Teisis Yesenia Ruiz Rodriguez[1]

5/26/2018 Teisis Yesenia Ruiz Rodriguez[1]

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UNIVERSIDAD INTERACTIVA Y A DISTANCIA DEL

ESTADO DE GUANAJUATO

PROPUESTA DE MEJORA DE LAPRODUCTIVIDAD PARA LA OPERACIN DEEXTRACCIN DE ADN PLASMDICO EN EL

LABORATORIO DE DESARROLLO YDIFERENCIACIN DE HONGOS DEL CINVESTAV

UNIDAD IRAPUATO

TESIS

QUE PARA OBTENER EL TTULO DEINGENIERO INDUSTRIAL

CON ESPECIALIDAD EN AGROINDUSTRIAS

PRESENTAYESENIA RUIZ RODRGUEZ

IRAPUATO, GTO. AGOSTO 2011


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DEDICATORIA

A mi familia:

A mis padres, hermanos y sobrinos !e siempre es"#n ah$ para apoyarme.

2


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AGRADECIMIENTO

Al %r. &os' R!i( )errera, por darme la opor"!nidad de reali(ar es"e "raba*o en

el labora"orio a s! +aro, por s!s ense-an(as !e han sido "an aliosas para

m$.

A la In. &!lio )ern#nde( Gallardo por s! +ons"an"e y a+er"ada asesor$a

d!ran"e "oda mi es"an+ia en es"a ins"i"!+i/n, al i!al !e en es"e "raba*o, por s!

"iempo y pa+ien+ia.

Al I3STA por permi"irme ha+er !so de s!s ins"ala+iones, al depar"amen"o

de Inenier$a Gen'"i+a, y en espe+ial al 4abora"orio de %esarrollo y

%iferen+ia+i/n de )onos.

A OA5T por el apor"e e+on/mi+o para la reali(a+i/n de es"e "raba*o.

Al SI por el apoyo e+on/mi+o !e me brindaron.

A UI%3G por ser mi alma ma"er, en espe+ial los "!"ores y a los

adminis"ra"ios !e siempre me brindaron s! ay!da para la reali(a+i/n de los

"r#mi"es.

A mis +ompa-eros del labora"orio 16

A mis amios y +ompa-eros de enera+i/n: San"i"os, 4!pi"a, 4ili, Ara+eli, Ana,

e"+.

A "odos !s"edes 7il Gra+ias888

NDICE

6


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%3%IATORIA.....................................................................................................2

AGRA%3I7I3TO ...........................................................................................6

9%I3..................................................................................................................6

ASTRAT...........................................................................................................;

ITRO%UI


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2.2 An"e+eden"es del problema........................................................................

2.1.1 T'+ni+a de 3C"ra++i/n de A% plasm$di+o 1 Firnboim and %oly,

1;H;..............................................................................................................

2.1.2 T'+ni+a de 3C"ra++i/n de %A plasm$di+o 2 F)!mphreys, illshaJ

and Anderson, 1;H.....................................................................................B

2.1.6 T'+ni+a de 3C"ra++i/n de %A plasm$di+o 6.......................................H

2.6 Reisi/n de li"era"!ra..................................................................................K

2.? Teor$as apli+ables al problema...................................................................;

2.?.1 Pr!eba de )ip/"esis para 7edias ..........................................................;

2.?.2 7an!al de Pro+edimien"os.......................................................................;

2.?.6 3+onom$as de es+ala.............................................................................10

ap$"!lo 6: 7ARO T3


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reali(a+i/n de las 6 "'+ni+as de eC"ra++i/n de %A reali(adas por los

in"eran"es del labora"orio...............................................................................16

3l +!es"ionario se llear# a +abo +!ando se pre!n"e a los in"eran"es del

labora"orio +!al es la "'+ni+a !e !"ili(an, !' modifi+a+iones le han

reali(ado, el "iempo !e emplean en reali(arla..............................................16

6. Sele++i/n de la m!es"ra............................................................................1?

3n la sele++i/n de la m!es"ra la pobla+i/n ser#n los in"eran"es del

labora"orio de %esarrollo y %iferen+ia+i/n de )onos del %epar"amen"o de

Inenier$a Gen'"i+a del en"ro de Ines"ia+i/n y 3s"!dios Aan(ados del

IP !e reali(an al!nas de las 6 "'+ni+as de eC"ra++i/n de %A plasm$di+o.

.........................................................................................................................1?

6.B An#lisis de la m!es"ra...............................................................................1?

4a sele++i/n de la m!es"ra se "omar#n los da"os de por lo menos 20

reali(a+iones de +ada "'+ni+a. 3l m!es"reo se har# al a(ar, la pobla+i/n

ser#n los in"eran"es del labora"orio !e reali(an las "'+ni+as de eC"ra++i/n de %A plasm$di+o..........................................................................................1?

6.B Pro+edimien"os..........................................................................................1?

Re+!rsos a !"ili(ar...........................................................................................1?

)!manos.........................................................................................................1?

4os in"eran"es del labora"orio de desarrollo y diferen+ia+i/n de hono

in+l!y'ndome..................................................................................................1?

7a"eriales........................................................................................................1?

@inan+ieros......................................................................................................1H

4os ma"eriales ser#n propor+ionados por el proye+"o de OA5T ...........1H

Infraes"r!+"!ra.................................................................................................1H

B


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3l proye+"o se llear# a +abo en las ins"ala+iones del I3STA !nidad

Irap!a"o...........................................................................................................1H

3n el pro+edimien"o se elaborar# !n +!es"ionario el +!al in+l!ya el nombre de

la "'+ni+a, el "iempo de d!ra+i/n de la misma, el +os"o de los rea+"ios y el

e!ipo !"ili(ado...............................................................................................1H

6.B Re+ole++i/n de da"os................................................................................1H

4a re+ole++i/n de los da"os se llear# a +abo median"e la obsera+i/n de la

reali(a+i/n de las "'+ni+as, los +!es"ionarios. Fer AneCo ............................1H

AP9TU4O ?. AL4ISIS %3 4A I@OR7AI


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S%SM F1r F0.6mlM 0.006............................................................................1K

Sol!+i/n III irnboim F600 mi+roli"ros............................................................1K

A+e"a"o de po"asioM F;K.1? rNmol F6molNl F0.0006lM 0.0KK62B................1K

Isopropanol F00 mi+roli"ros...........................................................................1K

T'+ni+a 2.........................................................................................................1K

@osfa"o de sodioM F1B6.;? rNmol F0.1molNl F0.0006lM 0.00?;1K2............1K

lor!ro de sodioM FK.?? rNmol F0.molNl F0.000lM 0.01?B1..................1;

Polie"ilenli+ol B000 al 10............................................................................1;

3"anol al H0 F00 mi+roli"rosM F0.ml FH0ml N100mlM 0.6ml...................1;

?.2 Presen"a+i/n de res!l"ados.......................................................................1;

Tabla 1.............................................................................................................20

.........................................................................................................................20

Gr#fi+a 1..........................................................................................................20

Tabla 6.............................................................................................................21

Tabla ?.............................................................................................................22

AP9TU4O . IT3R3I


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G4OSARIO........................................................................................................ 2;

ABSTRACT

3n la a+"!alidad eCis"en n!merosas "'+ni+as !"ili(adas en la biolo$a mole+!lar

en"re las !e se en+!en"ra la eC"ra++i/n de %A en/mi+o y plasm$di+o de

es"a Dl"ima podemos men+ionar la des+ri"a por irnmboim, )!mphreys y o"ras,

en es"e "raba*o se anali(aron 6 "'+ni+as de las +!ales se obseraron los

"iempos !"ili(ados para s! reali(a+i/n, se +al+!lo el +os"o de los ins!mos de

+ada !na de ellas, ob"eni'ndose !e la de menor "iempo f!e la T'+ni+a 6, la de

mayor "iempo f!e la T'+ni+a 2, sin embaro la "'+ni+a re+omendada desp!'s

de reali(ar es"e "raba*o f!e la T'+ni+a 1 de irnmboim por el ba*o +os"o en

rea+"ios y "ener !n "iempo a+ep"able.

;


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INTRODUCCIN

3l +amp!s G!ana*!a"o del I3STA dio ini+io a s!s labores +omo Unidad

Irap!a"o en o+"!bre de 1;K1, respondiendo a !n Prorama de

%es+en"rali(a+i/n del I3STA>IP. S! !bi+a+i/n en el a*$o

G!ana*!a"ense obede+e a !n +!idadoso es"!dio preliminar en el !e se

+onsideraron las perspe+"ias y medios para el desarrollo de los "raba*os de

ines"ia+i/n rela+ionados es"re+hamen"e +on los problemas aroalimen"arios

del pa$s.

3n el depar"amen"o de inenier$a en'"i+a se en+!en"ra el labora"orio de

Q%esarrollo y %iferen+ia+i/n de )onos en el +!al se reali(an proye+"os de

ran impor"an+ia. Para la reali(a+i/n de los proye+"os se llean a +abo arias

"'+ni+as de biolo$a mole+!lar +omo lo son la eC"ra++i/n de %A plasm$di+o,%A en/mi+o, rea++iones en(im#"i+as, hibrida+iones +on radia+"iidad,

rea++i/n en +adena de la polimerasa, e"+. 4a eC"ra++i/n de %A pl#smidi+o es

!na "'+ni+a de las +!ales se !"ili(a m#s en el labora"iorio, ya !e es ne+esaria

para ha+er +ons"r!++iones !e se !san para la reali(a+i/n de m!"an"es. 3n el

labora"orio se !"ili(an "res "'+ni+as para la eC"ra++i/n de %A pl#smidi+o desde

ha+e a-os.

10


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Cap!"#$ %& CONTEXTO SOCIAL

%'% U()*a*)+, -.pa*)$/!-0p$1a# 2-# p1$(#-0a

3l +amp!s G!ana*!a"o del I3STA dio ini+io a s!s labores +omo Unidad

Irap!a"o en o+"!bre de 1;K1, respondiendo a !n Prorama de

%es+en"rali(a+i/n del I3STA>IP. S! !bi+a+i/n en el a*$o

G!ana*!a"ense obede+e a !n +!idadoso es"!dio preliminar en el !e se

+onsideraron las perspe+"ias y medios para el desarrollo de los "raba*os de

ines"ia+i/n rela+ionados es"re+hamen"e +on los problemas aroalimen"arios

del pa$s.

3n el depar"amen"o de inenier$a en'"i+a se en+!en"ra el labora"orio de

Q%esarrollo y %iferen+ia+i/n de )onos en el +!al se reali(an proye+"os de

ran impor"an+ia. Para la reali(a+i/n de los proye+"os se llean a +abo arias

"'+ni+as de biolo$a mole+!lar +omo lo son la eC"ra++i/n de %A plasm$di+o,

%A en/mi+o, rea++iones en(im#"i+as, hibrida+iones +on radia+"iidad,

rea++i/n en +adena de la polimerasa, e"+. 4a eC"ra++i/n de %A pl#smidi+o es

!na "'+ni+a de las +!ales se !"ili(a m#s en el labora"iorio, ya !e es ne+esaria

para ha+er +ons"r!++iones !e se !san para la reali(a+i/n de m!"an"es. 3n el

labora"orio se !"ili(an "res "'+ni+as para la eC"ra++i/n de %A pl#smidi+o desde

ha+e a-os, lo +!al impli+a el as"o para diferen"es rea+"ios para la reali(a+i/n

de di+has "'+ni+as, diferen"es e!ipos, diferen"e "iempo empleado en la

reali(a+i/n.

%'3 p#a,!-a0)-,!$ 2-# p1$(#-0a

3l +en"ro de ines"ia+i/n y es"!dios aan(ados del IP I3STA Unidad

Irap!a"o, espe+$fi+amen"e en el 4abora"orio de %esarrollo y %iferen+ia+i/n de

)onos. !bi+ado en el m. ;.B de la arre"era Irap!a"o>4e/n, es !na ins"i"!+i/n

federal la +!al se dedi+a a reali(ar ines"ia+i/n b#si+a en plan"as.


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3n di+ho labora"orio hay "raba*adores por proye+"o y es"!dian"es !e reali(an

s! "esis de li+en+ia"!ra, maes"r$a, do+"orado, los +!ales reali(an diersas

"'+ni+as de biolo$a mole+!lar +omo lo son: eC"ra++i/n de A% en/mi+o de

hono, eC"ra++i/n de RA, rea++i/n en +adena de la polimerasa, rea++iones de

res"ri++i/n +on en(imas, lia+iones de framen"os de A%, +orrimien"o de

eles, hibrida+i/n de A% +on radia+"iiada Fnor"hern, so!"hern, en"re o"ras,

!na de las "'+ni+as m#s !"ili(adas es la eC"ra++i/n de A% plasm$di+o, !e es

la eC"ra++i/n de #+ido desoCirribon!+lei+o de ba+"erias.

3n el labora"orio para eC"raer de A% plasm$di+o, los es"!dian"es se basan en

"res diferen"es "'+ni+as, las +!ales se reali(an +on diferen"es rea+"ios en

eneral, o si es el mismo rea+"io en +an"idades diferen"es.

3s"e proye+"o se llear# a +abo en +!a"ro meses en el labora"orio men+ionado,

ba*o el finan+iamien"o de OA5T I3IAS LSIAS ?;6H, por lo !e no

habr# apor"a+i/n personal de +api"al.

3n +on+l!si/n la pre!n"a a +on"es"ar es la si!ien"e:

%e las "res "'+ni+as !"ili(adas para la eC"ra++i/n de A% plasm$di+o en ellabora"orio de desarrollo y diferen+ia+i/n de honos, del I3STA Unidad

Irap!a"o, p!ede me*orar la prod!+"iidad en la opera+i/n red!+iendo el +os"o

o el "iempo si se reali(a solo al!na de ellas

%'4 AN5LISIS DE LA SITUACIN ACTUAL

A+"!almen"e se si!en !"ili(ando las "res diferen"es "'+ni+as para la eC"ra++i/n

de %A plasm$di+o, lo !e impli+a el as"o en diferen"es rea+"ios, e!ipos,

"iempo empleado en la reali(a+i/n, as"os de ener$a para +ada !na de ellas.

3Cis"e la disposi+i/n de los in"eran"es del labora"orio para !e al reali(ar las

diferen"es "'+ni+as se p!eda "omar "iempo empleado, reali(a+i/n de an#lisis de

+os"os de los ma"eriales empleados, e"+.


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%'6 JUSTIFICACIN

4a finalidad de es"e proye+"o es la de red!+ir +os"os yNo "iempo en la opera+i/n

de eC"ra++i/n de A% plasm$di+o en el 4abora"orio de %esarrollo y

%iferen+ia+i/n de )onos del I3STA Unidad Irap!a"o, y as$ elear la

prod!+"iidad en di+ho pro+eso.

on la red!++i/n de "iempo en di+ha opera+i/n "ambi'n se red!+ir# el +os"o de

ele+"ri+idad por e!ipo !"ili(ado, el desas"e del e!ipo ser# menor, adem#s de

la reali(a+i/n m#s r#pida de di+ha opera+i/n.

omo Ins"i"!+i/n, el I3STA se benefi+iar# ya !e se "endr# la me*or

"'+ni+a de eC"ra++i/n de A% plasm$di+o para s!s +ondi+iones de labora"orio y

es"o a s! e( benefi+iar# a los "raba*adores por proye+"o, los es"!dian"es !e

reali(an s! "esis de li+en+ia"!ra, es"!dian"es de maes"r$a y es"!dian"es de

do+"orado, ya !e "ardar#n menor "iempo en la +lona+i/n de alDn en de s!

in"er's.

%'7 OBJETIVO GENERAL

Anali(ar las "res "'+ni+as de eC"ra++i/n de A% plasm$di+o !e se reali(an en

el labora"orio de Q%esarrollo y %iferen+ia+i/n de )onos del I3STA

Unidad Irap!a"o, eliiendo la me*or op+i/n para me*orar la prod!+"iidad en

di+ha opera+i/n.


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%'8 OBJETIVOS ESPECFICOS

1.B.1 Obserar los "iempos !"ili(ados para la apli+a+i/n de +ada !na de las

"'+ni+as !"ili(adas para la eC"ra++i/n de A% plasm$di+o para saber +!al de

ellas es m#s r#pida.

1.B.2 !an"ifi+ar los ins!mos !"ili(ados por +ada !na de las "'+ni+as para saber

+!al es el +os"o de +ada !na de di+has "'+ni+as.

1.B.6 Reali(ar la pr!eba de hip/"esis de medias para demos"rar si eCis"e

diferen+ia es"ad$s"i+amen"e sinifi+a"ia en "iempo y +os"o iner"idos por +ada

!na de las "'+ni+as.

1.B.? Ines"iar la +an"idad de e+es !e se reali(a la "'+ni+a de eC"ra++i/n de

A% plasm$di+o al a-o, para es"imar +os"os an!ales, para +ada !na de las

"'+ni+as !"ili(adas.


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Cap!"#$ 3& MARCO TERICO

3'% T)p$ 2- 0-!$2$#$9a

3l es"!dio de "ipo eCplora"orio se llear# a +abo en el primer niel del

+ono+imien"o +ien"$fi+o, ya !e "iene por ob*e"io la form!la+i/n del problema

para posibili"ar !na ines"ia+i/n m#s pre+isa o el desarrollo de !na hip/"esis.

Se reali(a al b!s+ar an"e+eden"es, saber si se han reali(ado o"ros es"!dios

sobre el "ema.

3l "ipo de es"!dio eCpli+a"io b!s+a en+on"rar las ra(ones o +a!sas !e

o+asionan +ier"os fen/menos. S! ob*e"io Dl"imo es eCpli+ar por !e o+!rre !n

fen/meno y en !e +ondi+iones se da. 3s"#n orien"ados a la +omproba+i/n de

hip/"esis +a!sales de "er+er radoE es"o es, iden"ifi+a+i/n y an#lisis de las

+a!sales Fariables independien"es y s!s res!l"ados, los !e eCpresan en

he+hos erifi+ables Fariables dependien"es

3'3 A,!-*-2-,!-. 2-# p1$(#-0a

4as "res "'+ni+as a eal!ar son las si!ien"es:

2.1.1 Tcnica de Extraccin de ADN plasmdico 1 (Birnboim and Doly, 1!"

Se ino+!la !na +olonia fres+a de la ba+"eria en 6ml de medio l$!ido 4 Fer

AneCo1 +on el mar+ador de sele++i/n, se in+!ba d!ran"e "oda la no+he en

ai"a+i/n a 6HV . 3l +!l"io se "ransfiere a !n "!bo eppendorf y se +en"rif!apor 2 min!"os a 12000 rpm, +omo se m!es"ra en la @i!ra 1 des+ar"ando el

sobrenadan"e. 4a pas"illa +el!lar se res!spende en 20 mi+roli"ros de sol!+i/n

1 FTris>)l p)K 0m7 se arean 600 mi+roli"ros de sol!+i/n 2 FaO)

200m7 y S%S 1, se me(+la por inersi/n, se a-ade 600 mi+roli"ros de

sol!+i/n 6 FA+e"a"o de po"asio 67 p) . y n!eamen"e se me(+la inir"iendo

el "!o arias e+es. Se +en"rif!a por min!"os a 12000 rpm +ole+"ando el

sobrenadan"e en !n "!bo limpio. Se pre+ipi"a el A% +on 0.B olDmenes de

isopropanol, y se de*a reposar d!ran"e 1 min!"os a >20V , se +en"rif!a por


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min!"os a 12000 rpm, se laa +on 00 mi+roli"ros de e"anol al H0, se de*a

se+ar la pas"illa d!ran"e 2 min!"os y se res!spende en 60 mi+roli"ros de a!a

des"ilada es"'ril.

@i!ra 1 en"rif!a para "!bos eppendorf

2.1.2 Tcnica de Extraccin de DNA plasmdico 2 (#$mp%reys, &ills%a' and

Anderson, 1!"

Se +re+e la ba+"eria d!ran"e 2? horas en medio 7;, se +en"rif!a 2 min!"os a

12,000rpm y se laa +on 600 mi+roli"ros b!ffer de fosfa"o de sodio 0.17 p)H se

le arean 600 mi+roli"ros ri* K +omo de"eren"e. %esp!'s se adi+ionan 00

mi+roli"ros +lor!ro de sodio 0.7, l!eo se adi+iona K00 mi+roli"ros de 10

FpesoNol!men de polie"ilenli+ol B00. Se me(+la y se man"iene a ?V d!ran"e

1 hora, desp!'s se +en"rif!a 2 min!"os a B,000rpm. Se "oma el pre+ipi"ado y

se adi+iona 00 mi+roli"ros de Tris 0.07, 3%TA 0.007, +lor!ro de sodio

0.07 p)K.0. 3l polie"ilenli+ol p!ede ser remoido adi+ionando 1 milili"ro

+lor!ro de +esio H.H7. se dis!ele en a!a des"ilada es"eril.


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2.1.) Tcnica de Extraccin de DNA plasmdico )

Se +re+e !n +!l"io de ba+"erias "oda la no+he en medio 4, se +en"rif!ra a 2

min!"os a 12,000rpm, se "ira el sobrenadan"e se res!spende, a-adir 600

mi+roli"ros de T3S F)idr/Cido de sodio 0.1 y 0. S%S se me(+la, se

man"iene min!"os a "empera"!ra ambien"e, se adi+iona 200 mi+roli"ros de

a+e"a"o de amonio H.7, se pone en hielo min!"os, +en"rif!a min!"os a

12,000rpm y se pasa el sobrenadan"e a "!bos limpios y se a-ade 0.B

ol!menes de sopropanol se in+!ba 10 min!"os a "empera"!ra ambien"e se

sen"rif!a 10 min!"os y 12,000rpm se "ira el sobrenadan"e, se laa +on

00mi+roli"ros e"anol H0 se +en"rif!a 10 min!"os y 12,000rpm se "ira el

sobrenadan"e, se de*a se+ar la pas"illa 10 min!"os y se res!spende en a!a

des"ilada es"eril.

Esc%eric%ia coli

4a +epa !"ili(ada f!e la TOP 10 FIno"roen. o.

ondi+iones de +!l"io para el +re+imien"o de E. coli

Para el +re+imien"o de E. coli, se !"ilia(ron las +ondi+iones de +!l"io des+ri"as

por *ambroo+ et al. F1;K;.

4as +epas se +!l"iaron en medio de +re+imien"o 4 adi+ionado +on el

an"ibi/"i+o +orrespondien"e en "!bos @al+on de 1ml +on !n "er+io de ol!men

de s! +apa+idad, a 6HV , de 1K a 2? h en !n aiador orbi"al a 60 rpm

3le+"roforesis en eles de aarosa

4a ele+"roforesis ay!da a la iden"ifi+a+i/n, separa+i/n y p!rifi+a+i/n de los

framen"os de %A, los eles de aarosa de preparan a !na +on+en"ra+i/n de

0.K y 1. Fdependiendo el "ama-o de los prod!+"os en re!lador TA3 FTris>

a+e"aro ?0m7, 3%TA 1m7 p) K.0. Para la is!ali(a+i/n de los framen"os de

%A, a la aarosa se le adi+iona brom!ro de e"idio a !na +on+en"ra+i/n final de

0. mNml. 4a separa+i/n de los framen"os de %A se reali(a apli+ando !n

ol"a*e de en"re 0 y 100, en !na +#mara de ele+"rofor'sis !e +on"ena el


18/40

mismo re!lador TA3. 3l "ama-o en pares de bases de es"as bandas se

de"ermina por +ompar+i/n +on mar+adores de peso mole+!lar de %A

+omer+iales Foehriner 7annheim. 4os eles se fo"oraf$an en !n sis"ema

Tale 3ye IS>1000 %ii"al Imain Sys"em FAlfa Inno"e+h orpora"ion, 1;;.

3'4 R-:).)+, 2- #)!-1a!"1a

4a prod!+"iidad p!ede definirse +omo la rela+i/n en"re la prod!++i/n ob"enida

por !n sis"ema prod!+"io y los re+!rsos !"ili(ados para ob"ener di+ha

prod!++i/n, o la rela+i/n en"re los res!l"ados y el "iempo !"ili(ado para

ob"enerlos.

O%3 FOrani(a+i/n para la oopera+i/n y %esarrollo 3+on/mi+o

Prod!+"iidad es i!al a prod!++i/n diidida por +ada !no de s!s elemen"os de

prod!++i/n

OITFOrani(a+i/n In"erna+ional del Traba*o

4os prod!+"os son fabri+ados +omo res!l"ado de la in"era+i/n de +!a"ro

elemen"os prin+ipales: "ierra, +api"al, "raba*o y orani(a+i/n. 4a rela+i/n de

es"os elemen"os a la prod!++i/n es !na medida de la prod!+"iidad.

3PA FAen+ia 3!ropea de Prod!+"iidad

Prod!+"iidad es el rado de !"ili(a+i/n efe+"ia de +ada elemen"o de

prod!++i/n. 3s sobre "odo !na a+"i"!d men"al. !s+a la +ons"an"e me*ora de lo

!e eCis"e ya. 3s"# basada sobre la +oni++i/n de !e !no p!ede ha+er las

+osas me*or hoy !e ayer, y me*or ma-ana !e hoy. Re!iere esf!er(os

+on"in!ados para adap"ar las a+"iidades e+on/mi+as a las +ondi+iones

+ambian"es y apli+ar n!eas "'+ni+as y m'"odos. 3s la firme +reen+ia del

proreso h!mano.


19/40

4a prod!+"iidad se define +omo la rela+i/n en"re ins!mos y prod!+"os. 3s la

rela+i/n en"re la prod!++i/n ob"enida por !n sis"ema prod!+"io y los re+!rsos

!"ili(ados para ob"ener di+ha prod!++i/n. Tambi'n p!ede ser definida +omo la

rela+i/n en"re los res!l"ados y el "iempo !"ili(ado para ob"enerlos: +!an"o

menor sea el "iempo !e llee ob"ener el res!l"ado deseado, m#s prod!+"io es

el sis"ema. 3s el indi+ador de efi+ien+ia !e rela+iona la +an"idad de prod!+"o

!"ili(ado +on la +an"idad de prod!++i/n ob"enida.

3'6 T-$1a. ap#)*a(#-. a# p1$(#-0a

2..1 -r$eba de #iptesis para edias

!ando se an a reali(ar pr!ebas de hip/"esis rela"ias a la media pobla+ional

m se debe saber si la arian(a pobla+ional s es +ono+ida o des+ono+ida, ya

!e la dis"rib!+i/n s!bya+en"e al es"ad$s"i+o de pr!eba ser# la normal es"#ndar

si la arian(a es +ono+ida, y la dis"rib!+i/n " en +aso +on"rario.

4as diferen"es hip/"eiss !e se p!eden presen"ar son las si!ien"es:

1 )o: mMm0 )1: mWm0

4as pr!ebas de hip/"esis para la media se basan en el es"ad$s"i+o dado por la

media m!es"ral +!ya dis"rib!+i/n "iende a la dis"rib!+i/n normal.

2..2 an$al de -rocedimientos

7edio o ins"r!men"o de informa+i/n !e +onsina, en forma me"/di+a, las

a+"iidades y opera+iones !e deben se!irse para la reali(a+i/n de las

f!n+iones en+omendadas a +ada #rea responsable. Pre+isando en los

diferen"es p!es"os o ins"an+ias par"i+ipan"es los nieles de responsabilidad

"an"o opera+ional +omo personal. Tiene +omo ob*e"io es"able+er la

norma"iidad, lineamien"os y responsabilidades a los !e habr#n de s!*e"arse"odas las #reas !e re!ieren do+!men"ar s!s pro+esos opera+ionales.


20/40

2..) Economas de escala

Se refiere al poder !e "iene !na empresa +!ando al+an(a !n niel /p"imo deprod!++i/n para ir prod!+iendo m#s a menor +ons"e, es de+ir a medida !e la

prod!++i/n en !na empresa +re+e s!s +os"es por !nidad prod!+ida se red!+en.

!an"o m#s prod!+e, menos le +!es"a prod!+ir +ada !na. Se refiere a !e si

en !na f!n+i/n de prod!++i/n se a!men"a la +an"idad de "odos los inp!"s

!"ili(ados en !n por+en"a*e, el o!"p!" prod!+ido p!ede a!men"ar en ese mismo

por+en"a*e o bien a!men"ar en mayor o menor +an"idad !e el mismo

por+en"a*e. Si a!men"a en el mismo, es"ar$amos an"e e+onom$as +ons"a"es dees+ala, si f!era en m#s, ser$an e+onom$as +re+ien"e de es+ala, si f!era en

menos , en e+onom$as de+re+ien"es de es+ala. omDnmen"e, +!ando se di+e

simplemen"e e+onom$as de es+ala, se refiere a la +re+ien"es, ya !e es"as

deno"an !na f!n+i/n bas"an"e en"a*osa desde el p!n"o de is"a e+on/mi+o,

por!e sinifi+a !e la prod!++i/n res!l"a m#s bara"ea por "'rmino medio

+!an"o mayor es el empleo de "odos los re+!rsos.


21/40

Cap!"#$ 4& MARCO TERICO

4'% p#a,!-a0)-,!$ 2-# p1$(#-0a

3l +en"ro de ines"ia+i/n y es"!dios aan(ados del IP I3STA Unidad

Irap!a"o, espe+$fi+amen"e en el 4abora"orio de %esarrollo y %iferen+ia+i/n de

)onos. !bi+ado en el m. ;.B de la arre"era Irap!a"o>4e/n, es !na ins"i"!+i/n

federal la +!al se dedi+a a reali(ar ines"ia+i/n b#si+a en plan"as.

3n di+ho labora"orio hay "raba*adores por proye+"o y es"!dian"es !e reali(an

s! "esis de li+en+ia"!ra, maes"r$a, do+"orado, los +!ales reali(an diersas

"'+ni+as de biolo$a mole+!lar +omo lo son: eC"ra++i/n de A% en/mi+o de

hono, eC"ra++i/n de RA, rea++i/n en +adena de la polimerasa, rea++iones de

res"ri++i/n +on en(imas, lia+iones de framen"os de A%, +orrimien"o de

eles, hibrida+i/n de A% +on radia+"iiada Fnor"hern, so!"hern, en"re o"ras,

!na de las "'+ni+as m#s !"ili(adas es la eC"ra++i/n de A% plasm$di+o, !e es

la eC"ra++i/n de #+ido desoCirribon!+lei+o de ba+"erias.

3n el labora"orio para eC"raer de A% plasm$di+o, los es"!dian"es se basan en

"res diferen"es "'+ni+as, las +!ales se reali(an +on diferen"es rea+"ios en

eneral, o si es el mismo rea+"io en +an"idades diferen"es.

3s"e proye+"o se llear# a +abo en +!a"ro meses en el labora"orio men+ionado,

ba*o el finan+iamien"o de OA5T I3IAS LSIAS ?;6H, por lo !e no

habr# apor"a+i/n personal de +api"al.

3n +on+l!si/n la pre!n"a a +on"es"ar es la si!ien"e:

%e las "res "'+ni+as !"ili(adas para la eC"ra++i/n de A% plasm$di+o en el

labora"orio de desarrollo y diferen+ia+i/n de honos, del I3STA Unidad

Irap!a"o, p!ede me*orar la prod!+"iidad en la opera+i/n red!+iendo el +os"o

o el "iempo si se reali(a solo al!na de ellas


22/40

4'3' A#*a,*-.

3l "ipo de al+an+e ser# eCpli+a"io b!s+a en+on"rar las ra(ones o +a!sas !e

o+asionan +ier"os fen/menos. S! ob*e"io Dl"imo es eCpli+ar por !e o+!rre !n

fen/meno y en !e +ondi+iones se da. 3s"#n orien"ados a la +omproba+i/n de

hip/"esis +a!sales de "er+er radoE es"o es, iden"ifi+a+i/n y an#lisis de las

+a!sales Fariables independien"es y s!s res!l"ados, los !e eCpresan en

he+hos erifi+ables Fariables dependien"es

4'4 H)p+!-.).

)o: 3l +os"o de eC"ra++i/n de A% plasm$di+o es el mismo por +!al!iera de

las "res "'+ni+as !"ili(adas.

)i: 3l +os"o de eC"ra++i/n de A% plasm$di+o es diferen"e por lo menos para

!na de las "'+ni+as !"ili(adas

ariable:

%ependien"e N

Independien"e

Indi+ador de la

ariable

Tipo de

7edi+i/n

iel de

medi+i/nos"o %ependien"e %inero on"in!a Ra(/n

T'+ni+a deeC"ra++i/n deA%

Independien"e Dmero %is+re"a ominal


23/40

4'6 I,.!1"0-,!a*)+,

4a obsera+i/n se emplear# al prin+ipio de la ines"ia+i/n, ya !e es +on es"a

+on la !e se form!l/ +!al era el problema a sol!+ionar y "ambi'n se llear# a

+abo en el pro+eso de la ines"ia+i/n +!ando se obsere la reali(a+i/n de las

6 "'+ni+as de eC"ra++i/n de %A reali(adas por los in"eran"es del labora"orio.

3l +!es"ionario se llear# a +abo +!ando se pre!n"e a los in"eran"es del

labora"orio +!al es la "'+ni+a !e !"ili(an, !' modifi+a+iones le han reali(ado,

el "iempo !e emplean en reali(arla.


24/40

4'7 S-#-**)+, 2- #a 0"-.!1a

3n la sele++i/n de la m!es"ra la pobla+i/n ser#n los in"eran"es del labora"orio

de %esarrollo y %iferen+ia+i/n de )onos del %epar"amen"o de Inenier$a

Gen'"i+a del en"ro de Ines"ia+i/n y 3s"!dios Aan(ados del IP !e

reali(an al!nas de las 6 "'+ni+as de eC"ra++i/n de %A plasm$di+o.

4'8 A,;#).). 2- #a 0"-.!1a

4a sele++i/n de la m!es"ra se "omar#n los da"os de por lo menos 20

reali(a+iones de +ada "'+ni+a. 3l m!es"reo se har# al a(ar, la pobla+i/n ser#n

los in"eran"es del labora"orio !e reali(an las "'+ni+as de eC"ra++i/n de %A

plasm$di+o.

4'8 P1$*-2)0)-,!$.

Re+!rsos a !"ili(ar

)!manos

4os in"eran"es del labora"orio de desarrollo y diferen+ia+i/n de hono

in+l!y'ndome.

7a"eriales

I,.!1"0-,!$.


25/40

Impresora

A!"o+lae

en"r$f!a "!bos eppendorf

TermomiCer

In+!badora

Refrierador

onelador

Transil!minador

3spe+"rofo"/me"ro

Po"en+i/me"ro

alan(a anal$"i+a

ron/me"ro

Parrilla

or"eC

7illiX

Ma!-1)a#

7i+ropipe"as

Pipe"as

Probe"as

asos de pre+ipi"ado


26/40

a*as pe"ri

@ras+os

T!bos fal+on

T!bos eppendorf

Asa de +!l"io

3sp#"!la de idrio

G!an"es

Papel de es"ra(a

Papel al!minio

Papel fil"ro

Toallas de papel

3apa+Y

Tapones de asa y alod/n


27/40

@inan+ieros

4os ma"eriales ser#n propor+ionados por el proye+"o de OA5T

Infraes"r!+"!ra

3l proye+"o se llear# a +abo en las ins"ala+iones del I3STA !nidad

Irap!a"o.

3n el pro+edimien"o se elaborar# !n +!es"ionario el +!al in+l!ya el nombre de

la "'+ni+a, el "iempo de d!ra+i/n de la misma, el +os"o de los rea+"ios y el

e!ipo !"ili(ado.

4'8 R-*$#-**)+, 2- 2a!$.

4a re+ole++i/n de los da"os se llear# a +abo median"e la obsera+i/n de la

reali(a+i/n de las "'+ni+as, los +!es"ionarios. Fer AneCo


28/40

CAPTULO 6' AN5LISIS DE LA INFORMACIN

6'% A,;#).). - ),!-1p1-!a*)+, 2- 1-."#!a2$.

7edian"e el an#lisis de los da"os p!dimos +al+!lar +!al es el "iempo empleado

por diferen"es personas para la reali(a+i/n de +ada !na de las "'+ni+as +omo

se m!es"ra en la "abla 1.3l an#lisis de los da"os se lleo a +abo median"e el

prorama de eC+ell.

3l +os"o de los rea+"ios se reali(/ +on la ay!da de f/rm!las de !$mi+a

anal$"i+a +omo lo son molariadad, normalidad, e"+. omo se obsera en los

+#l+!los. 4os res!l"ados ob"enidos f!e !e la T'+ni+a 1 es la de menor +os"o

en rea+"ios Fer Tabla 2, la !e le si!i/ f!e la T'+ni+a 6 +on !n +os"o de

Fer "abla ? y la de mayor +os"o f!e la T'+ni+a 2 +on !n +os"o de Fer "abla 6

T'+ni+a 1

Sol!+i/n I irnboim F20 mi+roli"ros

TrisM F121.1? rNmol F0.0molNl F0.0002lM 0.000116

Sol!+i/n II irnboim F600 mi+roli"ros

aO)M F?0rNmol F0.2molNl F0.0006l M 0.002?

S%SM F1r F0.6mlM 0.006

Sol!+i/n III irnboim F600 mi+roli"ros

A+e"a"o de po"asioM F;K.1? rNmol F6molNl F0.0006lM 0.0KK62B

Isopropanol F00 mi+roli"ros

T'+ni+a 2

@osfa"o de sodioM F1B6.;? rNmol F0.1molNl F0.0006lM 0.00?;1K2


29/40

lor!ro de sodioM FK.?? rNmol F0.molNl F0.000lM 0.01?B1

Polie"ilenli+ol B000 al 10

3"anol al H0 F00 mi+roli"rosM F0.ml FH0ml N100mlM 0.6ml

6'3 P1-.-,!a*)+, 2- 1-."#!a2$.

Tiempo en minutos utilizado en la realizacin de

cada tcnica

MuestraTcnica 1Birnmboim

Tcnica 2Humphreys Tcnica 3

1 70 70 60

2 7 72 62

3 73 6! "

# 72 7 61

76 6" 6#

6 7" 77 61

7 7 72 "! !0 7# 62

" 7# 6" 60

10 7! 76 !

11 6" 72 6#

12 6! 7 66

13 70 73 62

1# 72 71 6

1 7 70 61

16 !# 72 6"

17 !0 77 6!1! !2 7" 67

1" !1 !0 70

20 !3 7! 71

21 71 76 6

22 77 7! 67

23 7 !2 63

2# 6" !1 6"

2 73 !2 62

26 72 7! 63

27 76 77 672! 70 7 6


30/40

2" 7 7" 61

30 7# 73 60

$arianza 1"%307#71 16

12%76!"6

Ta(#a %

G1;?)*a %

Tcnica 1

Reactivo

Concentraci

n Cantidad

Costo

Dolares

Tris 0mM 0%00113& 0%000#60

'cido clorh(drico 12%3") 0%02367& 0%0277Hidr*ido desodio 200mM 0%002#& 0%0021312

+,+ 1- 0%003& 0%00336

.cetato depotasio 3M 0%0!!326& 0%02#!1"606

/sopropanol 100- 0%1ml 0%1672!

.lcohol et(lico 100- 0%3ml 0%112

Total

0%376"1306

Anual 60%31220!

Tabla 2


31/40

Tcnica 2

Reactivo

Concentraci

n Cantidad Costo

osato de sodio 0%1M 0%00#"1!2& 0%0002#6!"

Bri! 1- 0%003& 0%00106

loruro de sodio 0%M 0%01#61& 0%00107!21!4olietilen&licol6000 10- 0%0!& 0%0736

Tris 0mM 0%00302!& 0%000"2"7

5,T. Mm 0%0007306& 0%000721!33

loruro de sodio 0%0M 0%001#61& 0%000107!22

loruro de cesio 7%7M 0%32#61 2%0"6""

Total 2%176#""12

Anual 3#!%23""2

Ta(#a 4

Tcnica 3

Reactivo

Concentraci

n Cantidad Costo

Hidr*ido desodio 0%1) 0%012& 0%0106

+,+ 1- 0%001& 0%0016!.cetato deamonio 7%M 0%1162& 0%2!3!#71

/sopropanol 100- 0%33ml 0%10!2#

.lcohol et(lico 100- 0%3ml 0%112

Total 0%6171

Anual !!%!"!73


32/40

Ta(#a 6

CAPTULO 7' INTERVENCIN

3l Proye+"o +omen(/ desde el mes de mar(o ya !e se "en$an !e obserar

los "iempos para la reali(a+i/n de las "'+ni+as de eC"ra++i/n de %A plasm$di+o

y es"as se reali(an aproCimadamen"e a la semana, se apli+/ el +!es"ionario y

se +ronome"r/ el "iempo para +ada !na de las "'+ni+as, las "'+ni+as !e se

es+oieron f!eron las reali(adas en el labora"orio por m#s in"eran"es dellabora"orio de %esarrollo y %iferen+ia+i/n de )onos, desp!'s de "ener los

da"os se +al+!laron los +os"os en rea+"ios de +ada !na de las "'+ni+as. 3n"re

las modifi+a+iones !e se reali(aron a las "'+ni+as f!eron en la T'+ni+a 1 el

"iempo en hielo de 10 min se p!do ba*ar min, en la T'+ni+a 2 se p!ede

modifi+ar el "iempo de in+!ba+i/n de 2 horas a 1 hora., desp!'s de di+has

modifi+a+iones se +omprob/ !e la eC"ra++i/n de %A plasm$di+o f!era de

+alidad median"e la +orrida de el de aarosa en !na +#mara de ele+"roforesispara er la in"eridad del %A +omo se m!es"ra en la @o"oraf$a 2. on los

res!l"ados ob"enidos se p!do eleir la me*or T'+ni+a de eC"ra++i/n de %A

plasm$di+o para reali(ar en el 4abora"orio siendo la T'+ni+a 1 irnmboin por s!

ba*o +os"o y "iempo a+ep"able de d!ra+i/n, +on lo !e el labora"orio podr#

ahorrar re+!rsos e+on/mi+os de 2K.K dolares an!ales por +ada rea++i/n en

+ompara+i/n +on la T'+ni+a 6 y 2KH.;2 dolares an!ales por +ada rea++i/n en

+ompara+i/n +on la T'+ni+a 2.


33/40

@o"oraf$a o.2

CONCLUSIONES

%esp!'s de eal!ar las "res "'+ni+as de eC"ra++i/n de %A plasm$di+o se

en+on"r/:

X!e la T'+ni+a 1 es la de menor +os"o en rea+"ios.

X!e la T'+ni+a 6 es en la !e se inier"e menor "iempo para s!reali(a+i/n.

X!e en la T'+ni+a 2 se p!ede modifi+ar el "iempo de in+!ba+i/n de 2

horas a 1 hora.

X!e en la T'+ni+a 1 se p!ede modifi+ar el "iempo en hielo de 10 min a

min.


34/40

BIBLIOGRAFA

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#a I,9-,)-1a E2)!$1)a# M* G1a H)##

h""p:NNJJJ.es"iopolis.+omN+analesNe+oN"iposes"!.h"m

APNDICE O ANEXOS

AneCo 1

CUESTIONARIO

ombre:

ZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZ

@e+ha:ZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZ


36/40

T'+ni+a de eC"ra++i/n de %A plasm$di+o 1 ZZZ 2ZZZ 6ZZZ

Tiempo de reali(a+i/n de la "'+ni+a: ZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZ

Rea+"ios !"ili(ados: ZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZ


os"o de los rea+"ios !"ili(ados: ZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZ

3!ipo !"ili(ado:

ZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZ


7odifi+a+iones reali(adas a la "'+ni+a: ZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZ


Obsera+iones:ZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZZ


A3=O 1

7edio 4 F7edio 4!ria er"ani

Rea+"ios an"idad

3C"ra+"o de lead!ra 0.

a+"o "ris"ona 1

lor!ro de Sodio 1


37/40

Se a*!s"a el p) a H.2 [ H.? +on )idr/Cido de sodio

AneCo 6

4is"a de Pre+ios de Rea+"ios en d/lares Fa"#loo SIG7A 2010

Reactivo

Presentaci

n

Costo en

dolares

.cetato de amonio 100& 2#%0

.cetato de potasio 100& 2!%10

'cido clorh(drico 00ml !%!0


38/40

.lcohol et(lico 100ml #3%20

Bri! 100& 3%0

loruro de cesio 0& 323%00

loruro de sodio 00& 36%"0

5,T. 2& 2#%70

osato de sodio 00& 2%10

Hidr*ido de sodio 100& !!%!0

/sopropanol 100ml 32%!0

4olietilen&licol6000 1000& "#2%00

+,+ 100& 112%00

Tris 100& 30%70

4ISTA %3 AR3IATURAS

rpm Reol!+iones por min!"o

%A L+ido desoCirribon!+lei+o

3%TA L+ido e"ilenli+olamino"e"raa+'"i+o

m miliramo

ml milili"ro


39/40

m7 milimolar

7 molar

normal

S%S %!ode+ils!lfa"os/di+o

Tris TrisFhidroCime"ilaminome"ano

G4OSARIO

A% FLI%O %3SO=IRRIOU43IO

7ol'+!la !e +odifi+a la informa+i/n en'"i+a median"e la se+!en+ia de bases

Adenina, i"osina, G!anina y Tiamina. 3l %A +onsis"e en dos +adenas

polin!+leo"$di+as. 4os r!pos a(D+ar>fosfa"o de +ada +adena polin!+leo"$di+a

se en+!en"ra en el eC"erior de la mol'+!la y las bases en s! in"erior.


40/40

3PA SI43STR3 FJild "ype

epa !e +on"iene la +ara+"er$s"i+a o alelo !e se presen"a m#s +omDnmen"e

en pobla+iones na"!rales Fsiles"re.

343TRO@OR3SIS 3 G34

T'+ni+a para separar mol'+!las +aradas F+omo las pro"e$nas o los #+idos

n!+lei+os sobre la base del "ama-o, de la +ara mole+!lar o de ambos.

G3

@a+"or en'"i+o !e +on"rib!ye a de"erminar !na +ara+"er$s"i+aE a men!do se

define a niel mole+!lar +omo !na se+!en+ia de %A !e se "rans+ribe en !na

mol'+!la de RA.

P4LS7I%O

7ol'+!la de %A +ir+!lar pe!e-a presen"e en las ba+"erias !e es +apa( de

repli+arse independien"emen"e del +romosoma ba+"eriano.

Documents

Teisis Yesenia Ruiz Rodriguez[1]