Upload
min
View
45
Download
0
Embed Size (px)
DESCRIPTION
SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ. Nezhybová E. , Kašpárková E., Machalová B., Wagner F. Ústav histologie a embryologie Lékařské fakulty Univerzity Palackého v Olomouci. Úvod. - PowerPoint PPT Presentation
Citation preview
SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ
TVRDÝCH TKÁNÍ
Nezhybová E., Kašpárková E., Machalová B., Wagner F.
Ústav histologie a embryologie Lékařské fakulty Univerzity Palackého v Olomouci
Úvod
tvrdé tkáně představují pro běžná histologická vyšetření komplikaci s ohledem na nutnost demineralizace tkáně
k tomuto účelu slouží zředěné kyseliny, které přeměňují nerozpustné soli v soli rozpustné ve vodě
k zachování struktury a použitelnosti tkáně je nutné přesně dodržovat správné postupy
Cíle práce
cílem naší práce bylo srovnat některé demineralizační postupy, poskytnout přehled speciálních barvení využitelných pro tvrdé tkáně a stanovit možnosti imunohistochemických vyšetření na tvrdých tkáních, které byly demineralizovány
Materiál a metodika jako materiálu jsme použili dospělých lidských
zubů a kostí k dekalcifikaci jsme používali:
• elektrolytické odvápňování
• chelaton III
• Löwyho roztok jako barvících postupů jsme používali H.E.,
Schmorlovu reakci, azan, zelený trichrom, PAS a Saturnovou červeň
dále jsme prováděli imunohistochemické reakce
Dekalcifikace (1)
doba se řídí velikostí bločku a typem dekalcifikační tekutiny
stupeň odvápnění určujeme vbodnutím jehly nebo chemicky /k 5 ml dekalcifikační tekutiny slité z odvápňované tkáně se přidá 5 ml 5% roztoku hydroxidu amonného a 5 ml 5% roztoku šťavelanu vápenatého/
Základní pravidla demineralizace
tkáň musí být dobře fixována, jinak dochází k poškození tkáně (bobtnání)
důkladné vyprání tkáně po fixaci ve vodě nebo etanolu
odvápnění musí být rychlé /dostatečné množství dekalcifikační tekutiny, pravidelné vyměňování/
po odvápnění nutné dokonale vyprat tkáň od dekalcifikační tekutiny /nikdy nesmí ovšem přijít tkáň z dekalcifikačního roztoku do vody/
Dekalcifikace (2)
elektrolytické odvápnění• kyselina mravenčí, kyselina chlorovodíková,
destilovaná voda
chelaton III• kyselina etylendiamintetraoctová (EDTA)
Löwyho roztok• 40% formaldehyd, chlorid rtuťnatý, ledová kyselina
octová, destilovaná voda
Barvení tkáně
hematoxylin – eosin (HE) Schmorlova reakce Saturnová červeň zelený trichrom azan PAS
substrát (DAB)
I. protilátka
buněčný antigen
II. protilátka SA-P
Nepřímá třístupňová imunohistochemická reakce, při které jsme použili primární protilátky proti kolagenu a Ab-1 (na makrofágy)
Imunohistochemie
Výsledky - dekalcifikace
nejkratší dobu trvání má dekalcifikace v Löwyho roztoku (cca 20 hodin), který je současně fixační tekutinou a výsledná barvení neovlivňuje, současně je vhodný i pro imunohistochemické zpracování tvrdé tkáně
elektrolytické odvápnění je rovněž účinné, trvá několik dní a není k tvrdé tkáni příliš šetrné
EDTA trvá několik měsíců, ale je nejšetrnější, dosáhnout zkrácení doby odvápnění lze přidáním 2% kyseliny mravenčí, poté je nutné tkáň vyprat v 5% roztoku formaldehydu
Zub – hematoxylin/eosin
Zub – Schmorlova reakce
Zub - azan
Zub – Goldnerův zelený trichrom
Zub - PAS
Zub – Saturnová červeň
Zub – ukázka imunohistochemie
Závěry (1)
použití různých typů dekalcifikačních tekutin ovlivňuje délku demineralizace
Löwyho tekutina usnadňuje postup, protože je současně i tekutinou fixační, jde o postup z hlediska odvápnění nejkratší a dostatečně šetrný
chelaton III (EDTA) je postup dlouhý a pro rutinní laboratoř nevhodný
Závěry (2)
při barvení tvrdých tkání lze použít různých speciálních postupů, které poskytují specifické výsledky a umožňují zobrazit potřebné jednotlivé struktury
při šetrné dekalcifikaci lze na odvápněné tkáni úspěšně provádět imunohistochemická vyšetření, je ale třeba zvolit vhodný dekalcifikační prostředek
Děkujeme za pozornost