Integrantes:Chrystiam Sorondo

Lusiana RangelYenireth Martinez

Universidad Central de Venezuela

Facultad de MedicinaEscuela de Bioanálisis

Cátedra de Bioquímica “C”

Estudio del funcionalismo Hepático en el Laboratorio

Clínico

Bilirrubina.Producto del catabolismo del grupo heme.

250-300 mg por día. 80% Hemoglobina.20% enzimas, proteínas, mioglobina y citocromos.

Síntesis de bilirrubina (reacciones enzimnticas).

HemeOxigenasa.

Biliverdina

Bilirrubina.

Reductasa.

Trasformación de Biliverdina a Bilirrubina

Biliverdina

Bilurrubina

Bilirrubina.

Conjugada ó Directa

No Conjugada ó Indirecta

95 % Unida a Albúmina.

Bilirrubina Conjugada.Ácido

glucurónico

Bilirrubina diglucurónida

Transferasa de UDP-

glucuronilo

Bilirrubina Sérica.

Producción.

Descomposición.

Depuración.

Van den Bergh y Snapper. 1913.Modificación de Jendrassik y Grof.

Recomendada por NCCLS.La bilirrubina conjugada (directa) se

copula con el ácido sulfanílico diazotizado (nitrito de sodio) en ácido clorhídrico para formar un complejo coloreado que es medido a 540nm.

Medición de Bilirrubina.

Para determinar Bilirrubina no conjugada, ésta debe hacerse soluble en agua, mediante el uso de un acelerador.

Reacción química que usa al óxido nitroso (N2O) para formar un complejo de color (Azobilirrubina)

Bilirrubina No conjugada =Bil (t) – Bil (conj).

Método de Jendrassik y Grof.

Procedimiento:

Bilirrubina Total

  Blanco Calibrador (10

mg/dL) Muestra

Reactivo "Total" (ml) 1.0 1.0 1.0

Oxidante (gotas) 1 1 1

Agua (ml) 0.05 - -

Calibrador (ml) - 0.05 -

Muestra (ml) - - 0.05

Método de Jendrassik y Grof.

Incubar a T.A por 5 min MÍNIMO.Leer a 540 nm antes de 30 min.

Método de Jendrassik y Grof.

Bilirrubina Directa

 Blanc

o

Calibrador (10 mg/dL) Blanco

Mx.Muestr

a

Reactivo “Directa" (ml) 1.0 1.0 1.0 1.0

Oxidante (gotas) 1 1 - 1

Agua (ml) 0.1 - - -

Calibrador (ml) - 0.1 - -

Muestra (ml) - - 0.1 0.1

Incubar a T.A por 3 min EXACTOS.Leer a 540 nm rápidamente. (puede haber sobreestimación por bilirrubina indirecta.)

Cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC).

Cromatografía en capa fina.

Otros Métodos.

Pre-analíticas.

Analíticas: Hemólisis, lipemia, luz, conservación, temperatura, tiempos de reacción.

Post-Analíticas.

Variables.

Bilirrubina Delta

Bilirrubina que se une covalentemente con la albúmina, que no se disocia y no aparece en la bilis.

Tiene una vida media de 15 a 20 días.

Se encuentra

Bilirrubina DeltaDelta Biliproteína

NO ES HIDROSOLUBLE

ComplejoAlbúmina-Bilirrubina

Unido covalentemente

Metabolismo de la Bilirrubina Delta

Análisis de Bilirrubina Delta

Actualmente la determinación de Bilirrubina en muchos laboratorios de rutina se hace mediante las reacciones con la prueba Diazo:

Bilirrubina de reacción directa Conjugada

Bilirrubina de reacción indirecta NoConjugada

Determinación de fracciones de Bilirrubina por HPLC

Lauff, en 1982 separó las fracciones de Bilirrubina mediante esta técnica.◦Alfa No conjugada◦Beta Monoconjugada◦Gamma Diconjugada◦Delta Biliproteína

Determinación de fracciones de Bilirrubina

por Tecnología de Slide Seco o Microslides

Bilirrubina Delta = Bilirrubina Total – (B conjugada + B no conjugada)

Utilidad Clínica

Se evalúa su relación con respecto a la bilirrubina directa en procesos colestásicos y hepatobiliares.

Responsable

Normalizado la función hepática

Caso clínico.