r I T Vr

BIYOFIZIK DERilEGITT

BULTENI'Biyofizik Dernegi Yayln Organt Agustos-Eylr i l 1996 Yl l :2 Sayl :2

Yayrn Kurulundan,

Btiltenimizde artrk bilimsel Eahqmalar da yer ala-caktrr. Dernek Ycinerim Kurulu'nun aldrfr karar do$-rultusunda ilk olarak bu sayrda VIII. Ulusal Biyofizik Kong-resi'nde rjdtil alan Posterler yayrnlanmaktadrr. Birincilik,ikincilik ve tigiinctiliik 6dtilti alan posrerler, srrasryla l)Radyo-ligant ballama yiintemi ile srgan beyin sinaptikmembranlarrna glumatik asit baflanmasrnrn kantitatifsaptanrnasr, 2) Plevra srvlslnda Mycobacterium Tu-berculosis etkeninin IS6ll0 dizisi aracrh$ ile saptanmasr,

3) Prokainin bilegik sinir aksiyon potansiyeli ve birleEikdinlenim potansiyeli iizerine etkisi baghklarrnr ta-qrmaktadrr. Bu uygulama difer sayrlarda da siirdtiri.ilecektir.

Bu do[rultuda Demek Ydnetim Kurulu'nun aldr$r karar ge-re$i dniimiizdeki sayrda da Ege Universitesi Trp FakiiltesiBiyofizik Anabilim Dahnda yaprlan Biyosinyal 96 Yaz okulu

ders notlarr rizeti yayrnlanacakhr. Daha sonraki sayrlarda

btiltenimizde yayrnlamayr diiqi.indti[Uniiz bilimsel makaleveya yazrlannr zr Y ay n Kurul u'na gcinderebilirsiniz.

Bir dahaki sayrda bulugmak iizere saygrlar sunanz.

VIII. ULUSAL BiYOFiZiK

KONGRESi'NiN AROINNIN

Bir golunuzun bildigi gibi kongre hazrrlamak uzunsliren, emek yo$un bir u$ragtrr. Ancak, agalrda tekrar de-Sinece$imiz umutlar ve umutsuzluklar, sevinqler ve krz-grnhklan ile geride brraktrfrmrz 28 Eyltil akgamr MarmaraUniversitesi Biyofizik Anabilim Dah olarak dtizenlemeklesorumlu oldu$umuz ilk kongreyi gergekleqtirmig olmanrnhakh gururunu tagryorduk. Bir gok katlllmclnln 0zellikte be-lirttigi gibi bazr ufak aksakhklarrna raimen hem bilimseligeri$i agrsrndan hem de derne$e brraktipr maddi katkr agr-srndan kongre bagarrh olmugtu. Yine de ileride kongre dti-zenleyecek arkadaglara yaran olacaSr diiEtincesiyle tarihgeyi,yani kargllagtrlrmtz sorunlan, yaqadrltmrz umutsuzluklanrizetlenreyi gerekli gcirmekteyiz.

Kargrlagtr$rmrz en biiyiik sorun tahmin edilebilece$igibi maddi sorun oldu. ige Biyofizik Demelinden avans ola-rak aldr[rmrz 4 Milyon TL. ile bagladrk. ilk ba$ta masraflannen bi.iyuk kalemini posta ve kA[rt masraflarr olugturdu. ilkduyurulann yerine ulaqmamasr ve bunu tekrarlamak zorundakalmamrz giderleri ikiye katladr. YavaE yavag gelmeye bag-layan ba$rElar ile bu masraflar kargrlandr. yaz geldiSindeformunu yollamrE gelece$ini belirtmiq ancak (ashnda di[erkongrelere gdre oldukga az olan) kongre aidatlannr 6de-merniE katrhmcrlann goklulu ve dolayrsryla bu konuda ya-Eanan belirsizlik, gelen ba$rglann yetersizliSi ve dcivize en-deksli olarak belirlenen konaklama ve salon kira i.icretlerininyiiksekliSi nedeniyle hayli gergin, umursuz ve kaygrh gtinleryagandr. Son ana kadar gece yemefinin yaprhp ya-prlmayaca$r, otobiis sorununun nasrl halledilebileceEini bi-leme_z bir durumdaydrk. istanbul Trp Faki.iltesi ile CeriahpagaTrp Fakiiltesi'nin ve TUBiTAK-GMBA'nIn da gayretleri iieson anda ahnan balrglann sonucu kongreye ancak bir haftakala bu sorunlarr halledebildik.

Di$er yaganan rinemli sorun ise bildirilerinr gcin-dermiE ancak aidatlarrnr yatlrmamlg katlllmcllann yarattlElbelirsizlik idi. Bu bildirilerin kongre kitapgrlrna basrhp ba-srlmamasrna karE vermek oldukga zor oldu ve sonunda ba-srlmasrna karar verildi. Bu karar tiyelerimizin koEullannr 96zdntine alarak verildi. Ancak, bunun bir adet haline eelmemesikonusunda tiim iiyelerimizin ve Biyofizik camiairnrn uya-nlmasrnr gerekli gtirmekteyiz. Gerek yurt drgrnda gerekse

! Yayrn kurulundan

| 8. Ulusal Biyofizik Kongresiardrndan

Kongre Duyurularr

Makaleler

oo

yurt iginde bu kurala kesinlikle uyuldu$unu bilmekteyiz.Kongre hazrrhklan srasrnda bunun ne kadar hakh bir kararoldulunu gdrdtik. Aynca unutulmamaltdrr ki aidattnt gdn-dermeyenlerin bildirileri gdnderenlerin strttndan bastlmtq ol-maktadlr. Kongreden sonra gergekleEtirilen kuramsal kursakatrhmrn gok diiqtik olmasr bizler igin tizticii oldu. Btiytikzorluklarla gerek yurt iginden gerekse yurt drgtndan getirilenve hepsi kendi dallannda yetkin kigiler olan konugmacrlannBiyofizik camiasrndan daha gok i.iyenin yararlanabilmesiniisterdik.

Bu zorluklann ve aksakltklann drgrnda en dnemli vesevindirici gdzlemimiz kongreye katlhmtn yiiksek olmasr vesunulan bildirilerin bilimsel igerifinin daha Onceki kong-relere'oranla daha zengin oluEudur. Bu, kantmtzca TUr-kiye'deki Biyofizik dahnrn bilimsel agrdan giderek gtig-lendifinin ve bu alanda galtlan ara$ttrm.acrlann biiyiik birhrzla yetkinlegtiklerinin bir gcistergesidir. Ulkemizde oldukgayeni olan bu Anabilim Dahnrn bu kadar krsa bir zaman igindedi$erlerinin yanrnda saygrn ve nitelikli yerini almast he-pimizin katkrsryla gergeklegtirilecektir ve bunun onuru he-pimize ait olacaktrr. Bazl Biyofizik Anabilim DallanndanBiyofizik Kongre'sinin her yrl de[il iki yrlda bir dii-zenlenmesi dnerisi gelmiEtir. Buna gerekge olarak bildiri ka-litesinin ve kattltmtn daha da artaca[r gOsterilmigtir. Ka-nrmrzca bu hakh bir gerekge olabilir ve toplannlanmrzt bir yrlsempozyum ya da kurs geklinde di.izenlemeye gidebiliriz. Budnerinin Biyofizik Derne$i Ytjnetim Kurulunda tar-trgrlmasrnda yarar gdrmekteyiz.

Ttim iiyelerimizin gelecek gahgmalannda bagan di-leklerimizle.

M. U. Trp Fakiiltesi

Biyofizik Anabilim Dah

KONGRE DUYURULARI

FEBS'97 Ozel Toplantrsr

"Cell Signaling Mechanisms From Membranes to Nucleus"

29 Haziran - 3 Temmuz 1997

Amsterdam - Hollanda

Bildiri giinderme son tarihi : I $ubat 1997

Bagvuru adresi : Congress Secreterait

c/o Lidy Groot Congress Events

P.O. Box 83005

1080 AA Amsterdam / The Netherlands

Tel.: 3l-20-679 3l l8

Fax:31-20-675 8236

11. Balkan Biyokimya ve Biyofizik Giinleri

15-17 Mayrs 1997

Selanik - Yunanistan

Bildiri gcinderme son tarihi: 31 Ocak 1997

Bagvuru adresi : Prof. A. Dimitriadou - Vafiadou

Lab. of Biological Chemistry Medical

SchoolAristotle University of Thessaloniki

54006 - Thessaloniki GreeceTel:003031 -999002Fax:003031 -999004

2. Avrupa Biyofizik Kongresi

15-17 Mayrs 1997

Orl6ans. Fransa

BaEvuru adresi : CNRS-Rue Charles Sadron F-45071

Orleans. Cedex 2

Tel: 33-02-38255589

Fax:33-02-38690151

Email : vigny@cnrs-orleans. fr

ICGEB Fellowship Programme 1997

2nd Review 30 June 1997.

International Centre for Genetic Engineering and Bi-

otechnology office of the director (Fellowship Programme)

Padriciano 99,34012 Trieste - Italy

Tel: +39-40-3757305

Fax: +39-40-226555

2

a

RADyo-LicANT BAdra'MA vdNrrui ir-rsrQAr{ nnYiN siNegrir

MEMBRANU'RINAcrureuir esir sedr-ANMASTI\rN

reNrirerir SAPTANMAST.

Asiye Nurtenr ve Riistem Nurtenl'2

ozE,r

L-Glumatik asit ya da onun iyonize gekli olan glu-

tamat iyonu (GLU), memeli santral sinir sisteminde eksitatttr

ndrotransmiter olarak rol oynamaktadrr' Glutamik asit re-

septdrlerinin beyin ve omurilikte gelitli agonist ve an-

tagonistlere olan duyarhklartna g0re beE alt grubu oldulu

gtisterilmigtir. Ozellikle beyin ntironlannln sinaptik b6l-

gelerinden izole edilen kesimlerin L-Glutamat ba$lama tizel-

likleri igin birgok gahqma yaprlmrgtrr' Bu reseptdrler iginde

engok incelenen NMDA (N-metil-D-aspartat) reseptdrlerdir'

Bu iyonotropik reseptdrlerin epilepsi, iskemik beyin hasan'

6[renme, opiat bafrmhh$r gibi farkh iglemlerde rol0 oldugu

bilinmektedir. Ancak glutamik asit reseptdrlerinin bu me-

kanizmalardaki diizenleme rolii ite ilgili agrklama gok azdtr'

Glutamik asidin reseptdrlerle olan iligkisinin kantitatif sap-

unmasl bu do$rultudaki gahgmalara yardtmct olacaktrr'

Bu amaq do[rultusunda, gahEmada radyo-ligant ba[-

lama tekni$i kullanarak slgan beyin sinaptik membranlartna

L-Glutamik asidin ba$lanmasr kantitatif olarak saptandt'

Once stgan beyin sinaptik membranlart, homojenleqtirme ve

santriftijleme teknikleri kullanarak elde edildi' Daha sonra

radyoJigant baflama tekni$i gartlan belirlenerek baE-

lanmantn disosiyasyon (aynErm) denge sabiti

K,r= I I 0t9.2nM, ba$lanma miktart B.uk=g I 0f78'2 fmol/mg

olarak saPtandt.

l- iii D"").*l Ttp Araltrrma Enstitiisii Sinirbilim Anabilim Dah

qapa - iSTANBUL

2. i.U. istanbul Trp Fakiiltesi Biyofizik Anabilim Daltqapa - ISTANBUL

*BuqalrqmaistanbulUniversitesiAraqttrmaFonu.ncadesteklenmiltir.

(Prcje No.:855/090896)

GiRi$

Glutamik asit beyinde ve omurilikte bulunan ek-

sitatdr bir ndromedyatordtir. Clutamik asit veya onun iyonize

Eekli olan glutamat iyonu' sinir uglannda oksoglutarik asit ve

glutamat ile denge halinde bulunur' Sinir uglannda sinaps

aralt[tna sahverilen glutamik asidi igeri pompolayan ytiksek

afiniteli bir geri ahm "uptake" mekanizmastnrn varlt[t gds-

terilmigtir. Glutamik asit sinir ucunda glutaminaz enzimi

yardrmryla glutamin hidrolizi sonucu olugur' Az bir ktsmt ise

oksoglutarattn oksidasyon ve transaminasyon yoluyla glu-

kozdan sentez edilir. Sinir ucundan glutamatln sa-

hverilmesinin Ca2*'e ba[rmh oldu$u gtisterilmiqtirr'

Beyinde ve omurilikte geqitli agonist ve an-

togonistlere olan duyarhklarrna gdre beq tiirlii glutamat re-

septdrii bulundufunu gosteren deneysel kanrtlar elde edil-

miEtir. Clutamat resepttirleri aspartata da afinite gtisterirler

ve onun taraflnda da aktiflegtirilebilirler' Bu nedenle glu-

tamat reseptOrlerine eksitatbr amino asit (EAA) reseptorleri

de denir2.

Beyin nOronlannrn sinaptik btilgelerinden izole edi-

len kesimlerin glutamat ballama tizellikleri igin birgok 9a-

hgma yaprlmrgtrr. Bu reseptdrler iginde engok incelenen N-

metil-D-aspartat (NMDA) resept6rleridir' Bu iyonotropik

reseptdrlerin epilepsi, iskemik beyin hasan, iifrenme' opiat

ba$rmhh[r gibi farkh iglemlerde rolii olduSu bilinmektedir'

Ancak glutamik asit reseptOrlerinin bu mekanizmalardaki

dtizenleme roli.i ile ilgili agrklama gok azdtr' Glutamik asidin

resept0rlerle olan iligkisinin kantitatif saptanmasl bu do[-

rultadaki gahgmalara yardtmct olacakttr3-10'

Bu amag dofrultusunda radyo-ligant ba$lama tek-

nifinin kullanrlarak srgan beyin sinaptik membranlarma glu-

tamik asidin ballanmasr dtiEiiniildii' 3H' r4C veya l25I ile iqa-

retli spesifik ligantlar kullanrlarak yaprlan radyo-ligant

ba[lama yOntemleri ile hiicre homojenatlartnda, hiicre kiil-

tiirlerinde veya dokulanndaki hiicrelerde reseptorlerin ay-

nntlh bir gekilde incelenmesi miimkiindiir'

Membran reseptiirlerinin radyoligant ba[lama ydn-

temleriyle incelenmesinde 6nce h0cre homojenattndan

membran pargalarrnt igeren kesimler aynlrr' Sitoplazmik re-

septcirlerin incelenmesi igin ise goztilebilir reseptorli lQeren

kesim aynltr. Her iki durumda da reseptOrti igeren kesim da-

ha sonra, radyoligandrn artan konsantrasyonu ile belirli bir

srcakhkta ve belirli bir siire inkiibe edilerek her bir kon-

, I

:--

santrasyondaki spesifik baflama cilgi.iltir. Bu delerler gra_fiklenerek doygunluk (satiirasyon) egrisi gizilir. Aynca cil_giimler Scatchard grafiline uygulanarak elde edilen Ka yaniligand-reseptdr kompleksinin denge durumundaki di_sosiyasyon sabiti (ligandrn reseprdre kargr afinitesi) V€ B,uk,(reseptdr saylsl) degerleri hesaplanrr.

Qahgmada srgan beyin sinaptik membranlan ho_mojenlegtirme ve santriftijleme teknikleri kullanrlarak eldeedildi. Radyo-Ligant ballama tekni$i larrlan belirlendi. 3H_

glutamik asidin srgan beyin sinaptik membranlarrna ba$,Ianmastnrn disosiyasyon (ayrrglm) sabiti ve ba$lanma miktansaptandr. Biiylece bundan sonra yaprlacak bu dolrultudakigahgmalara katkl sa$landt. ''

GEREq VE YONTEMLER

i.U. Deneysel Trp Ara$tlrma Ensrirtisiinden allnan2W-250 g a$rrhsrnda erkek inbred Wistar srganler deneydekullanrldr. L-(3H) Glu (spesifik aktivite 40 CilmMol) Amers_ham (England)'dan sahn alrndr. Kullanrlan ri.im kimyasal mad_deler Sigma (Chemical Comp. U S)'dan elde edildi.

Sinaptik membranlarrn hazrrtanmasr:

Yoneda ve Ogitalt.l2 ve Emmelot ve arkt3,nrn ydn-temleri de$igtirilerek sinaptik membranlar hazrrlandr. Sr_ganlar servikal dislokasyondan sonra kafalan kesildi. Be_yinleri hemen grkanlarak 4oC'ye ahndr. Beyinler yabancrdokulardan temizlendikten sonra OoC'de 9 hacim (v/w 0.32M sukroz ilavesi ile l0 vurum teflon-cam homojenleqtirici(B. Braun Melsungen-Germany) ile g00 devir/dakika'da ho_mojenlegtirildi. Homojenarlar daha sonra l000xg de 20 da_kika santrifiijlendi. Ust srvr ahnarak l0000xg de 20 dakikasantrifiijlendi. Tekrar tist srvr ahndr ve 50000xg de 20 dakikasantrifiijlendi. Pelet ahndl ve 0.C'de bidestile su ile re_stispende edildi ve 50000 xg de 20 dakika santrifiijlendi. Buiglem i.ig kez tekrarlandr. Son pelet daha sonra -g0"C,de sak_landr. Deney giinii dondurulmuq pelet ahndr ve 50 mM tris_asetat tamponunda (pH 7.4) resiispende edildi ve 50000xg de20 dakika santrifiijlenerek pelet ahndr ve aynl tamponda re-si.ispende edildi. Bu iglem iig kez tekrarlandr. Son santriftijigleminden sonra pelet 50 mM Tris-asetat tamponunda (pH7.4) gdztildti.

Radyo-ligant ballama deneyi:

Kinetik parametreler (Ko ve B.u*") I mM L_Glu var_

hlrnda ve yoklufunda L-(3H)_Glu,nun 5_500 nM (son kon_santrasyon) de[igen konsantrasyonlan kullantlarak sa_turasyon deneyleriyle betirlendi. Ba[lama deneyleri 2oC,del0 pl hacimde yaklaErk 200-250 pg membran proreinleri ilegergeklegtirildi. Spesifik olmayan baglanma I mM iqaretsizL-Glu varhlrnda belirlendi. Spesifik olmayan ballanma ImM iEaretsiz L-CIu varhllnda belirlendi. l0 dakika in_kiibasyondan sonra reaksiyon so$uk (0.C) 2 x5 ml 50 mMTris-asetat (pH 7.D ile GF/B (Whatman) filtreleri kul_lanrlarak hrzlr filtrasyon ile tamamlandr.

Bu filtrelerdeki radyoaktivite triryum igin sayrm ve_rimiVo64 olan likit sintilasyon sayacrnda (packard) sayrlarakbelirlendi. Her sonug Vol\,dan daha az bir farkla tig deneyinsonunda hesaplandl. Spesifik ba$lama total ba$lanmanrnVo80-9 0' t olarak saptandl.

L-(3H)-Glu ballanma deney sonuglan en ktiglik ka_reler yiintemine g6re Scatchard analizi ile bilgisayar yar_drmryla saptandrla. Protein konsantrasyonu Lowry ve ark.yrintemine g6re belirlendi r5.

BULGULAR VE TARTISMA

Stgan beyin sinaptik membranlannrn izolasyonu Ge_reg ve Ydntemlbr briliimtinde aglklandr$r gekilde ger_gekleEtirildi. Degigik orramlarda (TrisHCt, pH 7.4, Tris_Sitrat, pH 7.4 ve Tris-Asetat, pH 7.4) elde edilen sinaptikmembranlar kullanrlarak yaprlan ba$lama deneyleri sonucuelde edilen ba$lanma miktarlarr Tablo I'de topluca g6s_terilmektedir. Gririildiigii gibi Tris_Asetat, pH, 7.4,de eldeedilen sinaptik membranlara baflanma miktannda en vijksekde$ere ulagrldr.

Tablo l. Deligik ortamlarda elde edilen srgan beyin sinaptik memb_ranlara (3H) Glutamik asit ba!lanmasr. Ballanma b"r.g ui ytint".l".kiliimiinde agrklzurdrlr gibi yaprldr. Delerler birbirinden baErmsrzdtirt deney sonucu elde edildi.

Ortam Ballanma miktan(fmol/mg protein)

Tris-HCl, pH,7.4

Tris-Asetat, pH, 7.4

Tris-Sitrat, pH,7.4

178.2 + 17.6

316.1 + 42.1

24t .6 + 3t.8

Ortamtn belirlenmesinden sonra uygun srcakhk vesiirenin saptanmast iEin yaprlan radyo_ligant ba$lama de_neyleri sonucu elde edilen ba$lama miktarlan slcaklrk vesiireye ba$h olarak Tablo 2 ve Tablo 3,de verilmektedir.Tablolarda giiriildtigii gibi, l0 dakika ve 2oC'de yaprlan de_neylerde en ytiksek ballama miktarrna ulagrldr.

4

Tablo 3. Sinaptik membranlara (3H) Clutamik asit ballanma mik-

tu.tr* i*tiUutyon srcakhlrna bafrmhhfr' Ballzurma l0 dakika in-

i.;il6 siires'inde Gereg-ve Yiintemler biiliimiinde agrklandrlt 9e-kilde gergekleqtirildi.

Srcakhk ("C) Ba!lanma miktart(fmol/mg protein)

2

5

l0

20

30

4t2

378

265

246810

l/ cH) Glu (nM"') x l0-2

$ekil 1. Sinaptik membranlara (3H) Clutamik asidin baElanmasrnrn

iantitatif *upi*tou K6 ve B,n* Gereg ve Ydntemler- btjliimiinde

aqrklandrlr gekilde saptanan o'ii-'u" srctkhkta yaprlan ballama de-

n"yf.ri to-nu"u "n

kiigiik kareler yiintemine giire Scatchard analizi ile

elie edildi. Delerler l0 ayn deney sonucu ile saptandt'

Uygun siire ve slcakllErn belirlenmesinden sonra

denge doyum ballanma deneyleri ile denge sabiti ve ba[-

lanma miktan saptandr. $ekil l'de gtiriildii$ii gibi elde edilen

ba$lanma miktannrn resiproku ile kullanrlan (3H) Glutamik

asit konsantrasyonunun resiproku arasrnda en kiigiik kareler

ycintemine gtire gizilen grafikten K.r = I l0 + 9'2 nM'

8."*=910.1 t 78.2 fmol/mg olarak belirlendi' Delerler l0

ayn slgan beyin sinaptik membranlarl ile yaprlan deneyler

sonucu elde edildi.

Bulgularrn tekrarlanabilir olmasl ortaya konan bu

radyo-ligant ba$lama ytintemi ile, srgan beyin sinaptik

membranlanndaki reseptdrlerine etki eden parametrelerin

araqttrtlmastna olanak tanrdt' Amag, bundan sonra bu re-

sept6rlerinin tipini belirleyerek glutamik asidin bu re-

septiirlerle etkileqmesine etki eden faktorleri belirlemektir'

Tablo 2. Sinaptik membranlara (3H) Clutarnik asittallanma mik-

"ttt* i"tlitutyon siiresine balrmlrhfr' Ballamna 2t inkiibasyon

;;;i;E;"tdt 9 ve YdntemlEr boliimtinde aqrklandrlr gekilde ger-

geklegtirildi.

185

t76

KAYNAKLAR

l. Breese, C.R., Leonard, S.S., Clutamate relePt9l subtype exp-

ression in human postmortem brain' J' Mol' Neurosci'4 (4)'

263,27s. (1994).

2. Mayer, M.L., Westbrook G.L., The physiology of excitatory-'

u.'i*'a"iOs in the vertebrate central nervous system' Progr'

Neurobiol. 28, 197-276' (198'7).

3. Ktthr, G., Eckard, S., Liiddens, H', Monyer, H'' Seeburg' P'' H"-

Nft{nn ieceptor channels: Subint-specihc.potention by re-

ducing agenti. Neuron, 12, l03t-1040' (1994)'

+. oanys"z,iv., Archer, T.' Glutamate' learning and,dementia-'

ielection of evidence. Amino Acids. 7, 147 -163 ' (1994)'

5. Baran H., Liischer' Mevissen, M', The glycine/l'iMDAreceptor"

;;;l;g;;iit D-cycloserine block kainate-induced seizures in

I"Lt E"tip"titi"n *ittt tt'tK-SOt and diazepem' Brain Res' 652'

195-2oO' (1994).

6- Kovuncuollu. H., Hatipo[lu, I., Sanca, O'' Morphine physical

dependenci intensification by hypoglycemia^NM-DA receptor

iniol."nt. Pharmacol. Biochern Behav' 48 (37' 571-574\'

(1994).

7. Sundstrdm, 8., Mo,L.' L., Effects of l-methyl-4 phenyl-

pyridunurn on radioligand binding to -the

NMD^A .receptori6.pf"*. Res. Commuir. Mol. Pathol' Pharmacol'88 (2)' l3l-

r 36, ( 1995).8. Meeker, R., B., Greenwood, R., S', Hayward, J' N- Glutamate''

t"."ptoi in theirat hypothalamus and pituitary' Endocrinology'| 34 (2\, 621 -629. ( I 994).

9. Brann, D., W., Zamorano, P.' L', Chorich, L' P" Mahesh' V''- s., ii;i"ii hormone etTects on NMDA receptor binding and

Ntt'lOR t"."pto, mRNA levels in the hypothalamus-and ce-

r"urat cort",. btthe adult rat. Neuroendocrinology '58'666-6'12'( 1993).

l0 Diurysz, W. Essmaurn, U., Bresink, I', Wilke' R', Glutamate

antasonisthave different effects on spontaneous locomotor ac-

; i l ; " i l ; ; . Pharmacol . Biochem. Behav' 48 ( l ) ' l l l - l18

(r994).Yoneda, Y. and Ogita, K., Labeling of NMDA receptor chan-

*lr Uu ililftff-S-Ol in brain synptic membranes treated with

tr i ron X-100, Brain Res..499' 305-314' (1989) '

Yoneda, Y. and Ogita, K., Heterogenety of the. N-methyl-D-

;r;;; receptor [nophore compiex in rat brain, as revealed

uirig*1 ut*ir"g techniques, J. iharmacol' Exp' Ther" 259'

Siire (dakika) Ballanma miktart(fmol/mg protein)

86-96, (1991).13. Emmelot,P. - Bos, C., J., van Hoevei, P' turd van Blitterswi Jk'' -

w., t. Isoiation of plasma membrans rt$ Pt uf .*gu.t: l1]1:il;";;;;;.;t., rt.i*t'"' and L', Packer (Eds')' Methods:--:--- ' vvvr D^* A anqrlamin Prcss I ondon-i" g"iytofogy, Vol. XXXI Part A. Academic Press' London'

oo '1 5-90. (19'7 4).ppI

5

l0

20

30

219

278

396

t4. Lowrv, O., H., Rosebrough, N', J', Four, A" L" Randall' R' J"' '

F-t"in.""surament with folin phenol reagent' J' Biol' Chem'

193,26s-275, (1951).

15. Klou, 1., M., Intraduction to biomolecular entergetics' Inc-

luding ligandreceptor interactions' Academic Press' Inc' Flo-

rida ( 1986).

186

132

PI.EVRA SIVISINDA MYCOBACTERIUMTUBERCULOS$ ETKENiNiN

rs611o oizisienecrrrdrrrl. sAprANMAsr

Tammam SiPAHi', Osman Ziya SAYHAN'

Ayge BAHADIR2, Beki KANr, Nur SAYHAN3,

6zsrBu gahgmada klinik olarak tuberkiiloz tanrsr konmug

ya da ti.iberkiiloz qiiphesi olan hastalann balgam ve plevra

srvrlannda bakterilerin varh$r bu etkenin genomunda bu-

lunan iki farkh b<ilgeye cizgii primerler ile go$altarak sap-

tandr. Bunlardan biri bakterinin 65 kDa'luk antijeni kodlayan

bir bdlge olup diferi bakteri genomunda 5-10 kez tekrarlanan

bir dizi olmasr nedeniyle PCR reaksiyonunda kullanrlmasr

daha avantajh gdriinen 1561l0 dizisidir. Qahgmamrzda aynr

klinik dmeklerde bu iki bdlgeyi go$altarak hibridizasyon ig-

lemi gerektirip gerektirmemesini pratiklik ve dzgiinliik agr-

srndan kryasladrk.

cinig

Tiiberki.iloz yrllardrr di.inyanrn en tjnemli saflrk so-

runlanndan birini olugturmaktadrr. Ancak bu enfeksiyonun

engellenmesindeki en bi.iyiik eksikliklerden biri etiyolojik

ajanrn yani Mycohacteriunt Tuberculosis'in etkin kontrolu

igin gerekli hrzh ve kesin sonug verebilecek bir teghis ydn-

teminin olmamasrndan kaynaklanmaktadrr. Son ydlarda ge-

l. Marmara Universitesi Trp Fakiiltesi Biyofizik Anabilim Dah - iSTANBUL

2. Yedikule Giigiis Hastalrklarr Hastanesi - ISTANBUL

3. i.U. Cenahpaqa Trp Fakiiltesi Trbbi Biyoloji Anabilim dah - iSTANBUL

Iigtirilen DNA amplifikasyon ydnteminin diger tanr ytin-

temlerine gdre daha hzh ve daha hassas oldu$u dne sii-rtilmektedir. Bu amagla birgok araEtlrmacr deligik primerler

kullanarak M. tuherculosis genomundaki deligik bdtgelerigo$altmaya ve cjrneklerdeki M. tnberculosis 'in varh_Ernr

saptamaya gahgmrElardrr. Bunlardan hangisinin daha hassas

ve 6zgUn oldu$u gi.intimtizde halen tartl$ma konusudur.

GEREQ VE YONTEMLER

Bu gahgmada S. B. Yedikule Gciftis Hastahklan ve

Heybeliada Gcigi.is Hastahklan Senatoryumuna ti.iberkiiloz

gikayeti ile bagvuran yaqlarr l7 ile 70 arasrnda defigen 19

kadrn ve 57 erkekten 14 balgam ve 62 plevra srvrsr ahndr.

Klinik muayene ve radyolojik tetkikler sonucunda balgam

ahnan 14 hastaya ve plevra srvrsr ahnan 52 hastaya ti.i-

berkiiloz ya da gUpheli ttiberkiiloz teEhisi konutdu. Malign

intratoraks neoplazmr sonucu pleral efiizyon oluqmug olan 10

hastanrn da plevra srvrsr kontrol grubu olarak degerlendirildi.

Kullanrlan Primerler:

65 kDa'luk antijeni kodlayan bdlge primerleri

TB- I : 5' - GAGATCGAGCTGGACGATCC-3'

TB-2 : 5' - AGCTGCAGCCCAAAGGTGTT-3'

1561l0 Tekrarlanan dizi parametreleri

IS- I : 5' - CCTGCGACCCTAGGCGTCCG-3'

IS-2 : 5' - CTCGTCCAGCGCCGCTTCGG-3'

DNA Amplifikasyonu

PCR reaksiyonu TB-1 ve TB-2 primerleri veya IS-l

ve IS-2 primerleri kullanrlarak 25 pl'lik reaksiyon hacminde

yaprldr. Reaksiyon ortamr 67 mM Tris-HCl (pH 8), l6 mM

amonyum sulfat, 170 pg/ml bovine serum albumin, l0 mM

B-merkaptoetanol, 7 pM EDTA, 6,7 mM MgCl., herbir

dNTP'den 1,4 mM ve herbir primerden 0,5 trrM igermekteydi.

Reaksiyon ortamlna I tinite Taq polimeraz ilave edilerek

PCR reaksiyonu gergekleqtirildi.

PCR KoEullan:

Tdak 94'C ilk denattirasyon

30 sn 94"C

30 sn 55"C2dak 72'C7 dak 72"C

deantlirasyonpriemer ballanmaill 30 dringtisentez

son sentez

6

I

I

I

BULGULAR

l4 balgam drne$inde her iki primer gifti ile PCR re-

aksiyonu sonucunda M. tuberculosis'in varlr[r saptandr.

Hasta grubunu olur;turan 52 plevra cirnefinin 43 tanesinde

TB-l ve TB-2 primer gifti ile PCR ve Southern Blot iglemi

sonucunda M. tuberculsois enfeksiyonu oldulu gcizlendi. 52

drnelin 3 I'inde agaroz jelinin etidyum bromiir ile boyanmasr

ve UV altrnda incelenmesi sonucunda bekleni len 383 bE'l ik

tirtin saptanrrken (Resim-l) geriye kalan 21 tanesi igin So-

uthern Blot ve hibridizasyon iqlemi sonucunda ancak kesin

sonuca ulagrlabi ldi. Bu 2l drneSin l2 tanesi hibridizasyon

sonucunda pozitif sonug verirken 9 tanesinin sonucu gene

negatifti. Diler taraftan ba'igam rirneklerinin hepsinde mik-

roskopik incelem sonucu M. tubert:ulosis varhlr saptanrrken

bunlann 7o50'sinde ktilttir sonucunda basil iiremiqtir. Plevra

srvrlarrndan sadece bir tanesinde (7o1,9) mikroskopik in-

celeme sonunda bakteri belirlenmig olup higbiri ktilttirde

tirememiEtir.

Resim-l : o/t2'hk agoroz jcl elektrotbrezinde yiiriitiilen ve 383 bg'likbant elde edilen drneklerin UV'deki gitriinttisii. I ) Negatif kontrol2\ 2, 3, 4, 5, 6 : PCR (+) plevra tirnekleri 3) M : Marker DNA

ikinci primer gifti olan IS- l ve IS-2 primerleri ile aynr

plevra drneklerinin 42 tanesinde ve balgam Orneklerinin

hepsinde hibridizasyon iglemine gerek kalmadan agaroz je-

linin etidyum bromtir ile boyanmasr ve UV altrnda in-

celenmesi sonucunda M. tuberculsois varlr$r saptanmr$tlr

(Resim - 2).

Kontrol grubunu olugturan l0 plevra 0rnelinde ise

gerek DNA analiz ycintemleri gerekse mikroskopik ve bak-

teriyolojik tetkikler sonucunda M. tuberculsis varhlr sap-

tanmlEtlr.

Resim-2 : o/o2'lik agoroz jel elektrolbrezinde yiiriitiilen pozitifdrneklerin UV gririintiisi.i

TARTI$MA VE SONUQ

Qahqmamrzda 14 balgam rirne$i tiiberkiiloz gtiphesi

olan 52 plevra srvrsryla l0 kontrol plevra srvrsrnda M. tu-

bertulosis enfeksiyonu iki farklr primer gifti kullanrlarak

aragtlnlmr$tlr. Balgam cirneklerinin hepsinde hem mik-

roskopik ydntem ile hem de PCR reaksiyonu ve hib-

ridizasyon ydntemi ile M. tuherrulo.sl.r varlrfr saptanmlltlr.

Plevra cirneklerinin 3l ' inde ise TB-l ve TB-2 primerleri i le

PCR yaprldrktan sonra geriye kalan l2 tanesinde ise cizgiin

prob ile hibridizasyon igleminden sonra olmak i.lzere toplam

43 tanesinde M. tuberculosi.s enfeksiyonu oldu$una karar

veri lmiEtir.

,ikinci primer gifti olan IS- I ve IS2 primerleri ile PCR

yaprldrlrnda ise hibridizasyon iglemine gerek kalmadan bal-gam drneklerinin 42 tanesinde M. tuberculosis enfeksiyonu

belirlenmiqtir. Hibridizasyon sonucu pozitif olan bir <irnek

ise bu primer Eifti ile negatif sonug vermesine ralmen bununo/o 2,3 glbi oldukga diigiik bir de$er oldugu g6riilmti$tiir.

Kontrol grusunda ise her iki PCR reaksiyonunda yanhg po-

zit i f l ik anlamrnda herhangi bir i i r i in gcizlenmemigtir .

Bu sonuglar do$rultusunda gahgma de$erlen-

dirildi$inde PCR reaksiyonunun 6zellikle plevra srvrsr gibi

gok etken igeren klinik cimeklerdeki enfeksiyonu belirlemek

igin di$er mikrobiyolojik ve bzrkteriyolojik ycintemlerden gok

daha hassas, hrzh ve gi.ivenilir oldu$u saptanmtgtlr. Diger ta-

raftan I56l l0 bcilgesi gogaltrldrErnda hibridizasyon iglemine

gerek kalmadan aynl hassasiyet ile krsa siirede M. lu-

berculosis varlr$r belirlenmektedir. Rutin olarak, ttiberkiiloz

Eiiphesi olan ve tanr konulamayan hastalarda elde edilecek

klinik cirneklere 156l l0 dizisine rizgii primeiler kullanrlarak

yaprlacak PCR iqlemi sonucunda M. tuherculo.ri.r en-

feksiyonu olup olmadr[r kolayhkla ve oldukga duyarh bir

qekilde anlagtlacaktrr.

7

Qalrgmamrz sonucunda M' tuberculosis tayininde' bu

bakteriye 6zgii iki diziden biri olan 156ll0 dizisinin amp-

Iifikasyonu daha avantajlt, pratik ve Ozgiin oldufu be-

lirlenmiqtir.

PRoKAiN'iN nir rEir siNiRersivoN POTANSiYETi Vn

nimsir DiNITNiM POTANSiYELi" t;aniwn nrrisi

Tufan MERT, Mustafa iTEGiN,

Avkut PELIT, ismail GUNAYT

KAYNAKLAR

l. Levine H, Metzger D, Lacera D, Kaly L: .Diagnosis of tu-

" t .."utor"'pt.urily by culture of pleural biopsy specimens'

Arch. Intem. Med. 126''269-7l' (1970)'

2. Brisson-Noel A, Lecossier D' Nassif X' Gicquel -B'.

Levy--'

ni.'U."ft V. Hance AJ: Rapid diagnosis of tuberculosis amp-

ir'n*ti"" of mycobacteriat bNa in clinical samples' Lancet 2:

1069-71, (1989).

3. Mzrniunath N, Shzurkar P, Rajan L' Bhargava A' Saluja S' Shri--'

;J; $t;;"iuation of a poiymerase chain reaction for the di-

;;;;;;iu,b"t;ulosis. Turbercle 72:2r - 27 ' (1991)'

6zv.r

Qahgmada, sukroz-gap tekni$iyle farkh prokain

konsantrasyonlarrnrn, kurba$a siyatik siniri bilegik aksiyon

potansiyelinin (BSAP)' genlik (V), Latans (TL)' de-

polarizasyon zamanl (ToJ, yarr repolariasyon zamanr (l/

2Tps) ve bitegik dinlenim potansiyeli (BDP) iizerine etkileri

araltlrlldr. i

Qahgmada afrrhklan 70-80 gram arastnda de$iqen

kurba$alardan grkarrlan 5-7 cm uzunlulundaki siyatik sinir

demetleri kullanrldr. Sukroz-gap teknifiyle bu sinirlerin 22-

24oC':lave 7.4 pH'da BSAP parametreleri ve BDP'si kontrol

(0 mM), l ,2.1,4.2 mM Prokain konsantrasyonlarrnda 30

dak. stireyle kaYrtlandt.

Kaytt srrasrnda desheat edilip sukroz-gap kutusuna

yerlegtirilen sinirler Nihon Kohden SEN-3301 stim$lattirii ile

uyanldr, Ag-AgCl kayrt elektrotlan ve Grass P-16 AC/DC

preamplifikatdr0 ile kayrtlandr' Amplifikatilriin AC qt-

krErndan BSAP ve DC grkrgrndan BDP'ler iki kanalh Hitachi

VC-6045 Digital Storage Osiloskobu ve pen recorderinde

gdzlendi hafizaya altndt ve ka[rda gizdirildi' Daha sonra

BSAP'lar storage osilosokoptan bilgisayara aktanldr ve Bi-

SiP programrnda deferlendirildi'

SonuE olarak, prokainin konsantrasyona ba$lr olarak

BSAP'nrn genlifini dtigtirdtifii, latans, depolarizasyon za-

manl ve yart repolarizasyon zamanlnl arttrrdrlr ve bileqik

dinlenim potansiyelini hiperpolarize etti$i belirlendi'

ciRi$

Lokal Anastezikler (LA) sinir zartndaki sodyum ka-

nallartnt geri ddniiq0mlti olarak bloke eden ilaglardrr3' Lokal

anestezik ajanlar, sinir ve iskelet kasr gibi dokulann uya-

nlabilirli$ini baskrlamaktadrrr' Voltaj-Clamp gahSmalart'

anestezik molekiillerin sinir zarlanntn i9 bdlgesinde anes-

tezik molektillerinin sodyum kanallannr direkt olarak et-

L Qukurova Universitesi Trp Fakiiltesi, Biyofizik Anabilim Dalt

Balcah - ADANA

8

f'

kiledi[ini gcistermigtir. Lokal anestezikler sinir impuls olu-

lumuna yol agan sodyum iyonlarrnrn zardan gegiEini en-

gelleyerek sinir iletimini bloke etmektedirlers.

Prokain, bileqik aksiyon potansiyelinin genli[ini doza

ba$h olarak geri ddniiglii bir Eekilde azaltmaktadrr2. Yaprlan

araqtrmalann sonucunda prokainin, iletimi bloke eden kon-

santrasyonlarca zan depolarize etmedifi gdriilmi.igtiir. Pro-

kain'in indirekt bir davranrgla zara ba$h kalsiyumun yerini

de$igtirdi$i ve sodyum iyon transportunu etkiledi$i dii-

qiini.ilmektedirr'4.

Bu aragtrrmantn amact, bir ekstraselli..iler kayrt yrin-

temi olan sukro-gap teknilini kullanarak ester yaprh bir lokal

anestezik olan prokain'in BSAP'rn latans, depolarizasyon za-

manl ve yan repolarizasyon zamanl ile bilegik dinlenim po-

tansiyeli (BDP) iizerindeki etkilerini belirlemektir.

GEREQ VE YONTEMLER

Qahgmada alrrhklan 70-80 gram arasrnda de[igen

kurbalalar (Rana cameranoi) kullanrldr. Dekapite edilen

kurba$alardan 5-7 cm uzunlu$undaki siyatik sinir demetleri

grkarrldr. Desheet edilen sinir demeti ringer igerisinde 8- 10"C

de yaklaElk bir gtin bekletildi. QahEmaya baElamadan <ince

glkanldr ve izotonik sukroz gdzeltisinde yaklagrk 20 dakika

bekletildikten sonra sukroz-gap aparatlna uygun gekilde yer-

leEtirildi (Diyae. l).

Agar jel

Ag-AgCl

Diyagram 1. Sukroz-Gap Aparatr: Bdlilmiimiizde tasarlanrp, ge-ligtirilen sukoz-gap aparatlrun lematik diyagrarnr. Her bdlmede si-nirin gegtili yatay ve izolasyon igin vazelin pompalandrlr dikey ka-nallar bulunmaktadrr. A biiliimiinde uyancr elektrotlar ve mineralya$; B bdliimiinde toprak ve aktif elektrot, C biiliimiinde izotoniksukroz ve D biiliimunde referans elektrot ve izotonik KCI bu-lunmaktadrr. B bdliimUne konan prokainli frogringer ile BDP'm ka-yrtlamak igin agar-jel Ag-AgCl elektrotlan kullanrldr.

soNug vE TARTr$MA

Qahqmalarrmrzda, aparatrn B ve D bdlmesi ringerde

iken potansiyel fzukr 0,D btilmesi izotonik KCI olunca D, B

ye gdre 44,I mV depolarize olmaktadtr. Daha sonra B b<il-

mesine farkh konsantrasyonlarda KCI koyunca bu biilmedeki

sinir zannrn depolarize oldufu, konsantrasyon arttrkga de-

polarizasyonun arttr[l ve B ile D arasrndaki potansiyel farktn

azaldrg,t gtiriilmektedir ($ek.l) Bilegik sinir aksiyon po-

tansiyeli (BSAP) ve bileqik dinlenim potansiyeline (BDP) ait

kontrol de$erleri Tablo I de verilmiEtir.

Tablo l. Sukroz-gap teknili ile kayrtlanan BSAP parametreleri veBDP'nin 0 mM (kontrol)'daki delerleri

Kont.olDegcrlerl(0 tuV)

&SAPBDP (mV)

V (m1-) Tr (ru) TDE (N} %TE(m)

54.3 t5.E 0.240i0.3 0.392i0.1 0.rf25t0.I 44.1t4.1

Prokain'in, konsantrasyonu ve zamana ba[h olanrk

BSAP'rn genli$ini (V) azalttrfr, depolarizasyon zamantnt(Toj, yan repolarizasyon zamanrnt (l/2 Tpr) ve latans r (T,-)

artnrdrSr, BDP'in ise hiperpolarize ettigi gdriilmektedir

(Tablo 2,3 ve $ek.2-6).

Tablo 2. Prokainin konsantrasyona balh olarak BSAP'rn gen-lifine ve BDP'ne etkisi. Ortalama genlikler yizde (o/o)(nor-malize) delerler olarak verilmigtir.

GOzlm7a.rM(.Lk)

BSAP BDP

lnM 2.1nM 4.2 mM I mLl 2.1 mM 4-2 mtrl

0 100 100 100 100 100 100

92.5 8r.3 77.1 1t5.3 l lE.8

l0 t9.7 75.0 64.5 tt6.2 I t t .5 lt1 7

l5 81 .1 69.5 56-6 7. t 120.t 128.9

20 85.9 6E.0 49.0 I t .2 t23.6 t30.0

to t3. I 39.5 120.4 tt{ t t31.2

Lokal anestezikler sinir zanndaki sodyum kanallannr

bloke etmektedir3. Tek sinir lifi ile yaprlan voltaj-clamp ga-

hgmalannda sinir zannrn ig brilgesinde sodyum kanallarr ile

anestezik molektillerin birbirlerini direkt olarak etkiledi$i ve

lokal anestezik molekiillerin, sinir impuls olugumuna yol

agan sodyum iyonlannrn zardan gegigini engelleyerek sinir

iletimini bloke ettikleri belirlenmiEtir5. iskelet kasr ile yaprlan

gahgmalarda ise prokain'nin iletimi bloke eden kon-

santrasyonlarda zan depolarize etmedi$i gdri.ilmtigttirr.a.

Qahgmamrzda kullandr$rmrz prokain ester yapth bir

lokal anesteziktir. Prokainin doza ba$r olarak BSAP'rn gen-

li$ini azaltmasr muhtemelen zar sodyum iletkenlifinin diiE-

mesi sonucunda olmaktadrrs. BSAP genli-Iiyle birlikte de-

polarizasyon s0resinin ve latans'in uzamasl sodyum

kanallannln bir krsmrnrn kapah oldu[unu ve/veya kanal ka-

prlannrn aErlma-k kinetiklerinin

termektedir. l/2 RT stiresinin uzamast ise potasyum ka-

nallannrn da prokainden etkilendifini ve kanal kapllanntn

agrlma-kapanma siiresinin uzadllml diiliindiirmektedir.

DOZ - BDP-ZAMAN rLl$KrSr

KCt - BDP-ZAMAN iLi$KiSi

,*-iI

! r*J'p tzo -rFl

E t tu- ll! l

- 110 I=lg le tosl

*

*

roJ

I,o' l

Iool

ro' l

I

I

III

I

II

-- l

70

t I T--- . : - l lI I l - - . - l mM l l

roo - . | -G- 2.1 mM il

i | _^_ 4.2 mM l l

95-L--- l - - r - - l05101520253035

Zaman ldakikal

$ekil 2. Farkh prokain konsantrasyonlannda BDP'nin uy-

gulama arundan itibaren zamanla deSigimi.

010203040s060

Zaman (dakika)

$ekil l. Farkh KCI konsantrasyonlannda BDP'nin uygulamaanrndan itibaren zamanla deligimi.

Bununla birlikte prokain ketamine benzer bir etki

yaparak sodyum inaktivasyon k3prsrnrn kapanma htztnt ya-

vaglatmrg ve BSAP'rn toPlam stiresini uzatml$ olabilif-

Prokain BDP'ini inhibe etmektedir ($ek. 2). Muh-

temelen iletim blokajrna bu inhibisyonda katklda bu-

lunmaktadrr.

DOZ - cENLir-Zamlru iui$risi

I130 I

IE 1251

gip tzo -t

.g r1s {!l

:11013l

- t05r!t

I1oo l

I95 L.

-----"

Tablo 3. Prokainin konsantrasyona balh oln*rk BSAPIn

depolarizasyon zamrurr (Tp6) ve yan repolarizasyon zamanl

(l/2 Tpg) ve latans (TL) parametreleri 0zerindeki etkisi.

Ortalama siireler yiizde (7o) (normalize) delerler olarak ve-

rilmigtir.

f{- l.M Il--r- 2.1 mM Ila1,r ' ! l

U.N

t@ XD tm

5 101.9 t la,6 [0.9 1il,4 10t.2 16.t

l0 t0l . i l t5, l t r . { rc.! r1!

t5 ts.J l0! l:t.6 r6.$ r!?.0 [{ P8,t

w lm t!1. D9.6 6l , t l t6. t l ! t , t trt.t

& ur. : 126, l l t20,1 t6t.: ts.t t!8,9

05101520253035

Zaman fdakikal

$ekil 3. Farkh prokain konsantrasyonlannda Genlilin uygulamaanrndtrn itibaren zamanla deliqimi.

-rF 20 mM KCI-{- 40 mM KCI'l- 80 mM KCI

10

I't30 ii

12s II

120 r

DOZ - LATANS - ZAMAN lLI$KlSl DOZ - 1t2 RT - ZAMAN tLt$KrSl

5le

115

110

J05

100

95

N

!s

I'*l ,/ I''.ol ,/ |'*l / -1 |'.i /t. I::l zg/ =,-i

I l--? '1 ' l1 I l

- rij+qLi

90-:--'r-T---.-l051015?,0253035

o 10 .20 30 40 50

Zam (&kika)

$ekil 4. Farkh prokain konsantrasyonlannda latansrn uygulamaanrndan itibaren zamanla deligimi.

' Zanil(datika)

$ekil 6. Farkh prokain konsantrasyonlannda l/2 RT'nin uygulamaamndan itibaren zamanla deligimi.

Doz - DT - ZAMAN ir-igrisi

KAYNAKLAR

Inoue F. and Franrl Cb.: Action of procaine on frog skeletalmuscle. J. Pharmacol Exp. Ther, I 36: I 90- I 96, (1962).

Butterworth JF., Lref PA., Stnchartz FR.: The PH-dependent lo-cal anesthetic activity of diethylaminoethanol, a procaine me-tabolite: Anesthesirology, 68:501:506, (1988).

Trrpga M., Sahrnr EM, NAE C., Vasrlescu V.: Sturucture / Nervemembrane effect relationships of some local anesthetics. GenPhysiol Biphys, 5:37 1 -37 6, (1986).

Strobel GE. and Bianchi P.: The affects of PH Pharmacol Exp-Ther, 172(l): l -17, (1970).

Stnchartz G.: Molecular mechanisms of nerve block by localAnesthetics. 1 5(4):421 -441, (197 6).

Moheunmed A. Maleque, Jordan E. and Edson X. Albuquerque:The mechanism and Site bf Ketamine on skeletal muscle. J.Pharmacol Exp Ther, 219(3):638-645,(1981 ).

II

I

l.200

$ rao

li rso

'F 140-eER 120

100

80O l0 20 30 rl0 50

ZAMAN (drkika)

$ekil 5. Farkh prokain konsantrasyonlarrnda DT'nin uygulamaamndan itibaren zamanla deligimi.

TAil{ oToMATk cIIEMIIUMI!{ESCENI IMilttlN0AssaY slslrM

"Bir otomatik immunoassay sistemden istenebilecek herqey''-Baqtan sona tam otomasyon'-Geigek'rContnuous Random Access "-Yuksek hrz:720 Test /Saat,vti[t.t performansh chemilumrnescent (LEIA ) testler'

-Stabil ve etkin kalibrasYon,-Gtiqlii ve kullamqh Program,-DPC RIA ile uYumlu geniq menti :

Tiroid,Fertilite,Tiimor MarkeqTerapotik MarkeqAlerjiTarama,

Anemi,Diabet,Adrenal,Uyugturucular,Inf,Hastahklar v's.

lbjidbolkLABoRATUAR vagemeuni

slNlvive ricmn n.9.

Biyofrrzik Dernegi Adrna Sahibi ve Yazt igleri Miidiirii : Engin Bermek

Yayln Kurulu : Riistem Nurten' Salih Qelik' Seralp $ener

Yiinetim Merkezi : Biyofizik Derneli

istanbul universitesi rrp Faki.irtesi Biyofizik Anabilim Dah 34390 Qapa - iSTANBUL

Tel & Fax: (0212) 635 I 1 53