Tipos De intrones

• GU-AG• AU-AC• Grupo I• Grupo II• Grupo III• Intrones

gemelos• pre-tRNA• Arqueales

• pre-mRNA nuclear eucariote• pre-mRNA nuclear eucariote• pre-rRNA nuclear eucariote• RNAs de organelos• RNAs de organelos• RNAs de organelos

• pre-tRNA nuclear eucariote• varios RNAs

Problema: Definición de los sitios de splicing

Solución: Secuencias consenso del mRNA en la fronterasentre exón/intrón. Acción de snRNA medianteel apareamiento Watson Crick a sitios crucialesdel mRNA. Complejos RNA-proteína (snRNP´s).

Ocurrencia: Co-transcripcional. Pol II CTD recluta los factores de splicing.

Factores: 5 snRNA: U1 (165 nts), U2 (185), U4 (145), U5 (106), U6 (116).100 proteínas (organizadas como U1 snRNP, U2 snRNP, etc.). Abundancia 2.5 105 – 1 x 106

Catálisis: Transesterificación del RNA

Tres problemas topológicos

• ¿Cómo identificar sitios de splicing distantes varias kb entre ellos?

• ¿Cómo identificar los sitios de splicing correctos sin saltarse alguno?

• ¿Cómo evitar la utilización de sitios crípticos ó espurios?

¿Cuáles son los puntos de regulación

del splicing?

Complejo de definición del exón

¿Se remueven los intrones en algún orden específico?

Procesamiento de un exón extra-largo

Intrones del grupo I Intrones del grupo II (III)

tamaño 400-3000 bases 400-2500 bases

ocurrencia ampliamente distribuidos en mitocondrias de hongos y plantas, en virus, cloropastos y rRNA nuclear en eucariotes simples

raros, algunos mRNA en mitocondrias y cloroplastos de hongos y plantas

nucleófilo GTP-3´OH, Ex-3´OH pAp-2´OH, Ex-3´OH

tipo de reacción doble transesterificación doble transesterificación

ORFs endonucleasas, madurasas

endonucleasas, transcriptasa reversa

función biológica movilidad del intrón movilidad del intrón

Resumen: procesamiento de intrones de los grupos I y II

Intron del grupo IIIntron del grupo I

¿Cómo Se Especifican Los Sitios Del Autoprocesamiento?

intrón del rRNA de Tetrahymena

Procesamiento por corte especifico - RNAs no codificantes

Procesamiento por modificación química de pre r-RNAs y pre t-RNAs

Un pre rRNA humano sufre 106 metilaciones y 95 pseudouridilaciones de manera específica y con un patrón

extremadamente conservado

Edicion de RNAs

¿Que sucede cuando hay intrones múltiples

en un gene?

Ejemplos de splicing alternativo

Transporte del mRNA procesado

Factores de especificidad para el procesamiento y la poliadenilación

Histonas 100/minOtras proteínas 100/minProteínas ribosomales 150/min

Subunidades ribosomales 5/minmRNA 1/min

Control de la estabilidad del RNA y su degradación

Señales que identifican al mRNA procesado

(a)

(b)

Remoción de señales durante la primera ronda de traducción de un mensajero silvestre

Circularización del mRNA después de la primera ronda de traducción

Activación de los factores de liberación por codones de terminación prematuros

La formación de complejos de RF, SC y marcadores del sitio de procesamiento activan a la enzima que

remueve el cap