i

PENGEMBANGAN SIDIK JARI KROMATOGRAFI

FITOKIMIA KULIT BUAH JERUK NIPIS (Citrus

aurantifolia (Christm.) Swingle) DENGAN KLT-

SPEKTROFOTODENSITOMETRI

Skripsi

I PUTU KRISNANTARA WIJANA PUTRA

1108505017

JURUSAN FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS UDAYANA

2015

ii

Lembar Pengesahan

PENGEMBANGAN SIDIK JARI KROMATOGRAFI

FITOKIMIA KULIT BUAH JERUK NIPIS (Citrus

aurantifolia (Christm.) Swingle) DENGAN KLT-

SPEKTROFOTODENSITOMETRI

Skripsi

Skripsi ini diajukan sebagai syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi (S.Farm)

di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana

Oleh

I PUTU KRISNANTARA WIJANA PUTRA

NIM. 1108505017

Menyetujui:

Pembimbing I Pembimbing II

Ni Putu Linda Laksmiani, S.Farm., M.Sc., Apt. Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt.

NIP. 198509012008122003 NIP. 196804201994021001

Mengesahkan:

Ketua Jurusan Farmasi

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt.

NIP. 196804201994021001

iii

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena

atas berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul

“Pengembangan Sidik Jari Kromatografi Fitokimia Kulit Buah Jeruk Nipis

(Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle) Dengan KLT-

Spektrofotodensitometri” tepat pada waktunya.

Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran, dan bimbingan

dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin

mengucapkan terima kasih kepada:

1. Ni Putu Linda Laksmiani, S.Farm., M.Sc., Apt. selaku dosen pembimbing

I yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,

bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan di

Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.

2. Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt. selaku dosen

pembimbing II yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi,

semangat, bimbingan dan saran selama penulis mengikuti pendidikan di

Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.

3. Ir. Anak Agung Gde Raka Dalem, M.Sc. (Hons), selaku Dekan Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.

iv

4. Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua

Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Udayana.

5. Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA

Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis

selama penyusunan skripsi ini.

6. Ir. I Wayan Wijana dan Ni Wayan Krisnawati, selaku ayah dan ibu tercinta

yang telah mengasuh dan membesarkan penulis, membimbing,

memberikan doa, cinta, dan motivasi kepada penulis, adik kandung penulis

yaitu Ni Made Rismayanti, serta sanak saudara penulis di Desa Peliatan,

Kota Gianyar, dan Kota Denpasar yang selalu memberikan motivasi dan

dukungan dalam penyusunan skripsi ini.

7. Ketut Alit Adi Krisna sekeluarga yang telah mendukung penulis

khususnya telah menyediakan tempat tinggal bagi penulis sejak awal

perkuliahan di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu

Pengetahuan Alam Universitas Udayana.

8. Seluruh teman-teman farmasi angkatan 2011 (Lumiere Onze Vauquelin)

atas segala dukungan dan motivasi, Tim Riset Analisis Angkatan 2011

(Rapid Isocratic) yang tak pernah lelah memberikan semangat dan

dukungan, sahabat seperjuangan yang selalu menemani di saat suka

maupun duka, dan staf Laboratorium Forensik Lembaga Sains dan

Kriminologi Universitas Udayana yang saya hormati atas semangat dan

motivasinya kepada penulis dalam penyusunan skripsi ini.

v

9. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan

tugas akhir I ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.

Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih belum sempurna.

Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat

membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis

berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang

memerlukan.

Bukit Jimbaran, Juli 2015

Penulis

vi

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL .................................................................................... i

LEMBAR PENGESAHAN ......................................................................... ii

KATA PENGANTAR ................................................................................. iii

DAFTAR ISI ................................................................................................ vi

DAFTAR TABEL ........................................................................................ ix

DAFTAR GAMBAR ................................................................................... x

DAFTAR SINGKATAN ............................................................................. xii

DAFTAR ISTILAH ...................................................................................... xiii

ABSTRAK .................................................................................................... xv

ABSTRACT .................................................................................................. xvi

BAB I PENDAHULUAN ............................................................................. 1

1.1 Latar Belakang .......................................................................... 1

1.2 Rumusan Masalah ..................................................................... 4

1.3 Tujuan Penelitian ...................................................................... 4

1.4 Manfaat Penelitian .................................................................... 5

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ................................................................ 6

2.1 Kulit Buah Jeruk Nipis (Citrus aurantifolia (Christm.)

Swingle).................................................................. ................... 6

2.1.1. Klasifikasi tanaman jeruk nipis..................................... .. 6

2.1.2. Deskripsi simplisia kulit buah jeruk nipis ....................... 6

2.1.3. Kandungan kimia ............................................................. 7

vii

2.1.4. Khasiat tanaman .............................................................. 7

2.1.5. Senyawa penanda dan identitas ....................................... 8

2.1.5.1. Rutin .................................................................... 8

2.1.5.2. Hesperidin ............................................................ 9

2.1.6. Pola kromatografi ............................................................ 10

2.2 Ekstraksi .................................................................................... 11

2.3 Kromatografi Sidik Jari ............................................................. 11

2.4 KLT-Spektrofotodensitometri ................................................... 12

2.5 Parameter Kromatografi ............................................................ 15

2.6 Analisis Data dengan Fungsi Korelasi Silang ........................... 17

2.7 Analisis Data dengan Fungsi Kosinus ....................................... 17

BAB III METODE PENELITIAN .............................................................. 19

3.1 Rancangan Penelitian ............................................................... 19

3.2 Tempat dan Waktu Penelitian ................................................... 19

3.3 Bahan Penelitian ....................................................................... 20

3.4 Alat Penelitian .......................................................................... 20

3.5 Prosedur Penelitian ................................................................... 20

3.5.1 Determinasi sampel buah jeruk nipis .............................. 20

3.5.2 Pengumpulan dan preparasi sampel ............................... 21

3.5.3 Penetapan susut pengeringan ......................................... 21

3.5.4 Ekstraksi sampel ............................................................. 22

3.5.5 Penyiapan sistem Kromatografi Lapis Tipis .................. 22

3.5.6 Optimasi volume penotolan ............................................ 22

viii

3.5.7 Pengembangan kromatografi fingerprint dengan

metode KLT-Spektrofotodensitometri ........................... 23

3.5.8 Analisis fungsi korelasi silang ........................................ 24

3.5.9 Analisis data dengan fungsi kosinus ............................... 24

3.6 Skema Penelitian ...................................................................... 25

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ..................................................... 26

4.1 Pengambilan Sampel Buah Jeruk Nipis .................................... 26

4.2 Determinasi Sampel Buah Jeruk Nipis ...................................... 26

4.3 Penetapan Susut Pengeringan .................................................... 26

4.4 Identifikasi Senyawa Identitas dan Penanda ............................. 27

4.5 Optimasi Volume Penotolan ...................................................... 29

4.6 Analisis Sidik Jari Ekstrak Kulit Buah Jeruk Nipis dengan

Metode KLT-Spektrofotodensitometri ....................................... 33

4.7 Analisis Data dengan Fungsi Korelasi Silang ........................... 35

4.8 Analisis Data dengan Fungsi Kosinus ....................................... 36

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ..................................................... 38

5.1 Kesimpulan ............................................................................... 38

5.2 Saran .......................................................................................... 38

DAFTAR PUSTAKA .................................................................................. 39

LAMPIRAN .................................................................................................. 42

ix

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 4.1 Hasil susut pengeringan serbuk kulit buah jeruk nipis ................ 27

Tabel 4.2 Nilai resolusi dan tailling factor puncak yang diduga hesperidin 31

Tabel 4.3 Nilai fungsi korelasi silang (r) spektrum hesperidin sampel kulit

kulit buah jeruk nipis dari tiga daerah. ........................................ 35

Tabel 4.4 Nilai fungsi kosinus (C) sampel kulit kulit buah jeruk nipis dari

tiga daerah. ................................................................................... 36

x

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 2.1 Buah jeruk nipis dan simplisia kulit buah jeruk nipis ........... 7

Gambar 2.2 Struktur kimia rutin ............................................................... 8

Gambar 2.3 Spektrum rutin pada rentang panjang gelombang

200-400 nm ........................................................................... 9

Gambar 2.4 Struktur kimia hesperidin ...................................................... 9

Gambar 2.5 Spektrum hesperidin pada rentang panjang gelombang

200-380 nm ........................................................................... 10

Gambar 2.6 Pola KLT kulit buah jeruk nipis ............................................ 11

Gambar 2.7 Perhitungan Tailing factor (Tf) .............................................. 16

Gambar 3.1 Skema penelitian ................................................................... 25

Gambar 4.1. Tampilan plat dan kromatogram ekstrak kulit buah jeruk

nipis dengan sistem kromatografi fase diam silika gel F254

dan fase gerak etil asetat-asam format-air (100:15:17 v/v) .. 28

Gambar 4.2 Kromatogram ekstrak larutan uji ekstrak metanol kulit buah

jeruk nipis sistem kromatografi fase diam silika gel F254

dan fase gerak etil asetat-asam format-air (100:15:17 v/v)

dengan 4 variasi volume penotolan ...................................... 30

xi

Gambar 4.3 Tampilan visual plat hasil elusi ekstrak kulit buah jeruk nipis

dengan sistem kromatografi fase diam silika gel F254 dan

fase gerak etil asetat-asam format-air (100:15:17 v/v)

dari 3 daerah berbeda. ........................................................... 33

Gambar 4.4 Kromatogram ekstrak larutan uji ekstrak metanol kulit buah

jeruk nipis dengan sistem kromatografi fase diam silika

gel F254 dan fase gerak etil asetat-asam format-air

(100:15:17 v/v) dari 3 daerah berbeda ................................. 34

xii

DAFTAR SINGKATAN

AUC : Area Under Curve

C : Cosinus

FHI : Farmakope Herbal Indonesia

KLT : Kromatografi Lapis Tipis

Rf : Retardation factor

Rs : Resolusi

Tf : Tailing Factor

UV : Ultraviolet

WHO : World Health Organization

xiii

DAFTAR ISTILAH

Agen Kemopreventif : Zat yang dapat bertindak sebagai penghambat dan

atau melindungi tubuh dari perkembangan sel kanker.

Anti osteoporosis : Aktivitas yang dapat mencegah terjadinya gangguan

pada tulang akibat menurunnya kualitas dan

kepadatan tulang.

Antibakteri : Aktivitas yang dapat mengganggu pertumbuhan atau

bahkan mematikan bakteri dengan cara mengganggu

metabolismenya.

Antifungi : Aktivitas yang dapat mengganggu pertumbuhan atau

bahkan mematikan fungi dengan cara mengganggu

metabolismenya.

Antioksidan : Merupakan zat yang mampu memperlambat atau

mencegah proses oksidasi.

Antikolinesterase : Aktivitas atau agen yang dapat menghalangi aksi dari

asetilkolinesterase.

Antispasmodik : Aktivitas yang dapat membantu mengurangi atau

menghentikan kejang otot di saluran cerna.

Determinasi Tumbuhan : Suatu proses untuk mengetahui kebenaran atau

menetapkan identitas tanaman dengan

membandingkan ciri tanaman dengan pustaka.

xiv

Fingerprint : Seluruh informasi yang merupakan karakteristik dari

tanaman meliputi warna bercak pada UV-visibel,

kromatogram dan spektrum.

Radiasi Elektromagnetik : Kombinasi medan magnet dan medan listrik yang

berosilasi dan merambat lewat ruang dan membawa

energi dari satu tempat ke tempat yang lain.

Simplisia : Bahan alamiah yang digunakan sebagai obat yang

belum mengalami pengolahan apapun juga dan

kecuali dinyatakan lain simplisia merupakan bahan

yang dikeringkan.

xv

ABSTRAK

Kulit buah jeruk nipis (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle) merupakan

bagian dari buah jeruk nipis yang sangat berpotensi digunakan sebagai bahan baku

atau obat herbal di Indonesia. Standardisasi diperlukan sebagai kontrol kualitas

dan menjamin mutu dari ekstrak kulit buah jeruk nipis yang digunakan. WHO

telah menetapkan standardisasi fitokimia suatu tanaman dilakukan dengan

kromatografi sidik jari. Namun, kromatografi sidik jari belum dicantumkan dalam

Farmakope Herbal Indonesia sebagai kontrol kualitas obat herbal Indonesia. Oleh

karena itu dalam penelitian ini dilakukan penetapan sidik jari kromatografi dan

melihat hubungan kedekatan sidik jari ekstrak metanol kulit buah jeruk nipis dari

beberapa daerah dengan KLT-Spektrofotodensitometri.

Sampel buah jeruk nipis dikumpulkan dari 3 daerah di Jawa Timur yaitu

Desa Kalibaru Banyuwangi, Desa Umbulsari Jember, dan Desa Selorejo Malang.

Sistem kromatografi mengacu pada FHI yaitu fase diam silika gel GF254 dan fase

gerak etil asetat-asam format-air (100:15:17). Sidik jari kromatografi ekstrak

metanol kulit buah jeruk nipis diperoleh dengan metode KLT-

Spektrofotodensitometri. Kromatogram dipindai pada 210 nm dan spektrum

senyawa identitas kulit buah jeruk nipis hesperidin dipindai pada 200-400 nm.

Analisis data dilakukan dengan korelasi silang dan fungsi kosinus.

Sidik jari kromatografi kulit buah jeruk nipis dari ketiga daerah berupa

susunan pola puncak dengan nilai Rf tiap puncak yaitu 0,06; 0,09; 0,25; 0,32;

0,37; 0,50; 0,63; dan 0,94. Senyawa identitas hesperidin berada pada Rf 0,37 dan

memiliki panjang gelombang maksimum pada 284 nm. Sidik jari kromatografi

ekstrak metanol kulit buah jeruk nipis dari tiga daerah yaitu Banyuwangi, Jember,

dan Malang tidak memiliki hubungan kedekatan satu sama lain dan memiliki

profil yang bervariasi karena menghasilkan nilai kosinus (C) dibawah 95 dan KV

diatas 2%.

Kata kunci: Kulit buah jeruk nipis, Citrus aurantifolia, standardisasi, kromatografi

sidik jari, KLT-Spektrofotodensitometri

xvi

ABSTRACT

Lime peel (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle) is a part of lime that is

potentially used as a raw material or herbal medicine in Indonesia.

Standardization is necessary for the quality control and guarantee the quality of

lime peel extract. WHO has established phytochemical standardization of plants

performed by chromatographic fingerprint. However, the chromatographic

fingerprint method have not been included in the Indonesian Herbal

Pharmacopoeia as a quality control of Indonesian herbal medicines. Therefore, the

aim of this research is developing phytochemical chromatographic fingerprint for

lime peel from different regions and to investigate their similarity by TLC-

Spectrophotodensitometry.

Lime fruit samples were collected from three areas in East Java those are

Kalibaru Village, Banyuwangi, Umbulsari Village, Jember, and Selorejo Village,

Malang. The applied chromatography system refers to FHI using silica gel GF254

as the stationary phase and ethyl acetate-formic acid-water (100:15:17) as the

mobile phase. Chromatographic fingerprint of methanol extract of lime peel was

obtained by TLC-Spectrophotodensitometry. The chromatogram was scanned at

210 nm and the spectrum of identity compound of lime peel hesperidin was

scanned at 200-400 nm. Data was analyzed with cross-correlation and cosine

functions.

Chromatographic fingerprint of three lime peel samples showed similar

peaks at Rf 0,06; 0,09; 0,25; 0,32; 0,37; 0,50; 0,63; and 0,94. Hesperidin was

identified at Rf 0.37. Its spectrum gave maximum wavelength at 284 nm.

Chromatographic fingerprints of lime peel methanol extract from mentioned

regions have no similarity yet their profiles are varies. Their cosine values (C)

were below of 95 and the KV values were above 2%.

Kata kunci: Lime peel, Citrus aurantifolia, standardization, chromatographic

fingerprint, TLC-Spectrophotodensitometry