UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLN CAMPO 1 Equipo 3 Reporte Desarrollo Analtico

INTEGRANTES: Acua Garduo Josue Europa Rebollo Tania Franco Gonzalez Jose Antonio Lpez Hernndez Jaime Vega Barcelata Edgar

Desarrollo de un mtodo analtico para la determinacin de contenido qumico de difenhidramina en jarabe

Objetivo General Desarrollar un mtodo analtico espectrofotomtrico mediante la aplicacin de fundamentos fsicos, qumicos y fisicoqumicos que permita cuantificar de manera precisa la cantidad de difenhidramina en una muestra farmacutica lquida (Jarabe). Objetivos particulares Durante el desarrollo del mtodo analtico, proponer procedimientos para obtener aspectos importantes en la validacin del mtodo, teniendo como objetivo principal, la precisin de este. AL obtener la precisin, desarrollar procedimientos para la obtencin de otros aspectos importantes en la validacin de mtodos analticos como es: exactitud, linealidad y reproducibilidad. Para lo anterior, preparar un placebo cargado cuya composicin resulte lo ms parecido a la muestra farmacutica estudiada. Evaluar el contenido qumico de difenhidramina en muestras farmacuticas especficas de jarabe de la marca BRUDIFEN, de laboratorios Bruluart. Introduccin

1.1

Consideraciones importantes sobre la difenhidramina

La difenhidramina es un antihistamnico, cuya molcula pertenece a una amina ternaria, con dos anillos aromticos unidos a esta por un oxgeno intermedio cuyo grupo funcional ter, no determina la reactividad principal de la molcula. Por tanto, es una base dbil que en las formas farmacuticas, est en forma de sal de clorhidrato. Tiene un pka aproximado de 9 y tiene una gran solubilidad y afinidad por compuestos polares y apolares. Esto se debe a su par de anillos aromticos, y al par electrnico de la amina, que puede solvatar fcilmente medios acuosos. Un gramo se disuelve en 1 ml de agua, 2 ml de alcohol, 2 ml de cloroformo, 50 ml de acetona. Caractersticas fisicoqumicas: Otros nombres.

Estado y aspecto Punto de fusin Propiedades experimentales

Slido cristalino de color blanco pardo. 166-170 oCPropiedad Solubilidad en agua logP pKa Valor 3.06 mg/mL at 37 oC [BEILSTEIN] 3.27 [HANSCH,C ET AL. (1995)] 8.98 Valor 7.52e-02 g/l 3.44 3.65 -3.5 0 2 0 12.47 6 79.93

Propiedades predictibles

Property Solubilidad en agua logP logP logS pKa hydrogen acceptor count hydrogen donor count polar surface area rotatable bond count refractivity

2-diphenilmethoxy-N,N-demetilletanamina Difenilhidramine O-benzidrildimetilaminoetanol

polarizability

29.86

Es una molcula de character bsico que se administra en forma de sal de clorhidrato. Debido a esto en varias porciones del tracto dugestivo, el frmaco puede presenter cualquiera de las formas como base o como forma protonada, dependiendo del pH . (Figure 4)

Figure 4: Diphenhydramine Acid-Base Equilibrium

NH+ ClN

O

+ H2OO

+ H3O

+

+ Cl

-

BH Cl

+

B

Transport of the drug through the body to the appropriate receptor involves at some point the transfer of the drug through a non-polar lipid membrane. Since the protonated form (BH+) is charged, it will not dissolve significantly in a non-polar medium. Therefore, only the free base (B) can dissolve and be transported across a lipid layer.

Es utilizada como antihistamnico, sedante ehipntico, un medicamento anticolinrgico con efectos antimuscarnicos, descubierto como alternativa sinttica de la escopolamina. La difenhidramina fue uno de los primeros antihistamnicos conocidos, inventado en 1943 por George Rieveschl.1 Poco despus, en 1946 se comenz a aprobar su uso comercial.2 El medicamento existe con el nombre comercial de Benadryl, producto registrado por Pfizer y como Dimedrol, as como en forma genrica. La difenhidramina bloquea el efecto de la histamina a nivel del receptor transmembranal H1. El efecto resultante es una reduccin de lacontraccin del msculo liso, haciendo que la difenhidramina sea una opcin frecuente en el tratamiento de la rinitis alrgica, urticaria, cinetosis, as como la picadura de insectos. En los aos 1960, se descubri que la difenhidramina inhibe la recaptacin del neurotransmisor serotonina.4 Este descubrimiento inici una bsqueda de una forma viable de antidepresivos con una estructura y efectos similares, lo que conllev al invento de la fluoxetina (Prozac), uninhibidor selectivo de recaptacin de Serotonina (ISRS).4 La difenhidramina es un antihistamnico de primera generacin, antagonista de los receptores tipo H1. Aunque es uno de los antihistamnicos ms antiguos del mercado, es an el ms efectivo disponible en accin antihistamnica, demostrando una mayor efectividad que las presentaciones ms recientes.5 Por ello, es frecuentemente usado cuando una reaccin alrgica requiere tratamiento rpido y efectivo de una liberacin masiva dehistamina. A pesar de ello, la difenhidramina no siempre es el frmaco de preferencia en el tratamiento de alergias.

Se sabe que la difenhidramina tiene propiedades sedativas. Muchas de las nuevas antihistaminas que se han producido en el mercado vienen sin los efectos sedativos secundarios. El medicamento es tambin usado como ingrediente en pastillas para dormir, aunque no mejora la calidad del sueo en nios. Algunos medicamentos, combinan la difenhidramina con acetaminofen (paracetamol), como es el caso de Tylenol PM y Tylenol Simply Sleep.7 Otros medicamentos como el Nytol y Sominez tienen a la difenhidramina como su nico ingrediente activo.8 La dosis mxima recomendada para la difenhidramina sin receta mdica vara entre 50 mg (en los Estados Unidos y 100 mg (en el Reino Unido, Australia, Nueva Zelandia y otros pases). En algunos locales se requiere que el comprador presente su nombre y otros identificadores. Existen presentaciones tpicas de la difenhidramina, como las cremas, lociones, gel y aerosoles y se usan para el alivio de la urticaria. Es posible recaer en una sobredosis con este medicamento, el cual debe ser tratado por un personal de salud capacitado. Como ocurre con muchos otros antihistamnicos, la difenhidramina es un potente agente anticolinrgico. Por ello causa somnolencia como uno de sus efectos colaterales. Otros posibles efectos secundarios incluyen dificultad motora (ataxia), resequedad en la boca y garganta, enrojecimiento de la piel, una alta frecuencia cardaca (taquicardia), visin borrosa debido a la falta de acomodacin (cicloplegia), sensibilidad anormal a la luz (fotofobia), dilatacin de la pupila (midriasis) y otros trastornos de la visin, retencin urinaria, estreimiento, dificultad concentrndose, prdida de la memoria a corto plazo, alucinaciones, confusin, disfuncin erectily delirio. Algunos de estos efectos adversos no se perciben hasta que haya subsanado la somnolencia y la persona se encuentre en un estado de mayor alerta. La difenhidramina tiene tambin propiedades como anestsico local, especialmente en casos de alergia a otros anestsicos locales.9 Las arritmias ms comunes asociadas a la difenhidramina, en especial a una sobredosis, son la bradicardia sinusal, un intervalo S-T elongado y la contraccin ventricular prematura. Algunas personas han reportado reacciones alrgicas a la difenhidramina en la forma de urticarias.

1.2 Consideraciones importantes sobre validacin, y conceptos de esta.La validacin es el proceso establecido para la obtencin de pruebas documentadas y demostrativas de que un mtodo de anlisis es lo suficiente fiable y reproducible para producir el resultado previsto dentro de intervalos definidos (Validacin de mtodos analticos. La validacin proporciona un alto grado de confianza y seguridad del mtodo analtico y se realiza con carcter obligatorio cuando se desarrolla un nuevo procedimiento, ya que permite asegurar que el mtodo propuesto hace lo que tiene que hacer. Es necesario sealar que los mtodos descritos en farmacopeas u otros textos oficiales se consideran validados, aunque debe aclararse que ellos se refieren solamente a mtodos generales y a materia primas. Estos no precisan de validacin aunque deben ser comprobados antes d su utilizacin rutinaria con la verificaci de la idoneidad en las condiciones d laboratorio. Sin embargo, para el caso de las formas farmacuticas terminadas, que pueden variar su composicin cualitativa cuantitativa segn el fabricante, habr que proceder en cada caso a la validacin del mtodo analtico. Para demostrar la aplicabilidad de estos mtodos que no tienen en cuenta todos los

posibles excipientes de una forma farmacutica, ser necesario, por lo menos, efectuar una validacin abreviada que evale que la especificidad, exactitud y precisin son adecuadas Definiciones ESPECIFICIDAD: Habilidad de evaluar inequvocamente el analito en presencia de componentes que se puede esperar que estn presentes. Tpicamente stos pueden incluir impurezas, productos de degradacin, la matriz, etc. EXACTITUD: (VERACIDAD): Expresa la cercana entre el valor que es aceptado, sea como un valor convencional verdadero (material de referencia interno de la firma), sea como un valor de referencia aceptado (material de referencia certificado o estndar de una farmacopea) y el valor encontrado (valor promedio) obtenido al aplicar el procedimiento de anlisis un cierto nmero de veces. INTERVALO DE LINEALIDAD: mbito entre la menor y la mayor concentracin de analito en la muestra (incluyendo stas concentraciones) para las cuales se ha demostrado que el procedimiento analtico tiene el nivel adecuado de precisin, exactitud y linealidad. LIMITE DE CUANTIFICACION: Cantidad ms pequea del analito en una muestra que puede ser cuantitativamente determinada con exactitud aceptable. Es un parmetro del anlisis cuantitativo para niveles bajos de compuestos en matrices de muestra y se usa particularmente para impurezas y productos de degradacin. Se expresa como concentracin del analito. LIMITE DE DETECCION: Cantidad ms pequea de analito en una muestra que puede ser detectada por una nica medicin, con un nivel de confianza determinado, pero no necesariamente cuantificada con un valor exacto. Es comnmente expresado como concentracin del analito. LINEALIDAD: Habilidad (dentro de un mbito dado) del procedimiento analtico de obtener resultados de prueba que sean directamente proporcionales a la concentracin de analito en la muestra. MATERIAL DE REFERENCIA (PATRN TERCIARIO): Material o sustancia, en el cual una o ms de sus propiedades estn suficientemente bien establecidas para que sea usado en la calibracin de un aparato, la estimacin de un mtodo de medicin o para asignar valores a los materiales. MATERIAL DE REFERENCIA CERTIFICADO (PATRN SECUNDARIO): Material en el que los valores de una o ms de sus propiedades estn certificados por un procedimiento tcnicamente validado, bien sea que este acompaado de, o pueda obtenerse, un certificado u otra documentacin emitida por un ente certificador. MATERIAL ESTANDAR DE REFERENCIA (PATRN PRIMARIO): Material emitido por la Oficina Nacional de Normas de Estados Unidos (U.S National Bureau of Standars) cuyo nombre fue cambiado recientemente a Instituto Nacional para Normas y Tecnologa (National Institute for Standards and Technology, NIST.) METODO ANALITICO: Adaptacin especfica de una tcnica analtica para un propsito de medicin seleccionado.

PARAMETROS DE DESEMPEO ANALITICO: Caractersticas de validacin que necesitan ser evaluadas y que tpicamente corresponden a la siguiente lista: exactitud, precisin, especificidad, lmite de deteccin, lmite de Cuantificacin, linealidad, intervalo de linealidad y robustez. LIBROS OFIACIALES: Los aprobados mediante el decreto 28466-S y sus modificaciones. PRECISION: expresa la cercana de coincidencia (grado de dispersin) entre una serie de mediciones obtenidas de mltiples muestreos de una misma muestra homognea bajo condiciones establecidas. Puede considerarse a tres niveles: repetibilidad, precisin intermedia y reproducibilidad. Debe determinarse utilizando muestras originales y homogneas. Sin embargo, si no es posible obtener una muestra homognea puede ser determinada usando muestras preparadas o una disolucin de la muestra. PRECISION INTERMEDIA: Precisin obtenida dentro del laboratorio por diferentes analistas, diferentes equipos, das distintos con la misma muestra homognea. PROCEDIMIENTO ANALITICO: Forma en que se realiza el anlisis. Debe describir en detalle los pasos necesarios para realizar cada prueba analtica. Puede incluir, pero no necesariamente los siguientes conocimientos: caractersticas de la muestra, preparacin de los estndares de referencia y reactivos, uso de los aparatos o instrumentos, generacin de la curva de calibracin, uso de frmulas para los clculos. PROCEDIMIENTO ANALITICO OFICIAL: Procedimiento analtico estandarizado contenido en una farmacopea oficial o libros oficiales. Se les supone validados y los laboratorios que los utilizan no estn obligados a validar la exactitud de los mismos, solamente demostrar su aptitud para aplicarlos, validando la linealidad y precisin del sistema. REPETIBILIDAD (REPETITIVIDAD): Precisin obtenida bajo las mismas condiciones de operacin en un intervalo corto de tiempo (mismo da), por un mismo analista, en la misma muestra homognea y en el mismo equipo. REPRODUCIBILIDAD: Expresa la precisin entre laboratorios como resultado de estudios interlaboratoriales diseados para estandarizar la metodologa. ROBUSTEZ: Medida de la capacidad de un procedimiento analtico de permanecer inafectado por pequeas pero deliberadas variaciones en los parmetros del mtodo y provee una indicacin de su fiabilidad en condiciones de uso normales. SELECTIVIDAD: Describe la habilidad de un procedimiento analtico para diferenciar entre varias sustancias en la muestra y es aplicable a mtodos en los que dos o ms componentes son separados y cuantificados en una matriz compleja. 3 SESGO: Se usa en el sentido de exactitud de un promedio a largo plazo (valor esperado) de una serie de promedios. Es la diferencia en el valor esperado (tericamente igual al promedio de un nmero infinito de valores individuales independientes) del valor verdadero, correcto o asumido. SISTEMA ANALITICO: Est compuesto por: equipos, reactivos, materiales, documentos, patrones, materiales de referencia, analistas y variables operativas, que se utilizan en un mtodo de anlisis.

TECNICA ANALITICA: Principio cientfico que se ha encontrado til para proveer informacin sobre la composicin de un determinado producto o material VALIDACIN: Confirmacin que se da por la recopilacin y anlisis de la evidencia objetiva de que se cumplen los requisitos particulares para el uso especfico propuesto. VALIDACIN DE UN PROCEDIMIENTO ANALITICO: Procedimiento para establecer por medio de estudios laboratoriales una base de datos que demuestren cientficamente que un mtodo analtico tiene las caractersticas de desempeo que son adecuadas para cumplir los requerimientos de las aplicaciones analticas pretendidas. Implica la demostracin de la determinacin de las fuentes de variabilidad y del error sistemtico y al azar de un procedimiento, no solo dentro de la calibracin sino en el anlisis de muestras reales.

1.3 Jarabes

Validacin y desarrollo del mtodo analticoEXTRACCINPlanteamiento de un procedimiento para la extraccin de difenhidramina en una muestra farmacutica lquida (jarabe) y placebo cargado y fundamento de esta. El primer paso para la extraccin, es la acidificacin del jarabe para asegurar la alta solubilidad de la base en el medio acuoso. Esto se consigue qumicamente por la protonacin de la base, la cual, al tener afinidad por el medio acuoso, permite que los excipientes se distribuyan en alguna fase orgnica, y puedan ser extrados de la muestra.

Las aminas se protonan en medios cidos formando sales de amonio

El principio activo, que ya se encuentra en la fase acuosa, es desprotonado por una base fuerte, y de este modo se consigue su afinidad por la fase polar, pudindolo extraer con esta para despus evaporarlo y resuspenderlo en el medio en el que se pretende realizar la extraccin. Por tanto, el procedimiento planteado para la extraccin es como sigue:

En una balanza analtica, colocar una probeta de 50 mL. Se procede a tarar la balanza para posicionar el medidor en cero, y gradualmente se aade jarabe hasta que la balanza marque 20 g. Para obtener un peso con mayor exactitud, se utiliza un cuentagotas de plstico cuando se observa que el peso est cerca de los 20 g, y se aade el jarabe lentamente.

El jarabe es transferido a un embudo de separacin previamente enjuagado con cido clorhdrico 0.1 N

Los residuos de jarabe de la probeta se eliminan aadiendo 10 mL de HCl 2 N, los cuales son transferidos al embudo de separacin.

El embudo es agitado vigorosamente durante 3 minutos. En este punto, se lleva a cabo la protonacin de la amina. Se deja reposar durante 5 minutos.

Se aaden 15 ml de ter etlico, el embudo se sella hermticamente con un tapn de plstico, y se agita durante 5 minutos. Despus de esto, se libera el gas producido una sla vez removiendo el tapn, y se deja reposar el embudo sin tapn por otros 5 minutos. Se recupera la fase acuosa que contiene a la amina protonada. La fase etrea que contiene los excipientes se desecha. Este proceso se repite en 3 ocasiones.

La fase acuosa recuperada, es transferida a otro embudo de separacin previamente, enjuagado con NaOH 5N. Para asegurar que la totalidad de la fase acuosa se transfiera, se aaden 10 mL de NaOH 5N y se transfieren al embudo. Se sella hermticamente con tapn de plstico y se agita vigorosamente durante 3 minutos. En este punto, se lleva a cabo la desprotonacin de la amina. Se deja reposar durante 5 minutos.

Se aaden 15 ml de ter etlico, el embudo se sella hermticamente con un tapn de plstico, y se agita durante 5 minutos. Despus de esto, se libera el gas producido una sla vez removiendo el tapn, y se deja reposar el embudo sin tapn por otros 5 minutos. Se recupera la fase etrea que contiene a la amina desprotonada. La fase acupsa que se desecha. Este proceso se repite en 3 ocasiones.

La fase etrea es evaporada, aadiendo antes al vaso de precipitado 4 perlas de ebullicin para minimizar la turbulencia que genera el calentamiento. Una vez que se observa que no queda ms ter etlico, se retira de calentamiento.

Al final del desecado, la amina se observa como un precipitado amarillo que se adhiere al fondo del vaso.

RESULTADOS: Identificacin del analito y especificidad Precisin Exactitud Linealidad del mtodo Cuantificacin en muestra comercialIdentificacin del analito y especificidad: Se realiz una extraccin de DFH a placebo cargado para realizar el espectro de absorcin, as como un std que se ley a las mismas condiciones. Los resultados son los siguientes:

Espectro absorcin de la muestra extrada de concentracin terica (46 mcg/mL) en HCl 0.1 N 2.5

2

1.5

1

0.5

0 190 200 210 220 230 240 250 Series1 260 270 280 290 300 310

Espectro absorcin DFH STD 46 mcg/mL en HCl 0.1 N2.5

2

1.5

1

0.5

0 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310

Long de onda (nm)

Espectros de absorcin de un estndar de DFH de concentracin 46 mcg/mL en HCl 0.1 N (en azul), y una muestra proveniente de la extraccin, con la misma concentracin terica.

Precisin del mtodo. Se efectu la extraccin de difenhidramina a 6 muestras de placebo cargado, por pesadas independientes de alrededor de 20g de jarabe. Los resultados son los siguientes: Solucin Absorbancia Conc. (mcg/mL) mg extrados 1 2 3 4 5 6 1.4724 1.4547 1.4674 1.4653 1.4645 1.5206 41.34206872 40.84508786 41.20167864 41.14271481 41.1202524 42.69542902 34.4517239 34.0375732 34.3347322 34.2855957 34.266877 35.5795242 mg tericos 38.45 38.45 38.45 38.45 38.45 38.45 Promedio Std 46.5 mcg/mL % extrado 89.6013626 88.5242476 89.2970929 89.1692995 89.1206164 92.5345232 89.70% :

1.6561

Desvest C.V

0.014296843 1.46995

En esta tabla, se observa que la extraccin tiene una eficiencia promedio de 89.70%, y que se obtiene la precisin al encontrarnos con un CV menor a 2%. La cuantificacin, pesado, extraccin y preparacin del std, se pueden encontrar en los PNOS siguientes:PNO-DFH-301-6 Extraccin

PNO-DFH-301-9 Preparacin del placebo cargado PNO-DFH-301-4 Preparacin de la solucin STD de DFH

Exactitud y optimizacin de la extraccin. A pesar de haber obtenido la precisin del mtodo satisfactoriamente, la eficiencia de la extraccin era del 89.70%, por lo cual se efectuaron modificaciones a la metodologa de la extraccin para evitar la prdida del principio activo durante la misma. Entre las cuales se incluyeron. Uso de tapones de plstico hermticos. Cambio de llaves y empaques en embudos. Aumentar el tiempo de agitacin de 1 a 2.5 minutos para favorecer las reacciones cido base, y la separacin de fases. Empleo de perlas de ebullicin durante el desecado (se evita que haya salpicaduras fuera del vaso)

Posteriormente, al haber tomado estas medidas, se procede a realizar la extraccin a 6 muestras de placebo cargado obtenidas por pesadas independientes alrededor de 20 g jarabe, obteniendo los resultados siguientes.

Absorbancia 1.5963

peso muestra (g) 20.02

cantidad aadida (g) 38.54

concentracin final 45.07

cantidad en (g) recuperada 37.56

% recobro 97.44

1.5972 1.6001 1.6046 1.6034 1.5959

20.02 20.06 20.02 20.10 20.12

38.53 38.61 38.54 38.70 38.74

45.09 45.17 45.30 45.27 45.06

37.58 37.64 37.75 37.72 37.55

97.52 97.50 97.95 97.47 96.92

(43ug/mL) std

1.5231

38.45 Prom recobro Desvesta C.V 97.47 0.33 0.336

PNO-DFH-301-6 Extraccin

PNO-DFH-301-9 Preparacin del placebo cargado PNO-DFH-301-4 Preparacin de la solucin STD de DFH

Linealidad del sistema. Se prepararon 5 niveles de concentracin por triplicado de la solucin de referencia, a partir de un stock. La concentracin central representa al 100% en la muestra procesada para su medicin. Se obtuvieron los resultados siguientes: mcg/ml (X) 16 16 16 32 32 32 48 48 48 64 64 64 80 80 80 suma desv std cv promedio r r2 abs (y) x2 y2 xy x/Y

0.5566 0.5294 0.5227 1.0469 1.0337 1.042 1.5502 1.554 1.5336 2.0218 2.0248 2.0458 2.4314 2.4312 2.421 22.7451

256 256 256 1024 1024 1024 2304 2304 2304 4096 4096 4096 6400 6400 6400 42240

0.30980356 8.9056 0.28026436 8.4704 0.27321529 8.3632 1.09599961 33.5008 1.06853569 33.0784 1.085764 33.344

28.7459576 30.2228938 30.6102927 30.5664342 30.9567573 30.7101727 30.9637466 30.8880309 31.2989045 31.6549609 31.6080601 31.2836054 32.9028543 32.905561 33.0441966

2.40312004 74.4096 2.414916 74.592

2.35192896 73.6128 4.08767524 129.3952 4.09981504 129.5872 4.18529764 130.9312 5.91170596 194.512 5.91073344 194.496 5.861241 193.68

41.3400158 1320.8784 468.362429 1.12661595 3.60815432 31.2241619 0.99885498 0.99771127

3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

y = 0.0298x + 0.0844 R = 0.9977

Sum Y2-(b1Sum xy) b0*SumY

4.35542063 2.7066669 4.147215484

sy/x (SUM X/N) 2 1/SUM x2 Sb1 IC + IC-

2.036471331 2304 2.36742E-05 4.82119E-05 0.025104138 0.027895862

PNO-DFH-301-EX-LIN LINEALIDAD DEL SISTEMA PNO-DFH-301-6 Extraccin PNO-DFH-301-9 Preparacin del placebo cargado PNO-DFH-301-4 Preparacin de la solucin STD de DFH

Cuantificacin en muestra comercial Despus de conseguir aumentar la eficiencia de la extraccin, se procedi a realizar la misma en muestras reales siguiendo los mismos procedimientos de extraccin, preparacin de estndar y pesado. Los resultados se muestran a continuacin.

Muestra 1 2 3 4 5 6 std 46 mcg/mL promedio desvesta CV

Abs 1.6046 1.5686 1.5912 1.6120 1.6043 1.5476 1.6412 1.5964 0.02407 1.517884

Concentracin (mcg/mL) 44.9742 43.9651 44.9742 44.9545 44.9658 43.3766

peso mta 20.341 20.126 20.32 20.29 20.302 20.311

mg cuantificados 37.4785 36.6376 37.4785 37.4621 37.4715 36.1471

mg reales 38.4552 37.5925 38.4552 38.4385 38.4480 37.0892

mL mta 15.6626 15.4970 15.6464 15.6233 15.6325 15.6395

mg por cada 100mL 245.5231 242.5787 245.7769 246.0329 245.9488 237.1512

% 98.21 97.03 98.31 98.41 98.38 94.86

237.64

95.06

ANLISIS DE RESULTADOS Y CONCLUSIONES: Identificacin del analito y especificidad Precisin Exactitud Linealidad del mtodo Cuantificacin en muestra comercial

Identificacin del analito y especificidad

Se puede decir que el mtodo es especfico por tres motivos:

No existe corrimiento significativo del mximo de la longitud de onda de la muestra respecto al estndar, lo que sugiere que slo se est detectando y cuantificando difenhidramina. Los posibles interferentes (metil y propilparabeno), los cuales se usan como conservadores; no absorben a las condiciones impuestas para el ensayo (0.1N HCl, 220 nm), por lo que no interfieren en la determinacin. El espectro de absorcin del medio slo, no presenta absorcin a ninguna longitud de onda.

Precisin PRECISION: expresa la cercana de coincidencia (grado de dispersin) entre una serie de mediciones obtenidas de mltiples muestreos de una misma muestra homognea bajo condiciones establecidas. Puede considerarse a tres niveles: repetibilidad, precisin intermedia y reproducibilidad. Debe determinarse utilizando muestras originales y homogneas. Sin embargo, si no es posible obtener una muestra homognea puede ser determinada usando muestras preparadas o una disolucin de la muestra. El mtodo es preciso, en virtud de que cumple con los criterios de aceptacin de la gua de validacin de mtodos analticos del colegio de qfb, la cual seala que:

CV menor o igual para mtodos qumicos o espectrofotomtricos Exactitud Expresa la cercana entre el valor que es aceptado, sea como un valor convencional verdadero (material de referencia interno de la firma), sea como un valor de referencia aceptado (material de referencia certificado o estndar de una farmacopea) y el valor encontrado (valor promedio) obtenido al aplicar el procedimiento de anlisis un cierto nmero de veces. El mtodo es exacto porque cumple con los parmetros establecidos en la gua de validacin de metodos analiticos colegio de qfb, la cual seala que:

El IC (u) debe incluir el 100% o que el promedio aritmtico del porcentaje de recobro se incluya en el intervalo: 97-103% si el mtodo es espectrofotomtrico

El CV del % de recobro: No mayor a 3% si es qumico o espectrofotomtrico. Linealidad del sistema Habilidad (dentro de un mbito dado) del procedimiento analtico de obtener resultados de prueba que sean directamente proporcionales a la concentracin de analito en la muestra. No conseguimos que la linealidad del sistema, ya que nuestros resultados salen de los criterios de aceptacin establecidos por la gua de validacin de mtodos analticos del colegio de qfb, la cual seala que: r2 0.98 b= 0 IC (m) no debe incluir el cero La r2 result mayor a .98, sin embargo la ordenada al origen no fue de 0, y el intervalo de confianza incluye al cero. Esto pudo haber ocurrido por las siguientes causas:

Interferencia no prevista anteriormente El sistema es lineal, excepto en las concentraciones ms altas, donde se observa una prdida de la linealidad del sistema. Errores sistemticos generados en el procedimiento experimental.

Cuantificacin en la muestra comercial. LA FEUM seala que toda preparacin farmacutica lquida oral que contenga como p. activo DFH, deber contener del 95 al 110% de lo reportado en el marbete, por lo cual se concluye que la muestra comercial cumple con las exigencias de contenido qumico que marca la Farmacopea.

Bibliografa

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