RÉPUBLIQUE ALGÉRIENNE DÉMOCRATIQUE ET POPULAIRE ES … · Kharoubi Omar, Mr. Hmed Hammad, et Mr. Slimani Miloud. Merci pour la confiance qu’ils m’ont accordée en m’encourageant,

MÉMOIRE DE MAGISTÈRE

Spécialité : Microbiologie

Option : Biodiversité des microorganismes

Sujet

RÉPUBLIQUE ALGÉRIENNE DÉMOCRATIQUE ET POPULAIRE MINISTÈRE DE L’ENSEIGNEMENT SUPÉRIEURE

ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE UNIVERSITÉ D’ORAN ES-SÉNIA

FACULTÉ DES SCIENCES DE LA NATURE ET DE LA VIE DÉPARTEMENT DE BIOLOGIE

LABORATOIRE DE MICROBIOLOGIE APPLIQUÉE

ÉTUDE DES ACTIVITÉ

ENZYMATIQUES CHEZ Fusarium oxysporum f. sp. albedinis

ET ÉVALUATION DE L’EFFET ANTIFONGIQUE DE QUELQUES MOLÉCULES CHIMIQUES

Présenté par :

Melle FESRAOUI Zahra Ainouna

Soutenue le 06 / 03 / 2014 devant le jury composé de :

Président Mr KIHEL.M Professeur à l’université d’Oran Examinateur Mr Slimani. M Professeur à l’université de Saida Examinateur Mme SADKI.K Maître de conférences A à l’université d’Oran Directeur de mémoire Mr HENNI.J.E Professeur à l’université d’Oran Co-directeur Mr. Karkachi. N Maître de conférences B à l’université d’Oran

I

RemerciementsRemerciementsRemerciementsRemerciements

Je tiens à présenter mes remerciements ;

A Mr. Henni, encadreur et chef de laboratoire de

phytopathologie ;

Au co-encadreur Mr. Karkachi pour avoir bien accepté de se rendre disponible et de mener

ce travail avec moi ;

Aux membres du jury ;

Mme Sadeki, Mr. Kihel et Mr. Slimani, pour juger ce travail

II

C’est avec beaucoup d’enseignements que ces deux ans et demi furent

achevées ; j’ai appris surtout que l’on a beau à courir à gagner du pain, on en

arrive à point que lorsque le bon Dieu décide ce que se doit. Qu’il faut tout de

même faire le pas et sa part de percer jusqu’au bout.

La biologie pour moi, était plus qu’une sorte d’évasion, quoique je me sois

égarée par moment, j’ai continué par la force de Dieu et son soin, à établir ce

modeste petit travail du mémoire de magister.

Notamment, par la présence et l’aide de Ma famille à qui je dédie ce

manuscrit, pour laquelle je ne trouverai pas les mots justes de ma profonde

reconnaissance ; ma mère qui a sacrifiée beaucoup pour moi, pour nous

enfin ; mon père qui a beaucoup donné pour que j’arrive à ce que je suis à

présent ; ma petite sœur et Princesse bien aimée qui a été bien présente. Mes

très chère tante Fadéla et Zohra qui ont toujours très bien pris soin de moi,

pour la gratitude et l’amour que je leur porte avec tante Fouzia Hachemaoui

; mes pseudo sœurs Souni, Narimène et Nawel, pour tout ce qu’elles ont fait

pour moi ; à tonton Hassan que je remercie beaucoup pour sa présence dans

des moments particuliers ; A tonton Nabil et Nouri pour le respect que je

leur dois. A tante Amel, à Abla, à Najia et son mari qui m’ont grandement

ouvert leurs portes. A grand-mère Fatiha, à la mémoire des jours passés

auprès d’elle, oncle Mohammed, sa femme et ses enfants, tantes Ammaria,

Fouzia Bendahou et Najet, ainsi qu’à toutes mes cousines proches. A mon

grand père paternel Amar, A tonton Hamid Soulimane et Moufida pour

leurs affection et encouragements. Une personne particulière et chère à qui

je dirige mes sentiments profonds de respect et de gratitude, à qui je dédie

tout mot de ce travail, à Moussa Hachemi. Ainsi qu’à tous les membres

chers de ma famille, à tous ceux à qui je suis chère.

Je tiens à présenter mes remerciements à Mr. Henni de m’avoir accepté au

sein de son laboratoire de phytopathologie pour établir mon magister. Je

remercie aussi, tous les membres du laboratoire, techniciennes, professeurs

qu’étudiants. Particuliers remerciements à Mr. Karkachi d’avoir accepté de

m’encadrer et d’avoir accepté de finaliser ce travail avec lui. A Mr. Safer,

professeur au laboratoire de chimie, pieuse reconnaissance pour les

substances chimiques qu’il nous a fourni, tout aussi pour sa bravoure et

précieux conseils.

III

Trois grandes personnes qui grâce a elles, ce mémoire a pu voir le jour, Mr.

Kharoubi Omar, Mr. Hmed Hammad, et Mr. Slimani Miloud. Merci pour la

confiance qu’ils m’ont accordée en m’encourageant, chacun à sa façon.

A Mr. Guessas par sa générosité au nom du savoir et sa modestie au profit de

l’étudiant, merci énormément ; A la technicienne Leila du laboratoire de

physiologie pour tout l’aide qu’elle apporte aux étudiants, pour son sourire

apaisant. Aussi bien qu’aux étudiants Wafaa, Saida et Amina. Au

laboratoire de Biochimie qui m’a grandement ouvert ses portes si

généreusement, a ses responsables et technicienne Akila. Je remercie

chaleureusement Mme. Khellafi, chercheur au centre agronomique de

Berraki Alger pour la documentation qu’elle a mis à ma disposition tout

aussi que pour sa confiance. Aussi a la bibliothécaire de l’institut national

agronomique d’Alger. A Mme Bennaceur Malika que j’estime beaucoup pour

sa personne et sa générosité. Un remerciement à la technicienne aussi qu’aux

étudiants du laboratoire de microbiologie appliquée de Mr. Kihel, ainsi qu’à

Nadia Hammouche et Mr. Hammouche Wahab pour leur soutien durant le

séjours à Alger.

Mes amitiés qui m’ont apportées beaucoup, Faiza Fodil pour son aide, sa

disponibilité que pour son amitié, Sabrina Amara qui n’a jamais hésité de se

rendre disponible, Jamila Boumaaza pour ses conseils, son soutien moral et

matériel, Amina Mostéfai pour ses prières et pensées, Amina Benouis et

Samira Brahimi pour leurs affections et présence, à Nahla aussi, Zohra de

Mazouna. Aicha Bouras, Nabahate Bessadate, mes précieuses Farah

Bensaleh, Adila Ougouag et Jihane Benmansour.

. . Pour tous ceux que je n’ai pas pu citer par faute d’oubli qu’ils reçoivent

mes excuses et ma profonde reconnaissance. Mille mercis …

IV

Résumé

Le Fusarium oxysporum sp. albedinis (F.o.a) est l’un des agents pathogène

les plus redoutables pour l’agression du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.).

Pour cela, la connaissance de la physiologie du champignon et les essais de lutte

en son égard est une approche indispensable dans le domaine de la recherche.

Dans ce travail, un aperçu est donné sur la maladie du bayoud. Les dosages

enzymatiques établis pour la phosphatase alcaline (ALP), le gamma-glutamyl

transpeptidase (γ-GT) et le glutamate oxaloacétate (GOT) au niveau intra- et

extracellulaire, en présence de différentes sources de carbohydrates (glucose,

saccharose, amidon et cellulose) a décelé une variation d’expression de l’activité

enzymatique pour chaque isolat. L’activité antifongique des substances

chimiques de synthèse s’est effectuée en évaluant le taux d’inhibition sur

milieu solide. L’satine a présenté un taux d’inhibition de 42% et une IC 50 de

30ppm (30mg/l) à 1500ppm de la substance testée. Les molécules spirooxindoles

ont manifesté in vitro un faible taux d’inhibition vis-à-vis de F.o.a.

Mots clés : Palmier dattier, Fusarium oxysporum f. sp. albedinis, substrat de

carbohydrate, ALP, γ-GT, GOT, molécule chimique, activité antifongique,

chalcone, oxindole.

V

Abstract

Fusarium oxysporum sp. albedinis (F.o.a) is one of the most dangerous

pathogenic agents for aggression date palm (Phoenix dactylifera L.). Why

knowledge of the physiology of the fungus and control trials in him is an

essential approach to research. In this work, an overview is given on the disease

bayoud. Enzymatic assays established for alkaline phosphatase (ALP), gamma-

glutamyl transpeptidase (γ-GT), and glutamate oxaloacetate (GOT) in intra-and

extracellular presence of different carbohydrates sources (glucose, saccharose,

starch and cellulose ) has detected a change of expression of the enzymatic

activity for each isolate. The antifungal activity of synthetic chemical

compounds was carried out by evaluating the inhibition rate on solid medium.

The isatin presented an inhibition of 42% and an IC 50 of 30ppm (30mg / l) at

1500ppm rate of the test substance. Spirooxindoles molecules in vitro have

shown a low rate of inhibition against F.o.a.

Keys words : date palm, Fusarium oxysporum f. sp. albedinis, carbohydrate substract,

ALP, γ-GT, GOT, chemical molecule, antifungal activity, chalcone, oxindole.

VI

ملخص

احد العوامل المسببة �مراض (Fusarium oxysporum sp. albedinis)يعتبر فطر الفوزاريوم

معرفة فسيلوجية الفطر الغرض دراسته و فإن لھذا ; ة ا� كثر خطور )Phoenix dactylifera( نخيل التمور

عن مرض نعطي لمحة عامة , ھذا العملفي .يعد منھج اساسي في البحث العلمي لمحاربته االتطرق الى وسيلة

)γ-غلوتاميل غاما الببتيد ناقلة (ALP) القلوية للفوسفاتيز الخلية خارج و داخل تقييم ا8نشطة ا8نزيمية. البيوض

)GTأوكسالوآسيتات والغلوتامات) GOT, (الكربوھدرات من مختلفة مصادر وجود ظل في) الجلوكوز,

تنفيذ تم. F.o.a عزل لكل ا"نزيمي النشاط عن التعبير في ا�خت�ف عن كشف ,)السكروز، النشا والسليلوز

ICو٪ 42 تثبيط نسبة اا�يزاتين قدم. الصلبة المتوسطة على التثبيط معدل تقييم خ�ل من للفطريات مضاد نشاط

المختبر في سبيرو جزيئات أظھرت وقد. ا�ختبار مادة من 100ppm ل) لتر/ مغ 30 ل( 30ppm ب 50

.فوا على تثبيط نشاط انخفاض

ALP . GT-γ كربوھيدرات مصدر , albedinissp. f. Fusarium oxysporumنخيل التمور :المفتاحية الكلمات

,GOT أوكساندول .الفطر ضد حيوي نشاط .كيميائي جزيء.

VII

Abréviations

ADN : Acide désoxyribonucléique

ALP : phosphatase alcaline

CVS : Cultivars

°C : degré Celsius, mesure de la température

DMSO : Diméthylsulfoxyde

Eq. : équivalant

Ex. : exemple

F.o.a : Fusarium oxysporum sp. albedinis

GOT : le glutamate oxaloacétate transférase

ha : hectar

IC 50 : Concentration inhibitrice pour 50 % de la population

IC 90 : Concentration inhibitrice pour 90 % de la population

M : mesure de la longueur (metre)

NADPH : Nicotinamide adénine dinucléotide phosphate

Ppm : partie par million

Rpm : rotation par minute

UI : L’unité internationale (UI) est la quantité d’enzyme qui convertit 1 µmol

de substrat par minute, dans des conditions standards. La concentration est

exprimée en unités par litre (U/L)

V/V : volume / volume

γ-GT : gamma-glutamyl transpeptidase

VIII

Liste des figures

Page

Figure. 1 : Représentation figurative du palmier dattier 7

Figure. 2 : Les caractéristiques morphologiques de Fusarium oxysporum. 12

Figure. 3 : Distribution géographique du bayoud en Afrique du nord et

en Algérie 16

Figure. 4 : Premiers symptômes du Bayoud 23

Figure. 5 : Symptômes atypique du Bayoud. 24

Figure. 6 : Coupe transversale au niveau central du tronc d’un dattier atteint

du bayoud qui illustre la coloration rouge des tissus vasculaire 25

Figure. 7 : Coupe transversale au niveau de l’apex du tronc d’un dattier atteint

du bayoud qui montre l’impact du F.o.a sur certains vaisseaux 26

Figure. 8 : Stade final de la maladie. 26

Figure. 9 : micro- et macroconidies produites par les micro- et macrophialides

et chlamydospores de Fusarium oxysporum f. sp. albedinis 29

Figure. 10 : Cycle infectieux de Fusarium oxysporum f. sp. albedinis, agent

causal de la maladie du Bayoud. 33

Figure 11 : Démarche entreprise 30

Figure.11: Représentation graphique de l’effet de la source de carbone sur

la croissance mycélienne des isolats de Fusarium oxysporum

sp. albedinis 45

Figure. 13 : Activité de la phosphatase alcaline (ALP) pour l’isolat F1 au niveau

intracellulaire 1 et au niveau extracellulaire 2. 49

Figure. 14 : Activité de la phosphatase alcaline (ALP) pour l’isolat F5

au niveau intracellulaire 1 et au niveau extracellulaire 2. 49





IX





Figure. 19 : Activité de γ-glutamyl transpeptidase (γ-GT) pour l’isolat F1












Figure. 25 : Activité Du glutamate oxaloacétate pour l’isolat F1












Figure. 31 : Représentation graphique des pourcentages d’inhibition des

substances antifongiques testées pour différentes concentration. 77

X

Liste des tableaux

Page

Tableau. 1 : Production dattière en 2010 en quintal 5

Tableau. 2 : Evaluation des valeurs de IC50 (en ppm) pour

les molécules antifongiques testées. 78

XI

Sommaire

Page

Remerciements I

Résumé IV

Abstract V

VI ملخص

Abréviations VII

Liste des figures VIII

Liste des tableaux X

Sommaire XI

Introduction 1

Chapitre I : Revue bibliographique 2

1. Palmier Dattier 3

1.1 Distribution géographique 3

1.2. Importance écologique, culturelle et socio-économique 3

1.3 Généralités sur les données botaniques et bioécologiques 6

2. Le Bayoud, fusariose vasculaire du palmier dattier 9

2.1 L’agent pathogène du flétrissement vasculaire, Fusarium oxysporum 9

2.1.1 Position taxonomique et Formes spéciales 10

2.2 Origine et distribution du Bayoud dans le Nord de l’Afrique 14

2.3 Moyens de propagation du bayoud 17

2.3.1 Epidémiologie, facteurs favorisant la croissance du F.o.a et

influençant sa propagation 17

2.4 Impact économique de la maladie du bayoud 20

2.5 Symptômes de la maladie du bayoud 21

2.5.1 Les symptômes externes sur le feuillage 22

2.5.2 Les symptômes externes sur les racines 24

2.5.3 Les symptômes internes 25

2.6 Le pathogène, Fusarium oxysporum f. sp albedinis 27

2.6.1 Caractéristiques morphologiques et culturales 27

2.6.2 Biologie et pathogénicité du F.o.a 30

XII

2.7 Méthodes de lutte contre le Bayoud 34

2.7.1 Mesures prophylactique 34

2.7.2 Lutte par utilisation de cultivars résistants 34

2.7.3 Lutte biologique 36

2.7.3 Lutte chimique 38

Chapitre II : Matériel & méthode 40

Objectif du travail 41

1. Matériel fongique 42

2. Evaluation de l’effet de la source de carbone 42

2.1. Evaluation sur la croissance mycélienne 42

2.2. Evaluation des activités enzymatiques 42

2.2.1 Préparation de l’extrait cellulaire 43

2.2.1.1 Dosage des protéines totales 43

2.2.1.2 Dosage des activités enzymatiques 44

3. L’évaluation de l’effet antifongique de molécules Chimiques 46

3.1 Substances chimiques testées 46

3.2 Evaluation de la croissance mycélienne sur milieu solide 46

Chapitre III : Résultats & interprétation 48

1. Effet de la source de carbone (glucose, amidon, cellulose et saccharose)

sur la croissance mycélienne des isolats de

Fusarium oxysporum sp. albedinis 49

2. Effet de la source de carbone (glucose, amidon, cellulose et saccharose)

sur les activités enzymatiques de la phosphatase alcaline, le γ-glutamyl

transpeptidase et du glutamate oxaloacétate transaminase des isolats de


3. Effet antifongique de quelques molécules chimiques sur l’isolat F1 de


Conclusion 79

Références bibliographiques 81

Annexes : Annexe 1 91

Annexe 2 96

Introduction

1

Introduction

L’importance du palmier dattier comme pivot central autour duquel

s’articule la vie dans les oasis sahariennes est une donnée reconnue et

indiscutable, de part son rôle important qu’il joue sur le plan économique que

sur le plan social. Depuis ces dernières décennies, la maladie du bayoud causée

par le champignon tellurique Fusarium oxysporum f. sp. albedinis constitue une

vraie menace pour les palmeraies. C’est une maladie vasculaire dont les formes

végétatives du pathogène induisent un flétrissement généralisé.

La connaissance supplémentaire de la forme spéciale albedinis aiderait à

mieux caractériser le champignon ; Le comportement in vitro en présence de

plusieurs sources de carbone (glucose, amidon, saccharose et cellulose) sur la

croissance mycélienne des isolats reflète plus ou moins leurs différences

nutritionnelles. De plus, l’étude de certaines activités enzymatique permettrait

de mieux comprendre la physiopathologie in vitro du champignon en question

L’objectif de ce travail consiste en premier lieu à évaluer les activités

enzymatiques de la phosphatase alcaline (ALP), le gamma glutamyl

transpeptidase (γ-GT) et le glutamate oxaloacétate transférase (GOT), en

présence de différentes sources de carbone (le glucose, le saccharose, la

cellulose et l’amidon) et voir l’impact du substrat carbohydraté, non seulement

sur la croissance mycélienne radiale des isolats testées de Fusarium oxysporum

sp. albedinis (F.o.a) mais aussi sur l’activité intracellulaire et extracellulaire de

ces enzymes. En second lieu, une mesure de lutte chimique est envisagée en

testant l’activité antifongique d’une nouvelle famille de molécules chimiques à

savoir les spirooxindole, de plus d’une chalcone et de l’isatine, connues pour

leurs propriétés biologiques et antifongiques, et ceci sur la variation de la

croissance mycélienne de F.o.a.

2

Chapitre I

REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

Chapitre I Revue bibliographique

3

1. Le palmier dattier

1.1. Distribution géographique en Algérie

Le palmier dattier est cultivé dans plusieurs oasis du sud Algérien,

caractérisé par un climat chaud et sec. La zone de culture s’étend de la frontière

marocaine à l'Ouest jusqu'à la frontière Tuniso – Libyenne à l’Est. Du Nord au

Sud du pays, elle s'étend depuis la limite Sud de l'Atlas saharien jusqu'à Reggane

à l'Ouest, Tamanrasset au centre et Djanet à l'Est Les principales régions

productrices de dattes sont concentrées à l’Est au niveau des Zibans, Oued Righ,

Oued Souf et la cuvette de Ouargla et le M’Zab. Sa densité diminue en se dirigeant

vers l'Ouest où les principales oasis sont localisés dans la région de la Saoura, le

Touat, le Gourara, le Tidikelt et El Goléa (Khelafi, 2013).

1.2. Importance écologique, culturelle et socio-économique

Le palmier dattier (Phoenix dactylifera L.) constitue le pivot de

l’agrosystème oasien des régions sahariennes et présahariennes (Trifi et al., 2001),

tout particulièrement dans le Sahara algérien (Bouguedoura et al., 2011). A savoir,

que sa culture est très intensifiée dans le bassin méditerranéen et surtout en

Afrique du Nord ainsi que dans les pays du golfe (Sedra, 2003). Il joue un rôle

important de part son aspect morphologique et son adaptation écologique qui lui


4

permet d’assurer une protection nécessaire aux oasis contre les influences

désertiques en créant un microclimat favorisant le développement des cultures

sous-jacentes (arboricoles, céréalières, maraîchères...) (Hakkou et Bouakka, 2004).

Le palmier dattier est essentiellement cultivé pour ses dattes, fruits d’une bonne

valeur nutritive qui représentent la base de l’alimentation des populations

oasiennes aussi la composante vitale dans les oasis (Trifi et al., 2001 ; Abouraicha et

al., 2010), du fait notamment de la multitude de sous-produits qu’il fournit pour

l’usage domestique (Chehma et Longo, 2001), artisanal et industriel (Sedra, 2003).

En Algérie, le nombre de palmiers productifs est de l’ordre de 11 millions

d’arbres, fournissant une production de 7 millions de quintaux dont 46% pour la

seule variété Deglet nour (Belguedj, 2010). L’exportation est estimée à 129 570

quintaux de dattes, constituant l’une des principales entrées en devise, après les

hydrocarbures. Elle occupe le 6ème rang parmi les pays producteurs de dattes à

l’échelle mondiale (Soucheyre, 2006 ; FAO-Stat, 2009 ; Khelafi, 2013).

Les cultivars les plus importants sur le plan économique sont dans l’ordre

décroissant: Deglet nour, avec une production de 3 074 332 quintaux, suivie de

Degla Beida et analogues avec 1 788 974 quintaux et enfin, Ghars et analogues

avec 1 482 653 quintaux (Tableau. 1). Cette culture occupe toutes les régions situées

sous l’atlas saharien, soit environ 160.000 ha. Le potentiel de production a

augmenté de 70 % entre 1999 et 2006, grâce à l'extension de la superficie occupée

par les palmeraies (Khelafi, 2013).


5

Tableau. 1: Production dattière en 2010 en quintal (Belguedj, 2010).

Wilaya Deglet-Nour Mech-Degla et

analogues

(sèches)

Ghars et

analogues

(molles)

TOTAL

Biskra 1 442 895 789 881 381 309 2 614 085

El-Oued 1 060 130 359 366 377 334 1 796 830

Ouargla 540 786 56 766 416 091 1 013 643

Ghardaïa 185 000 - 238 000 423 000

Adrar - 821 194 - 821 194

Béchar - 55 978 157 814 213 792

Tamanrasset - 104 489 - 104 489

Illizi 763 6 046 9 093 15 902

Tindouf - 240 5 760 6 000

TOTAUX 3 229 574 2 193 960 1 585 401 7 008 935


6

1.3. Généralités sur les données botaniques et bioécologiques

Le palmier dattier est une monocotylédone arborescente pérenne qui peut

vivre plus de 300 ans (Hakkou et Bouakka, 2004). Dioïque; c'est à dire qu'il en existe

des dattiers males (Dokhar) et des dattiers femelles (Nakhla). Dénommé par Linné

depuis 1734 (Phoenix dactylifera L.), Phoenix dérive de Phonix, nom du dattier chez

les Grecs de l’antiquité, qui le considéraient comme l’arbre des phéniciens;

dactylifera vient du latin dactylus dérivant du grec dactulos signifiant doigt, en

raison de la forme du fruit (Munier, 1973). Plante à fécondation croisée, le palmier

dattier comprend suite à des croisements fortuits ou voulus, un nombre toujours

croissant (Rhouma, 1991). A croissance apicale dominante, classée dans le groupe

des Spadiciflores, l’ordre des Palmales, la famille des Palmacées (Arecaceae), la

sous-famille des Coryphoidées et la tribu des Phoénicées (Sedra, 2003 ; Sedra, 2012).

La plante présente un système racinaire très développé comprenant de

nombreuses racines grêles longues, obliques ou horizontales à disposition

fasciculée. Un appareil végétatif comprenant le tronc (stipe) et qui contient de

nombreux faisceaux libéroligneux. Il est doté d’un seul bourgeon terminal assurant

sa croissance en longueur (jusqu’à 30 m) et de bourgeons auxiliaires qui se

trouvent à l’aisselle de chaque palme et peuvent se développer pour donner

naissance à la base du stipe à un rejet. L’inflorescence de cette plante dioïque est en

forme de grappe d’épi, un seul ovule par fleur est fécondé, un seul carpelle se

développe pour donner le fruit appelé datte et les autres avortent (figure. 1)

(Bellabaci, 1988).


Figure. 1 : Représentation

Le palmier dattier, espèce thermophile, connue pour sa tolérance aux

conditions climatiques extrême d’aridité et de continentalité, nécessite pour sa

croissance et sa production dattière des températures supérieures à 30°C et une

forte luminosité (Fernandez

eau d’irrigation (Sedra, 2012


7

Représentation figurative du palmier dattier (Munier, 1973




andez et al., 1995 ; Chakroune et al., 2005). Il est très exigent en

Sedra, 2012), s’adapte à tout type de sol, mais mieux en sol assez


Munier, 1973).




). Il est très exigent en

), s’adapte à tout type de sol, mais mieux en sol assez


8

léger, profond, à pH neutre, et bien drainé. Il supporte des eaux assez chargées en

sels dissouts : Sulfate (de potassium et d’ammonium) et chlorure (de potassium)

(Sedra, 2003 ; Sedra, 2012).

La nature particulière du biotope où se développe le palmier dattier fait

que cette espèce est exposée à un nombre relativement restreint de maladies et de

ravageurs. Si certains ennemis s’avèrent, chaque année, économiquement nuisible

et causent des dégâts énormes, d’autres occasionnent des dégâts moindres,

différents d’un pays à un autre et d’une région d’un pays à une autre. Certaines

maladies vulnérables comme le Bayoud (fusariose vasculaire), le jaunissement

mortel ‘lethal yellowing’ et les ravageurs dangereux comme le charançon rouge

constituent les stress biotiques les plus menaçants dans les palmeraies du monde

(Sedra, 2012).


9

2. Le Bayoud, fusariose vasculaire du palmier dattier

Le Bayoud est une maladie très destructrice des palmeraies en Algérie et au

Maroc et c’est un réel danger pour les autres régions phoenicicoles. Il est spécifique du

palmier dattier mais fait partie d’un groupe de 80 maladies semblables, les fusarioses

vasculaires, provoquées par différentes souches de la même espèce de champignon du sol,

Fusarium oxysporum SCHLECHT. (Louvet, 1991).

2.1 L’agent pathogène du flétrissement vasculaire,

Fusarium oxysporum

Fusarium spp. est un groupe de champignons filamenteux,

imparfaits, considéré comme l'un des genres les plus variés et adaptables dans le

règne des Eumycota (Maheshwari et Dubey, 2008 ; Fourie et al., 2011). Les espèces de

Fusarium ont joué un rôle important pendant de nombreuses années comme agents

pathogènes des plantes causant des maladies entrainant des dégâts d’ordre

économique important (Fravel et al., 2003); telles que la pourriture de la couronne,

brûlure de l'épi, et la tavelure sur les céréales; flétrissements vasculaires sur un

large éventail de cultures horticoles; pourriture des racines; chancres et autres

maladies telles que pokkah-Boeng sur la maladie de la canne à sucre et bakanae de

riz (Nelson, 1981). Cosmopolites ; Elles sont très répandues dans le sol et sur les

parties de la plante souterraines et aériennes, les débris végétaux, et d'autres

substrats organiques, fréquents dans les régions tropicales et tempérées et se

retrouvent également dans le désert, montagne et les régions arctiques, où règnent


10

des conditions climatiques difficiles. Les espèces de Fusarium sont souvent

considérées comme des champignons telluriques en raison de leur abondance dans

le sol et leur association fréquente avec les racines des plantes, soit comme des

parasites ou saprophytes. Cependant, beaucoup ont des moyens actifs ou passifs

de dispersion dans l'atmosphère et sont des colonisateurs communs de parties

aériennes des plantes où dans les deux cas, peuvent entraîner des maladies

d'importance économique considérable (Nelson et al., 1994). Parmi ces espèces,

Fusarium oxysporum Schlechtendahl emend. Snyder and Hansen occupe le

cinquième rang universel d’agent fongique le plus pathogène de plante (Dean et al.,

2012).

2.1.1 Position taxonomique et formes spéciales

La première et véritable description du genre Fusarium a été réalisée par

Link en 1809, ce dernier a crée le genre pour des espèces présentant des spores

cloisonnées, fusiformes, formées sur des stromas ; principalement et uniquement

par le critère de la présence de conidies en formes de banane. En 1935, Seifert

rejette l’identification des Fusarium par la présence unique de macroconidies

distinctives étant donné que nombreux de champignons appartenant au groupe de

coelomycetes produisent des spores. Par la suite, les nombreuses recherches se

sont focalisées sur le diagnostic, l’identification et la taxonomie des espèces de

Fusarium pathogènes de plantes, par le fait que les isolats fongiques de la même

plante hôte représentaient le même individu fongique. Les travaux de

Wollenweber et Reinking ont reformulés le concept de classification de Fusarium


11

qui fut indépendant de la plante hôte est basé sur les caractères mycologiques des

souches impliquées. Ils ont divisé le genre en 16 sections, chaque section contient

des espèces qui ont été unies par des caractères morphologiques critiques, par

exemple, la morphologie et pigment macroconidien, leur concept d'espèce est resté

basé sur les différences entre les souches, plutôt que sur les similitudes qu'ils

partagent. Dans les années 1940 et 1950, Snyder et Hansen ont réduit le nombre

d'espèces au sein du genre à neuf et ont proposé de regrouper toutes les espèces de

la section elegans dans F. oxysporum, un concept qui a reçu une large acceptation.

Ils ont démontré que c'est seulement en utilisant des cultures issues d'une seule

spore que l’identification de l’espèce pourrait se faire de manière fiable. (Gordon et

Martyn, 1997 ; Leslie et Summerell, 2006 ; Fourie et al., 2011 ; Net.1)

En raison de l’absence de stades téléomorphes connus de la plupart des

Fusarium spp, leur classification traditionnelle est basée exclusivement sur la

morphologie, ainsi leur taxonomie a été basée principalement sur la structure et

l'abondance des structures reproductrices asexuées (chlamydospores, phialides,

microconidies et macroconidies) et sur les caractéristiques culturelles (texture de la

colonie, couleur et l'arôme culturel) (Windels, 1992 ; Maheshwari et Dubey, 2008).

Comme c’est le cas pour F. oxysporum ; dont la taxonomie morphologique se

caractérise principalement par des microconidies non cloisonnées formés en

fausses têtes sur les monophialides courts, les macroconidies présentent trois septa

formés à partir de monophialides sur conidiophores ramifiés dans les

sporodochies, et aussi par des chlamydospores avec une apparence de paroi lisse

ou rugueuse formées individuellement ou par paires (figure. 2) (Fourie et al., 2011).


Suivant la classification actuelle,

Ascomycètes, classe des Sordariomycètes, ordre des hypocreales, famille des

Nectriaceae (Net. 2).

Figure. 2 : Les caractéristiques morphologiques de (A) microconidies

par monophialides

En dépit de la di

pathogénique est un critère d’identification

flétrissement causé par

vis-à-vis de l’hôte, basés sur les espèces de plantes et des cultivars que peuvent

infecter (Fravel et al.,

nouveaux taxons des esp

forme spéciale. Ils sont classés en plus de 150 formes spéciales et races (

2011). Les isolats qui attaquent la


12

Suivant la classification actuelle, Fusarium oxysporum appartient à la division des


Les caractéristiques morphologiques de Fusarium oxysporum

microconidies ; (B) macroconodies ; (C) microconidies produites par monophialides ; et (D) une seule chlamydospore terminale.

(Fourie et al. 2011)

En dépit de la diversité morphologique et cultura

pathogénique est un critère d’identification ; Les agents pathogènes du

usé par Fusarium oxysporm montrent un dégrée élevé de spécificité

vis de l’hôte, basés sur les espèces de plantes et des cultivars que peuvent

2003). Ce qui a conduit Snyder et Hansen (1940) à créer de

nouveaux taxons des espèces basés sur la spécificité et d’établir ainsi le concept de

forme spéciale. Ils sont classés en plus de 150 formes spéciales et races (

). Les isolats qui attaquent la même famille ou le même genre ou espèce de


appartient à la division des


Fusarium oxysporum. produites

une seule chlamydospore terminale.

versité morphologique et culturale, la variabilité

Les agents pathogènes du

montrent un dégrée élevé de spécificité

vis de l’hôte, basés sur les espèces de plantes et des cultivars que peuvent

). Ce qui a conduit Snyder et Hansen (1940) à créer de

èces basés sur la spécificité et d’établir ainsi le concept de

forme spéciale. Ils sont classés en plus de 150 formes spéciales et races (Fourie et al.

genre ou espèce de


13

plante sont inclus dans la même forme spéciale (Maheshwari et Dubey, 2008); ils

correspondent à des souches dont les caractéristiques morphologiques et

culturales sont imperceptibles mais montrent des propriétés physiologiques

différentes à parasiter un hôte spécifique (Garcès de Granada et al., 2001). A leurs

tours, les formes spéciales présentent des subdivisons qui diffèrent dans leur

pouvoir virulent vis-à-vis du cultivar et ce par rapport aux variétés différentes,

suite à la présence d’un ou de plusieurs gènes de résistance, d’où l’attribution de

‘races pathogènes’ (Corbaz, 1990 ; Maheshwari et Dubey, 2008)

La plupart des isolats de F. oxysporum n’expriment pas leur pouvoir pathogène. Ils

sont donc considérés comme agents non-pathogènes qu’on retrouve au niveau de

la rhizosphère de diverses espèces végétales (Fouri et al., 2011).

Il a été reconnu que plusieurs formes spéciales n’ont pour cible qu’une seule

culture de plante (ex. F. oxysporum ciseri pour la banane, F. oxysporum f. sp.

Vasinfectum pour le coton), contrairement à certaines qui peuvent présenter une

variété de gamme d’hôte comme pour le cas de F. oxysporum f. sp. Cucumerinum

qui infecte à la fois le concombre et le melon (Fourie et al., 2011). Par ailleurs,

Fusarium oxysporum f. sp. albedinis a pour plante-hôte principale le palmier-dattier.

Tous les cultivars nord-africains de qualité sont sensibles (cvs Mejhoul, Deglet

Nour, Bou Feggous, etc.) ; Certains cultivars ont une bonne résistance (cvs Bou

Sthammi noir, Bou Sthammi blanc, Tadment, Iklane, Sair Laylet, Bou Feggous ou

Moussa au Maroc et Takerboucht en Algérie mais, parmi ces cultivars, seuls Sair

Laylet et Takerboucht sont de qualité acceptable, quand même inférieure à celle de

Deglet Nour ou Mejhoul. On signale aussi F. oxysporum f. sp. albedinis sur d'autres

plantes cultivées dans les palmeraies: Lawsonia inermis, une plante tinctoriale (du

nom vernaculaire, le henné) ainsi que le Trifolium sp. dont la luzerne Medicago


14

sateva. Ces plantes sont porteuses du pathogène sans manifester de symptômes.

(EPPO, 1992 ; EPPO, 2010)

2.2 Origine et distribution du Bayoud dans le Nord de l’Afrique

Selon certaines données littéraires, la maladie du bayoud est apparue entre

1877 et 1887 dans la vallée du Drâa au Maroc (Toutain, 1965 ; Sedra, 2006), dont

l’agent causal Fusarium oxysporum sp. albedinis ne fut découvert et identifié qu’en

1934 (Sedra, 2006). Elle s’est ensuite propagée vers le Sud-Ouest marocain et l’Est

(1900 - 1920) pour atteindre respectivement les palmeraies marocaines du Bani et

les palmeraies situées des deux côtés des frontières algéro-marocaines (Khelafi,

2013).

En Algérie, elle a été signalée pour la première fois en 1898 à Beni-Ounif

pour se propager dans le Sud puis le centre du pays (1900 – 1950), ou elle atteint

Béchar et Beni abbes, Foggaret ez Zoua, Fatis, Adrar et In Salah. A partir d’In

Salah, le bayoud fait un bond de 700km vers le Nord pour atteindre la palmeraie

de Metlili. Arrivé dans le Mzab (Metlili, Ghardaïa) ou il a été signalé à Ghardaïa

1978 et en 1977 à El Goléa ; le bayoud s’est rapproché des palmeraies de l’Oued

Righ, où la variété Deglet Nur (très sensible au bayoud) constitue des plantations

monovariétales (Djerbi, 1982 ; Sedra, 2006 ; Khelafi, 2013). La région de Ghardaïa est

considérée comme le front de la maladie du bayoud. L’apparition des nouveaux

foyers dans cette région au niveau des localités de zelfana (01 foyer) et Sebseb (02

foyers) montre la menace qui pèse sur les plantations de Deglet nour du Sud-Est


15

Algérien (figure. 3). La localité de zelfana n’est qu’à 150km de la wilaya de

Ouargla, zone indemne du bayoud (Chikh Aissa et Sekouti, 2003 ; Khelafi, 2013).

Durant la période 1995 – 2000, plusieurs autres foyers infectés mais dont la maladie

ne s’est pas manifestée ont été découverts, surtout dans les palmeraies d’Adrar

situées au Nord de la Mauritanie (Sedra, 1999a, b). Ainsi, de nouveaux foyers ont

été signalés dans la région de Tichit et dans la région de Tagant au centre du pays

dont les symptômes ont été repairés (Khelafi, 2013). Les derniers foyers déclarés au

Maroc en 1996 sont situés dans la Vallée de Ait Mansour (région de Tafraoute)

(Sedra, 1996).

En 2008, Une étude a montré l’avancée de la maladie suite à un taux

d’infection enregistré dans les régions d’Adrar, Bechar, Tamanrasset et Ghardaïa

(Loumaizia et al., 2008).


Figure. 3 : Distribution géographique du bayoud en Afrique du nord


16

Distribution géographique du bayoud en Afrique du nord et en Algérie (Tirichine, 2006).


Distribution géographique du bayoud en Afrique du nord


17

2. 3 Moyens de propagation du bayoud

La maladie du Bayoud se transmet par le biais de spores du F.o.a

pathogène. A l’exception des dattes et du spadice (branche à laquelle les dattes

sont fixées) , toutes les parties d’un arbre contaminé sont susceptibles d’être

porteuses du champignon et sont donc à l’origine de sa dissémination, et ce, à

travers l’utilisation de matériels d’agriculture contaminé sans préalable

désinfection ; transport et véhicule ou utilisation des rejets et des palmes d’un

arbre malade, de plantules, de tronc d’arbre, de terre, racines contaminés et/ ou

non contaminés qui, transférés dans un lieu sain, favorisent la dissémination de

la maladie ; importation de palmiers d’ornement infectés ; la circulation d’eau

d’irrigation ; de plants dénommés porteurs sains du parasite (ex : henné, luzerne,

cultures intercalaires) dont les racines sont souillées de terre contaminée, favorise

la dissémination. Les vents violents peuvent, dans certains cas, véhiculer les

graines de sables et de terre porteuses de spores. Cependant, il se peut qu’il

existe d’autres moyens de transmission de la maladie qui jusqu’à présent restent

méconnues. (Sedra, 2006 ; Sedra, 2011)

2.3.1 Epidémiologie, facteurs favorisant la croissance du F.o.a et

influençant sa propagation

L’agent causal du Bayoud tolère un sol aéré, humide et une température

pouvant dépasser 35°C. Cependant, dans des conditions non adéquates, les


18

spores du champignon se transforment en chlamydospores pour lui

permettre de se conserver et de mieux lutter aux conditions du milieu. Les

chlamydospores peuvent se conserver dans les débris végétaux et le sol et

supporter de fortes températures (60°C) (Sedra, 2006).

Plusieurs facteurs sont impliqués dans l’épidémiologie du F.o.a

influençant sa survie ainsi que sa propagation, parmi lesquels :

1° Les parcelles entretenues sont les plus touchées : Il est bien connu, par des

observations sur le terrain, que le passage de la forme endémique du Fusarium

oxysporum f.sp. albedinis à la forme épidémique est étroitement lié à l’intensité

d’irrigation du palmier dattier. Une irrigation abondante qui se pratique dans les

parcelles bien entretenues, due en grande partie aux cultures associées très

exigeantes en eau, favorise automatiquement la virulence du Fusarium

oxysporum f.sp. albedinis. À l’inverse, les parcelles mal irriguées ou complètement

abandonnées sont relativement épargnées par rapport aux parcelles bien

entretenues. (Hakkou et Bouakka, 2004)

2° pratique des cultures associées : Les fortes attaques du Fusarium

oxysporum f.sp. albedinis sont souvent une conséquence liée à la pratique des

cultures associées : céréales, luzerne, henné, maraîchères, tabac, etc. Ces cultures se

pratiquent au cours de différentes saisons de l’année, faisant que le sol où baignent

les racines du palmier dattier et où niche le champignon pathogène est bien

travaillé et les conditions favorables à la multiplication et à l’agressivité

du Fusarium oxysporum f.sp. albedinis sont constamment réunies.


19

De plus, ces plantes constituent les porteurs sains de la fusariose vasculaire. Il a été

montré que l’épidémie progresse plus rapidement dans les parcelles cultivées

pendant plusieurs années (10 à 15 ans) en luzerne et henné. Ce fait est dû aux

pratiques agronomiques intenses de labour, de fertilisation et d’irrigation qui

peuvent jouer un rôle important dans l’infestation du sol par le champignon

pathogène. L’irrigation régulière le long de l’année, et surtout pendant les périodes

chaudes, est très favorable à l’extension de la maladie. (Hakkou et Bouakka, 2004)

3° la densité élevée de la palmeraie : Elle favorise le développement de la

fusariose vasculaire, or le pourcentage des pieds atteints par la fusariose vasculaire

augmente avec la diminution de la distance qui sépare deux pieds contigus du

palmier dattier. Il est bien connu que les racines du palmier dattier influencent

directement le gradient microbiologique de l’agent pathogène le Fusarium

oxysporum f.sp. albedinis dans le sol ; Chaque fois qu’on s’éloigne des racines, la

densité de cet agent décroît. En effet, cette microflore est stimulée par les racines de

la plante hôte sensible à l’agent pathogène en libérant des facteurs nutritifs

favorisant sa germination et/ou en inhibant la microflore du sol compétitive. Pour

les variétés résistantes, l’accumulation des substances phénoliques, comme l’acide

caféoylshikimique, dans leurs racines, limite la croissance et le développement

du Fusarium oxysporum f.sp. albedinis. Ces résultats affirment ainsi que les racines

du palmier dattier sensible interviennent dans la propagation et la transmission de

la fusariose vasculaire, phénomènes qui sont d’autant plus accentués que la densité

des palmiers est élevée. (Hakkou et Bouakka, 2004)


20

4° Qualité du Sol : La réceptivité d’un sol à une maladie d’origine tellurique

désigne la capacité d’un sol à permettre plus ou moins l’expression de la maladie.

La qualité physico-chimique du sol et sa microflore jouent un rôle important dans

la survie du parasite. Il a été démontré que plus les sols sont fertiles plus le parasite

s’y installe, aussi ; le bayoud est d’autant plus grave que les conditions culturales

sont optimales (Amir et Amir, 1988). Parmi les facteurs ayant pu être corrélés à la

réceptivité :

- La densité en Fusarium totaux : plus un sol est riche en Fusarium

saprophyte plus il serait résistant à la fusariose ; La salinité : un sol est

d’autant plus résistant qu’il est salé pour une concentration ne

dépassant pas 20 g/l (Sedra, 2006) ;

- Plusieurs substrats végétaux tels que la paille d’orge, broyat de palmes,

de bois, feuilles de légumineuses ont montré leur effet stimulateur plus

ou moins important sur le développement de F.o.a. (Amir et Amir, 1988)

2. 4 Impact économique de la maladie du bayoud

La maladie du Bayoud causée par F.o.a représente l’une des maladies les

plus destructrices du palmier dattier. En un siècle, il a occasionné des dégâts

considérables dont les pertes sont estimées à plus de 3 millions de pieds de

palmiers en Algérie et plus de 12 millions au Maroc. Ce qui a eu impact sur les

cultures sous-jacentes des oasis et a contribué de masse dans le phénomène de

désertification (Si-Moussa et al., 2010).


21

Les meilleurs cultivars nord-africains sont les plus sensibles, ceci a

conduit à la disparition progressive des cultivars de qualité en faveur de cultivars

peu productifs ; plus de 50% des cultivars commerciaux de dattiers ont été

détruits parmi lesquels « Deglet nour ». La maladie n'a pas seulement provoqué la

perte d'un aliment de base pour les populations sahariennes, mais aussi la perte

d'une source de revenus et de devises indispensable (EPPO, 1992 ; EPPO, 2010).

Devant la situation alarmante de l'extension de la maladie et vu

l'importance des dégâts qu’elle a occasionnés, le Bayoud devient un ennemi

majeur pour l'agriculture saharienne algérienne et marocaine, et une menace

pour la culture du palmier dattier dans le monde (Sedra, 2005 ; EPPO, 1992 ; EPPO,

2010).

2.5 Symptômes de la maladie du bayoud

Le bayoud causé par F.o.a est une trachéomycose, ce qu’il fait que les

symptômes sont en relation avec l’envahissement du bois (ou « tranchées »)

(Messiaen et al., 1991). Le bayoud vient du mot arabe « Bayadh » désignant la

couleur blanche que prend la palme atteinte (Ploetz, 2003). Cette maladie attaque

les palmiers à tous les stades de croissances, matures et moins jeunes, ainsi que

leurs ramifications basales (Djerbi, 1982; Sedra, 2006).


22

2.5.1 Les symptômes externes sur le feuillage

a. Les symptômes typiques : Le premier symptôme de la maladie,

perceptible pour les observateurs expérimentés, apparaît sur une ou plusieurs

feuilles de la couronne moyenne (figure. 4). La fronde affectée prend une teinte de

plomb (gris cendré), puis commence à se faner d’une manière particulière ;

Certaines épines (ou pennes) situées sur un côté de la fronde deviennent blanches,

puis, Le flétrissement progresse vers le haut à partir de la base jusqu'au sommet.

De l’autre coté de la fronde, le flétrissement progresse du sens inverse, allant du

haut en bas, jusqu’à ce que la fronde est entièrement desséchée et détruite. Ensuite,

une strie brune apparait en longueur sur la face dorsal du rachis en avançant de la

base jusqu’à la pointe de la fronde, correspondant au passage du mycélium dans

les faisceaux vasculaires du rachis. Ce processus peut s’étendre sur plusieurs jours.

Ensuite, la même succession de symptômes commencent à apparaître sur les

feuilles adjacentes ou opposées, de la même façon jusqu’au cœur. Le bourgeon

terminal reste dressé et vert, par la suite il sera atteint puis meurt, les frondes

prennent un aspect arqué qui ressemble à une plume humide, puis elles se pendent

au long du tronc (figure. 8). Au niveau des rejets basaux, les symptômes

apparaissent de façon unilatérale et le dessèchement se manifeste

vraisemblablement. (Toutain, 1967 ; Djerbi, 1982; Peyron, 2000 ; Sedra, 2006)


Figure. (première fronde

b. Les symptômes atypiques

différemment (figure.

au milieu du rachis et que les folioles se dessèchent de l'apex vers la base, des deux

cotés à la fois. D’autres variations peuvent survenir aussi

généralisé pourrait être repér

principalement durant l'automne et l'hiver


23

Figure. 4 : Premiers symptômes du Bayoud (première fronde de la couronne moyenne affectée)

(Hakkou et al., 2012)

Les symptômes atypiques : Parfois, les symptômes se développent

5). Il se peut, par exemple, que la coloration brune apparaisse


cotés à la fois. D’autres variations peuvent survenir aussi

généralisé pourrait être repéré avant l'apparition des symptômes typiques,

principalement durant l'automne et l'hiver. (Djerbi, 1982 ; Hakkou


arfois, les symptômes se développent

Il se peut, par exemple, que la coloration brune apparaisse


cotés à la fois. D’autres variations peuvent survenir aussi ; un jaunissement

é avant l'apparition des symptômes typiques,

Hakkou et al., 2012)


Figure. 5 : Symptômes atypique du Bayoud. ( et brunissement du rachis avec des feuilles maintenues vertes. ( premiers symptômes sur la partie haute du dattier plutôt que sur le centre.

2.5.2 Les symptômes externes sur les racines

Le système radiculaire présente quelques racines de couleur brun

rougeâtre, accentuée avec des zones ou le tissu est en décomposition

est due à la pénétration du

2009). A noter que, les symptômes sur pédoncules, fleurs ou fruits n'ont jamais été

signalés (Boulenouar et

présente pas de symptômes n’est pas exempt d’une infection, déjà installée, par

F.o.a.


24

Symptômes atypique du Bayoud. (A) et (B) : Fronde symptomatique, flétrissementet brunissement du rachis avec des feuilles maintenues vertes. (premiers symptômes sur la partie haute du dattier plutôt que sur le centre.

(Sedra, 2006)

Les symptômes externes sur les racines

e système radiculaire présente quelques racines de couleur brun

, accentuée avec des zones ou le tissu est en décomposition

tion du champignon dans l’arbre. (Sedra, 2006

es symptômes sur pédoncules, fleurs ou fruits n'ont jamais été

Boulenouar et al., 2009). De plus, il faut rappeler qu’un dattier qui ne



) : Fronde symptomatique, flétrissement et brunissement du rachis avec des feuilles maintenues vertes. (C) : Apparition des premiers symptômes sur la partie haute du dattier plutôt que sur le centre.

e système radiculaire présente quelques racines de couleur brun-

, accentuée avec des zones ou le tissu est en décomposition. Cette couleur

Sedra, 2006 ; Boulenouar et al.,

es symptômes sur pédoncules, fleurs ou fruits n'ont jamais été

De plus, il faut rappeler qu’un dattier qui ne



2.5.3 Les symptômes internes

Les racines malades correspondent à plusieurs groupes de faisceaux

vasculaires du stipe qui ont pris une coloration brun

parenchyme et le sclérenchyme environnants d'ailleurs

stipe, les taches sont larges et nombreuses. Au cours de leur ascension dans l'arbre,

les faisceaux vasculai

tortueux, à l'intérieur des tissus sains, peuvent être suivis. Les frondes qui

manifestent des symptômes externes ont une couleur brun rougeâtre et des

faisceaux vasculaires très colorés quand on le

symptômes vasculaires qui existent depuis les racines jusqu'a

du palmier. (Boulenouar et

Figure.

d’un


25

Les symptômes internes

es racines malades correspondent à plusieurs groupes de faisceaux

stipe qui ont pris une coloration brun-rougeâtre, de même que le

parenchyme et le sclérenchyme environnants d'ailleurs (figure


les faisceaux vasculaires colorés (figure. 6 et 7) se séparent et leurs chemins



faisceaux vasculaires très colorés quand on les coupe. Il y a donc continuité des

symptômes vasculaires qui existent depuis les racines jusqu'a

Boulenouar et al., 2009)

. 6 : Coupe transversale au niveau central dud’un dattier atteint du bayoud qui illustre la coloration rouge des tissus vasculaire. (Djerbi, 1982


es racines malades correspondent à plusieurs groupes de faisceaux

rougeâtre, de même que le

figure. 6). Vers la base du


se séparent et leurs chemins



s coupe. Il y a donc continuité des

symptômes vasculaires qui existent depuis les racines jusqu'aux feuilles apicales

au niveau central du tronc du bayoud qui illustre la coloration

Djerbi, 1982)


Figure.

d’un dattier


26

7 : Coupe transversale au niveau de l’apex du tronc d’un dattier atteint du bayoud qui montre l’impact du

F.o.a sur certains vaisseaux (Djerbi, 1982

Figure. 8 : Stade final de la maladie. (Hakkou et al. 2012)


du tronc montre l’impact du


27

La mort du palmier peut survenir de six mois jusqu’à quelques

années après l’apparition des premiers symptômes de la maladie (Sedra, 2006).

L’évolution des symptômes dépend de la variété du dattier ainsi que des

conditions de plantation (Boulenouar et al., 2009).

2.6 Le pathogène, Fusarium oxysporum f. sp albedinis

L’agent causal, responsable de la maladie du Bayoud est un champignon

microscopique de la mycroflore du sol. Dénommé Fusarium oxysporum forma

speciale albedinis (Kiliani et Maire) et Gordon.

2.6.1 Caractéristiques morphologiques et culturales

Au premier isolement et par repiquage de cultures monospores sur les

milieux usuels (PDA et Czapek-Dox), à partir de tissus de dattier infecté ou de

tissus de porteurs asymptomatiques ou isolés sur milieu sélectif à partir du sol, le

parasite F. o. f. sp. albedinis présente un aspect cultural, dans plus de 80% des cas,

appelé forme sauvage ou forme typique du parasite qui est caractérisée par un

mycélium fin frisé, ras, arbustif et d’aspect graisseux, de couleur rose saumon pale

et de croissance lente. A l’obscurité; sur des cultures vieilles ; ou suivant des

repiquages successive et/ ou maintenues sur des supports synthétiques par des


28

transferts de masse, F.o.a peut émettre un pigment violet foncé. La coloration

devient pêche, rose, mauve ou violette, ou pourpre (Bounaga, 1970 ; Sedra et Djerbi,

1985). Le mycélium aérien blanc est généralement violet au bout de quelques jours

(Reinhard et Dagmar , 2009). Sa croissance mycélienne débute au dessus de 7°C, elle

est faible jusqu’à 12°C et optimale entre 21 et 27 °C. Cette croissance s’arrête à

partir de 37°C (Bounaga, 1970).

En microscopie optique, le Fusarium oxysporum possède un mycélium

cloisonné et hyalin. Les microconidies nombreuses peuvent être sphériques à

ellipsoïdes, légèrement incurvés, unicellulaires, hyalines, de taille 3-15 x 3-5 μm;

elles se forment dans des microphialides qui sont renflés à la base et pointues à

l'extrémité. Les macroconidies peu nombreuses issues des macrophialides, sont

falciformes, généralement présentent trois cloisons, dont la taille est de 20-35 x 3-5

μm. Dans les cultures âgées se forment les chlamydospores ; spores formées à

partir de la condensation de contenu du hyphe avec épaississement des parois de

conidies qui sont intercalaires ou terminales, de forme sphérique, se produisant

individuellement ou par groupes de deux à trois. Les sclérotes sont rares dans la

culture, bleu foncé au noir, à diamètre de 2.1 mm, soit répartie sur le mycélium ou

en groupes. (figure. 9) (OEPP, 1992 ; Garcès de Granada et al., 2001 ; Hakkou et al.,

2012).


Figure. 9 :


29

micro- et macroconidies produites par les micro et macrophialides et chlamydospores de

Fusarium oxysporum f. sp. albedinis. (Djerbi, 1982


et macroconidies produites par les micro-

Djerbi, 1982)


30

2.6.2 Biologie et pathogénicité du F.o.a

Le flétrissement causé par Fusarium oxysporum est le résultat de divers

facteurs guidés par l’interaction pathogène - hôte, tels que le facteur de

reconnaissance du pathogène par les racines de la plante ; l'attachement des agents

pathogènes par la structure différenciée ; la pénétration de l'agent pathogène

pour avoir accès aux tissus vasculaires ; l'adaptation des agents pathogènes au sein

du système de la plante ; la prolifération des composants fongiques (hyphes et

microconidies) dans les vaisseaux du xylème et enfin la sécrétion de protéines et de

toxines (Ul Rehmen et al., 2013).

Le cycle de vie de Fusarium oxysporum (figure. 10) commence par une phase

saprophyte suite à sa survie sous forme de chlamydospore dans le sol. La

croissance saprophyte et l’activité des agents pathogènes varient en fonction des

conditions environnementales et des conditions des sols (Senthilkumar et al., 2011).

Les chlamydospores restent à l’état de dormance, retrouvés en faibles quantités

jusqu’à 1 m de profondeur (10-75 propagules par gramme de sol) avec une

répartition très hétérogène (Fernandez et al., 1995), et cela peut durer plusieurs

années, jusqu’à ce que leur germination est stimulée, dans les conditions

adéquates, en utilisant des nutriments qui sont secrétés par les racines; Le

développement du parasite à proximité des racines de palmier est une étape

nécessaire pour qu’il atteigne la surface racinaire. Le degré de compétition et plus

globalement d’antagonisme que subit le parasite au voisinage des racines est un

élément prépondérant ; Une fois à la surface racinaire, le pathogène se heurte


31

encore à une barrière microbiologique : la microflore du rhizosphère et de l’écorce.

Des facteurs internes à la plante peuvent également l’arrêter (résistance génétique,

phénomène de prémunition), ensuite se fait la pénétration. (Amir et Amir, 1988)

Certains travaux montrent qu’il existe à la surface des racines des lectines,

de glycoprotéines ou de glycolipides intervenant dans les phénomènes de

reconnaissance entre hôte et parasite (Rahmania, 1988). Toute fois, il a été signalé

que toutes les variétés de palmier dattier portent au niveau des racines des

pneumatodes qui constituent la porte d’entrée du F.o.a. La structure de ces

pneumatodes varie en fonction des variétés ou il s’est avéré que le F.o.a les pénètre

plus facilement chez la variété sensible Deglet nour (Belarbi, 1988) ; lors de la

pénétration, des hyphes spécialisés sont mis en place ; la surface des hyphes émet

des branches qui se caractérisent par leur diamètre réduit à comparé avec le

mycélium. La dégradation de la paroi cellulaire peut être important pour le

pathogène non seulement pour l’extension du processus de pénétration suivit de la

ramification à l'intérieur du tissu de la plante mais également pour la libération, à

partir des polysaccharides de la paroi, des éléments nutritifs nécessaires à la

croissance du champignon (Recorbet et al., 2003).

L’introduction du champignon F.o.a et sa production de toxines telles que

l’acide fusarique, acide succinique, 3-phenyl acide lactiques et leurs dérivés, les

toxines peptidiques et marasmines (El Hadrami, 2005) entrainent une fièvre, un

déséquilibre du métabolisme. Puis un grand développement du champignon se

produit dans les vaisseaux conducteurs de la sève, ou le champignon arrive à

boucher les vaisseaux du xylème (Rahmania, 1988) : en libérant les conidies qui vont


32

germer et former à nouveau un mycélium sporulant, véhiculés vers le haut par la

sève montante. microconidies que macroconidies en sont responsables, cependant,

la présence des macroconidies est prépondérante dans les tissus de l’hôte (Mace et

al., 2012). D’autre part une thyllose est manifestée suite à l’expansion vésiculaire

des cellules adjacentes du parenchymes jouant un rôle important dans la résistance

mécanique (El Modafar, 2010), ce qui entraine d’avantage un ralentissement de la

montée de la sève (Rahmania, 1988) puis un arrêt de l’alimentation en sève des

palmes et le bourgeon terminal est en final affecté (Sedra, 2011) ; ainsi tous les

organites cellulaires sont petits à petits dégradés, les mitochondries n’ont plus

structure normale, et les chloroplastes subissent une vacuolisation avec des dépôts

de lipides et de ferritine, la membrane plasmidiale est toute a fait creuvée, et ceci se

manifeste au dernier stade de la maladie. Au stade ultime de la maladie, la cellule

est totalement vidée, il ne reste que la paroi pecto-cellulosique (Rahmania, 1988).

Le champignon qui se développe à partir du système vasculaire dans les cellules

du parenchyme adjacentes produisant d’importantes quantités de conidies et de

chlamydospores, ainsi ; Le pathogène survie dans les débris de dattier infecté dans

le sol, sous toutes ses formes végétatives, mycélium et spores. La forme qui

demeure la plus fréquente est le chlamydospore. (Agrios, 1997)


Figure. 10 : Cycle infectieux de causal de la

(modification apportée depuis (Chl. : chlamydospore. V.

Xylème primaire(A) : infestation des racines par le champignon(B) : Pénétration et envahissement (C) : Mycélium et conidies dans les vaisseaux du xylème(D) : Apparition des symptômes(E) : Etat avancé de la maladie ou le champignon bouche les vaisseaux vasculaires de part sa

propagation (F) : palmier dattier à un état avancé de l’infection(G) : Mort du palmier dat(H) : déterioration des parties infectées de l’arbre et dissémination

sol. (I) : Cycle saprophy


33

: Cycle infectieux de Fusarium oxysporum f. sp. albedinis

causal de la maladie du Bayoud. (modification apportée depuis Agrios, 2005 ; Sedra, 2006

: chlamydospore. V. : vaisseaux vasculaires. F. feuilles ou fronde du dattier. Xylème I.Xylème primaire) : infestation des racines par le champignon

et envahissement du champignon des vaisseaux vasculaires de racines: Mycélium et conidies dans les vaisseaux du xylème : Apparition des symptômes caractéristiques de la maladie : Etat avancé de la maladie ou le champignon bouche les vaisseaux vasculaires de part sa

propagation et la formation de gommes (thyllose) : palmier dattier à un état avancé de l’infection : Mort du palmier dattier : déterioration des parties infectées de l’arbre et dissémination du champignon, dans le

: Cycle saprophyte du champignon dans le sol.


albedinis, agent

Sedra, 2006) fronde du dattier. Xylème I. :

des vaisseaux vasculaires de racines

: Etat avancé de la maladie ou le champignon bouche les vaisseaux vasculaires de part sa

du champignon, dans le


34

2.7 Méthodes de lutte contre le Bayoud

2.7.1 Mesures prophylactique

Les mesures prophylactiques restent une nécessité absolue pour préserver

les palmeraies de I’Est Algérien et celles de Tunisie (Bounaga et Djerbi, 1990).

Les moyens de lutte contre le bayoud lorsqu’un palmier est atteint sont :

- L’archage du palmier ;

- Le bruler sur place ;

- Le nettoyage des débris végétaux.

Cependant après l’arrachage, la plupart des racines restent dans le sol, ce

qui constitue une source de contamination. En plus, le Fusarium oxysporum sp.

albedinis peut se conserver longtemps dans le sol ou dans les fragments de palmiers

infectés sous forme de chlamydospores. Par conséquent le traitement chimique est

recommandé pour éradiquer le F.o.a dans le sol et dans le reste des racines

infectées (Djerbi, 1990).

2.7.2 Lutte par utilisation de cultivars résistants

Les variétés importantes et de hautes valeurs marchandes sont toutes

sensibles à la Fusariose. Le reste est constitué de diverses variétés dites

secondaires et de moindre importances économique, très rares à exister ou en voie

d'extinction et dont le comportant vis-à-vis du Bayoud n'a pu être mis en évidence.

(Rhouma, 1991) Pour l'instant, la seule variété présumée résistante semble être

"akerbouch".


35

De ce fait, elle constitue une alternative valable pour le repeuplement des zones

contaminées que jusqu’à présent constitue la mesure de contrôle la plus utilisée et

la plus efficace pour réduire l’incidence de la maladie (Dihazi et al., 2012). Un

programme de lutte fut envisagé par utilisation de la résistance variétale dans le

but de la création de variétés résistantes et de qualité (Djerbi, 1988) selon deux

moyens :

• Sélection de variétés résistantes parmi celles déjà existantes. Soit, de

populations naturelles issues de graines : les ‘’Khalts’’ (Bounaga et Djerbi, 1990) ;

• Croisement dirigé, entre variétés de qualité ou résistantes avec des males

résistants ou de qualité. (Djerbi, 1991)

Au Maroc, Il a été reporté récemment que la nouvelle lignée Najda est

résistante au Bayoud et produit des dattes de bonnes qualité (Dihazi et al., 2012).

Cependant la monoculture monovariétale est l'alternative la plus délicate et la plus

instable (sensibilité aux maladies et parasites, exigences vis-à-vis des facteurs

climatiques et agronomiques, réduction massive de la biodiversité du palmier

dattier et donc disparition d'une bonne partie du patrimoine génétique

phoenicicole) (Rhouma, 1991 ; Dihazi et al., 2012).


36

2.7.3 Lutte biologique

a. Utilisation de microorganismes antagonistes

La recherche de microorganismes du sol, antagonistes de F.o.a, utilisé pour

le contrôle biologique de la maladie du Bayoud a fait l'objet de plusieurs études.

De nombreux agent de biocontrôle ont été identifiés dont des actinomycètes

(Sabaou, 1988 ; Badji et al., 2005), des bactéries (Bacillus spp., Pseudomonas, Serratia

spp ; (El Hassni et al., 2007), des champignons (Penicillium spp ; Trichoderma spp

dont Trichoderma harzianum; Candida, Ulocladium atrum ;...) (El Hassni et al., 2007 ;

Ghomari, 2009 ; Souna et al., 2012), ou des espèces saprophytes de Fusarium (El

Modafar, 2010), présentant soit une antibiose, soit une compétition microbienne, soit

un parasitisme vis-à-vis de ce champignon pytopathogène, ou bien une induction

de la résistance de la plante hôte (Dihazi et al., 2012).

Malgré l’apparence séduisante de l’utilisation de l’antagonisme microbien

pour la lutte biologique contre la fusariose, ce procédé se révèle très difficile à

mettre en pratique particulièrement lorsqu’il s’agit d’un « arbre » comme le

palmier dattier (Amir et Amir, 1988). Le transfert in situ n’a vu le jour jusqu’à

présent en application pour le Bayoud (Dihazi et al., 2012). Toutefois, il est peut-être

possible d’aboutir rapidement à des applications restreintes dans le cas par

exemple du repeuplement en microflore de foyers éradiqués chimiquement (Amir

et Amir, 1988). De plus, il est porté a la connaissance de savoir le mode d’action et

les doses d’application (Alabouvette et al., 2009).


37

b. induction de la résistance de la plante hôte

L’induction de la résistance de la plante consiste à stimuler ses systèmes de

défense en réponse à un stresse d’origine biotique ou abiotique. Les organismes

impliqués dans ce biocontrôle comprennent des individus non pathogènes,

avirulants, ou hypoagressifs des populations d’espèces pathogènes ; Ou des

individus de populations de microorganismes antagonistes (Alabouvette et al.,

2009). L’utilisation de la mycorhization du Palmier Dattier par des champignons

symbiotiques représente une autre approche de biocontrôle. Elle semble jouer un

rôle dans la résistance de certaines cultivars vis-à-vis du bayoud; la variété

takerboucht semble la plus dépendante de la mycorhisation (Bouhired, 1988). De

plus, Jaiti et al. (2007) Ont testé et approuvé l’effet de la colonisation des racines par

Rhizobium arbuscularmycorrhizal par induction des réactions de défense du dattier

contre F.o.a.

Une approche nouvelle d’induction de la résistance fait intervenir des

éliciteurs. Les éliciteurs abiotiques impliquent des macromolecules telles que les

oligosaccharides, les glycoprotéines, Et peptides ou de petites molécules comme

l’acide arachidonique, jasmonique (Jaiti et al ., 2009) ou salicylique (El Hassni et al.,

2004). Les éliciteurs induisent des réponses structurales et/ ou biochimiques dans

l’hôte entrainant l’accumulation de protéines antimicrobiennes ainsi que

l’inhibition de la lignification de la paroi cellulaire. Alors que les éliciteurs

biotiques peuvent impliquer du chitosan par exemple (El Hassni et al., 2004).


38

c. Autres

Comme substances naturelles envisagées pour être utilisés dans le

traitement du Bayoud ; Des extraits de plantes médicinales de différentes régions

d’Algérie ont montré leurs effet inhibiteur vis-à-vis de F.o.a (Belyagoubi et al., 2008 ;

Boulenouar et al., 2012).

2.7.4 Lutte Chimique

Les maladies du sol sont parmi les plus difficiles à contrôler, surtout celle

causées par les formes spéciales de Fusarium oxysporum. Certains fongicides

systémiques tels que le chloropicrine, le bromure de méthyle ainsi que le mélange

chloropicrine / bromure de méthyle ont été testés sur le terrain (Chikh Aissa, 1991;

Vanachter, 1991 ; Djerbi et al, 1991). Cette fumigation est nécessaire dans le cas de

l’éradication d’un foyer primaire ; méthode d’éradication ayant été appliquée

avec succès en 1978 à El- Meneaa (Djerbi, 1982 ; Chikh Aissa, 1991). L’enquête menée

dans cette région en mai 2002 confirme l’absence de bayoud dans cette palmeraie

y compris dans les anciens foyers éradiqués à la chloropicrine en 1978 (Tirichine,

2002). Cette pratique, qui détruit à la fois les pathogènes et les organismes

bénéfiques du sol, a été interdit parce qu'il présente un danger pour les

applicateurs (Vanachter, 1988) et pour la santé publique (Alabouvette et al., 2007)

l’utilisation des produits chimiques


39

s’avère très onéreuse et présente un risque de pollution de l’environnement. Cela a

conduit à un regain d'intérêt pour la recherche et l’étude de l’effet de substances

chimiques de synthèse, beaucoup moins couteuses et efficaces. De nombreux tests

ont été tentés dans le cadre de rechercher des molécules chimiques à effets

inhibiteurs, la famille des triazoles ayant montré quelques résultats satisfaisants

(Karkachi, 2013).

40

Chapitre II

MATÉRIELS & MÉTHODES

Isolats

F1, F5, F7, F10

mesures des activités enzymatique pour les isolats en présence du

glucose; du saccharose; de l'amidon; de la

cellulose

dosage des enzymes : ALP;

γ-GT et GOT

Effet de l'amidon; glucose;

mesure du taux de la croissance mycelienne sur milieu Czapeck

dox modifié

- Etude de l’effet de substrats

croissance

- Mesure de lutte chimique

molécules de synthèse de la famille des oxindoles

chalcone.

41

Objectif du travail

Démarche entreprise

Figure.11

Isolats de F.o.a

Isolats

10, F11, F12

Effet de l'amidon; glucose; saccharose; et cellulose

mesure du taux de la croissance mycelienne sur milieu Czapeck

dox modifié

Isolat F

test antifongique (méthode de la

croissance mycélienne sur milieu solide

évaluation du taux d'inhibition et de la

Etude de l’effet de substrats de carbohydrates sur la

croissance mycélienne et dosage enzymatique

esure de lutte chimique par essai antifongique de

molécules de synthèse de la famille des oxindoles

Figure.11

Isolat F1

antifongique (méthode de la dilution)

mesure de la croissance mycélienne

sur milieu solide

évaluation du taux d'inhibition et de la

IC 50

s sur la

enzymatique ;

par essai antifongique de

molécules de synthèse de la famille des oxindoles et une

Chapitre II Matériels & méthodes

42

1. Matériel fongique

Les isolats de Fusarium oxysporum f. sp. albedinis font partie de la

mycothèque du laboratoire de microbiologie appliquée, Département de

biologie, Faculté des sciences de la nature et de la vie Université d’Oran.

2. Evaluation de l’effet de la source de carbone

2.1. Evaluation sur la croissance mycélienne

Partant du milieu de base Czapeck-Dox (annexe.1.3), la source de

carbone (saccharose 1%) a été remplacée à la même concentration (milieu

Czapeck-Dox); par trois autres composés carbohydratés: monosaccharide

(glucose) et polysaccharides (amidon et cellulose) séparément, le pH des

milieux est ajusté à 5,8 avant autoclavage.

Pour chaque espèce fongique et chaque milieu de culture, trois boîtes Pétri sont

ensemencées d’un explant de 5 mm de diamètre prélevé d’une culture âgée de 5

jours au centre de la boite Pétri contenant le milieu Czapeck à différents source

de carbone, l’incubation est réalisée à 28°C jusqu’à l’envahissement de la boite

par le premier isolat. Les mesures des diamètres s’effectuent à l’aide d’une règle

précise. (Amir et Mehdi, 1992)

2.2 Evaluations des activités enzymatiques

Les activités enzymatiques de la phosphatase alcaline (ALP) ; du

gamma-glutamyl transpeptidase (γ-GT) et du glutamate oxaloacétate (GOT)

étudiées sont recherchées dans les filtrats de cultures des isolats par des

dosages colorimétriques, pour cela nous avons ensemencés 3 fragments

mycéliens de 0,5 cm de diamètre prisent de la marge d’une culture jeunes sur

milieu PDA dans des ErlenMeyers de 100 ml contenant 20 ml du milieu


43

Czapeck-dox (annexe.1.1) amendé de différents source de carbone testée à pH

5,8, les erlemeyers sont incubées à température ambiante pendant 8 jours sous

agitation 80 rpm.

2.2.1. Préparation de l’extrait cellulaire

Le mycélium est récupéré par filtration, essoré entre deux papiers filtre

stérile ;, ensuite le mycélium est broyé en présence du sable préalablement traité

(annexe.1.6) et du tampon phosphate à pH 7.1 (v/v) à 4°C. Après obtention

d’une pate homogène, répartie dans des tubes falcons de 50 ml. Les tubes sont

centrifugés à 8500 tours/ minute à 4°C pendant 20 min.

Le surnageant « extrait cellulaire » est réparti dans des tubes eppendorfs à

raison de 100 μl. Les filtrats de cultures sont répartis dans des tubes à essai, à

raison de 15 ml. Les échantillons sont conservés au congélateur à – 4°C (pour 15

jours) pour des analyses et dosages ultérieurs.

2.2.1.1 Dosage des protéines totales

Les méthodes actuelles de dosage des protéines totales font très

largement appel aux techniques colorimétriques fondées sur la fixation de

colorants sur les protéines dont la méthode de Biuret, selon laquelle le réactif de

coloration utilisé est le réactif de Gornall dont la composition comprend des

ions cuivre II (Cu2+) qui se fixent aux protéines pour former un complexe bleu-

violet. L'intensité de la couleur de ce complexe est proportionnelle à la

concentration en protéines et est mesuré au spectrophotomètre à λ = 540 nm.

Le calcul de la concentration en protéine s’effectue suivant cette formule :

Do de l’échantillon * 7g/dl = x g/dl de protéines Do Standard Remarque : le dosage des protéines permettrait d’établir le rapport concentrations en protéines / concentrations en enzyme

(g/dl)/(UI/l) afin d’évaluer ultérieurement l’activité enzymatique par rapport a la quantité de protéines.


44

2.2.1.2 Dosage des activités enzymatiques

Le dosage des l’activité enzymatique s’est effectué pour les enzymes

intra- et extracellulaire, suivantes :

- Phosphatase alcaline

La phosphatase alcaline (ALP) catalyse l’hydrolyse du p-

nitrophenylphosphate à pH 10,4, libérant le p-nitrophénol et le phosphate,

selon la réaction suivant :

ALP

p-Nitrophénylphosphate + H2O p-Nitrophénol + phosphate

Le taux du p-Nitrophénol formé se mesure par spectrophotomètre et la densité

optique obtenue est proportionnelle à la concentration de la phosphatase

alcaline présente dans l’échantillon. (Wenger et al., 1984 ; Rosalki et al., 1993)

Le dosage s’effectue par le biais du kit SPIREACT-Alkalin phosphatase

(ALP) (fourni par le laboratoire biochimie) pour un dosage enzymatique

effectué trois fois dans un intervalle de temps de 3 min.

Le calcul de la concentration en ALP s’effectue suivant cette formule :

Δ Do × 3300 = [ALP] UI/L

3

- Glutamate oxalate transaminase

Le glutamate oxalate transaminase (GOT) catalyse le transfère

réversible du groupement amine du donateur l’aspartate à la molécule

réceptrice le α-kétoglutarate avec formation de glutamate et de l’oxaloacétate.

L’oxaloacétate est réduit au malate en présence de malatedéhydrogénase

(MDH) et du NADH ;

L-aspartate + α-kétoglutarate Glutamate + oxaloacétate

GOT


45

Le taux de diminution de la concentration du NADH dans le milieu

réactionnel, déterminé par spectrophotométrie est proportionnel à la

concentration du catalyseur GOT dans l’échantillon. (Murray, 1984)

Le dosage s’effectue par le biais du kit SPIREACT-GOT (AST) pour analyse de

la cinétique enzymatique par dosage trois fois dans un intervalle de temps de 3

min.

MDH

Oxaloacétate + NADH + H+ Malate + NAD+

Le calcul de la concentration en GOT s’effectue suivant cette formule :

Δ Do × 1750 = [GOT] UI/L

3

- Gamma-glutamyl transférase

Le gamma-glutamyl transférase (γ-GT) catalyse le transfère du

groupement γ-glutamyl de la molécule donatrice γ-glutamyl-p-nitroanilide à

l’accepteur le glycylglycine, selon la réaction qui suit :

γ—L-Glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide +Glycylglycine

γ-GT

γ-L-Glutamyl-glycylglycine+ acide 2-Nitro-5-aminobenzoique

Le taux de l’acide 2-Nitro-5-aminobenzoique formé se mesure au

spectrophotomètre, et la densité optique obtenue est proportionnelle à la

concentration γ-GT présente dans l’échantillon. (Persijn et al., 1976)

Le dosage s’effectue par le biais du kit SPIREACT-γ-GT pour analyse de la

cinétique enzymatique par dosage trois fois dans un intervalle de temps de 3

min.


46

Le calcul de la concentration en γ-GT s’effectue suivant cette formule :

Δ Do × 1190 = [γ-GT] UI/L

3

3. L’évaluation de l’effet antifongique de molécules

Chimiques

3.1 Substances chimiques testées

Les substances chimiques que nous avons testé sont des molécules

synthétiques (annexe.1.1). Une chalcone (P5), l’isatine (P3) et cinq molécules

(P1, P4, P6 et P7) de la famille des spiro-oxindole, obtenues du laboratoire de

chimie organique, université d’Oran Es-Senia.

Pour chaque substance testée, une solution mère est préparée. Les

substances chimiques sont solubilisés dans du DMSO (100%). Des dilutions

sont ensuite préparées à des concentrations croissantes.

3.2. Evaluation de la croissance mycélienne sur milieu solide

La méthode désignée pour le test antifongique est la méthode de

dilution dans l’agar (Atta-Ur-Rahmane, 2005).

- La méthode de dilution dans l’agar :

Dans des tubes à essai contenant le milieu PDA (annexe.1.3), sont

ajoutés des volumes de 0,04 ; 0,2 ; 0,4 ; 2 ; 6 ml de la solution mère de 5000ppm

(0.5 g du produit chimique dissout dans 10ml de DMSO) ; pour obtenir les

différentes concentrations (10 ; 50 ; 100 ; 500 ; 1000 et 1500 ppm) à un volume

final de 20 ml, respectivement. Pour chaque concentration de chaque produit,

l’essai est répété trois fois. Trois essais pour les différentes concentrations où la

solution chimique ne comprend que le DMSO seul sont pris comme témoins.


47

Les tubes sont ensuite stérilisés à l’autoclave puis coulées en conditions stériles,

dans des boites Pétri. L'inoculation d’un fragment mycélien de 0.5 cm de

diamètre, d’une culture jeune, se fait au centre de la boite.

Les boites Pétri sont laissés incuber à température ambiante pendant le temps

que les premières cultures puissent envahir toute la boite. La lecture des

résultats s’effectue par mesure du diamètre de la croissance mycélienne sur

boite Pétri (Rappily, 1991). Deux diamètres mesurés sur deux axes

perpendiculaires tracés au revers des boîtes de culture sont pris en mesure par

une règle décimale, ou par le même moyen, plusieurs rayons sont mesurés pour

une seule boite. La croissance est estimée par obtention du diamètre moyen. Le

pourcentage d’inhibition de la croissance mycélienne est calculé selon la

formule de Leroux et Gredet (1978) :

I(%) = 100 ( X – Xi )/ X

Ou X = diamètre moyen des colonies témoins et Xi= diamètre moyen des

colonies traitées.

Les pourcentages d’inhibition de la croissance mycélienne et de la

production de conidies ont été transformés en valeurs probit à partir de la table

de Finney (annexe.1.5). L’équation de régression y = a log x +b, avec a =

coefficient de corrélation, b = constante, x = concentration en fongicide, y =

probit et log = logarithme décimal. De cette équation de régression linéaire

entre les logarithmes décimaux des concentrations de fongicides (en abscisses)

et les pourcentages d’inhibition de la croissance transformée en valeur probit

(en ordonnées), les concentrations réduisant de 50% (CI 50) la croissance

mycélienne sont déterminés ; l’indice du potentiel toxique d’une substance

antifongique (Dimond et al., 1941).

48

Chapitre III

RÉSULTATS & INTÉRPRÉTATION

Chapitre III Résultats & interprétation

49

1. Effet de la source de carbone (glucose, amidon, cellulose et

saccharose) sur la croissance mycélienne des isolats de

Fusarium oxysporum sp. albedinis.

Figure. 12 : Représentation graphique de l’effet de la source de carbone

sur la croissance mycélienne des isolats de

Fusarium oxysporum sp. albedinis.

De nombreux travaux ont étudié l’influence de la nature du substrat de

carbohydrate autant que source de carbone sur la croissance mycélienne des

champignons phytopathogènes ; parmi lesquels Gharbi et al. (2013) ayant testé

l’effet du glucose, l’acide pectique et de l’acide polygalacturonique sur la

croissance de Ascochyta rabiei, Karkachi, (2013), a évalué l’effet de la pectine sur

la croissance radiale de F.o.a.

Dans notre test de l’effet du glucose, amidon, cellulose et saccharose sur

la croissance mycélienne de six isolats de Fusarium oxysporum sp. albedinis

utilisé, montre que ces isolats sont capables d’utiliser chaque source de

carbone : l’augmentation exponentielle du diamètre de la colonie s’effectue au

dépend de l’épuisement des nutriments du centre de la colonie (Allan et


50

Prosser, 1985) : Plus la source de carbone est bien assimilée par le champignon,

plus l’épuisement de nutriments s’élargie du centre vers la périphérie de la

boite Pétri ce qui favorise soit l’extension radiale des hyphes mycéliens ou la

diminue.

Des résultats obtenu (figure. 12), nous remarquons que les isolats F1 et

F5 présentent une croissance mycélienne importante avec le taux de croissance

le plus élevé, et ce pour tous les milieux aux différents substrats de carbones

testés (glucose, saccharose, amidon et cellulose) avec les diamètres suivant

(8,4 ; 8,23 ; 8,05 et 8,4 cm) pour l’isolat F1, (8,1 ; 8,3 ; 7,9 et 7,65 cm) pour l’isolat

F5, pour chaque substrat, dans l’ordre cité. Cependant, les deux isolats F7 et

F12 présentent un taux de croissance moyen (6,8 ; 6,25 ; 6,1 et 6,3 cm), (6,4 ;

6,6 ; 7,1 et 6,5 cm), respectivement. Une faible croissance est manifestée pour

les isolats F10 et F11 avec les valeurs suivantes, (4,8 ; 6,05 ; 6,2 ; 4,8) pour

chacun.

Les résultats montrent une variation de l’expression de la croissance

mycélienne par rapport à chaque substrat et pour chaque isolat. F1 et F11

présentent une faible variation, suivie par l’isolat F5 mais pour lequel on

observe une préférence de croissance pour le saccharose, Naim et Sharoubeem,

(1964) ont signalé une meilleure croissance en présence du saccharose par

rapport à la présence du maltose, glucose, fructose et cellulose pour des isolats

de Fusarium oxysporum responsable du flétrissement vasculaire du coton.

Alors que l’amidon est favorable à une croissance importante pour l’isolat

F12 ; F11 et F10. Duira et al. (1998) ont mentionné que l'amidon soluble

représente une bonne source de carbone pour tous les isolats de Pyricularia

oryzae qu’ils sont testé. L’isolat F7 marque une préférence au glucose. Le

glucose et la cellulose sont plus favorables à la croissance radiale de l’isolat F1.

Duira et al. (1998) ont noté dans leur étude que les monosaccharides (glucose,

mannose et fructose) ont permis une croissance importante de tous les isolats

de Pyricularia oryzae. Cependant, Ocamb et Kommendahl, (1994) ont noté sur


51

différentes espèces de Fusarium spp. Isolées de la rhizosphère du blé, de

meilleurs résultats en présence de la cellulose microcristalline par rapport au

poids mycélien.

En somme, nous pouvons conclure que les deux isolats F5 et F1 ont une

meilleure croissance que les isolats F7 ; F10 ; F11 et F12. L’amidon semble

présenter le substrat le plus favorable à la croissance des isolats F10 ; F11 et

F12. Alors que pour les isolats F1 ; F5 et F7, c’est plutôt le glucose qui est le

plus favorable, a coté du saccharose et de la cellulose pour les deux isolats F5

et F1, respectivement. nous pourrions aussi supposer pour la croissance en

présence de saccharose est moindre du fait que le saccharose peut être

sensiblement hydrolysé par un pH légèrement acide (Griffin, 1996). La

croissance en milieu cellulose est très importante pour F1, F11 et F7. Enfin,

L'étude de la nutrition carbonée est fondamentale pour comprendre la

physiologie des champignons (Madan et Thind, 1998).


52

2. Effet de la source de carbone (glucose, amidon, cellulose et

saccharose) sur les activités enzymatiques de la phosphatase

alcaline, le γ-glutamyl transpeptidase et du glutamate

oxaloacétate transaminase des isolats de Fusarium

oxysporum sp. albedinis.

2.1. L’activité enzymatique de la phosphatase alcaline

Les phosphatases, conventionnellement appelés « phosphoestérases

non spécifiques » sont des enzymes à très large spécificité, hydrolysant le

radical phosphoryl porté par une liaison ester ou anhydride. Ils sont divisés

en plusieurs classes, en fonction de leur pH optimum d’action :

phosphataes acides (EC 3.1.3.2) avec un pH optimum inférieur à 6,0,

phosphatases alcaline (EC 3.1.3.1) avec un pH optimum supérieur à 8,0.

(Guimaraes et al., 2003).

La phosphorylation et la déphosphorylation des protéines est

l’une des clés pour laquelle les cellules vivantes perçoivent et réagissent aux

signaux environnementaux. Les phosphatases sont en mesure de participer

aux processus fondamentaux les plus divers chez les champignons

filamenteux tel que le cycle cellulaire et la transcription, assurant des

fonctions cellulaires importantes y compris l'acquisition de phosphore à des

fins nutritionnelles et de moduler les réseaux de signalisation cellulaire,

réalisée par les phosphoproteines qui sont des cibles spécifiques aux

phosphatases (CE 3.1.3.16) (Dickman et Yarden, 1999 ; Guimaraes et al., 2003 ;

Net. 2).

Remarque : Toutes les activités enzymatiques des trois enzymes dosées sont établies par rapport à la quantité de protéines.


53

Figure. 13 : Activité de la phosphatase alcaline (ALP) pour l’isolat F1 au niveau intracellulaire 1 et au niveau extracellulaire 2.



54




55




56

Les résultats que nous avons obtenu (figures 13, 15, 16, 17 et 18)

ont bien caractérisé la présence de l’ALP au niveau intracellulaire qu’au niveau

extracellulaire. Nous avons remarqué que les isolats agissement de façon

variable aux différents substrats carbonés pour la production de l’enzyme ALP

intra- et extracellulaire. En effet, les études du génome fongique ont donné un

aperçu sur la façon dont les champignons modifient la transcription, le

métabolisme et la sécrétion d’enzymes en réponse à la disponibilité des

glucides. En effet, l’organisme fongique établi un équilibre entre les signaux et

substrats environnementaux avec le statut énergétique intracellulaire, tout en

orientant la phosphorylation des protéines qui est la forme la plus courante de

modification post traductionnelle ; et ce selon l’exigence de la situation. Ainsi,

les phosphatases jouent un rôle central dans la transduction de ces signaux par

modulation de l’état de phosphorylation et l’activité des protéines. (Brown et al.,

2013)

Nous observons que la production au niveau intracellulaire présente le

plus faible taux pour les isolats F1 et F11, une production moyenne est observée

pour les isolats F5 ; F7 et F12 : F1 et F10 présentent le même profil de variations

d’expression de l’enzyme par rapport aux substrats utilisés, le glucose leur est

le substrat de carbone le plus inductible à la synthèse intracellulaire de l’ALP

avec 17,55 UI/min, 33,15 UI/min, respectivement. Cependant, l’amidon est le

substrat le plus favorable à une production intracellulaire de l’enzyme pour les

isolats F5 ; F7 et F11, avec 25,81 UI/min, 26,59 UI/min, et 19,31 UI/min de façon

respective, Alors que pour l’isolat F12, c’est plutôt le saccharose avec 26,93

UI/min du taux de l’enzyme. Nous observons que la cellulose est le substrat de

carbone le plus faiblement inductible à la production intracellulaire de l’enzyme

de tous les isolats dont les taux varient entre 6,36 UI/min comme valeur

minimale représenté par l’isolat F1 et 10,43 UI/min comme valeur maximale


57

pour l’isolat F12. Par contre, la production au niveau extracellulaire de la

phosphatase alcaline par les isolats F5 et F7 présente le taux le plus élevé ;

Suivies par les isolats F1 ; F10 et F12 avec une production moyenne. Une

production moyennement faible est remarquée pour l’isolat F11. L’isolat F5

présente le pic le plus élevé qui représente le taux de l’enzyme produite en

milieu ou la source de carbone est le glucose, avec 89,71 UI/min. Le glucose est

aussi la source C la plus inductible pour l’isolat F11, pour un taux d’enzyme de

28,23 UI/min. Garcia Alvares et al., (1982) ont approuvé dans leur étude qui porte

sur la régulation de la synthèse de la phosphatase alcaline chez Candida utilis,

que la synthèse de cette enzyme dépend de la présence du glucose.

L’amidon semble agir de façon approximativement rapprochée sur la

production extracellulaire de l’ALP sur les deux isolats F1 et F10 avec des taux

de 33,20 UI/min et 34,51 UI/min, respectivement. Guimaraes et al., (2003) ont

approuvé dans leur étude sur Aspergillus caespitosus, que l’addition de l’amidon

dans le milieu de culture présente une influence considérable sur la production

élevée de l’ALP extracellulaire. Le saccharose, en fait, est le substrat favorable à

la sécrétion de l’ALP pour l’isolat F12 (45,24 UI/min), alors que pour l’isolat F7,

c’est la cellulose qui en est la plus favorable.

Au final, Nous nous sommes intéressés à mettre en évidence la

présence de l’enzyme et la variation de son expression par rapport aux

substrats carboné que nous avons utilisés (glucose, saccharose, amidon et

cellulose), Vu l’importance que porte le rôle de la phosphatase alcaline au

niveau cellulaire aussi bien que dans le processus pathologique tel mentionné

par quelques études qui ont montré l’implication des phosphatases dans le

processus infectieux de certains agents phytopathogènes. Tout au long de

l’infection de la plante hôte, la plupart des champignons pathogènes,

secrètent une variété d’enzymes comme moyen de piéger les éléments nutritifs


58

(Maccheroni et Azevedo, 1998). A savoir, Leur rôle serait déterminant dans

certaines accélérations de la respiration des plantes parasitées (Chevaugeon,

1957).

2.2. L’activité enzymatique du γ-glutamyl transpeptidase

Le gamma glutamyl transpeptidase γ-GT (ou GGT) ; (EC 2.3.2.2) est une

enzyme liée à la membrane, ubiquitaire dans tous les organismes vivants. Elle

catalyse la dégradation du glutathion GSH (L- γ-glutamyl-L-cystéinylglycine)

par clivage de la liaison γ-glutamyl permettant la récupération de la cystéine

(Bello et al., 2013). Le GSH joue de nombreux rôles physiologiques tels que la

protection contre le stress oxydatif, la désintoxication, le transport et la

catalyse enzymatique (Penninckx et Elskens, 1993). La γ-GT est une enzyme clé

impliquée dans l’homéostasie intracellulaire de la réduction du GSH et par

conséquent dans la régulation cellulaire du statut rédox (Meister, 1984 ;

Ganasekaran et al., 1995). Le GSH est impliqué dans des fonctions cellulaires de

base ainsi que dans le maintien de la structure mitochondriale, l'intégrité de la

membrane et dans la différenciation cellulaire et le développement. Il joue un

rôle clé dans la réponse à plusieurs situations de stress chez les champignons

(Pocsi et al., 2004).

L’évaluation de l’effet de la source de carbone sur le taux de l’enzyme le

γ-glutamyl transpeptidase (figures 19, 20, 21, 22, 23 et 24) dosé au niveau

intra- et extracellulaire a montré que dans tous les isolats, l’expression de

l’activité enzymatique s’est manifesté dans les deux milieux ; Pour les isolats

F1, F5, F7, une faible production de l’enzyme intracellulaire est notée,

également, une faible présence de l’enzyme extracellulaire. Nous y observons,

une légère différence dans les niveaux de l’activité enzymatique entre le


59

milieu intra- et le milieu extracellulaire. Ceci est marqué aussi pour l’isolat

F12, cependant, celui-ci exprime un taux plus élevé de l’enzyme. Les deux

isolats F5 et F11 manifestent une expression un peu plus élevée que les isolats

F1, F7 et F10. Une augmentation importante de l’enzyme extracellulaire est

observée pour F5 et F11.

Nous remarquons aussi que l’effet de la nature du substrat carboné sur

l’activité de l’enzyme γ-GT est variable selon l’isolat. Nous notons seulement,

que la cellulose induit la plus faible production au niveau intracellulaire pour

tous les isolats, à l’exception de l’isolat F11. Les deux isolats F7 et F10 présentent

le même profil de l’activité enzymatique intracellulaire avec une forte induction

régit par le saccharose donnant les taux suivant, 9,72 pour F7 UI/min et 11,71

UI/min pour F11. Sinon, l’impact du substrat carboné varie. Le glucose est le

plus favorable à une meilleure production pour les isolats F5 et F7, alors que la

cellulose et l’amidon sont inductibles pour les isolats F1 et F11. Les sucres

complexes semblent favoriser la présence de l’enzyme au niveau extracellulaire

pour les isolats F1, F5, F7, F10 et F11. Le glucose est inductible pour les isolats

F10 et F12. Nous remarquons donc que le saccharose reste le sucre le moins

inductible à l’exception de l’isolat F7. La variation dans l’expression du γ-GT

intracellulaire peut être expliquée par le fait que chez les microorganismes, il a

été signalé que le niveau du glutathion intracellulaire n’est pas statique, plutôt

dynamique et diffère selon le microorganisme, en réponse aux conditions

naturelles ou altérées, ainsi qu’à de nombreuses situations de stress.

Néanmoins, le niveau du glutathion dans la cellule, à tout moment donné,

dépend des activités des enzymes métaboliques du glutathion dont γ-GT

(Ganasekaran et al., 1995 ; Penninckx et al., 1980), le taux de production de

l’enzyme est influencé et modifié par le type de source de carbone tel cité par

Ganasekaran et al., (1995). Pocsi et al., (2004) dans leur étude sur Candida albicans,


60

ont montré que l'activité du γ-GT est influencée par les sources de carbone et

son activité accrue est responsable de la diminution rapide du GSH

intracellulaire lors de la conversion de la levure en mycélium.

De par l’implication de la γ-GT In vivo, Chevalier et al. (1999) Ont rapporté

que l’enzyme est essentielle pour l'infection à Helicobacter pylori de la souris. De

plus, d’après Bello et al., (2013), l’expression des gènes des isoenzymes de γ-GT

ont été détectés dans la plante pendant les stades biotrophes et nécrotrophes de

l'infection ; ce qui pourrait nous mener à poser l’hypothèse pour le cas de notre

étude.

Figure. 19 : Activité de γ-glutamyl transpeptidase (γ-GT) pour l’isolat F1 au niveau intracellulaire 1 et au niveau extracellulaire 2.


61




62




63


2.3 L’activité enzymatique du glutamate oxaloacétate

transaminase

Le glutamate oxalate transaminase (Aspartate aminotransferase) GOT

(E.C 2.6.1.1) joue un rôle important dans la croissance des champignons Le

glutamate est le principal donneur des groupes amines dans les réactions de

transamination (Tolstongov, 2000).

Dans la dégradation des acides aminés à la suite de la conversion d'α-

cétoglutarate en glutamate, le glutamate subit ensuite désamination oxydative

pour former des ions d'ammonium qui sont excrétés sous forme d'urée. Dans

la réaction inverse, l'aspartate peut être synthétisé à partir de l'oxaloacétate,

qui est un intermédiaire clé dans le cycle de l'acide citrique (Berg et al., 2006).


64

Nous remarquons qu’au niveau intracellulaire, l’activité de l’enzyme GOT

(figures 25, 26, 27, 28 et 28) est très élevée pour les deux isolats F7 et F12 avec les

valeurs maximales de 31,95 et 40,34 UI/min, respectivement, enregistrés pour le

substrat amidon. Suivis de l’isolat F1, pour lequel un seuil moyen de 15,99 UI/min est

noté pour l’activité enzymatique en présence du saccharose. Une activité faible est

régit chez les isolats F5, F10 et F11. Le glucose marque le taux le plus élevé pour F10

et F11 avec un taux de 9,85 et 9,15 UI/min pour chacun. L’amidon et la cellulose sont

aussi favorables à une production importante pour l’isolat F10. Cependant, l’isolat F5

présente un seuil maximal de 8,20 UI/min en présence du saccharose.

L’expression au niveau extracellulaire de l’enzyme GOT marque des seuils à des

valeurs très élevées de l’ordre de 475,42 pour l’isolat F11, en présence du glucose. Une

expression de l’activité de l’enzyme, réduite à moitié se manifeste pour les isolats F7 et

F10 avec 201,37 et 115,91 UI/min, en présence du glucose pour F7 et de l’amidon pour

F10, respectivement. L’activité de l’enzyme extracellulaire pour l’isolat F12 est marquée

faible avec un taux maximum de 100,82 UI/min, en présence de glucose. On observe

une baisse très importante de l’activité enzymatique avec un seuil de 13,53 UI/min

pour l’isolat F1 et un seuil de 1,24 UI/min pour l’isolat F5, en présence de l’amidon.


65

Figure. 25 : Activité Du glutamate oxaloacétate pour l’isolat F1 au niveau intracellulaire 1 et au niveau extracellulaire 2.



66

Figure. 27 : Activité du glutamate oxaloacétate pour l’isolat F7 au niveau intracellulaire 1 et au niveau extracellulaire 2.



67




68

3. Effet antifongique de quelques molécules chimiques sur

l’isolat F1 de Fusarium oxysporum sp. albedinis

Plusieurs recherches se sont dirigées à évaluer de nouveaux composés

fongicides efficaces. Le noyau indole occupe une position de première

importance comme agent antimicrobien dans le vaste monde des composés

hétérocycliques (Abdel-Aty, 2010). Certains dérivés de l’indole se sont montrés

efficaces contre F. oxysporum lycopersici, agent pathogène du flétrissement de la

tomate, en réduisant la germination des spores, le poids sec du mycélium et la

teneur en protéines, ainsi et suite à une application du produit sur le sol in vivo,

l’incidence de la maladie a diminué (Sharaf et Farrag, 2004). D’autres dérivés tel

que le 1H-indole-4 ,7-dione a montré une activité antifongique contre Candida

krusei, Cryptococcusneoformans et Aspergillus Niger (Ryu et al., 2007).

Le groupe des spirooxindoles sont les dérivés indoles ayant été le moins

étudiés, pour cela de nombreux efforts se sont focalisés récemment à

synthétiser, caractériser et étudier les activités biologiques des composés spiro

(Miqdad et Abunada, 2011). Il constitue une classe importante de substances

naturelles caractérisées par des propriétés biologiques très prononcées. Le

système du noyau spirooxindole forme la structure de base des alcaloïdes et

d'un grand nombre d'agents pharmacologiques (Periyasami et al. 2008).

Beaucoup ont déjà révélé leur pouvoir biologique prometteur, comme agents

anti-Alzheimer (Masakazu et al, 2001), antibactériens (Var der Sar et al., 2006),

antituberculeux (Chande et al, 2005), anti-dermatite (Nakao et al, 2008),

antimicrobiens (Pawar et al, 2009; Thadhaney et al, 2010). En plus de leurs usages

médicamenteux, certains composés spiro ont trouvé d'autres utilisations dans

les domaines agricoles et industriels ; utilisés comme agents antifongiques

(Hejiao et al., 2006) et autant que pesticides (Lindell et al., 2001).


69

Partant de l’idée que les produits spiro-oxindoles jouissent d’une

importance biologique considérable tel qu’il est mentionné, nous nous sommes

intéressés à tester l’effet de quelques molécules nouvellement synthétiser sur la

croissance mycélienne de notre champignon Fusarium oxysporum f. sp. albedinis.

Les résultats des diamètres mesurés ainsi que des pourcentages d’inhibitions

sont donnés à (l’annexe. 1). Sept molécules sont testés (P1, P2, P3, P4, P5, P6,

P7) :

• P5 et P3 présentent les produits de départ testés, P5 est un chalcone, P3 est une

isatine, Ces réactifs sont doués d’intérêt biologique (Baghdad, 2012).

• P1, P2, P4, P6 et P7 sont des spiro [oxindol-pyrrolidines] synthétisés par le

moyen de la cycloaddition 1,3 dipolaire regroupant trois composés à savoir

l’isatine, des acides aminés (sarcosine, L-proline ou D-alphaphényl glycine) et

des dérivés de chalcone : (Baghdad, 2012).

a. 3'-benzoyl-1'-methyl-4'-phenylspiro[indoline-3,2'-pyrrolidin]-2-one et

ses dérivés (P2, P6 et P7): Les dérivés des spiro-oxindoles sont préparés à

partir d’un mélange d’isatine, de sacrosine et de la chalcone ;

b. 2'-benzoyl-1'-phenyl-1',2',5',6',7',7a'-hexahydrospiro[indoline-

3,3'pyrrolizin]-2-one et ses dérivés (P1) : Les dérivés des spiro-oxindoles sont

préparés à partir d’un mélange d’isatine, de L-Proline et de la chalcone ;

c. 3'-benzoyl-4',5'-diphenylspiro[indoline-3,2'-pyrrolidin]-2-one et ses

dérivés (P4): Les dérivés des spiro-oxindoles sont préparés à partir d’un

mélange d’isatine, de DL.AlphaPhenylglycine et de la chalcone ;

Les réactions intermoléculaires 1,3-dipolaire sont considérées comme

l'un des processus les plus utiles pour la construction du cycle à cinq chaînons

contenant l'unité structurale pyrrolidine. Cette méthode est largement utilisée


70

pour la synthèse des produits naturels tels que les alcaloïdes (Raj et

Raghunathan, 2001). La cycloaddition 1,3- dipolaire de l’azomethine qui est la

base de schiff de l’isatine, aux dipolarophiles avec double liaison exocyclique

offre les hétérocycles spiro (RanjithKumar et al., 2009) avec une grande activité

biologique ; Les composés spiro, en particulier les spirooxindolopyrrolidines

et leurs dérivés, représentent une classe importante de substances naturelles

caractérisées par des propriétés biologiques remarquables (Raj et Raghunathan,

2001 ; Javidan et al., 2013).

Effet de la molécule P3

L’isatine (Indoline-2,3-dione) (P3) est le substrat de synthèse polyvalent

utilisé comme précurseur pour une large variété de composés hétérocycliques

tels que les indoles, oxindole et les quinolines, et comme matière première

pour la production de médicaments. Son utilisation extensive est due à ses

propriétés biologiques (Joaquim et al., 2001 ; Karki et al., 2011). les dérivés

organophosphorés composés d’isatine ont montré un excellent effet

antifongique contre Fusarium oxysporum (Pandey et al., 2008).

Suite aux essais du test antifongique de la molécule P3 sur la croissance

mycélienne, nous avons remarqué qu’elle présente le plus grand pourcentage

d’inhibition de toute la série des molécules (figure.5) avec 42,58% d’inhibition.

Une importante sensibilité du F.o.a vis-à-vis de l’isatine est bien remarquée

pour les concentrations 1500 et 1000 ppm. Nous remarquons une baisse de la

sensibilité avec 27% d’inhibition à 500 ppm. En dessous de cet intervalle,

chute brutale de l’effet antifongique de P3 est manifestée.


71

L’activité antifongique de l’isatine vis-à-vis de F.o.a est due aux

propriétés biologiques (Joaquim et al., 2001 ; Sarki et al., 2011) antimicrobienne

(Pal et al., 2011) de ses groupements fonctionnels ainsi que ceux de ses

métabolites (Medvedev et al., 2007). A savoir, Les groupements carbonyls sont

retrouvés dans ces composés (l’isatine et ses dérivés). Très réactifs, ils peuvent

entrainer des dommages cellulaires. Ils sont capables de modifier d’ADN ou

les acides aminés, ils peuvent également promouvoir le stress oxydatif.

(Oppermann, 2007) ainsi réduire la croissance mycélienne.

En contre partie et pour faire face à ce danger, Les groupements

carbonyls des polykétones dont l’isatine sont réduits par des enzymes

NADPH-dépendantes appartenant à la famille des oxydoréductases

(Oppermann, 2007). Ces enzymes sont responsables du métabolisme des

composés xénobiotiques carbonylés chez les microorganismes (Shimizu et al.,

1988) dont Fusarium oxysporum, notamment responsables de réduire les

composés cellulaire carbonylés en d’importants métabolites intermédiaires

(Honda et al., 2006), ce qui explique qu’à faibles doses de l’isatine, celle-ci est

dégradée et son action biologique est diminué voir perdue.

Alors qu’à fortes doses et donc en présence de quantités importantes de la

molécule P3, nous pourrions expliquer son effet inhibiteur par la saturation de

tous les sites d’action de la NADPH-carbonyl réductase, ainsi une quantité de

molécule agirait dans ses sites ciblés pour appliquer son pourvoir biologique

antifongique. On pourrait supposer son action en inhibant la monoamine


72

oxydase (MAO) (Medvedev et al., 1995), un des moyen de contrôle pour le

flétrissement vasculaire de Fusarium oxysporum f. sp. carthami noté par Ghozal

et al., (1977). Aussi, en s’associant au pyruvate kinase pour former un complexe

(Medvedev et al., 2007), l’enzyme clé de la voie glycolytique et du métabolisme

du carbone en général (Munoz et Ponce, 2003).


Les Chalcones appartiennent à la vaste classe de composés présents

dans presque toutes les plantes vasculaires, non seulement dans leurs parties

terrestres, dans les racines, aussi bien que dans les graines. A savoir, la

résistance des plantes requière la synthèse de la chalcone synthétase, enzyme

clé de la voie de synthèse des phytoalexines et substances de défense ; les

chalcones sont des précurseurs de flavonoïdes et jouent un rôle crucial dans

leur biosynthèse (Dao et al., 2011). Selon le modèle de substitution sur les deux

cycles aromatiques, un large éventail d'activités pharmacologiques a été

identifié pour diverses chalcones. Ceux-ci comprennent entre autres des

activités antifongiques et antibactériennes (Nowakowska et al., 2008 ; Sirisha et

Raghunathan, 2013).

Dans notre essai antifongique de la chalcone (P5) sur la croissance

mycélienne du F.o.a, nous remarquons une inhibition moyenne par rapport au

seuil de l’inhibition dans toute la série des molécules (figure. 5), 22, 89% pour

la plus grande concentration 1500 ppm. Dès lors, le pourcentage d’inhibition

commence à baisser légèrement, 14,78 ; 17,93 ; 14,73 et 11,08 comme valeur la

plus faible, pour les concentrations 1000, 100, 50 et 10 ppm, respectivement.

On remarque notamment une inhibition étendue sur tout l’intervalle de

concentration, faible qu’elle soit.


73

Etant donné l’effet antifongique remarquable que présente de

nombreux chalcones, le groupement substitué du chlore (Cl) pourrait être à

l’origine de la diminution du pouvoir biologique que présente notre molécule ;

les travaux de Lahtchev et al., (2008) dans lesquels, l’effet de 21 chalcones avec

des substituant différents est testé sur S. cerevisiae, ont montré une activité

inhibitrice sur la croissance mycélienne pour le même composé que nous

avons utilisé mais aux concentrations (>40 μg/ml) (eq. à 40000 ppm) et ont été

prises en considération que pour l'analyse des effets des substituant. Il a été

aussi démontré que l’introduction de groupement methoxy, hydroxy ou

benzyloxy à la molécule confère une bonne activité biologique contre les

champignons phytopathogènes (Dimmock et al., 1999). De plus, et dans les

mêmes premiers travaux, il a été démontré que P5 n’agit pas autant que

substances mutagènes ou recombinogènes (Lahtchev et al., 2008).

Cependant l’effet inhibiteur réduit de P5 sur la croissance du

champignon pourrait être du à un stress causé par la molécule sur la cellule

fongique par action sur le glutathione-S-transférase (GST) cytosolique. Ces

enzymes (présentent chez Fusarium oxysporum) (Cohen et al., 1986) sont

capables de conjuguer le glutathion à des molécules hydrophobes et donc sont

impliqués dans les voies de biotransformation et détoxification, ainsi leur

inhibition engendre un stress oxydatif au sein de la cellule (Dimmock et al.,

1999).


74


Nous remarquons aussi pour P1 une inhibition moyenne par rapport au

seuil de l’inhibition dans toute la série des molécules à 23,91% pour une

concentration du produit de 50 ppm (figure.5). Le pourcentage de

concentration varie entre 10 % et 15,98% pour les concentrations > 50 ppm

jusqu’à 1500 ppm. A la plus basse concentration 10 ppm, l’inhibition reste

inchangée de 10,09% par rapport.

Si l’effet antifongique n’est pas très prononcé par rapport à l’impact des

spirooxindolopyrrolidines comme antifongiques, cela pourrait être du à la

structure de la molécule et ses groupements fonctionnels. Cependant, le faible

effet biologique contre F.o.a pourrait être à l’origine de l’implication du

groupement OCH3 connu pour sa grande capacité réactive; le groupement

substitué ou l’atome peut rendre la molécule moins réactive ou plus réactive,

l’oxygène attaché au carbone permettrait une meilleure réactivité en la rendant

plus électrophile (Net. 4).


75

Effet de la molécule P2 ; P6 ; P7 et P4

Le champignon F.o.a croit très bien en présence de ces molécules (P2 ;

P6 ; P7 et P4) et le pourcentage d’inhibition est très faible (figure. 5) < 7%

pour P6, < 4% pour P7 et < 3% pour P4. De même est noté pour P2, cependant,

à la concentration de 1000 ppm de la molécule en question, l’inhibition est de

12,79%. En plus de l’impact de la structure de la molécule, P6 avec le

groupement Cl présente une réactivité très faible parmi la plus basse par

rapport aux autres substituants (Net.3). La molécule P2 présente plus d’effets

que le celle de P6 et P7 ; il se pourrait que le remplacement du groupement R

(Cl et OCH3) par le groupement H améliore l’effet inhibiteur de la molécule.

Ces résultats sont corrélés avec ceux de Thangamani, (2010) dans lesquels le

radical H améliore l’effet contre C. neoformans et Rhizpus sp. par rapport au

groupement méthyl.


76

En dépit du rôle structural des molécules, l’effet inhibiteur réduit de ces

molécules sur la croissance mycélienne pourrait impliquer la résistance du

champignon envers les substances antifongiques (Corbaz, 1990).


77

Figure. 31 : Représentation graphique des pourcentages d’inhibition des

substances antifongiques testées pour différentes concentration :

Les valeurs IC 50 obtenu (tableau. 1) sont calculés par le biais du

logiciel ''curve express" après avoir converti les pourcentages d’inhibition en

valeurs probits afin d’établir une courbe (concentrations testées de la substance

en fonction des probits) (annexe.1.4).

Le calcul des IC 50 confirme que le P3 est le produit le plus actif sur l’inhibition

de la croissance mycélienne de F.o.a. la valeur est faible (30 ppm) par rapport à

toute la série et met en évidence un important pouvoir antifongique de l’isatine.


78

Tableau. 2 : Evaluation des valeurs de IC50 (en ppm) pour les

molécules antifongiques testées.

P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7

IC50 1087,4 397,7 30 3774,64 397,04 905,94 1114,38

* ppm (mg/l)

79

CONCLUSION

Conclusion

80

Conclusion

L’étude de ce travail a décelé une croissance mycélienne importante

sur tous les substrats carbohydratés et ceci pour tous les isolats. L’influence du

substrat carbohydraté est considérable sur la variation d’expression des

enzymes au niveau intra- et extracellulaire pour l’ALP, γ-GT et GOT, avec une

préférence d’impact des milieux amidon et glucose. La cellulose a montré un

effet répressif sur la production enzymatique intracellulaire pour tous les

enzymes. L’ALP, γ-GT et GOT sont des marqueurs de l’activité métabolique

des cellules, or leur évaluation mesure l’effet du stress environnemental sur le

champignon. De plus, l’ALP et γ-GT sont impliquées dans la voie métabolique

hydrolytique, et GOT intervient dans la voie métabolique de transamination

d’où leurs rôles importants dans le fonctionnement cellulaire. A savoir, L’ALP

et γ-GT sont impliquées dans le piégeage des nutriments ; le phosphore

composant essentiel des membranes et parois cellulaires est capté par l’ALP.

Les métaux essentiel tels que le Fer, le magnésium sont repérés par le

gluthation, issu de l’action de la γ-GT. Ainsi, l’altération de l’équilibre ionique

au sein de la plante qui pourrait être régit par le champignon serait l’un des

moyens du processus infectieux du champignon pathogène.

Comme mesure de lutte, le contrôle chimique a montré que l’activité

antifongique de l’isatine présente le taux d’inhibition le plus élevé avec 42%

d’inhibition et une IC 50 de 30 ppm (30mg/l) à 1500 ppm de la substance testée,

suivie de la chalcone, à 22% du taux d’inhibition et une IC 50 de 397,04 ppm.

Cependant, la molécule P1 des spirooxindole a un effet antifongique avec 14%

d’inhibition à 100ppm. Les molécules spiro manifestent un faible taux

d’inhibition contre F.o.a.

Enfin, pour mieux améliorer notre vision à l’avenir, nous pourrons

proposer de procéder par une étude statistique afin d’établir une corrélation

entre les différentes activités des enzymes évaluées d’une part, et avec le

pouvoir pathogène des isolats d’une autre part. De plus, une analyse statistique

portée sur le test antifongique nous aiderait à confirmer nos résultats de

l’activité inhibitrice des substances antifongiques testées. En d’autres cas, nous

pourrons proposer de tester in vitro l’effet synergique de deux meilleures

substances antifongiques, aussi de voir l’effet in vivo de l’isatine vis-à-vis de

F.o.a. Il serait intéressant de suivre l’étude par une interprétation assidue de

l’évolution dans le temps de l’activité inhibitrice (annexe.2) pour mieux cerner

le phénomène de résistance et d’adaptation du champignon vis-à-vis des

substances chimiques.

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128.

Annexe 1

91

Annexe 1

1. Caractéristiques physicochimiques et structures des molécules

Abréviation Strucuture chimique Point de

fusion (°C)

Aspect physique

P 1

≥ 262

Solide blanc

P 2

212 – 214 Solide blanc

P 3

200-204°C Solide Orange

Annexe 1

92

P 4

>262

Solide blanc

P 5

114–116°C Solide jaune

P 6

218 – 220

Solide blanc

P 7

188 – 190 Solide blanc

Annexe 1

93

2. Fonction Probit : « Unité de mesure de la probabilité d’une variation normalement

distribuée, calculée sur la base d’une formule mathématique faisant appel à la variation

aléatoire ». est définie comme l'inverse de la fonction de répartition associée à la distribution

normale. Elle a des applications dans les graphiques statistiques explo. La loi normale est

l'une des lois de probabilité les plus adaptées pour modéliser des phénomènes naturels issus

de plusieurs évènements aléatoires.

3. Milieux de culture : (Ishrat et al., 2007 ; Davet et Rouxel, 1997)

Composition et préparation

Milieu de Czapeck Dox

Préparation

Milieu de P.D.A

(Potatos Dextrose Agar)

NaNO3 3g

K2HPO4 1g

MgSO4, 7H2O 0,5 g

KCl 0,5g

FeSO4, 7H2O 0,01g

Saccharose 30g

Agar agar 15g

Eau distillée 1000 ml

Ajuster le pH du milieu à 5,8

Le milieu czapeck-dox liquide ne contient pas

l’agar.

Autoclaver à 121°C pendant 15 min

Faire cuire 200g de pommes de terre pelées,

lavées et coupées en fines tranches dans 1 litre

d’eau pendant 1h. Filtrer et récupérer le

liquide de pomme de terre.

Ajouter 20g de glucose et 15 à 20g d’Agar agar.

Compléter à un litre, d’eau distillée.

Ajuster le pH du milieu à 5,8

Autoclaver 15 min à 121°C.

Annexe 1

94

4. Régression linéaire : exemple pour P2

5.Table de Finney (Finney 1952)

6.Traitement du sable : Le sable est traité par de l’acide sulfurique plusieurs fois jusqu'à

décalcification complète. A chaque addition de l’acide on lave avec de l’eau distillée jusqu'à

extinction de l’effervescence.

S = 0.71161096r = 0.99622430

X Axis (units)

Y A

xis

(uni

ts)

10.0 190.0 370.0 550.0 730.0 910.0 1090.00.36

2.66

4.95

7.24

9.53

11.82

14.12

Annexe 1

95

Tableau. 1 : Résultats des Diamètres moyens (cm) de l’isolat F1 confronté aux

substances antifongiques testées (P1 à P7)

P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 Tm’

1500 ppm 2,89 2,74 1,78 3,23 2,93 3,78 3,42 3,3 1000 ppm 3,27 3,34 2,13 3,42 3,46 3,95 3,78 3,74 500 ppm 3,66 3,78 2,82 3,88 - 4,37 3,98 4,1 100 ppm 3,57 3,9 4,06 3,96 3,66 4,33 4,13 4,22 50 ppm 3,18 3,94 3,93 4,06 3,8 4,49 4,06 4,24 10 ppm 3,83 3,65 3,92 3,94 3,85 4,26 4,2 4,21

*Tm’: la moyenne de diamètre du témoin (milieu additionné à du DMSO)

Tableau. 2 : Résultats des pourcentages d’inhibition substances antifongiques

testées (P1 à P7)

P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7

1500ppm 15,98 1,08 42,58 0,3 22,86 -2,16 -11,4 1000 ppm -23,39 12,79 42,11 8,5 14,78 5,85 4,3 500 ppm 10,36 5,73 26,94 0,51 - 0,9 1,24 100 ppm 14,01 1,51 0,49 2,46 17,93 7,48 0,48 50 ppm 23,91 2,47 4,61 0,73 14,73 3,02 4,1 10 ppm 10,09 8,75 3,92 2,95 11,08 5,8 4,05

Annexe 2

96

Annexe 2

• Résultats obtenus, pour lesquels nous n’avons pas achevé de l’inclure dans

notre partie de travail, cependant, ça reste un moyen de perspectif à l’avenir.

L’évolution dans le temps (par jour –J-) de l’effet inhibiteur des

molécules antifongiques par rapport aux différentes concentrations

testées

a) Molécule P1

Tableau des pourcentages d’inhibition (%) de P1 pour différentes concentrations,

en fonction du temps (par jour)

Figure représentative des pourcentages d’inhibition (%) de P1 pour différentes

concentrations, en fonction du temps (par jour).

Annexe 2

97

b) Molécule P2





Annexe 2

98

c) Molécule P3





Annexe 2

99

d) Molécule P4





Annexe 2

100

e) Molécule P5





Annexe 2

101

f) Molécule P6





Annexe 2

102

g) Molécule P7





Résumé

Le Fusarium oxysporum sp. albedinis (F.o.a) est l’un des agents pathogène les plus redoutables pour

l’agression du palmier dattier (Phoenix dactylifera L.). Pour cela, la connaissance de la physiologie du champignon

et les essais de lutte en son égard est une approche indispensable dans le domaine de la recherche. Dans ce

travail, un aperçu est donné sur la maladie du bayoud. Les dosages enzymatiques établis pour la phosphatase

alcaline (ALP), le gamma-glutamyl transpeptidase (γ-GT) et le glutamate oxaloacétate (GOT) au niveau intra- et

extracellulaire, en présence de différentes sources de carbohydrates (glucose, saccharose, amidon et cellulose) a

décelé une variation d’expression de l’activité enzymatique pour chaque isolat. L’activité antifongique des

substances chimiques de synthèse s’est effectuée en évaluant le taux d’inhibition sur milieu solide. L’satine a

présenté un taux d’inhibition de 42% et une IC 50 de 30ppm (30mg/l) à 1500ppm de la substance testée. Les

molécules spirooxindoles ont manifesté in vitro un faible taux d’inhibition vis-à-vis de F.o.a.

Mots clés : Palmier dattier, Fusarium oxysporum f. sp. albedinis, substrat de carbohydrate, ALP, γ-GT, GOT,

molécule chimique, activité antifongique, chalcone, oxindole.

Abstract

Fusarium oxysporum sp. albedinis (F.o.a) is one of the most dangerous pathogenic agents for aggression date

palm (Phoenix dactylifera L.). Why knowledge of the physiology of the fungus and control trials in him is an

essential approach to research. In this work, an overview is given on the disease bayoud. Enzymatic assays

established for alkaline phosphatase (ALP), gamma-glutamyl transpeptidase (γ-GT), and glutamate oxaloacetate

(GOT) in intra-and extracellular presence of different carbohydrates sources (glucose, saccharose, starch and

cellulose ) has detected a change of expression of the enzymatic activity for each isolate. The antifungal activity of

synthetic chemical compounds was carried out by evaluating the inhibition rate on solid medium. The isatin

presented an inhibition of 42% and an IC 50 of 30ppm (30mg / l) at 1500ppm rate of the test substance.

Spirooxindoles molecules in vitro have shown a low rate of inhibition against F.o.a.

Keys words : date palm, Fusarium oxysporum f. sp. albedinis, carbohydrate substract, ALP, γ-GT, GOT,

chemical molecule, antifungal activity, chalcone, oxindole.

ملخص

) Phoenixاحد العوامل المسببة �مراض نخيل التمور oxysporum sp. albedinis) (Fusariumيعتبر فطر الفوزاريوم

) dactylifera يعد منھج اساسي في البحث لمحاربته معرفة فسيلوجية الفطر الغرض دراسته و االتطرق الى وسيلة فإن لھذا ;ة ا� كثر خطور الببتيد ناقلة (ALP)القلوية للفوسفاتيز الخلية خارج و داخل تقييم ا8نشطة ا8نزيمية. عن مرض البيوض نعطي لمحة عامة , في ھذا العمل .العلمي

السكروز، النشا ,الجلوكوز (الكربوھدرات من مختلفة مصادر وجود ظل في) ,GOT (أوكسالوآسيتات والغلوتامات )GT) -γغلوتاميل غاما التثبيط معدل تقييم خ�ل من للفطريات مضاد نشاط تنفيذ تمF.o.a . عزل لكل ا"نزيمي النشاط عن التعبير في ا�خت�ف عن كشف ),والسليلوز

أظھرت وقد. ا�ختبار مادة من 100ppm ل) لتر/ مغ 30 ل( 30ppm ب IC 50و٪ 42 تثبيط نسبة اا�يزاتين قدم. الصلبة المتوسطة على .فوا على تثبيط نشاط انخفاض المختبر في سبيرو جزيئات

. GT-γ. ALPكربوھيدرات مصدر , albedinisf. sp. Fusarium oxysporumنخيل التمور :المفتاحية الكلمات

,GOT أوكساندول .الفطر ضد حيوي نشاط .كيميائي جزيء.

Résumé

Le Fusarium oxysporum sp. albedinis (F.o.a) est l’un des

agents pathogène les plus redoutables pour l’agression du palmier

dattier (Phoenix dactylifera L.). Pour cela, la connaissance de la

physiologie du champignon et les essais de lutte en son égard est

une approche indispensable dans le domaine de la recherche. Dans

ce travail, un aperçu est donné sur la maladie du bayoud. Les

dosages enzymatiques établis pour la phosphatase alcaline (ALP),

le gamma-glutamyl transpeptidase (γ-GT) et le glutamate

oxaloacétate (GOT) au niveau intra- et extracellulaire, en présence

de différentes sources de carbohydrates (glucose, saccharose,

amidon et cellulose) a décelé une variation d’expression de l’activité

enzymatique pour chaque isolat. L’activité antifongique des

substances chimiques de synthèse s’est effectuée en évaluant le

taux d’inhibition sur milieu solide. L’satine a présenté un taux

d’inhibition de 42% et une IC 50 de 30ppm (30mg/l) à 1500ppm de

la substance testée. Les molécules spirooxindoles ont manifesté in

vitro un faible taux d’inhibition vis-à-vis de F.o.a.

Mots clés :

Palmier Dattier; Fusarium Oxysporum F. Sp. Albedinis; Substrat DeCarbohydrate; ALP; Γ-GT; GOT; Molécule Chimique; ActivitéAntifongique; Chalcone; Oxindole.

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