RT-PCR

扬州大学生物科学与技术学院

背景介绍

• DNA 存在于细胞核中并编码了基因• 转录 : 双链 DNA 解链后利用其中一条链

（编码链）合成信使 RNA （ mRNA ）• mRNA 从细胞核转移到细胞质中• mRNA 结合上核糖体开始翻译成蛋白质• 蛋白执行基因的功能

从 DNA转录成mRNA

转录，复制和翻译

原理• 利用逆转录酶能将 RNA逆转录成 DNA的特性，通过合适的引物，将细胞内的 RNA（一般为mRNA)逆转录成 cDNA，

• 然后，通过 PCR技术，将痕量的 cDNA扩增成大量的双链 DNA。

• 获得的 dsDNA可通过测序获得目的基因，也可用于基因操作。

RT－ PCR的步骤 :

• 从细胞中分离mRNA

• 将mRNA逆转录成 cDNA

• 这个步骤与转录是相反的，因此叫逆转录－逆转录酶来源于病毒

• 逆转录后，获得了一些微量的 cDNA, 这些微量的 cDNA还不足以用来测序。

• 因此，需要将这些微量的 cDNA扩增足够的拷贝才能用于序列测定或基因操作。

逆转录步骤

cDNA 链合成 , 互补 mRNA 链，一般利用 polyT 作为引物，也可用特异性的序列作为引物

G U A A U C C U CAAAAAAAAAAAAAAA

Reverse transcriptase

mRNA

cDNAT T A G G A G TTTTTTTTTTTTTTT

逆转录 polyT引物

PCR 步骤

电泳分离不同大小的 DNA片断

RT PCR

• RT-PCR animation

• http://www.bio.davidson.edu/Courses/genomics/RTPCR/RT_PCR.html