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SEGURIDAD ALIMENTARIA: DETECCIÓN DE ALÉRGENOSMetodologías para la detección de alérgenos

Sra. Juliana Roca. Responsable departamento técnico, Bioser, S. A.DERIO, martes 16 de Junio de 2015

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• La etiqueta constituye un elemento imprescindible deseguridad alimentaria para aquellos consumidores que sufrenalergias y/o intolerancias alimentarias.

• Las personas que presentan alergia y/o intoleranciaalimentaria tienen que disponer de información completasobre la composición de los alimentos para poder elegir losproductos y eliminar el riesgo de sufrir una reacción adversa.

Alérgenos y marco normativo

Devoluciones de producto

Devoluciones de producto

Mercado ‘Allergen-free’Mercado ‘Allergen-free’

Interés mediáticoInterés mediático

Protección de marca

Protección de marca

Alérgenos alimentarios = riesgo seguridad alimentaria

Legislación y Estándares

Legislación y Estándares

¿Por qué analizar alérgenos?

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Alérgenos alimentarios

Los alérgenos son proteínas o glicoproteínas que están presentes de forma natural en los alimentos, tanto en los de origen animal como vegetal.Estables al calor, al ácido y a las proteasas

Métodos de control alérgenos

Inmunoensayo

LFD Elisa

Otros

PCR LCMS

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Actualmente, a nivel de industrias

• Análisis en laboratorios: kits Elisa o PCR• Auto monitorización durante el procesado: tiras de flujo lateral (LFD)

Métodos por inmunoensayo

LFD y ELISA

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Tiras rápidas para el control de alérgenos

Tiras Agrastrip®

Definición y Aplicaciones

Aplicaciones:

Las tiras AgraStrip® son un test rápido de flujo lateral para el análisis de alérgenos en matrices alimentarias, superficies y aguas de aclarado en poco más de 10 minutos.

• Análisis de materia prima (pre‐producción) 

• Verificación de la limpieza/validación CIP

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Protocolo AgraStrip®

0,2 gr 1 min12 gotas

Interpretación de resultados

Positivo: niveles Alérgeno superiores o iguales al nivel de cutoff (dos líneas)

Negativo: niveles Alérgeno inferiores al nivel de cutoff (solo línea control)

Resultados Inválidos: no línea control

T C

T C

T C

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Interpretación de resultados

Nueva AgraApp, para resultados semi‐cuantitativos de las AgraStrip®:• almendras • avellanas • nueces• nueces del Brasil• nueces de Macadamia• cacahuete• pistacho • anacardo

Interpretación de resultados

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• Muy específicos y sensibles• Fáciles de usar• Muy rápidos • Rango de productos muy amplio• Flexibilidad• No requieren material adicional• Estabilidad 

AgraStrip® Alérgenos

Kits elisa para el control de alérgenos

Kits AgraQuant®

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Los kits AgraQuant® son kits elisa para el análisis cuantitativo de alérgenos en matrices alimentarias, superficies y aguas de aclarado.

‐ AgraQuant®

‐ AgraQuant®  PLUS

Definición y Aplicaciones

Homogenización

Centrifugación/Filtración

Alimento + solución extracción

AgraQuant®: protocolo de extracción

ANÁLISIS

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AgraQuant® PLUS: protocolo extracción

1. 1g muestra +  aditivo extracción 1 y 2

2. Añadir 20ml agua destilada (80‐100ºC)

3. Agitar vigorosamente 15 seg

4. Filtrar o centrifugar (8000g, 5min)

Procedimiento de análisis

100µl extractos muestra/estándares

Incubar

Lavados x 5

100µl conjugado

Incubar

Lavados x 5100µl sustrato100µl Solución Stop

Incubar 

En la oscuridad

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Interpretación de los resultadosElisa Sándwich directo

↑Intensidad color →↑concentración

0,000

0,200

0,400

0,600

0,800

1,000

1,200

1,400

1,600

0 1 4 10 40

OD

450n

m

Peanut conc. [ppm]

S5

S4S3

S2S1

M

AgraQuant® vs AgraQuant® PLUS

AgraQuant® AgraQuant® PLUS

Rango productos Más amplio (20 referencias) 8 referencias

LOD Muy bajos 2ppm en producto

Rango cuantificación En función del alérgeno 1‐25ppm

Tiempo extracción ~ 30 min ~ 1 min

Tiempo incubación 60 min 30 min

Vida útil 12 meses 12 meses

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• Rápidos • Elevada sensibilidad y especificidad• Facilidad de uso• Per a la mayoría de los alérgenos de declaración obligatoria

AgraQuant®

Otros Métodos 

PCR y LCMS

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Métodos por PCR

Detección de secuencias de ADN correspondientes a especies que contienen alérgenos.

‐ Método de detección indirecto‐ Elevada especificidad ‐ Permite analizar muestras muy  procesadas

Resumen

ELISA, LFD PCREspecificidad Posible reacción cruzada Altamente específico

Detectabilidad Mayoría de alérgenos o grupos de proteínas

Fragmento ADN

LOD bajos ppm Teóricamente1-10 moléculas

Cuantificación Proteínas detectadas por Ab

Número de copias de ADN

Efecto Matriz Inhibidores pueden interferir con los anticuerpos

Matrices pueden tener inhibidores de la PCR

Procesado Proteínas desnaturalizadas

DNA más estable

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Todavía queda mucho camino porrecorrer:

‐ Distintos métodos y kits de análisis dan distintos resultados 

‐ Falta de material de referencia certificado‐ Falta de método de referencia (MS?)‐ Falta de límites máximos permitidos

¿Alguna Pregunta?

Juliana Roca – Rble dpt. técnico Bioser, S. A.jroca@bioser.com