Teori DasarAir merupakan senyawa kimia yang sangat penting
fungsinya bagi kehidupan umat manusia dan mahkluk hidup lainnya.
Air yang dibutuhkan manusia meliputi air layak pakai yang bersih
dan sehat untuk keperluan memasak, mencuci, dan mandi serta air
yang layak konsumsi untuk keperluan minum. Air juga dapat berperan
sebagai media penularan penyakit. Air merupakan media dan
lingkungan yang baik untuk kehidupan mikroorganisme baik itu
mikroorganisme patogen maupun non pathogen (Rumondor, 2014).Air
minum adalah air yang melalui proses pengolahan atau tanpa proses
pengolahan yang memenuhi syarat kesehatan dan dapat langsung
diminum. Air minum aman bagi kesehatan apabila memenuhi persyaratan
fisika, mikrobiologis, kimiawi, dan radioaktif. Parameter wajib
penentuan kualitas air minum secara mikrobiologi adalah total
bakteri Coliform dan Escherichia coli. Pengamatan bakteri dapat
dilakukan secara individual, satu per satu, maupun secara kelompok
dalam bentuk koloni. Bila bakteri yang ditumbuhkan di dalam medium
yang tidak cair, maka akan terjadi suatu kelompok yang dinamakan
koloni. Bentuk koloni berbeda-beda untuk setiap spesies, dan bentuk
tersebut merupakan ciri khas bagi suatu spesies tertentu (Waluyo
Lud, 2008).Analisis bakteri khususnya pada bahan makanan dapat di
lakukan secara kuantitatif dan kualitatif. Analisis kuantitatif
bakteri pada bahan pangan penting dilakukan untuk mengetahui mutu
bahan pangan dan menghitung proses pengawetan yang akan diterapkan
pada bahan pangan tersebut(Waluyo Lud, 2008).Total Plate Count
(TPC) merupakan salah satu metode yang dapat digunakan untuk
menghitung jumlah mikroba dalam bahan pangan. Metode hitungan cawan
(TPC) merupakan metode yang paling banyak digunakan dalam analisa,
karena koloni dapat dilihat langsung dengan mata tanpa menggunakan
mikroskop. Untuk menghitung total bakteri dengan metode cawan
digunakan Nutrient Agar (NA). Standard plate count dipergunakan
untuk menentukan kerapatan bakteri aerob dan anaerob fakultatif
heterotrop dari air. Penentuan dengan cara ini merupakan pengukuran
empiris saja, oleh karena tiap spesies bakteri membentuk koloni
tersendiri dalam pertumbuhannya. Semua bakteri dari sampel akan
tumbuh pada media tertentu dan setiap golongan bakteri akan tumbuh
menjadi satu koloni yang spesifik, sehingga jumlah bakteri dapat
diketahui dengan menghitung jumlah koloni. Pada umumnya dibutuhkan
pengenceran sampel, yang tergantung dari perkiraan populasi
bakteri. Semakin tercemar suatu badan air, semakin tinggi
konsentrasi bakteri dan semakin kecil volume sampel yang
diperlukan, agar jumlah koloni dapat dihitung. Air pengencer yang
digunakan harus selalu mengandung garam nutrient (Nurhayati dan
Isye, 2013).Dari masing-masing hasil pengenceran sampel dipipet 1,0
ml ke dalam cawan Petri steril, kemudian dituangkan 15-20 ml media
Plate Count Agar (PCA), yang telah dicairkan dan didinginkan hingga
temperaturnya 45C. Cawan Petri segera digoyang dan diputar sampai
media tersebar merata dan homogen. Percobaan dilakukan secara duplo
dan disertakan cawan Petri yang mengandung media dan larutan
pengencer yang tidak mengandung sampel sebagai kontrol uji
(blanko). Setelah media membeku, inkubasi cawan petri pada suhu 37C
selama 24 jam dengan posisi terbalik. Dihitung koloni yang tumbuh
pada setiap cawan petri. Angka total bakteri dalam 1 ml sampel
adalah dengan mengalikan jumlah rata-rata koloni pada cawan petri
dengan faktor pengenceran yang digunakan (Radji, et al,
2008).Secara umum, metode penanaman dapat dibedakan atas dua macam
yaitu metode tuang (pour plate) dan metode sebar (spread plate).
Bakteri akan bereproduksi pada medium agar dan membentuk koloni
setelah 18-24 jam inkubasi. Untuk menghitung jumlah koloni dalam
cawan petri dapat digunakan alat colony counter yang biasanya
dilengkapi dengan pencatat elektronik (Nurhayati dan Isye,
2013).Prinsip dari metode hitungan cawan adalah menumbuhkan sel
mikroba yang masih hidup pada metode agar, sehingga sel mikroba
tersebut akan berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat
dilihat langsung dengan mata tanpa menggunakan mikroskop. Untuk
memenuhi persyaratan statistik, cawan yang dipilih untuk dihitung
mengandung 30-300 koloni. Untuk memenuhi persyaratan tersebut
dilakukan sederatan pengenceran dan pencawan. Jumlah mikroba dalam
sampel ditentukan dengan mengalikan jumlah koloni dengan faktor
pengenceran pada cawan yang bersangkutan. Satuan yang digunakan
untuk menyatakan jumlah koloni atau bakteri adalah cfu/mL (cfu
=colony forming units)(Waluyo Lud, 2008).Laporan dari hasil
menghitung dengan cara hitungan cawan menggunakan suatu standar
yang disebut Standar Plate Count (SPC) sebagai berikut:1. Cawan
yang dipilih dan dihitung adalah yang mengandung jumlah koloni
antara 30-300, jika tidak ada yang memenuhi syarat dipilih yang
jumlahnya mendekati 300. 2. Beberapa koloni yang bergabung menjadi
satu merupakan suatu kumpulan koloni yang besar dimana jumlah
koloninya diragukan, dapat dihitung sebagai satu koloni. 3. Suatu
deretan rantai koloni yang terlihat sebagai suatu garis tebal
dihitung sebagai satu koloni. 4. Perbandingan jumlah bakteri hasil
pengenceran yang berturut-turut antara pengenceran yang lebih besar
dengan pengenceran sebelumnya, jika sama atau lebih kecil dari 2
hasilnya dirata- rata. Tetapi jika lebih besar dari 2 yang dipakai
jumlah mikroba dari hasil pengenceran sebelumnya. 5. Tidak ada
koloni yang menutup lebih besar dari setengah luas petri disk,
koloni demikian dinamakan spreader. 6. Jika dengan ulangan setelah
memenuhi syarat hasilnya dirata-rata (Waluyo Lud, 2008).Dalam SPC
ditentukan cara pelaporan dan perhitungan koloni sebagai berikut:
1. Hasil yang dilaporkan hanya terdiri dari dua angka, yakni angka
pertama (satuan) dan angka kedua (desimal). Jika angka ketiga sama
dengan atau lebih besar dari 5, harus dibulatkan satu angka lebih
tinggi pada angka kedua, sebagai contoh, didapatkan 1,7 x 104 unit
koloni/ml atau 2,0 x 106 unit koloni/ml.2. Jika pada semua
pengenceran dihasilkan kurang dari 30 koloni per cawan petri,
berarti pengenceran yang dilakukan terlalu tinggi. Karena itu,
jumlah koloni pada pengenceran yang terendah yang dihitung.
Hasilnya dilaporkan sebagai kurang dari 30 dikalikan dengan
besarnya pengenceran, tetapi jumlah yang sebenarnya harus
dicantumkan di dalam tanda kurung. 3. Jika pada semua pengenceran
dihasilkan lebih dari 300 koloni pada cawan petri, berarti
pengenceran yang dilakukan terlalu rendah. Karena itu, jumlah
koloni pada pengenceran yang tertinggi yang dihitung. Hasilnya
dilaporkan sebagai lebih dari 300 dikalikan dengan faktor
pengenceran, tetapi jumlah yang sebenarnya harus dicantumkan di
dalam tanda kurung. 4. Jika jumlah cawan cawan dari dua tingkat
pengenceran dihasilkan koloni dengan jumlah antara 30 dan 300, dan
perbandingan antara hasil tertinggi dan terendah dari kedua
pengenceran tersebut lebih kecil atau sama dengan dua, dilaporkan
rata-rata dari kedua nilai tersebut dengan memperhitungkan faktor
pengenceran. Jika perbandingan antara hasil tertinggi dan terendah
lebih besar daripada 2, yang dilaporkan hanya hasil yang terkecil.
5. Jika digunakan dua cawan petri (duplo) per pengenceran data yang
diambil harus dari kedua cawan tersebut, tidak boleh salah satu.
Oleh karena itu, harus dipilih tingkat pengenceran yang
menghasilkan kedua cawan duplo dengan koloni antara 30 dan 300
(Waluyo Lud, 2008).Perhitungan jumlah bakteri dengan metode Total
Plate Count (Metode hitung cawan). Prinsip dari metode ini adalah
jasad renik yang masih hidup ditumbuhkan pada medium agar , maka
sel tersebut akan berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat
dilihat langsung dan dihitung dengan mata tanpa menggunakan
mikroskop ( Purwa, et al, 2012)
DAFTAR PUSTAKANurhayati dan Isye. Analisis Degradasi Polutan
Limbah Cair Pengolahan Rajungan (Portunus Pelagicus) Dengan
Penggunaan Mikroba Komersial. Jurnal Ilmiah Fakultas Teknik LIMITs,
Vol. 9, No. 2 Purwa, Junianto dan Titin Herawati. 2012.
Karakteristik Bakteri Caviar nilem dalam Pendalaman Campuran
Larutan Asam Asetat dengan Larutan Garam Pada Penyimpanan Suhu
Rendah (5-10 C). Jurnal Perikanan dan Kelautan, Vol.3, No. 4Radji,
Heria dan Herman Suryadi. 2008. Pemeriksaan Bakteriologis Air Minum
Isi Ulang Di Beberapa Depo Air Minum Isi Ulang Di Daerah Lenteng
Agung Dan Srengseng Sawah Jakarta Selatan. Majalah Ilmu
Kefarmasian, Vol. V, No. 2Rumondor, John Porotuo dan Olivia
Waworuntu. 2014. Identifikasi Bakteri Pada Depot Air Minum Isi
Ulang Di Kota Manado. Jurnal e-Biomedik (eBM), Vol.2, No.2 Waluyo,
Lud. 2008.Teknik dan Metode Dasar Dalam Mikrobiologi. Malang:UMM
Press.
