Embed Size (px)
DESCRIPTION
toxicologia
Citation preview
TP N° 1
TOXICOLOGIA.
CONSERVAS VEGETALES. DETERMINACIÓN CUALITATIVA
Y CUANTITATIVA DEL ÁCIDO BENZÓICO Y
BENZOATOS ALCALINOS.
1. OBJETO
1.1 Esta norma establece los métodos de ensayo para determinar cualitativa y cuantitativamente
el ácido benzoico y benzoatos alcalinos de los productos elaborados a partir de frutas y vegetales y
bebidas.
2. ALCANCE
2.1 Los métodos son aplicables a productos elaborados de frutas y vegetales que contienen ácido
benzóico y benzoatos alcalinos, especialmente a jugos de frutas, salsa y concentrado de tomate,
jaleas y mermeladas, que contengan o no sal, y a productos preservados con ácido láctico y
vinagre. Bebidas en general.
3. MÉTODO CUALITATIVO
3.1 Fundamento y resumen
a) Fundamento. El método se basa en la reacción del ácido benzóico con el cloruro férrico, dando
un precipitado de color rojizo que indica la presencia de ácido benzóico.
b) Resumen. El método consiste en la homogeneización del producto, seguido de una dilución y
acidificación de la porción de ensayo; extracción del ácido benzóico mediante éter etílico y
posterior evaporación de la capa etérea; se alcaliniza con amoníaco, se elimina el exceso de
amoníaco y se agrega cloruro férrico.
3.2 Reactivos o materiales
3.2.1 Solución (1 + 3) de ácido clorhídrico.
3.2.2 Éter etílico, grado reactivo.
3.2.3 Éter de petróleo, fracción que destila abajo de 60°C.
3.2.4 Solución acuosa neutra al 0,5 % de cloruro férrico.
3.2.5 Solución (1 + 9) de hidróxido de amonio.
Para la prueba de Mohler:
3.2.6 Solución aproximadamente al 10% de NaOH.
3.2.7 Ácido sulfúrico concentrado, obtenida por dilución de 2 volúmenes de ácido sulfúrico
concentrado, ρ20 = 1,84 g/cm3, con un volumen de agua.
3.2.8 Nitrato de potasio cristalizado.
3.2.9 Todos los reactivos deben ser de pureza analítica reconocida, y el agua usada debe ser
destilada.
DESCRIPTORES: Productos agroindustriales, conservas vegetales, análisis químico, determinación
del contenido de ácido benzoico, método cualitativo, análisis por volumetría, absorción
espectrométrica molecular.
3.3 Equipo
3.3.1 Embudo de decantación, de 250 cm3,
3.3.2 Probeta, de 50 cm3,
3.3.3 Cápsula de porcelana,
3.3.4 Baño María,
3.3.5 Centrífuga,
3.3.6 Instrumental de laboratorio.
Para la prueba de Mohler:
3.3.7 Baño de glicerina.
3.4 Procedimiento
3.4.1 Preparación de la muestra.
3.4.1.1 Líquidos no alcohólicos. Muchos líquidos pueden ser sometidos directamente a la
extracción según
3.4.2, sin ningún tratamiento adicional.
Si durante la extracción se forman emulsiones difíciles de separar, transferir con una pipeta
volumétrica 100 cm3 de la muestra a un matraz volumétrico de 250 cm3, agregar
aproximadamente 5 g de cloruro de sodio, agitar hasta dilución completa de la sal, ajustar el
volumen con alcohol etílico de 95% (v/v), volver a agitar vigorosamente, dejar reposar durante 10
minutos, agitando ocasionalmente, filtrar y luego tratar una alícuota del filtrado de acuerdo a lo
indicado en 3.4.1.2.
3.4.1.2 Líquidos alcohólicos. A un volumen de 200 cm3 de la muestra alcalinizar en presencia de
papel indicador, mediante la adición de una solución aproximadamente al 10% de hidróxido de
sodio; luego evaporar en baño de María hasta que el volumen se reduzca aproximadamente a 1/3
del volumen original y volver con agua destilada al volumen original de 200 cm3, filtrar si es
necesario.
3.4.1.3 Sustancias sólidas y semisólidas. Moler y homogeneizar bien la muestra, transferir una
cantidad conveniente de 50 a 200 g de acuerdo a la consistencia de la muestra a un matraz
volumétrico de 500 cm3, agregar agua destilada hasta un volumen aproximadamente de 400 cm3
y agitar hasta lograr una mezcla homogénea. Agregar de 2 a 5 g de CaCl2 y agitar hasta que se
disuelva. Alcalinizar en presencia de papel indicar con una solución aproximadamente al 10% de
hidróxido de sodio; diluir con agua hasta la marca, agitar vigorosamente, dejar en reposo durante
no menos de 2 h agitando ocasionalmente y luego filtrar.
3.4.2 Procedimiento analítico
3.4.2.1 Colocar en el embudo de decantación 50 cm3 de la muestra original o un volumen
equivalente del extracto acuoso preparado como se indicó en 3.4, agregar 1/10 de dicho volumen
de la solución (1 + 3) de ácido clorhídrico y extraer con 50 cm3 de éter etílico, agitar nuevamente y
luego dejar decantar hasta separación en dos capas.
3.4.2.2 Si la mezcla se emulsificador, agregar de 10 a 15 cm3 de éter de petróleo y agitar. Si este
tratamiento no rompe la emulsión, centrifugar o dejar reposar hasta que una porción considerable
de la capa acuosa se separe; se elimina esta última, agitar vigorosamente y dejar separar otra vez.
3.4.2.3 Lavar dos veces la capa de éter con porciones de 5 cm3 de agua, cada vez, eliminando ésta
después de cada lavado; luego transferir la fase etérea a la cápsula de porcelana, la cual se coloca
en baño de María, cuando se haya separado la mayor parte del éter, retirar y dejar evaporar el
resto a temperatura ambiente.
3.4.2.4 Si hay cantidades apreciables de ácido benzoico, éste se cristaliza en forma de hojitas las
cuales producen un olor característico con el calentamiento. El residuo cristalino disolver en agua
caliente y dividir en dos porciones, en las que se realizan las pruebas siguientes:
1. Prueba con cloruro férrico. Una de las porciones de 3.4.2.4 alcalinizar con pocas gotas de
hidróxido de amonio, expeler el exceso de amonio por evaporación y luego disolver el residuo en
pocos centímetros cúbicos de agua caliente, filtrar si es necesario y agregar pocas gotas de la
solución al 0,5% de cloruro férrico. Un precipitado color rojizo de benzoato férrico indica la
presencia de ácido benzoico.
2. Prueba modificada de Mohler. Esta prueba se realiza cuando la muestra contiene fenolftaleina,
la cual interfiere en la prueba con cloruro férrico. En este caso se procede de la siguiente manera:
a) A la otra porción de 3.4.2.4 agregar de 1 a 2 gotas de una solución aproximadamente al 10% de
NaOH y evaporar hasta sequedad.
b) Al residuo agregar 5 a 10 gotas de H2SO4, un pequeño cristal de KNO3 y calentar durante 10
minutos en un baño de glicerina a una temperatura de 120 a 130°C; cuidar que el baño no
sobrepase la temperatura de 130°C.
c) Dejar enfriar, agregar 1 cm3 de agua caliente, añadir amoníaco hasta completa alcalinidad y
hervir la solución para descomponer el NH4NO2 que puede formarse.
d) Enfriar y agregar unas gotas de solución incolora, recién preparada de (NH4)2S, teniendo
cuidado de que no se mezclen las dos capas de líquido, la formación de un anillo café rojizo entre
las dos capas líquidas indica la presencia de ácido benzoico.
NOTA. Al mezclar las dos capas el color se difunde a través de la solución y al calentar cambia a un
color amarillo verdoso; éste cambio de coloración, debido a la presencia de ácido benzoico no se
produce cuando se trata de ácido salicílico o de ácido cinámico, ya que estos dos ácidos forman
compuestos coloreados que no se destruyen por el calentamiento.
4. MÉTODO CUANTITATIVO POR VOLUMETRÍA
4.1 Fundamento y resumen
a) Fundamento. El método se basa en la dosificación del ácido benzóico por alcalimetría.
b) Resumen. Consiste en extraer el ácido benzóico en medio ácido con cloroformo, eliminación del
solvente por calentamiento, disolución del residuo en alcohol neutro y titulación del mismo con
solución normalizada de hidróxido de sodio.
NOTA. La presencia de vainillina interfiere con éste método, dando resultados erróneos.
4.2 Reactivos y materiales
4.2.1 Cloruro de sodio pulverizado
4.2.2 Lechada de cal, suspención acuosa de hidróxido da calcio, preparada con óxido de calcio
recientemente apagado, suspención 1 en 3.
4.2.3 Solución al 10% de hidróxido de sodio
4.2.4 Solución saturada de cloruro de sodio
4.2.5 Solución (1 + 3) de ácido clorhídrico
4.2.6 Cloroformo
4.2.7 Alcohol neutralizado a la fenolftaleina
4.2.8 Solución alcohólica al 0,1 % de fenolftaleina
4.2.9 Solución 0,05 N de hidróxido de sodio
4.3 Equipo
4.3.1 Balanza analítica, con sensibilidad 0.1 mg
4.3.2 Pipetas volumétricas de 100 cm3
4.3.3 Matraz volumétrico, de 500 cm3
4.3.4 Varillas de vidrio
4.3.5 Cápsulas de porcelana
4.3.6 Erlenmeyer de 300 cm3
4.3.7 Desecador, con ácido sulfúrico concentrado
4.4 Procedimiento
4.4.1 Preparación de la muestra
4.4.1.1 Método general
a) Mezclar perfectamente la muestra, moler si es sólida o semisólida y transferir 150 cm3 o 150 g
al matraz volumétrico de 500 cm3.
b) Agregar suficiente cloruro de sodio pulverizado para saturar el agua presente en la muestra.
c) Alcalinizar al papel tornasol con la solución al 10% de hidróxido de sodio o con la lechada de cal
y diluir a 500 cm3 con la solución saturada de cloruro de sodio.
d) Agitar perfectamente y dejar en reposo por lo menos durante 2 horas agitando periódicamente
y luego
filtrar.
NOTA 1. Si la muestra contiene grandes cantidades de grasa que puede contaminar el filtrado,
agregar a éste una pequeña cantidad de la
solución al 10% de NaOH y extraer con éter etílico antes de proceder como se indica en 4.4.2.
NOTA 2. Si la muestra contiene alcohol, proceder como se indica en 4.4.1.4.
4.4.1.2 Salsa de tomate
a) A 150 g de la muestra agregar 15 g de cloruro de sodio pulverizado y transferir la mezcla al
matraz volumétrico de 500 cm3 enjuagando el recipiente donde se hizo la pesada con
aproximadamente 150 cm3 de la solución saturada de cloruro de sodio.
b) Alcalinizar ligeramente al papel tornasol con la solución al 10% de hidróxido de sodio y
completar al volumen con la solución saturada de cloruro de sodio.
c) Dejar en reposo por lo menos 2 horas, agitando frecuentemente, luego pasar a través de una
bolsa de muselina gruesa ejerciendo cierta presión, el líquido escurrido filtrar a través de papel
filtro.
4.4.1.3 Jaleas y mermeladas
a) Digerir 150 g de muestra en aproximadamente 300 cm3 de solución saturada de cloruro de
sodio.
b) Agregar 15 g de cloruro de sodio pulverizado y luego alcalinizar al papel tornasol con lechada de
cal.
c) Transferir al matraz volumétrico de 500 cm3 y completar el volumen con la solución saturada de
cloruro de sodio.
d) Dejar en reposo durante no menos de 2 horas, agitando frecuentemente, luego centrifugar si es
necesario y filtrar por papel filtro.
4.4.1.4 Productos conteniendo alcohol, tales como sidra, vinos y similares
a) A 250 cm3 de muestra alcalinizar al papel tornasol con la solución al 10% de NaOH y evaporar
en un baño de María hasta aproximadamente un volumen de 100 cm3.
b) Transferir a un matraz volumétrico de 250 cm3, agregar 30 g de cloruro de sodio pulverizado,
agitar hasta que se disuelva y diluir al volumen de 250 cm3 con la solución saturada de NaCl.
c) Dejar en reposo durante no menos de 2 horas agitando frecuentemente y luego filtra en papel
filtro.
4.4.2 Procedimiento analítico
4.4.2.1 Transferir por medio de una pipeta, una alícuota de 100 a 200 cm3 del filtrado preparado
de acuerdo a lo indicado en 4.4 al embudo de decantación y neutralizar al papel tornasol con la
solución (1 + 3) de ácido clorhídrico, agregando 5 cm3 de exceso.
4.4.2.2 Extraer cuidadosamente con cloroformo, usando porciones sucesivas de 70, 50, 40 y 30
cm3. Para evitar la formación de una emulsión agitar cuidadosamente después de cada adición,
aplicándole un movimiento rotativo; por lo general, la capa de cloroformo se separa rápidamente
después de dejarlo reposar unos pocos minutos.
NOTA. Si se forma emulsión, se puede romper ésta mediante una de las siguientes maneras:
a) Por agitación de la capa de cloroformo con una varilla de vidrio.
b) Pasando la emulsión a un segundo embudo de decantación y dándole a éste 1 ó 2 movimientos
bruscos de uno a otro extremo del embudo; o bien,
c) Por centrifugación durante unos pocos minutos.
4.4.2.3 Debe tenerse cuidado al drenar la solución de cloroformo que esté lo más clara posible
después de cada extracción sucesiva; es decir, no debe drenarse ninguna porción de emulsión con
la capa de cloroformo. Si se toma esta precaución el extracto de cloroformo no necesita ser
lavado.
4.4.2.4 Transferir los extractos combinados a una cápsula de porcelana, lavar el embudo de
decantación varias veces con una pequeña cantidad de cloroformo, y evaporar a sequedad a la
temperatura ambiente en una corriente de aire seco.
NOTA. El extracto también puede transferirse del embudo de dacantación a un Erlenmeyer de 300
cm3, lavando el embudo con 3 porciones de 5 a 10 cm3 cada una de cloroformo, luego destilar
muy lentamente a baja temperatura hasta un volumen aproximado a 1/4 del volumen original,
transferir el residuo a la cápsula de porcelana, lavando el matraz con 3 porciones de 5 a 10 cm3 de
cloroformo, y finalmente evaporar a sequedad a la temperatura ambiente en una corriente de aire
seco.
4.4.2.5 Secar el residuo durante la noche o hasta que ningún olor de ácido acético se pueda
detectar cuando se trate de una muestra de salsa de tomate, colocando la cápsula en un
desecador que contenga ácido sulfúrico.
4.4.2.6 Disolver el residuo de ácido benzóico en 30 a 50 cm3 de alcohol neutralizado a la
fenolftaleina, agregar aproximadamente 1/4 de su volumen de agua destilada, una o dos gotas de
la solución indicadora de fenolftaleina y titular con la solución 0,05 N de NaOH.
4.4.2.7 Esta determinación efectuar por duplicado.
5. CÁLCULOS
5.1 El contenido de ácido benzóico y benzoatos alcalinos en la muestra se expresa como benzoato
de
sodio anhidro, en porcentaje en masa, y se obtiene de acuerdo a la siguiente fórmula:
En donde:
Ab = Porcentaje en masa de ácido benzóico y benzoatos alcalinos, expresado como benzoato
de sodio anhidro.
V = Volumen de la solución de NaOH, gastado en la titulación, en cm3
V1 = Volumen del filtrado final en la preparación de la muestra, en cm3, ver 4.4. Los valores
son los siguientes:
- método general, (ver 4.4.1.1), V1 = 500
- salsa de tomate, (ver 4.4.1.2), V1 = 500
- jaleas y mermeladas, (ver 4.4.1.3), V1 = 500
- sidra, vinos y similares, (ver 4.4.1.4), V1 = 250
V2 = Alícuota tomada para el ensayo, en cm3, ver 4.4.2.1
N = Normalidad de la solución de NaOH
m = Masa de la muestra original, en gramos
NOTA 1. En el caso de líquidos alcohólicos, numeral 4.4.1.4, este factor en vez de ser la masa de la
muestra original, es el volumen de la muestra original, en cm3. En este caso, Ab es porcentaje en
masa sobre volumen.
NOTA 2. 1 cm3 de solución 0,05 N de hidróxido de sodio equivale a 0,0072 g de benzoato anhidro.
5.2 Repetibilidad
5.2.1 La diferencia entre los resultados de dos determinaciones realizadas simultáneamente o en
rápida sucesión por el mismo analista, no deberá se mayor del 5% del valor medio.
5.2.2 El resultado final será la media aritmética de las dos determinaciones, siempre que el
requisito de repetibilidad se haya cumplido.
6. MÉTODO DE ABSORCIÓN ESPECTROMÉTRICA MOLECULAR
6.1 Alcance. Este método es aplicable con un contenido de ácido benzoico superior a 20 mg por
litro o kilogramo de producto, y en particular, a jugos de frutas, puré o pasta de tomate, salados o
no y a productos preservados con vinagre o ácido láctico.
6.2 Resumen. El método consiste en la extracción del ácido benzóico de una muestra de ensayo
acidificada usando éter dietílico, nitración seguida de reducción, y reacción de Moholer modificada
con hidrocloruro de hidroxilamina. Medida espectrométrica de la absorbancia del complejo rojo
obtenido.
6.3 Reactivos. Todos los reactivos deben ser de calidad analítica reconocida y el agua a usarse
debe ser destilada.
6.3.1 Ácido benzóico, solución estándar que corresponde a 1 g de ácido benzóico por litro. Pesar,
con aproximación de 0,0001 g, 100 mg de ácido benzóico. Disolver en 25 cm3 de una solución de
hidróxido de sodio 0,1 mol/l y diluir a 100 cm3 con agua. 1 cm3 de ésta solución estándar contiene
1 mg de ácido benzóico.
6.3.2 Solución de nitración.
Disolver 23 g de nitrato de potasio en 250 cm3 de ácido sulfúrico concentrado (ρ20 = 1,84 g/cm3).
6.3.3 Hidrocloruro de hidroxilamina, 20 g/l de solución.
6.3.4 Solución de amoníaco, concentrado (ρ20 = 0,910 g/cm3).
6.3.5 Solución de fenolftaleína. Disolver 1 g de fenolftaleína en 100 cm3 de alcohol al 60 % (v/v).
6.3.6 Hidróxido de sodio, 1 mol/l de solución.
6.3.7 Hidróxido de sodio, 0,1 mol/l de solución.
6.3.8 Ácido sulfúrico, solución al 25 % (m/m).
6.3.9 Solución Carrez I. Disolver 150 g de ferrohexacianuro II potásico trihidratado
[K4Fe(CN)6.3H2O] en agua y diluir a 1000 cm3.
6.3.10 Solución Carrez II. Disolver 300 g de sulfato de zinc heptahidratado (ZnSO4.7H2O) en agua y
diluir a 1000 cm3.
6.3.11 Éter dietílico, recientemente destilado.
6.4 Equipo
Equipo usual de laboratorio, y en particular
6.4.1 Embudos de separación, de 200 cm3 de capacidad, ajustado con tapones.
6.4.2 Pipetas, de 1,2,5,10,25 y 50 cm3 de capacidad.
6.4.3 Pipeta, de 2 cm3 de capacidad, graduada en divisiones de 0,1 cm3.
6.4.4 Matraces volumétricos, de 10 y 100 cm3 de capacidad, ajustado con un tapón de vidrio.
6.4.5 Baño de agua caliente.
6.4.6 Tubos de ensayo, de 1,5 o 2,0 cm de diámetro.
6.4.7 Estufa, capaz de ser controlada 103 ± 2 oC.
6.4.8 Baño de agua, capaz de ser controlado a 20 ± 2 oC.
6.4.9 Baño de agua, capaz de ser controlado a 60 ± 2 oC.
6.4.10 Espectrómetro, adecuado para efectuar medidas a una longitud de onda de 533 nm, con
celdas de trayectoria óptica de 10 mm de longitud.
6.5 Procedimiento
6.5.1 Preparación de la muestra de ensayo
6.5.1.1 Productos líquidos, mezclar completamente la muestra de laboratorio.
6.5.1.2 Productos semi-densos (puré, etc), mezclar completamente la muestra de ensayo. Prensar
una parte de la muestra a través de cuatro capas finas de gasa, rechazar las primeras gotas de
líquido y usar el remanente para la determinación. (Seguir las instrucciones dadas para productos
líquidos).
6.5.1.3 Productos espesos, mezclar completamente la muestra de laboratorio.
6.5.2 Porción de ensayo
6.5.2.1 Productos líquidos, tomar, con una pipeta (6.4.2), 10 cm3 de la muestra de ensayo y
transferir a un embudo de separación de 200 cm3 (6.4.1).
6.5.2.2 Productos espesos
a) Pesar, con aproximación de 0,01 g, 10 g de la muestra de ensayo.
b) Clarificación de la porción de ensayo, añadir una pequeña cantidad de agua a la porción de
ensayo y alcalinizar añadiendo la solución de hidróxido de sodio (6.3.6) en presencia de la solución
de fenolftaleína (6.3.5); colocar por 30 min en el baño de agua caliente (6.4.5); después de enfriar,
transferir a un matraz volumétrico de 100 cm3 , añadir 2 cm3 de la solución Carrez I (6.3.9) y 2
cm3 de la solución Carrez II (6.3.10) y diluir hasta la marca con agua. Dejar en reposo por 30 min y
luego centrifugar o filtrar. Usar esta solución clarificada para la extracción (6.5.3).
6.5.3 Extracción y purificación de ácido benzóico
6.5.3.1 Productos líquidos. Añadir 2 cm3 de la solución de ácido sulfúrico (6.3.8) a la porción de
ensayo en el embudo de separación. Añadir 25 cm3 de éter dietílico (6.3.11), agitar y dejar en
reposo hasta separación de la fase etérea. Repetir esta extracción agitando una vez mas con 25
cm3 de éter dietílico.
combinar las dos fases etéreas.
Extraer el ácido benzóico de la fase etérea sin lavar con agua, añadiendo 2 cm3 de la solución de
hidróxido de sodio (6.3.6) en presencia de una gota de solución de fenolftaleína (6.3.5) y agitando
por 5 min. Separar la fase alcalina. Luego extraer dos veces agitando con 2 cm3 de la solución de
hidróxido de sodio (6.3.7).
Recolectar los extractos alcalinos en un matraz volumétrico de 10 cm3 (6.4.4) y diluir hasta la
marca con agua.
6.5.3.2 Productos espesos. Añadir 50 cm3 de la solución de ácido sulfúrico (6.3.8) a 50 cm3 de la
solución obtenida después de la clarificación (b). Añadir 50 cm3 de éter dietílico (6.3.11), agitar y
dejar en reposo hasta separación de la fase etérea. Repetir esta extracción dos veces más agitando
con 50 cm3 de éter dietílico. Combinar las fases etéreas en un embudo de separación de 200 cm3
Añadir 5 cm3 de agua, agitar y rechazar la fase acuosa. Añadir 2 cm3 de la solución de hidróxido de
sodio (6.3.6) a la fase etérea y agitar (hasta aquí se habrá formado benzoato de sodio). Separar la
fase alcalina.
Luego extraer dos veces agitando con 2 cm3 de la solución de hidróxido de sodio (6.3.7).
Recolectar los extractos alcalinos en un matraz volumétrico de 10 cm3 (6.4.4) y diluir hasta la
marca con agua.
6.5.4 Determinación
6.5.4.1 Desarrollo del color
De acuerdo con el contenido de ácido benzoico esperado, transferir 0,5 a 1,0 cm3 del extracto
alcalino a un tubo de ensayo (6.4.6) y evaporar hasta sequedad en el baño de agua caliente (6.4.5).
Transferir a la estufa (6.4.7) y deshidratar por 15 min a 103 ± 2 oC.
Dejar enfriar, añadir 1 cm3 de la solución de nitración (6.3.2) y colocar en el baño de agua caliente
por 20 min, (es recomendable agitar al tubo de ensayo durante los primeros minutos).
Transferir al baño de agua (6.4.8), manteniendo a 20 ± 2 oC por el tiempo de 15 min.
Cuidadosamente añadir 2 cm3 de agua y dejar 15 min adicionales. Añadir 10 cm3 de la solución de
amoníaco (6.3.4), añadiendo los primeros 5 cm3 en fracciones de 0,5 cm3 y el resto en fracciones
de 1 cm3. Dejar en el baño de agua por 15 min, tener cuidado que la temperatura del baño de
agua no exceda de 20 ± 2 oC. Añadir 2 cm3 de la solución de hidrocloruro de hidroxilamina (6.3.3)
y colocar en el baño de agua (6.4.9), mantener la temperatura a 60 ± 2 oC por 5 min.
6.5.4.2 Medición espectrométrica
Enfriar el tubo de ensayo, llenar una celda espectrométrica con la solución y medir la absorbancia
a 533 nm en los siguientes 30 min por medio del espectrómetro (6.4.10).
6.5.5 Preparación de la curva de calibración
6.5.5.1 Preparación de los juegos de soluciones estándar
En una serie de cinco tubos de ensayo, transferir por medio de la pipeta (6.4.3), los volúmenes de
la solución estándar de ácido benzóico (6.3.1) indicados en la tabla.
6.5.5.2 Desarrollo del color
Transferir los tubos al baño de agua caliente (6.4.5) y evaporar hasta sequedad. Transferir los
tubos a la estufa (6.4.7) y deshidratar por 15 min a 103 ± 2 oC.
Continuar conforme a lo descrito en 6.5.4.1, desde el segundo párrafo que empieza con las
palabras"[Dejar enfriar, añadir 1 cm3 de la solución de nitración (6.3.2)..."].
6.5.5.3 Mediciones espectrométricas. Proceder conforme a lo explicado en 6.5.4.2.
6.5.5.4 Trazado de la curva. Trazar la curva teniendo, por ejemplo, en las abcisas los juegos de
soluciones estándar de ácido benzóico, en microgramos, y en las ordenadas los valores
correspondientes de la absorbancia.
6.5.6 Número de determinaciones
Efectuar dos determinaciones en porciones de ensayo tomadas de la misma muestra de ensayo
(6.5.1).
6.6 Expresión de los resultados
6.6.1 Método de cálculo y fórmula
6.6.1.1 Productos líquidos
El contenido de ácido benzóico, expresado en miligramos por litro, se calcula mediante la
expresión:
En donde:
C = contenido de ácido benzóico, en mg/l;
m = masa del ácido benzóico, leída desde la curva de calibración, en mg;
V1= volumen de la porción de ensayo, en cm3, es decir 10 cm3 (ver 6.5.2.1);
V2= volumen del extracto alcalino, en cm3, es decir 10 cm3 (ver 6.5.3);
V3= volumen del extracto alcalino tomado para el desarrollo del color, en cm3 (ver 6.5.4.1).
6.6.1.2 Productos espesos
El contenido de ácido benzóico, expresado en miligramos por kilogramo, se calcula mediante la
expresión:
m2 x V1 x V3
C = ⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯ x 1 000
m1 x V2 x V4
En donde:
C = contenido de ácido benzóico, en mg/kg;
m1= masa de la porción de ensayo, en g;
m2= masa del ácido benzóico, leída desde la curva de calibración, en mg;
V1= volumen de la solución clarificada preparada, en cm3, (ver 6.5.2.2);
V2= volumen de la solución clarificada tomada para la extracción, en cm3, es decir 50 cm3 (ver
6.5.3.2);
V3= volumen del extracto alcalino, en cm3, es decir 10 cm3 (ver 6.5.3);
V4= volumen del extracto alcalino tomado para el desarrollo del color, en cm3 (ver 6.5.4.1).
6.6.2 Repetibilidad
6.6.2.1 La diferencia entre los resultados de dos determinaciones (6.5.6), realizadas
simultáneamente o en rápida sucesión por el mismo analista, no deberá exceder 10 mg de ácido
benzóico por litro o por kilogramo de producto.
6.7 Nota del procedimiento
6.7.1 La presencia de ácido fórmico y ácido sórbico no interfiere con la determinación de ácido
benzóico.
6.8 Reporte del ensayo
6.8.1 El reporte del ensayo debe mostrar el método usado y los resultados obtenidos, además
debe mencionar cualquier condición de operación no especificada en la presente norma, así como
cualquier circunstancia que pueda haber influido en los resultados.
6.8.2 El reporte del ensayo debe incluir todos los detalles necesarios que permitan la completa
identificación de la muestra.
