Pemeriksaan Laboratorium Forensik Cairan Mani &
Spermatozoa(1), (5)Cairan mani merupakan cairan agak putih
kekuningan, keruh dan berbau khas. Cairan mani pada saat ejakulasi
kental kemudian akibat enzim proteolitik menjadi cair dalam waktu
yang singkat (10 20 menit). Dalam keadaan normal, volume cairan
mani 3 5 ml pada 1 kali ejakulasi dengan pH 7,2 7,6.Cairan mani
mengandung spermatozoa, sel-sel epitel dan sel-sel lain yang
tersuspensi dalam cairan yang disebut plasma seminal yang
mengandung spermion dan beberapa enzim sepertri fosfatase asam.
Spermatozoa mempunyai bentuk yang khas untuk spesies tertentu
dengan jumlah yang bervariasi, biasanya antara 60 sampai 120 juta
per ml.Sperma itu sendiri didalam liang vagina masih dapat bergerak
dalam waktu 4 5 jam post-coitus; sperma masih dapat ditemukan tidak
bergerak sampai sekitar 24-36 jam post coital dan bila wanitanya
mati masih akan dapat ditemukan 7-8 hariPemeriksaan cairan mani
dapat digunakan untuk membuktikan :1.Adanya persetubuhan melalui
penentuan adanya cairan mani dalam labia minor atau vagina yang
diambil dari forniks posterior2.Adanya ejakulasi pada persetubuhan
atau perbuatan cabul melalui penentuan adanya cairan mani pada
pakaian, seprai, kertas tissue, dsb.Teknik Pengambilan bahan untuk
pemeriksaan laboratorium untuk pemeriksaan cairan mani dan sel mani
dalam lendir vagina, yaitu dengan mengambil lendir vagina
menggunakan pipet pasteur atau diambil dengan ose batang gelas,
atau swab. Bahan diambil dari forniks posterior, bila mungkin
dengan spekulum. Pada anak-anak atau bila selaput darah masih utuh,
pengambilan bahan sebaiknya dibatasi dari vestibulum saja.
Pemeriksaan yang dapat dilakukan meliputi :1.Penentuan spermatozoa
(mikroskopis)Tujuan : Menentukan adanya spermaBahan pemeriksaan :
cairan vaginaMetode pemeriksaan :Tanpa pewarnaanUntuk melihat
motilitas spermatozoa. Pemeriksaan ini paling bermakna untuk
memperkirakan saat terjadinya persetubuhan.Cara pemeriksaan :
Letakkan satu tetes cairan vagina pada kaca objek kemudian ditutup.
Periksa dibawah mikroskop dengan pembesaran 500 kali. Perhatikan
pergerakkan spermatozoa.Hasil :Umumnya disepakati dalam 2 3 jam
setelah persetubuhan masih dapat ditemukan spermatozoa yang
bergerak dalam vagina. Haid akan memperpanjang waktu ini sampai 3 4
jam. Berdasarkan beberapa penelitian, dapat disimpulkan bahwa
spermatozoa masih dapat ditemukan 3 hari, kadang kadang sampai 6
hari pasca persetubuhan. Pada orang mati, spermatozoa masih dapat
ditemukan hingga 2 minggu pasca persetubuhan, bahkan mungkin lebih
lama lagi.
Dengan PewarnaanCara pemeriksaan :Buat sediaan apus dan fiksasi
dengan melewatkan gelas sediaan apus tersebut pada nyala api. Pulas
dengan HE, biru metilen atau hijau malakit.Cara pewarnaan yang
mudah dan baik untuk kepentingan forensik adalah pulasan dengan
hijau malakit dengan prosedur sebagian berikut :Buat sediaan apus
dari cairan vaginal pada gelas objek, keringkan diudara, dan
fiksasi dengan melewatkan gelas sediaan apus tersebut pada nyala
api, warnai dengan Malachite-green 1% dalam air, tunggu 10-15
menit, cuci dengan air, warnai dengan larutan Eosin Yellowish 1
%dalam air, tunggu selama 1 menit, cuci lagi dengan air, keringkan
dan periksa dibawah mikroskop.Hasil :Keuntungan dengan pulasan ini
adalah inti sel epitel dan leukosit tidak terdiferensiasi, sel
epitel berwarna merah muda merata dan leukosit tidak terwarnai.
Kepala spermatozoa tampak merah dan lehernya merah muda, ekornya
berwarna hijauBila persetubuhan tidak ditemukan, belum tentu dalam
vagina tidak ada ejakulat karena kemungkinan azoosperma atau
pascavasektomi. Bila hal ini terjadi, maka perlu dilakukan
penentuan cairan mani dalam cairan vagina.
2.Penentuan Cairan Mani (kimiawi)Untuk membuktikan terjadinya
ejakulasi pada persetubuhan dari ditemukan cairan mani dalam sekret
vagina, perlu dideteksi adanya zat-zat yang banyak terdapat dalam
cairan mani, yaitu dengan pemeriksaan laboratorium :a.Reaksi
Fosfatase AsamMerupakan tes penyaring adanya cairan mani,
menentukan apakah bercak tersebut adalah bercak mani atau bukan,
sehingga harus selalu dilakukan pada setiap sampel yang diduga
cairan mani sebelum dilakukan pemeriksaan lain. Reaksi fosfatase
asam dilakukan bila pada pemeriksaan tidak ditemukan sel
spermatozoa. Tes ini tidak spesifik, hasil positif semu dapat
terjadi pada feses, air teh, kontrasepsi, sari buah dan
tumbuh-tumbuhan.
Dasar reaksi (prinsip) :Adanya enzim fosfatase asam dalam kadar
tinggi yang dihasilkan oleh kelenjar prostat. Enzim fosfatase asam
menghidrolisis natrium alfa naftil fosfat. Alfa naftol yang telah
dibebaskan akan bereaksi dengan brentamin menghasilkan zat warna
azo yang berwarna biru ungu. Bahan pemeriksaan yang digunakan
adalah cairan vaginal.Reagen :Larutan ABrentamin Fast Blue B 1 g
(1)Natrium asetat trihidrat 20 g (2)Asam asetat glasial 10 ml
(3)Askuades 100 ml (4)(2) dan (3) dilarutkan dalam (4) untuk
menghasilkan larutan penyangga dengan pH 5, kemudian (1) dilarutkan
dalam larutan peyangga tersebut.Larutan BNatrium alfa naftil fosfat
800 mg + aquades 10 ml.89 ml Larutan A ditambah 1 ml larutan B,
lalu saring cepat ke dalam botol yang berwarna gelap. Jika disimpan
dilemari es, reagen ini dapat bertahan berminggu-minggu dan adanya
endapan tidak akan mengganggu reaksi.
Cara pemeriksaan :Bahan yang dicurigai ditempelkan pada kertas
saring yang terlebih dahulu dibasahi dengan aquades selama beberapa
menit. Kemudian kertas saring diangkat dan disemprotkan /
diteteskan dengan reagen. Ditentukan waktu reaksi dari saat
penyemprotan sampai timbul warna ungu, karena intensitas warna
maksimal tercapai secara berangsur-angsur.Hasil :Bercak yang tidak
mengandung enzim fosfatase memberikan warna serentak dengan
intensitas tetap, sedangkan bercak yang mengandung enzim tersebut
memberikan intensitas warna secara berangsur-angsur.Waktureaksi 30
detik merupakan indikasi kuat adanya cairan mani. Bila 30 65 detik,
masih perlu dikuatkan dengan pemeriksaan elektroforesis. Waktu
reaksi > 65 detik, belum dapat menyatakan sepenuhnya tidak
terdapat cairan mani karena pernah ditemukan waktu reaksi > 65
detik tetapi spermatozoa positif.Enzim fosfatase asam yang terdapat
di dalam vagina memberikan waktu reaksi rata-rata 90 100 detik.
Kehamilan, adanya bakteri-bakteri dan jamur, dapat mempercepat
waktu reaksi.
b.Reaksi FlorenceReaksi ini dilakukan bila terdapat
azoospermia/tidak ditemukan spermatozoa atau cara lain untuk
menentukan semen tidak dapat dilakukan.Dasar :Menentukan adanya
kolin.Reagen (larutan lugol) dapat dibuat dari :Kalium yodida 1,5
gYodium 2,5 gAkuades 30 mlCara pemeriksaan :Cairan vaginal ditetesi
larutan reagen, kemudian lihat dibawah mikroskop.Hasil :Bila
terdapat mani, tampak kristal kolin periodida coklat berbentuk
jarum dengan ujung sering terbelah.Test ini tidak khas untuk cairan
mani karena bahan yang berasal dari tumbuhan atau binatang akan
memperlihatkan kristal yang serupa tetapi hasil postif pada test
ini dapat menentukan kemungkinan terdapat cairan mani dan hasil
negative menentukan kemungkinan lain selain cairan mani.
c.Reaksi BerberioReaksi ini dilakukan dan mempunyai arti bila
mikroskopik tidak ditemukan spermatozoa.Dasar reaksi :Menentukan
adanya spermin dalam semen.Reagen :Larutan asam pikrat jenuh.Cara
pemeriksaan (sama seperti pada reaksi Florence) :Bercak diekstraksi
dengan sedikit akuades. Ekstrak diletakkan pada kaca objek, biarkan
mengering, tutup dengan kaca penutup. Reagen dialirkan dengan pipet
dibawah kaca penutup.Hasil :Hasil positif bila, didapatkan kristal
spermin pikrat kekuningan berbentuk jarum dengan ujung tumpul.
Kadang-kadang terdapat garis refraksi yang terletak longitudinal.
Kristal mungkin pula berbentuk ovoid. Daftar Pustaka:1. Budiyanto
A, Widiatmo W, Sudiono S, Winardi T, Munim A Sidhi, Hertian S, et
al. Ilmu Kedokteran Forensik. 1sted. Jakarta: Bagian Kedokteran
Forensik Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia; 1997. p. 47:
68-69: 92-100: 105-06: 111: 113: 125-26: 136-37: 144-46: 167962.
Mansjoer, Arif M. Kapita Selekta. 3rded. Jakarta : Media
Aesculapius; 2003. p.233-363.
