis de presencia del RSE, imagenes durante la fase 3 de revelado. Izquierda: Tiempo 0 Min de incubación. Mitad: Tiempo 5 Min de incubación. Derecha: Tiempo 10 Min de incubación.

Durante la realización de la prueba de revelado se tomaron muestras de control sobre las superficies que no fueron sometidas a desinfección por el RSE-19 en el vehículo #2, pero si recibieron la desinfección habitual por hipoclorito. Estas pruebas se realizaron como un control a la prueba de revelado enzimático y no se observó un cambio de coloración en la solución ABTS de la fase 3 del protocolo, lo que indica que no hay presencia de los componentes activos del RSE-19 sobre la superficie. La imagen 40 muestra el proceso de revelado realizado sobre una silla del vehículo #2 que solamente recibió desinfección habitual con hipoclorito, como se puede observar no hay cambio de coloración en la solución ABTS. La imagen 41 muestra el mismo proceso en el piso del vehículo #2, este punto solamente recibió proceso de desinfección por protocolo habitual con hipoclorito; se puede ver que tampoco presenta cambio de coloración en la solución ABTS, lo que nos indica que el proceso de revelado si está identificando los compuestos activos del RSE-19 y no presenta resultados cruzados con otros procesos de desinfección.

Imagen 40. Punto #8 (silla después de realizado el protocolo de desinfección habitual), imagenes durante la fase 3 de revelado. Izquierda: Tiempo 5 Min de incubación. Mitad: Tiempo 10 Min de incubación. Derecha: Tiempo 15 Min de incubación.

Imagen 41. Punto #9 (piso después de realizado el protocolo de desinfección habitual), imagenes durante la fase 3 de revelado. Izquierda: Tiempo 5 Min de incubación. Mitad: Tiempo 10 Min de incubación. Derecha: Tiempo 15 Min de incubación.

Análisis Microbiológicos

A continuación, se muestran los resultados obtenidos en las muestras microbiológicas resumidos en tablas que contienen todos los valores. Después de exponer las tablas compiladas se procederá a analizar cada uno de los materiales muestreados por separado para evidenciar los resultados específicos con gráficas de desempeño y explicaciones enfocadas. Los muestreos iniciales corresponden a las 24 horas de aplicación de hipoclorito, es por eso que los puntos iniciales y los finales de la cantidad de MOs con este desinfectante son los mismos, se asume una reinfección del 100% de la superficie.

Día 2

El segundo día de trabajo se tomaron muestras microbiológicas al vehículo #2 cuya desinfección

se realizó 24 horas antes con el protocolo habitual usando hipoclorito. Un vehículo diferente que

acaba de llegar de transportar pasajeros durante las 24 horas anteriores fue sometido a muestreo

microbiológico de ambientes y superficies para determinar la flora presente antes de realizar una

desinfección. En la imagen 24 se puede observar a la especialista tomando las muestras de

superficie dentro del vehículo, estas muestras son llevabas a un medio de estabilización que las

mantiene hasta llegar al laboratorio y realizar el cultivo respectivo. Las muestras tomadas son de

pisos, ventanas, barandas y vidrios del interior del vehículo.

Las primeras pruebas microbiológicas fueron realizadas 24 horas después de una desinfección con hipoclorito por aspersión siguiendo el protocolo habitual y después de que el vehículo estuvo en tránsito. Los resultados obtenidos se pueden observar en la tabla 1, donde se puede observar que la carga bacteriana a nivel ambiental es de 7 UFC y de mohos y levaduras el mismo valor. Los muestreos de superficies muestran que las áreas más contaminadas son el piso, fuelle y pasamanos, siendo los menos contaminados las sillas y las ventanas. Además, se observa la presencia de coliformes en el piso. Las sillas presentan un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 20 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 5 UFC/30 min. Los pasamanos presentan un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 60 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 30 UFC/30 min. Las ventanas presentan un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 5 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 55 UFC/30 min. El piso presenta un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 175 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 295 UFC/30 min. El fuelle presenta un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 75 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 185 UFC/30 min.

Imagen 24. Técnica especializada tomando muestras de superficies en el piso del vehículo #2.

Imagen 25. Placas de Petri para tomas ambientales antes de la desinfección del vehículo, fueron dejadas en la superficie abiertas 15 minutos.

Tabla 1. Tabla de resultados microbiológicos antes de los procesos de desinfección. Valores expresados en UFC/30 min y para coliformes A: Ausencia, P: Presencia.

Aerobios Mesófilos UFC/30

Min

Mohos y levaduras UFC/30

min

Coliformes

Fuelle - Ambiente 7 7

Silla 1 30 0 A

Silla 2 10 10 A

Pasamanos 1 90 50 A

Pasamanos 2 30 10 A

Ventana 1 10 90 A

Ventana 2 0 0 A

Piso 1 120 20 A

Piso 2 230 570 P

Fuelle 1 70 340 A

Fuelle 2 80 30 A

Tabla 2. Tabla de resultados microbiológicos después de 30 minutos de la aplicación de RSE-19 por aspersión a una concentración de 1:5. Valores expresados en UFC/30 min y para coliformes A: Ausencia, P: Presencia.

Aerobios mesófilos UFC/30

Min

Mohos y levaduras UFC/30

min

Coliformes

fuelle - Ambiente 2 4

Silla 1 0 0 A

Silla 2 0 0 A

Pasamanos 1 20 10 A

Pasamanos 2 0 0 A

Ventana 1 40 10 A

Ventana 2 0 0 A

Piso 1 50 20 A

Piso 2 80 200 P

Fuelle 1 30 10 A

Fuelle 2 20 10 A

El segundo muestreo se realizó 30 minutos después de la aplicación del desinfectante RSE-19 por aspersión siguiendo el protocolo habitual a una concentración 1:5. Los resultados obtenidos se pueden observar en la tabla 2, donde se ve que la carga bacteriana a nivel ambiental se redujo a 2 UFC y de mohos y levaduras a 4 UFC. Los muestreos de superficies muestran que las áreas más

contaminadas no alcanzaron a ser desinfectadas en su totalidad. Además, se observa que la presencia de coliformes en el piso no se eliminó. Las sillas presentan un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 0 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 0 UFC/30 min. Los pasamanos presentan un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 10 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 5 UFC/30 min. Las ventanas presentan un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 20 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 5 UFC/30 min, se puede observar que la ventana 1 aumentó de o a 40 lo que puede indicar errores en la medición o contaminación de la muestra en el transporte. El piso presenta un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 65 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 110 UFC/30 min. El fuelle presenta un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 25 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 10 UFC/30 min.

Día 3

El domingo 14 de junio de 2020 se realizaron pruebas solamente sobre el vehículo # 2 que no salió a transitar las 24 horas posteriores a la aplicación del RSE-19 y se mantuvo cerrado dentro del parqueadero. Las primeras pruebas tomadas son las de microbiología de superficies y ambientes, como se puede ver en la imagen 26. Los revelados enzimáticos se llevaron a cabo dentro del vehículo #2 antes del proceso de desinfección con los protocolos establecidos por las normativas empresariales. La imagen 27 muestra el montaje realizado para el revelado 24 horas después de la aplicación del RSE-19.

Imagen 26. Técnica especializada tomando muestras de superficies en el piso del vehículo #2. Los revelados fueron tomados en piso, silla y baranda del vehículo #2, como se puede observar en la imagen 27 se tienen marcados los puntos de estudio en el vagón anterior que fue desinfectado 24 horas antes con RSE-19.

El tercer muestreo se realizó 24 horas después de la aplicación del desinfectante RSE-19 por aspersión siguiendo el protocolo habitual. Los resultados obtenidos se pueden observar en la tabla 3, donde se ve que la carga bacteriana a nivel ambiental se redujo a 0 UFC y de mohos y levaduras aumento a 7 UFC. Los muestreos de superficies muestran que las áreas más contaminadas tuvieron aumentos o disminución en sus cargas de microorganismos probablemente a reinfección. Además, se observa que la presencia de coliformes en el piso no se eliminó y hay una colonización adicional en una silla. Las sillas presentan un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 15 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 25 UFC/30 min. Los pasamanos presentan un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 5 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 20 UFC/30 min. Las ventanas presentan un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 0 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 15 UFC/30 min. El piso presenta un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 55 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 95 UFC/30 min. El fuelle presenta un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 20 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 30 UFC/30 min. Tabla 3. Tabla de resultados microbiológicos después de 24 horas de la aplicación de RSE-19 por aspersión a una concentración de 1:5. Valores expresados en UFC/30 min y para coliformes A: Ausencia, P: Presencia.

Aerobios mesófilos UFC/30

Min

Mohos y levaduras UFC/30 min

Coliformes

fuelle - Ambiente 0 7

Silla 1 10 20 A

Silla 2 20 30 P

Pasamanos 1 0 20 A

Pasamanos 2 10 20 A

Ventana 1 0 10 A

Ventana 2 0 20 A

Piso 1 40 20 A

Piso 2 70 170 P

Fuelle 1 0 30 A

Fuelle 2 40 30 A

Una vez se tomaron las muestras microbiológicas 24 horas posteriores a la desinfección del RSE-19 se solicitó realizar una aplicación con hipoclorito usando el protocolo habitual a la mitad del bus que no ha sido desinfectada aún. Luego de 15 minutos de la aplicación de hipoclorito se procedió a tomar muestras microbiológicas de ambientes y superficies.

Los resultados obtenidos se pueden observar en la tabla 4, se puede ver que la eliminación de los aerobios mesófilos, hongos y levaduras y coliformes es alta, sin embargo, la tasa de recolonización es del 100%. Los resultados obtenidos muestran que la carga bacteriana a nivel ambiental se redujo a 1 UFC y de mohos y levaduras a 2 UFC. Los muestreos de superficies muestran que las áreas más contaminadas tuvieron disminución en sus cargas de microorganismos. Además, se observa que la presencia de coliformes en el piso se eliminó. Los valores promedio para los diferentes materiales es de 0 UFC/30 Min, excepto para el piso que presenta un valor promedio de Aerobios Mesófilos de 10 UFC/30 min, mientras que para Mohos y Levaduras el valor promedio de las dos réplicas es de 5 UFC/30 min. Se debe tener em cuenta que la desinfección con hipoclorito no presenta efecto residual y que los valores iniciales de muestreo son la recolonización y reinfección de las superficies después de 24 horas de aplicación del protocolo habitual con hipoclorito. Ahora se procederá a un análisis separado por materiales para evaluar el comportamiento del desinfectante RSE-19 en comparación con la desinfección habitual con hipoclorito. Tabla 4. Tabla de resultados microbiológicos después de 15 minutos de la aplicación de hipoclorito por aspersión. Valores expresados en UFC/30 min y para coliformes A: Ausencia, P: Presencia.

Aerobios mesófilos UFC/30 Min

Mohos y levaduras UFC/30 min

Coliformes

Ambiente 1 2 A

Silla 1 0 0 A

Silla 2 0 0 A

Pasamanos 1 0 0 A

Pasamanos 2 0 0 A

Ventana 1 0 0 A

Ventana 2 0 0 A

Piso 1 10 0 A

Piso 2 10 10 A

Análisis de ambientes

En las gráficas 1 y 2, se pueden ver los puntos iniciales del muestreo ambiental realizado con el

RSE-19 (azul) es más alto que el punto inicial del hipoclorito (rojo). Esto se puede explicar por el

procedimiento realizado. La muestra azul fue tomada en el fuelle por sedimentación después de

que el vehículo terminó su trabajo de 24 horas después de la desinfección con hipoclorito.

Después de tomar estas muestras se realizó el protocolo de desinfección de la parte anterior del

vehículo hasta el fuelle, la parte posterior no se desinfectó; luego de 24 horas se procedió a tomar

las muestras de la parte posterior del vehículo, esto demuestra que el RSE-19 tiene efectos de

desinfección de ambientes y disminuyó la carga de microorganismos aún en el espacio que no

recibió aspersión directa.

También se puede ver que a los 30 minutos de aplicación hay una disminución mayor en el

número de microorganismos con la aplicación del RSE-19 que, con la aplicación del hipoclorito,

esto se puede ver por la pendiente de la gráfica de antes de desinfección a 30 Min, se puede

observar en las graficas 1 y 2 que la pendiente azul es mayor que la pendiente roja. Además, se

puede ver que la tasa de reinfección de ambientes para Aerobios Mesófilos es de 0% para el RSE-

19 y de 70% para Mohos y Levaduras, se asume una reinfección del 100% con la desinfección con

hipoclorito ya que la superficie no está protegida. Estos resultados se obtienen luego de una

aplicación de RSE-19 a una dilución 1:5.

Gráfica 1. Línea de tiempo durante la desinfección que compara los dos desinfectantes usados (RSE-19 vs. Hipoclorito), valores promedio. Muestreo de ambientes, resultados para Aerobios Mesófilos.

Gráfica 2. Línea de tiempo durante la desinfección que compara los dos desinfectantes usados (RSE-19 vs. Hipoclorito), valores promedio. Muestreo de ambientes, resultados para Mohos y Levaduras.

Sillas

Las gráficas 3 y 4 muestran los resultados de los muestreos realizados en las sillas del vehículo #2. Como se puede observar hay una eliminación del 100% de Aerobios Mesófilos y Mohos y Levaduras para ambos desinfectantes, pero a las 24 horas hay una reinfección del 66% para Aerobios Mesófilos y un aumento en la carga de Mohos y Levaduras, con la desinfección usando RSE-19. Esto se puede deber a la presencia de estos MOs en el ambiente y aire circulante que no se desinfectó por completo con la dilución 1:5. De todas maneras se puede observar un efecto residual en la recolonización de MOs sobre la superficie cuando se realiza la desinfección por RSE-19 y su efecto residual. Según estos resultados es recomendable usar una concentración más alta del RSE-19 para la desinfección total de esos materiales.

Gráfica 3. Línea de tiempo durante la desinfección que compara los dos desinfectantes usados (RSE-19 vs. Hipoclorito), valores promedio. Muestreo de superficies - sillas, resultados para Aerobios Mesófilos. La desinfección con hipoclorito mostró ser más rápida para la eliminación completa de MOs incluyendo coliformes (Tabla 5), lo que nos indica que la concentración usada de RSE-19 no es la indicada para usarse en un vehículo con tránsito y circulación de personal con alto nivel. También nos muestra que la recolonización que se presenta luego de la desinfección con hipoclorito puede ser mayor, ya que depende de los MOs que lleguen a la superficie por aire, fómites o personas contaminadas y serán capaces de quedarse en la superficie. Como se observa en la gráfica 3, la tasa de reinfección que se asume para el hipoclorito es del 100%, pero según los resultados de la gráfica 4 podemos saber que esta tasa puede aumentar según características extrínsecas.

Gráfica 4. Línea de tiempo durante la desinfección que compara los dos desinfectantes usados (RSE-19 vs. Hipoclorito), valores promedio. Muestreo de superficies - sillas, resultados para Mohos y Levaduras. Tabla 5. Recuento de Coliformes Totales en superficie – Sillas. Comparación del efecto antibacteriano de dos desinfectantes, hipolorito y RSE-19.

Coliformes

Antes de desinfección 30 Min 24 horas

RSE AUSENCIA AUSENCIA AUSENCIA

RSE-2 AUSENCIA AUSENCIA PRESENCIA

NaClO AUSENCIA AUSENCIA

NaClO-2 AUSENCIA AUSENCIA

Pasamanos

Los pasamanos son unas de las superficies más contaminadas del vehículo según las pruebas iniciales. Se puede ver que la tasa de eliminación es mayor para el hipoclorito, pero la permanencia de ese desinfectante es nula y permite la reinfección del 100% o más sobre la superficie. La eliminación de MOs con el desinfectante RSE-19 no fue total a una dilución 1:5, pero se puede evidenciar el efecto residual a las 24 horas. En la gráfica 5 se ven los resultados de Aerobios Mesófilos y se puede observar que el efecto residual continúa eliminando las bacterias a las 24 horas de aplicación inicial. En la gráfica 6 se muestran los resultados de Mohos y Levaduras, no continúa la eliminación a las 24 horas, pero se puede observar que el porcentaje de recolonización es menor que el que se presenta con la desinfección por hipoclorito.

Gráfica 5. Línea de tiempo durante la desinfección que compara los dos desinfectantes usados (RSE-19 vs. Hipoclorito), valores promedio. Muestreo de superficies - pasamanos, resultados para Aerobios Mesófilos.

Gráfica 6. Línea de tiempo durante la desinfección que compara los dos desinfectantes usados (RSE-19 vs. Hipoclorito), valores promedio. Muestreo de superficies - pasamanos, resultados para Mohos y Levaduras.

Ventana

Los resultados obtenidos para las ventanas se muestran en las gráficas 7 y 8. En la gráfica 7 se puede ver que el resultado de la desinfección con RSE-19 a una dilución 1:5 a 30 minutos presenta un pico inusual, lo que nos muestra que esa muestra se contaminó durante el transporte. Sin embargo se puede ver que a las 24 horas de aplicación la recolonización es del 0% para Aerobios Mesófilos en las dos réplicas tomadas en las ventanas. Para los hongos la recolonización es del 22% a las 24 horas y presenta una eliminación del 89% a los 30 minutos de aplicación. La aplicación con hipoclorito muestra una eliminación del 100% de Aerobios Mesófilos y Mohos y Levaduras a los 30 minutos, pero una recolonización del 100% o más a las 24 horas de aplicación;

lo que muestra el desempeño superior del desinfectante RSE-19 sobre el hipoclorito por su efecto residual. Es necesario usar a una concentración más alta de 1:5 para poder tener la eliminación del 100% de los MOs presentes en la superficie.

Gráfica 7. Línea de tiempo durante la desinfección que compara los dos desinfectantes usados (RSE-19 vs. Hipoclorito), valores promedio. Muestreo de superficies - ventana, resultados para Aerobios Mesófilos.

Gráfica 8. Línea de tiempo durante la desinfección que compara los dos desinfectantes usados (RSE-19 vs. Hipoclorito), valores promedio. Muestreo de superficies - ventana, resultados para Mohos y Levaduras.

Piso

El piso es la superficie más contaminada según los análisis iniciales con una concentración de MOs más alta que las otras superficies muestreadas. En las gráficas 9 y 10 se pueden ver los resultados comparados del desempeño para los dos desinfectantes. La pendiente de eliminación es más

inclinada para el hipoclorito, mostrando una eliminación del 100% de los MOs a los 30 minuos de su aplicación, pero la recolonización a las 24 horas es del 100% o más. Con el RSE-19 se puede ver que la eliminación de Aerobios Mesófilos es del 61.8% en promedio entre las dos replicas analizadas a los 30 minutos de aplicación. Para los homgos el porcentaje de eliminación es de 32.5% a los 30 minutos. A las 24 horas de aplicación del RSE-19 a una concentración de 1:5 se sigue teniendo actividad antibacteriana y antifúngica, con un porcentaje de eliminación de Aerobios Mesófilos de 68.1% y para Mohos y Levaduras de 35.1%, lo que indica que el efecto residual evita la recolonización y sigue eliminando los MOs presentes en la superficie. Los resultados que se tienen con la desinfección por hipoclorito muestran una eliminación de Aerobios Mesófilos del 93.7% y de Mohos y levaduras del 99.1%, mostrando que es muy efectivo eliminando los MOs de las superficies, pero al aumentar la carga inicial pierde efecto y ya no se presenta el 100% de eliminación. Además hay que tener en cuenta que la tasa de recolonización es del 100%.

Gráfica 9. Línea de tiempo durante la desinfección que compara los dos desinfectantes usados (RSE-19 vs. Hipoclorito), valores promedio. Muestreo de superficies - piso, resultados para Aerobios Mesófilos. En la tabla 6 se ven los resultados para Coliformes Totales, se puede observar que a una dilución 1:5 el desinfectante RSE-19 no elimina estos MOs de la superficie y permite la recolonización, por lo que se recomienda usar a una concentración mayor para tener los resultados evidenciados en las pruebas de laboratorio que muestran una eliminación total de los coliformes de las superficies. El hipoclorito elimina esos MOs de las superficies a los 30 minutos de aplicación, pero permite la recolonización del 100% o más después de 24 horas de su aplicación.

Gráfica 10. Línea de tiempo durante la desinfección que compara los dos desinfectantes usados (RSE-19 vs. Hipoclorito), valores promedio. Muestreo de superficies - piso, resultados para Mohos y Levaduras. Tabla 6. Recuento de Coliformes Totales en superficie – Pisos. Comparación del efecto antibacteriano de dos desinfectantes, hipolorito y RSE-19.

Coliformes

Antes de desinfección 30 Min 24 horas

RSE AUSENCIA AUSENCIA AUSENCIA

RSE-2 PRESENCIA PRESENCIA PRESENCIA

NaClO AUSENCIA AUSENCIA

NaClO-2 PRESENCIA AUSENCIA

Fuelle

Para el análisis microbiológico del fuelle solamente se tomaron muestras tras la aplicación del RSE-19 a una concentración 1:5. El material del fuelle es tela con soportes metálicos. Los resultados se muestran en las gráficas 11 y 12 donde se puede observar que hay una disminución de 66.1% en promedio de aerobios mesófilos a los 30 minutos de exposición y de 75% a las 24 horas, lo que muestra la capacidad residual del desinfectante evitando la recolonización y teniendo efecto antibacterial aún después de 24 horas. Para los Mohos y Levaduras, en la gráfica 12 se puede ver que la eliminación promedio a los 30 minutos es de 81.9%, a las 24 horas hay una recolonización del 100% en una de las réplicas, y solo del 6% para la otra. Se debe tener en cuenta que otros desinfectantes permiten la recolonización del 100%.

Gráfica 11. Línea de tiempo durante la desinfección que compara las dos replicas tomadas de RSE-19. Muestreo de superficies - fuelle, resultados para Aerobios Mesófilos.

Gráfica 12. Línea de tiempo durante la desinfección que compara las dos replicas tomadas de RSE-19. Muestreo de superficies - fuelle, resultados para Mohos y Levaduras.

Discusión y conclusiones

El RSE-19 tiene pruebas de permanencia en superficies que muestran su actividad y presencia a más de 72 horas de su aplicación. Esta prueba se realizó sobre un sistema no controlado, con tránsito de personas continuo y sujeto a condiciones ambientales de sol y humedad normales en el transporte de pasajeros. Las pruebas fueron realizadas en dos vehículos, uno sometido a tránsito de pasajeros y trabajo por 24 horas seguidas, luego de la aplicación del desinfectante RSE-19 en sus superficies y los resultados muestran la permanencia del desinfectante después de que las superficies estuvieron

sometidas a condiciones no controladas y de intercambio de personal en su interior. Las pruebas de permanencia por medio del revelado enzimático mostraron la presencia de los componentes activos del RSE-19 a las 24 horas de la aplicación y después de ser sometido a este tránsito de personas. Esto indica que el RSE-19 es un desinfectante apto y que cumple con las expectativas de permanencia sobre las superficies, lo que permite tener una seguridad adicional al momento de exponer y diseñar los protocolos de bioseguridad asociados a vehículos de transporte de personas de manera continua y variable. Las pruebas realizadas en el vehículo #2 fueron pruebas de permanencia a las 24 horas de aplicación del RSE-19, y también incluyeron tomas después de realizar el proceso de desinfección habitual con hipoclorito por medio de la aplicación por aspersión. Los resultados soportan la presencia de los componentes activos en las superficies después de 24 horas de aplicación y aún después del protocolo de desinfección por aspersión de hipoclorito de sodio. También se incluyó una prueba de permanencia por revelado enzimático, luego de que pasaran 24 horas de la aplicación y después de que la superficie fue frotada con un hisopo húmedo en solución de cultivo microbiano, proceso que retiraría materia orgánica, desechos, microorganismos y químicos que pudieran estar presentes en la superficie. Los resultados muestran que las propiedades nanotecnológicas del RSE-19 lo mantienen anclado a la superficie aún después de un proceso mecánico de frotis. Los resultados microbiológicos muestran el desempeño del RSE-19 comparado con el desempeño del hipoclorito. Se puede observar que el hipoclorito tiene efecto de eliminación casi del 100% en todos los materiales, mientras que el RSE-19 a una dilución 1:5 no presenta estos mismos resultados a corto plazo, al subir la concentración se podrán evidenciar efectos similares o mejores a los presentados por el hipoclorito a la media hora de su aplicación. Además, se debe tener en cuenta que el efecto residual evita la recolonización del 100% que se presenta con el hipoclorito o cualquier otro desinfectante a las 24 horas de su aplicación; lo que nos permite afirmar el desempeño superior y de largo alcance que tiene el RSE-19. Se debe ajustar la concentración para que los efectos presentados en laboratorio se puedan evidenciar en los casos de trabajo en campo. Los resultados en laboratorio se obtienen en un ambiente controlado, donde los microorganismos ambientales son mínimos y la recolonización no es evidente. Estas pruebas en campo nos permiten evaluar la capacidad del desinfectante de comportarse de la misma manera en laboratorio y “vida real” en uno de los ambientes más complicados como lo es el transporte público masivo. La cantidad de personas que usan este servicio pueden cargar MOs que contaminan las superficies y se transmiten de persona a persona, lo que puede crear una reacción en cadena. Esto es lo que Multinsa quiere evaluar con estas pruebas de desempeño en campo, el comportamiento real del desinfectante sometido a pruebas pesadas de transporte y recolonización de MOs.

Estos resultados demuestran la gran capacidad de adherencia que presenta el RSE-19 sobre diferentes materiales y su capacidad de permanencia aún si es enfrentado con otro tipo de químicos o líquidos que sean aplicados sobre la superficie y bajo presiones de movilidad, intercambio de personal y frote de las superficies. Este informe se presenta como un soporte en un espacio no controlado como lo es un laboratorio a las capacidades y propiedades nanotecnológicas que posee el RSE-19, mostrándolo como una herramienta útil en los procesos de mitigación en la transmisión de enfermedades transmitidas por contacto o por superficies. Es importante tener en cuenta que los protocolos de bioseguridad deben ser ajustados a los requerimientos mínimos de cada espacio a trabajar, los métodos de aplicación y los tiempos de aplicación varían según las necesidades y características de cada espacio y lugar. El RSE-19 es una herramienta poderosa en la mitigación de las enfermedades virales, bacterianas y fúngicas que son transmitidas por contacto con superficies contaminadas, y debe ser usado acorde a las necesidades y características únicas de cada espacio. Es por eso que se recomienda una evaluación de los protocolos de desinfección utilizados y recomendados para que se ajusten a las necesidades de cada cliente, espacio y lugar y así poder aprovechar todas las ventajas que ofrece el desinfectante RSE-19.

Referencias

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(6) Ministerio de Salud y Protección Social. 2020. Resolución 666 del 24 de abril del 2020. “Por medio de la cual se adopta el protocolo general de bioseguridad para mitigar, controlar y realizar el adecuado manejo de la pandemia del coronavirus COVID-19”. Tomado de: https://id.presidencia.gov.co/Documents/200424-Resolucion-666-MinSalud.pdf (7) Ministerio de Salud y Protección Social. 2020. Limpieza y Desinfección en Servicios de Salud ante la introducción del nuevo coronavirus (SARS-CoV-2) a Colombia. Gestión de las intervenciones individuales y colectivas para la promoción de la salud y prevención de la enfermedad. Tomado de: https://www.minsalud.gov.co/Ministerio/Institucional/Procesos%-20y%20procedimientos/GIPS07.pdf (8) Farmacotecnia. 2020. Grupo de trabajo en farmacotecnia de la Sefh. Recomendaciones sobre el uso de desinfectantes y limpieza en las áreas de elaboración de medicamentos frente al COVID 19. Tomado de: https://www.sefh.es/fichadjuntos/Desinfeccion-limpieza-Farmacotecnia-COVID19.pdf (9) United States Environmental Protection Agency. 2020. List N: Disinfectants for Use Against SARS-CoV-2 (COVID-19). Tomado de: https://www.epa.gov/pesticide-registration/list-n-disinfectants-use-against-sars-cov-2-covid-19 (10) Pontificia Universidad Católica de Chile. Escuela de enfermería. Manejo de heridas. Antisépticos y desinfectantes. Tomado de: http://www6.uc.cl/manejoheridas/html/antiseptico.html (11) ARL SURA. Sf. Hipoclorito de sodio. Tomado de: https://www.arlsura.com/index.php/173-noticias-riesgos-profesionales/noticias/2243-hipoclorito-de-sodio (12) Eggers, M., Koburger-Janssen, T., Ward, L. S., Newby, C., & Müller, S. (2018). Bactericidal and virucidal activity of Povidone-Iodine and chlorhexidine gluconate cleansers in an in vivo hand hygiene clinical simulation study. Infectious diseases and therapy, 7(2), 235-247.