TEORI DASAR HPLC.docx

8/17/2019 TEORI DASAR HPLC.docx

1/20

TEORI DASAR HPLC

Kromatografi merupakan suatu cara pemisahan unsur-unsur yang akan

dipisahkan terdistribusikan antara dua fasa, satu dari fasa-fasa ini membentuk

suatu lapisan stasioner dengan luas permukaan yang besar dan yang lainnya

merupakan cairan yang merembes lewat atau melalui fase yang stasioner. Fasa

stasioner mugkin suatu zat padat atau suatu cairan, dan fasa yang bergerak

mungkin suatu cairan atau suatu gas. Maka semua jenis kromatografi yang

dikenal, terbagi menjadi empat golongan: cair-padat, gas-padat, cair-cair, dan gas-

cair.

embahasan teknik kromatografi modern baru lengkap bila disebut

kromatografi cairan kinerja tinggi !"#$%. Kromatografi cairan kolom klasik

merupakan prosedur pemisahan yang sudah mapan dalam mana fase cair yangmobil mengalir lambat-lambat lewat kolom karena gra&itasi. 'mumnya metode

itu dicirikan oleh efisiensi kolom yang rendah dan waktu pemisahan yang lama.

(amun sejak kira-kira tahun )*+*, perhatian dalam teknik kolom cairan hidup

kembali dengan sangat menyolok karena dikembangkannya sistem tekanan tinggi

oleh Kirchland dan "uber, yang bekerja pada tekanan sampai , / ) (m-

!0 p.s.i%. 1alam metode ini digunakan kolom berdiameter kecil !)-0 mm% dan

eluen dipompakan ke dalamnya dengan laju alir yang tinggi !sekitar )-2 cm 0m-)%.

emisahan dengan metode ini dilakukan jauh lebih cepat !sekitar ) kali lebih

cepat% daripada dengan kromatografi cairan yang biasa. Meskipun peralatan yang

tersedia di pasar dewasa ini agak mahal, "#$ telah terbukti luas penggunaannya

dalam kimia organik.

'mumnya metode kromatografi seperti adsorpsi, partisi, dan penukar ion

adalah contoh-contoh dari kromatografi kolom. ada metode kromatografi cair ini

digunakan kolom tabung gelas dengan bermacam diameter. artikel dengan

dimensi yang ber&ariasi digunakan sebagai penunjang stasioner. 3anyaknya cairan

pada kolom jumlahnya sedemikian rupa sehingga hanya cukup menghasilkan

sedikit tekanan untuk memelihara aliran fase bergerak yang seragam. 4ecara

keseluruhan pemisahan ini memakan waktu lama. 3erbagai usaha telah dilakukan

untuk menambah laju aliran tanpa mengubah tinggi piringan teoritis kolom.enurunan ukuran partikel penunjang stasioner tidak selalu menguntungkan.

Kromatografi cair kinerja tinggi atau high performance li5uid chromatography

!"#$% berbeda dari kromatografi cair klasik.

3ila dibandingkan terhadap kromatografi gas-cair6gas-li5uid

chromatography !7#$%, maka "#$ lebih bermanfaat untuk isolasi zat tidak

mudah menguap, demikian juga zat yang secara termal tidak stabil. 8etapi ditinjau

dari kecepatan dan kesederhanaan, 7$ lebih baik. Kedua teknik ini komplementer

satu sama lainnya, keduanya efisien, sangat selektif hanya memerlukan sampel

berjumlah sedikit serta keduanya dapat digunakan untuk analisis kuantitatif.


2/20

9khir-akhir ini, untuk pemurnian !misalnya untuk keperluan sintesis%

senyawa organik skala besar, "#$ !high precision li5uid chromatography atau

high performance li5uid chromatography% secara ekstensif digunakan. 3ila zat

melarut dengan pelarut yang cocok, zat tersebut dapat dianalisis. $iri teknik ini

adalah penggunaan tekanan tinggi untuk mengirim fasa mobil kedalam kolom.

1engan memberikan tekanan tinggi, laju dan efisiensi pemisahan dapat

ditingkatkan dengan besar. Kromatografi penukar ion menggunakan bahan

penukar ion sebagai fasa diam dan telah berhasil digunakan untuk analisis kation,

anion dan ion organik.


3/20


4/20

Kromatografi $air 8enaga 8inggi !K$K8% atau biasa juga disebut

dengan "igh erformance #i5uid $hromatography !"#$% merupakanmetode yang tidak destruktif dan dapat digunakan baik untuk analisis

kualitatif dan kuantitatif. K$K8 paling sering digunakan untuk :

menetapkan kadar senyawa-senyawa tertentu seperti asam-asam amino,

asam- asam nukleat, dan protein-protein dalam cairan fisiologis

menetukan kadar senyawa-senyawa aktif obat, produk hasil samping

proses sintesis, atau produk-produk degradasi dalam sediaan farmasi.

ada "#$ terdapat kolom terbuka yaitu : #ow pressure !tekanan

rendah%, dan "igh pressure !tekanan tinggi + bar biasanya memakaisatuan kpa6kilo paskal%. ada "#$ terdapat o&en untuk pemanas karena

pada partikel kecil, cairan ditekan terjadi gesekan maka digunakan

pendingin dan tekanan tinggi !cairan ditekan menggunakan pompa

kemudian didorong, jika ditarik cairan masuk%. 8ekanan harus + bar,

antara fase diam dan fase gerak terjadi gesekan sehingga temperatur

meningkat maka harus diturunkan !dengan pendingin liebig6 ion e/change%

karena ikatannya bisa lepas dan bisa juga terjadi bleeding. 8emperatur

pada "#$ digunakan untuk menjaga temperatur dalam kolom konstan

sehingga K1 tetap.

Jenis HPLC

emisahan dengan "#$ dapat dilakukan dengan fase normal !jika

fase diamnya lebih polar dibanding dengan fase geraknya% atau fase

terbalik !jika fase diamnya kurang non polar dibanding dengan fase

geraknya%. 3erdasarkan pada kedua pemisahan ini, sering kali "#$

dikelompokkan menjadi "#$ fase normal dan "#$ fase terbalik.

4elain klasifikasi di atas, "#$ juga dapat dikelompokkan

berdasarkan pada sifat fase diam dan atau berdasarkan pada mekanisme

sorpsi solut, dengan jenis-jenis "#$ sebagai berikut:

). Kromatografi 9dsorbsi

rinsip kromatografi adsorpsi telah diketahui sebagaimana

dalam kromatografi kolom dan kromatografi lapis tipis. emisahan

kromatografi adsorbsi biasanya menggunakan fase normal dengan

menggunakan fase diam silika gel dan alumina, meskipun demikian

sekitar *; kromatografi ini memakai silika sebagai fase diamnya.


5/20

ada silika dan alumina terdapat gugus hidroksi yang akan berinteraksi

dengan solut. 7ugus silanol pada silika mempunyai reaktifitas yang

berbeda, karenanya solut dapat terikat secara kuat sehingga dapat

menyebabkan puncak yang berekor.

. Kromatografi fase terikat

Kebanyakan fase diam kromatografi ini adalah silika yang

dimodifikasi secara kimiawi atau fase terikat. 4ejauh ini yang

digunakan untuk memodifikasi silika adalah hidrokarbon-hidrokarbon

non-polar seperti dengan oktadesilsilana, oktasilana, atau dengan fenil.

Fase diam yang paling populer digunakan adalah oktadesilsilan !


6/20

Kromatografi pasangan ion juga dapat digunakan untuk

pemisahan sampel-sampel ionik dan mengatasi masalah-masalah yang

melekat pada metode penukaran ion. 4ampel ionik ditutup dengan ion

yang mempunyai muatan yang berlawanan.

2. Kromatografi ?ksklusi 'kuran

Kromatografi ini disebut juga dengan kromatografi permiasi

gel dan dapat digunakan untuk memisahkan atau menganalisis

senyawa dengan berat molekul @ dalton. Fase diam yang

digunakan dapat berupa silika atau polimer yang bersifat porus

sehingga solut dapat melewati porus !lewat diantara partikel%, atau berdifusi lewat fase diam. Molekul solut yang mempunyai 3M yang

jauh lebih besar, akan terelusi terlebih dahulu, kemudian molekul-

molekul yang ukuran medium, dan terakhir adalah molekul yang jauh

lebih kecil. "al ini disebabkan solut dengan 3M yang besar tidak

melewati porus, akan tetapi lewat diantara partikel fase diam. 1engan

demikian, dalam pemisahan dengan eksklusi ukuran ini tidak terjadi

interaksi kimia antara solut dan fase diam seperti tipe kromatografi

yang lain.

+. Kromatografi 9finitas

1alam kasus ini, pemisahan terjadi karena interaksi-interaksi

biokimiawi yang sangat spesifik. Fase diam mengandung gugus-gugus

molekul yang hanya dapat menyerap sampel jika ada kondisi-kondisi

yang terkait dengan muatan dan sterik tertentu pada sampel yang

sesuai !sebagaimana dalam interaksi antara antigen dan antibodi%.

Kromatografi jenis ini dapat digunakan untuk mengisolasi protein

!enzim% dari campuran yang sangat kompleks.

8eknik "#$ lebih bermanfaat dibandingkan dengan 7$ !7as

$hromatography%.

Kelebihan dari teknik "#$ ini antara lain :

). "#$ dapat digunakan untuk isolasi zat yang tidak mudah menguap

dan zat yang tidak stabil.

. "#$ memiliki detector dengan kepekaan yang tinggi


7/20

0. 8eknik ini memiliki daya memisah yang tinggi

>. 1apat menganalisis sampel yang kecil kuantitasnya

2. 1alam "#$ dapat memberikan beberapa ribu lempeng teoritis hanya

dalam beberapa cm sehingga memungkinkan analisis kolom yang

sangat kecil !sedikit fase gerak yang dikonsumsi%

+. 3iaya pelarut jauh lebih rendah dibandingkan #$ kuno, sehingga dapat

menurunkan biaya karyawan.

. 8eknik "#$ dapat dilakukan pada suhu kamar.

9. AB(4B 1949A

Prinsip kerja HPLC :

1engan bantuan pompa fasa gerak air dialirkan melalui kolom ke

detector. $uplikan dimasukkan ke dalam aliran fasa gerak dengan cara

penyuntikan. 1i dalam kolom terjadi pemisahan komponen-komponen

ampuran. Karena perbedaan kekuatan interaksi antara solut-solut terhadap

fasa diam. 4olut-solut yang kurang kuat interaksinya dengan fasa diam

akan keluar dari kolom lebih dulu. 4ebaliknya, solute-solut yang kuat

berinteraksi dengan fasa diam maka solute-solut tersebut akan keluar dari

kolom lebih lama. 4etiap komponen campuran yang keluar kolom

dideteksi oleh detector kemudian direkam dalam bentuk kromatogram.


8/20

3. B(48A'M?( 9#98

Bnstrumentasi "#$ pada dasarnya terdiri atas: wadah fase gerak,

pompa, alat untuk memasukkan sampel !tempat injeksi%, kolom, detektor,

wadah penampung buangan fase gerak, dan suatu komputer atau integrator

atau perekam. 1iagram skematik sistem kromatografi cair seperti ini :

a. Fasa gerak Fasa gerak dalam "#$ adalah berupa zat cair dan disebut juga eluen atau

pelarut. 4elain berfungsi sebagai pembawa komponen-komponen

campuran campuran menuju detector, fasa gerak dapat berinteraksi dengan

solut-solut.


9/20

0. Cat air harus jernih sekali untuk menghindarkan penyumbatan pada

kolom.

>. Cat cair harus mudah diperoleh, murah, tidak mudah terbakar, dantidak beracun.

2. Cat air tidak kental. 'mumnya kekentalan tidak melebihi ,2 c !centi

oise%.

+. 4esuai dengan detector.

Jenis fasa gerak berdasarkan kepolaran fasa diam dan fasa

gerak:

a% "#$ fasa normal: "#$ dengan kombinasi antara fasa diam polar

dan fasa gerak non-polar. Fasa diam yang digunakan seperti silica,

alumina, atau trietilenaglikol yang dilapiskan pada partikel silica.

4edangkan fasa gerak yang digunakan adalah heksana atau i-propileter.

b% "#$ fasa terbalik: "#$ dengan kombinasi antara fasa diam non-

polar dan fasa gerak polar. Fasa gerak yang digunakan seperti air,

methanol, atau asetinitril.

Fasa gerak yang baik memberikan factor kapasitas kD pada rentang yang

sesuai. 'ntuk cuplikan dengan -0 komponen, sebaiknya menggunakan

fasa gerak yang memberikan kD antara -2.

b. ompa

ompa dalam "#$ dapat dianalogkan dengan jantung pada manusia

yang berfungsi untuk mengalirkan fasa gerak cair melalui kolom yang

berisi serbuk halus.

ersyaratan pompa yang digunakan dalam "#$:

). Menghasilkan tekanan sampai +psi !point6in%

. Keluaran bebas pulsa

0. Kecepatan alir berkisar antara ,)-) ml6menit

>. 3ahan tahan korosi

Tiga jenis pompa ang dig!nakan dalam HPLC:

a% ompa reciprocating

ompa ini terdiri dari ruangan kecil tempat pelarut yang dipompa

dengan cara gerakan piston mundur-maju yang dijalankan oleh motor.

iston berupa gelas dan berkontak langsung dengan pelarut. Ketika

piston mundur maka bola gelas bawah terangkat dan pelarut masuk,

sebaliknya ketika piston maju maka bola bawah menutup saluran

pelarut dan pelarut yang telah berada di ruang pompa didorong masuk

ke dalam kolom.


10/20

b% ompa displacement

ompa ini menyerupai syringe !alat suntik% terdiri dari tabung yang

dilengkapi pendorong yang digerakkan oleh motor. ompa ini juga

menghasilkan aliran yang cenderung tidak bergantung pada tekanan

balik kolom dan &iskositas pelarut.

c% ompa pneumatic

1alam pompa ini pelarut didorong oleh gas bertekanan tinggi. ompa

jenis ini murah dan bebas pulsa. 9kan tetapi mempunya keterbatasan

kapasitas dan tekanan yang dihasilkan !E psi% serta kecepatan alir

bergantung pada &iskositas pelarut dan takanan balik kolom.

c. emasukan cuplikan

3eberapa teknik pemasukan cuplikan ke dalam system "#$:

). Bnjeksi syringe

4yringe disuntikan melalui septum !seal karet% dan untuk ini dirancang

syringe yang tahan tekanan sampai )2 psi. akan tetapi keterulangan

injeksi syringe ini sedikitb lebih baik dari -0; dan sering lebih jelek.

. Bnjeksi stop-flowD

Bnjeksi ini adalah jenis injeksi syringe kedua tapi di sini aliran pelarutdihentikan sementara, sambungan pada ujung kolom dibuka dan

cuplikan disuntikan langsung ke dalam ujung kolom. 4etelah

menyambungkan kembali kolom maka pelarut dialirkan kembali.

0. Kran cuplikan

Genis pemasukan uplikan ini disebut juga loop. 'ntuk memasukkan

cuplikan ke dalam aliran fasa gerak perlu dua langkah:

a% 4ejumlah &olume cuplikan disuntikkan ke dalam loop dalam posisi

HloadI, cuplikan masih berada dalam loop

b% Kran diputar untuk mengubah posisi HloadI menjadi posisi

HinjeksiI dan fasa gerak membawa cuplikan ke dalam kolom.


11/20

d. Kolom dan Fase diam

9da jenis kolom pada "#$ yaitu kolom kon&ensional dan

kolom mikrobor. Kolom merupakan bagian "#$ yang mana terdapat

fase diam untuk berlangsungnya proses pemisahan solut6analit.

Kolom mikrobor mempunyai 0 keuntungan yang utama dibanding dengan

kolom kon&ensional, yakni:

a% Konsumsi fase gerak kolom mikrobor hanya =; atau lebih kecildibanding dengan kolom kon&ensional karena pada kolom mikrobor

kecepatan alir fase gerak lebih lambat !) -) Jl6menit%.

b% 9danya aliran fase gerak yang lebih lambat membuat kolom mikrobor

lebih ideal jika digabung dengan spektrometer massa.

c% 4ensiti&itas kolom mikrobor ditingkatkan karena solut lebih pekat,

karenanya jenis kolom ini sangat bermanfaat jika jumlah sampel

terbatas misal sampel klinis.


12/20

Meskipun demikian, dalam prakteknya, kolom mikrobor ini tidak setahan

kolom kon&ensional dan kurang bermanfaat untuk analisis rutin.

Kebanyakan fase diam pada "#$ berupa silika yang dimodifikasi

secara kimiawi, silika yang tidak dimodifikasi, atau polimer-polimer stiren

dan di&inil benzen. ermukaan silika adalah polar dan sedikit asam karena

adanya residu gugus silanol !4i-


13/20

1etektor pada "#$ dikelompokkan menjadi golongan yaitu:

detektor uni&ersal !yang mampu mendeteksi zat secara umum, tidak

bersifat spesifik, dan tidak bersifat selektif% seperti detektor indeks bias

dan detektor spektrometri massa dan golongan detektor yang spesifik

yang hanya akan mendeteksi analit secara spesifik dan selektif, seperti

detektor '-is, detektor fluoresensi, dan elektrokimia.

Bdealnya, suatu detektor harus mempunyai karakteristik sebagai

berikut:

a. mempunyai respon terhadap solut yang cepat dan reprodusibel

b. mempunyai sensitifitas yang tinggi, yakni mampu mendeteksi solut

pada kadar yang sangat kecil

c. stabil dalam pengopersiannya

d. mempunyai sel &olume yang kecil sehingga mampu meminimalkan

pelebaran pita

e. signal yang dihasilkan berbanding lurus dengan konsentrasi solut pada

kisaran yang luas !kisaran dinamis linier%

f. tidak peka terhadap perubahan suhu dan kecepatan alir fase gerak.

Karakteristik detector "#$:

Dasar

Pendeteksian

Jenis Maksimum

sensitifitas

Peka terhadap

kecepatan alir

Sensitivitas

suhu

9bsorbsi ' 4pesifik / )-)+ 8idak Aendah

9bsorbsi BA 4pesifik )-+ 8idak Aendah

Flourometri 4pesifik )-)) 8idak Aendah


14/20

Bndek bias 'mum ) / )- 8idak L )-> $

Konduktometri 4pesifik )-= a ; $

4pektometri

massa

'mum )-) 8idak 8idak ada

elektrokimia 4pesifik )-) a ),2; $

$. 9(9#B49 K'9#B898BF dan K'9(8B898BF

9plikasi analisis "#$ adalah untuk penentuan kualitatif dan

penentuan kuantitatif. "#$ digunakan untuk analisa kualitatif didasarkan

pada waktu retensi untuk identifikasi. Bdentifikasi dapat diandalkan apabila

waktu retensi sampel dibandingkan dengan larutan standar.

4edangkan beberapa hal yang harus diperhatikan agar "#$ dapat

dipergunakan untuk penentuan secara kuantitatif adalah:

). arameter percobaan sama antara standar dan sampel

. enentuan berdasarkan waktu retensi sampel dan standar yang sama

0. enentuan kadar dilakukan berdasarkan hubungan !korelasi% dengan

menggunakan larutan standar seri pada waktu retensi tertentu. aitu

berdasarkan area kromatogram dan tinggi puncak kromatogram.

"asil analisa "#$ diperoleh dalam bentuk signal kromatogram.1alam kromatogram akan terdapat peak-peak yang menggambarkan

banyaknya jenis komponen dalam sample. 4ample yang mengandung

banyak komponen didalamnya akan mempunyai kromatogram dengan

banyak peak. 3ahkan tak jarang antar peak saling bertumpuk !o&erlap%.

"al ini akan menyulitkan dalam identifikasi dan perhitungan konsentrasi.


15/20

lebih mudah karena sedikit mengandung komponen selain zat aktif.

4ample ini umumnya hanya melalui proses pelarutan saja.

$ontoh hasil analisa "#$

4eperti pada kromatografi gas, jumlah peak menyatakan jumlah

kompone sedangkan luas peakmenyatakan konsentrasi komponen dalam

campuran. Komputer dapat digunakan untuk mengontrol kerja system

"#$ dan mengumpulkan serta mengolah data hasil pengukuran "#$.

?fisiensi kolom biasanya dinyatakan secara matematika dengan istilah plet

teori, konsep yang dipinjam dari teori distilasi. enerapannya dalam

kromatografi, jumlah teori plat (, untuk kolom ditentukan dari lebar peak

dan waktu retensi.

'ntuk peak-peak berbentuk simetri seperti terjadi pada kebanyakan

peak-peak kromatografi gas, jumlah teori plat dapat diformulasi sebagai:

N =5,55 t r

2

W 1

2

2


16/20

t r mena$akan %ak$! re$ensi dan

W 12 mena$akan le&er

peak pada se$enga& $inggi' Akan $e$api !n$!k peak(peak ang

$idak sime$ri disarankan mengg!nakan persamaan:

N =

41,7 ( t rW 0,1

)2

A

B+1,25

)ambar gra*k asime$ri:

Peak asime$ri dengan parame$er A dan + !n$!k

meng&i$!ng &araga ,' +erdasarkan gambar-t r adala& %ak$!

re$ensi-W

0,1 adala& lebar peak pada ke$inggian ./0 a$a!

A"+- A adala& lebar sebela& kanan- dan + adala& lebar se$enga&

peak sebela& kiri'

T!j!an !$ama dari kroma$ogra* 1airan kinerja $inggi sama

dengan kroma$ogra* gas adala& mendapa$ pemisa&an ang

semp!rna' Deraja$ pemisa&an 2Rs3 dalam kroma$ogra* 1air


17/20

kinerja $inggi(p!n dina$akan dengan is$ila& resol!si ang di

form!lasi sebagai berik!$:

Rs=√ N

4 ( α −1α )( k

2'

k 2

' +1 )

+erdasarkan persamaan di a$as- $erli&a$ ba&%a resol!si

dipengar!&i ole& $iga fa1$or ai$! efisiensi 2,3- selek$i4i$as 253-

dan re$ensi 2k63' lebi& seder&ana dari kroma$ogra* gas- di sini

selek$i4i$as 1!k!p dina$akan sebagai:

α =k 2

'

k 1'

Dimana:

α adala& selek$i4i$as, k 1'

dan k 2'

adala& masing(

masing fa1$or kapasi$as sena%a . dan sena%a 7' Harga

selek$i4i$as dapa$ sama dengan sa$! a$a! lebi& besar dari sa$!'

+ila &argaα =1

berar$i sena%a . dan 7 kel!ar dari kolom

bersama(sama' Dengan ka$a lain sena%a . $idak dapa$

dipisa&kan dari sena%a 7- sebalikna bila &arga α >1 maka

sena%a . kel!ar dari kolom lebi& 1epa$ dari pada sena%a 7'

Semakin besar &arga α - semakin baik pemisa&an'

Efsiensi Pemisahan:

Tingka$ e*siensi pemisa&an dengan kroma$ogra*

$er1ermin pada pek(peak kroma$ogram ang di&asilkan'

Semakin lebar s!a$! peak kroma$ogram maka dapa$ dika$akanpemisa&an semakin k!rang e*sien' Parame$er e*siensi

pemisa&an dina$akan dlam ben$!k HETP 2&eig&$ e8!i4alen$ $o a

$&eore$i1al pla$e3 ang diform!lasikan sebagai berik!$:

H = L

N

1imana: " : "?8 !height e5ui&alent to a theoretical plate%


18/20

# : panjang kolom dalam centimeter

( : jumlah total theoretical plate

(ilai " menunjukkan ukuran efisiensi yang diberikan kolom tiap

unit panjang kolom. (ilai " yang kecil menyatakan kolom yang lebih

efisien dan nilai ( yang besar.


19/20

. Bnteraksi yang lebih selektif dengan molekul sample kerena fasa gerak

dan fasa diam berperan dalam proses kromatografi.

0. 3erbagai jenis kolom yang selektif.

>. Menghasilkan pemisahan dengan kecepatan tinggi.

2. Naktu analisis yang cepat.

+. emasukan sample yang tepat dan mudah dikendalikan sehingga

menjamin presisi kuantitatif.

. Aesiko peruraian sample yang lebih kecil karena tidak dilakukan

pemanasan.

=. Keragaman kolom dan detector berarti bahwa selekti&itas metode

tersebut dapat disesuaikan dengan mudah.

Keterbatasan "#$ adalah untuk identifikasi senyawa, kecuali jika

"# dihubungkan dengan spektrofotometer massa !M4%. 4elain itu,

keterbatasan lainnya adalah jika sample dianalisis sangat kompleks, maka

resolusi yang baik sulit diperoleh.


20/20

D!"# P$S"K

7ritter, Aoy G, dkk. )**). Pengantar Kromatografi Edisi Kedua. 3andung: B83

3andung.

"endayana, 4umar, dkk. )**>. Kimia Analitik Instrumen Edisi Kesatu. 4emarang:

BKB 4emarang ress.

. +. Kimia Pemisahan Metode Kromatografi dan

Elektroforesis Modern. 3andung: 8 Aemaja Aosdakarya

Documents

TEORI DASAR HPLC.docx