Uji Aktivitas Antidiabetes Fraksi

7/23/2019 Uji Aktivitas Antidiabetes Fraksi

1/9

UJI AKTIVITAS ANTIDIABETES FRAKSI-FRAKSI BUAH

KETAPANG (Terminalia catappaL.) DENGAN METODE

PENGHAMBAT AKTIVITAS -GLUKOSIDASE DAN

IDENTIFIKASI GOLONGAN SENYAWA KIMIA DARI FRAKSI

YANG AKTIF

Devi So!"!#i

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Program Studi Sarjana Farmasi

Depok Universitas Indonesia

ABSTRAK

Diabetes melltus (DM) adalah gangguan metabolisme yang ditandai dengan

hiperglikemia dan abnormalitas metabolisme karbohidrat lemak dan ptotein! Salah

satu terapi "armakologi yang digunakan dalam mengobati DM adalah agen

pengambath aktivitas #glukosidase yang dapat mengambat penguraian disakarida

sehingga menunda absorbsi glukosa dan menurunkan kadar glukosa postprandial!

Peneliian terdahulu membuktikan bah$a ektsrak etanol %&' buah ketapang

(Terminalia catappa!) memiliki pengambat aktivitas #glukosidase tertinggi bila

dibandingkan dengan * tanaman lain yang diuji! +ujuan penelitian ini adalah untuk

memperoleh "raksi dari ekstak buah ketapang yang memiliki pengmabath aktivitas #

glukosidase tertinggi dan mengetahui golongan senya$a kimia dari "raksi yang akti"!

Serbuk simplisia buah ketapang dimaserasi menggunakan etanol %&' kemudian

di"raksinsasi menggunakan petroleum eter etil asetat butanol dan metanol! Uji

penghambat aktivitas #glukosidase menggunakan metode Spe,triphotometri, Stop

-ate Determination! Absorbansi p#nitro"enol yang dilepaskan dari p#nitro"enil##D#

glukopiranosida sebagai substrat diukur pada panjang gelombang .&& nm! /asil

menunjukan bah$a "raksi etil asetat buah ketapang memiliki penghambat paling kuat

terhadap aktivitas #glukosidase dengan nilai I0*& 12. ppm! Uji kinetika en3im

menunjukan bah$a "raksi etil asetat buah ketapang mempunyai penghambat aktivitas

kompeteti"! 4olongan senya$a kimia yang terdapat pada "raksi etil asetat buah

ketapang adalah terpen "lavonoid dan glikosida!

5ata kun,i 6 diabetes melitus penghambat #glukosidase +erminaliae ,atappa

!buah ketapang!


2/9

PENDAHULUAN

Diebetes Melitus (DM) adalah

gangguan metabolisme yang di tandai

denga hiperglikemia dan abnormalitas

karbohidart lemak dan protein yang

disebabkan oleh penurunan sekresi

insulin penuruna sensitivitas insulin

atau keduannya (Dipro +albert 7ees

Mat3ke 8ells 9 Posey 1&&*)!

Diabetes melitus merupakan salah satu

penyakit yang menyebabkan

peningkatan resiko kematian :

kesakitan dan penuruna kualitas hidup

pasien (Adisak$atana erdsu$ankijPoputta,hai Minipun 9 Suparpprom

1&)!

ebih dari ;&& juta orang

penderita diabetes dan jumlah ini

akan terus meningkat seiring dengan

pertumbuhan populasi! Prevalensi

diabetes global diperkirakan pada

tahun 1&;& jumlah penderita diabetes

akan meningkat menjadi .;2 juta!Diabetes merupakan penyakit kronis

yang menyebabkan komplikasi serius

seperti penyakit jantung ginjal ulkus

pada kaki yang dapat mengakibatkan

amputasi dan bahkan kematian dini di

banyak negara terutama negara#

negara yang berpengasilan rendah atau

mengngah (International Diabetes

Federation 1&&anatta et al!

1&&?)! Diabetes mellitus yang ditandai

dengan hiperglikemia dapat

menyebabkan komplikasi seperti

retinopati neuropati ne"ropati dan

penyakit jantung (/sieh et al! 1&&)!

5erajaan 6 Plantae

Divisi 6 Magnoliophyta

5elas 6 Magnoliopsida

=angsa 6 Mytrales

Suku 6 0ombreta,eae

Marga 6 +erminalia

@enis 6 +erminalia ,atappa !

Sinonim 6+erminalia

molu,,ana amk!

+erminalia pro,era

-ob!

+ermenlia

lati"olia =lan,o non S$art3!

Bama Daerah 6 5etapang ketapas

keta"a (Sumatera)!

5etapang katapnga

(@a$a)! 5atapang

klihi (Busa +enggara)!

+arisei salrise

atapang (Sula$esi)!

8e$a sarina sartalo(Maluku)! -uge

(Irian) (Materia

Medika 2%2)!

Pohon ketapang berukuran

besar tinggi hingga .& m dan diameter

batangnya 1 m! 5ulit kayu sepat

terdapat banyak damar! Daun#daun


3/9

yang serupa kulit li,in di bagian atas

dan berambut halus di bagian ba$ah

tersebar di ujung ranting! =unga

berukuran ke,il terkumpulkan dalam

bulir dekat ujung ranting dan ber$arna

hijau kekuningan! =uah berbentuk

telur gepeng keras ber$arna

hijau:kuning:merah atau ber$arna

ungu kemerahan jika buah sudah

masak! Daging buahnya dapat

dimakan tapi berserabut di dalam

buah ketapang terdapat biji yang

berbentuk jorong bagian ujuang agak

merun,in" dan agak pipih sedangkan

bagian pangkal membulat (/yne

2%?)!

5etapang merupakan

tumbuhan asli Asia +enggara dan biasa

ditanam di Australia bagian utara

Inida Pakistan Madagaskar A"rika

=arat Amerika +engah dan Amerika

Selatan! Pohon ketapang ,o,ok

tumbuh di daerah panas dataran

rendah dan dekat pesisir hingga

ketinggian sekitar %&& m di atas

permukaan laut! (/eyne 2%?)!

5etapang menggurkan daeunnya

hingga dua kali dalam setahun! =uah

ketapang umumnya disebarkan oleh

kelela$ar!

Se,ara umum kandungan kimia

yang terkandung pada tanaman

ketapang adalah tannin (puni#,alagin

puni,alin tervla"in A dan =

tergallagin ter#,atin asam ,hebulagi,

geranin granatin = ,orilagin)

"lavonoid (isovitein vitein

isoorientin rutin) dan triterpenoid

(Ahmed et al! 1&&*)!

5ayu dan kulit pohon ketapang

mengandung tanin kitekin epikatekin

asam galat leukosianidin (emmens

9 Soetjipto 221)! Daun mengandung

banyak tannin "alvonoid saponin

triterpenoid "itosterol (Ahmed et al!

1&&*)! Pada daging buah terdapat *'

protein! Pada biji kering terdapat

sbegaian besar minyak yang teriri atas

beberapa asam lemak diantarnya asam

palmitat ***' asam oleat 1;;'asam linoleat ?


4/9

Industries td! @epang) diemtil

sul"oksida (DMSG) (Mer,k @erman)

bovine serum albumin (=SA) (mer,k

@erman kalium dihidrogen"os"at

(Mer,k @erman) etnaol petroleum

eter etil asetat butanol metanol

akuades air bebas 0G1 asam klorida

(Mer,kC @erman) iodium (Mer,k

@erman) bismut (III) nitrat (Mer,k

@erman) asam nitrat (Mer,k @erman)

timbal (II) asetat natrium sul"at

anhidrart (Mer,k @erman) asam asetat

anhidrat (Univar USA) asam sul"at

(Mer,k @erman) #na"tol serbuk 3ink

(Mer,k @erman) serbuk magnesium

(Mer,k @erman) aseton serbuk asam

borat (Mer,k @erman) serbuk asam

oksalat (Mer,k @erman) eter besi (II)

klorida natrium klorida (Mallin,krodt

0hemi,als USA) gelatin (Mer,k

@erman) natrium hidroksida (Univar

USA) kuersetin (Mer,k @erman)

alumunium (III) klorida!

P+o,e+e &e'!/,!$!!$

&e$%i!&!$ '!+#!$ &e+e/!,i '!+#!$

&e+e/!,i Bo0*!+# larutan pereaksi

=ou,hardt dibuat dari ,ampuran

iodium dan kalium iodida! Sebanyak 1

g iodium P dan . dilarutkan dengan

akuades se,ukupnya hingga &&& m!

L!+#!$ +!/,! (II) /'o+i!

larutan raksa (II) klorida dibuatdengan ,ara melarutkan ;*% g raksa

(II) klorida dengan akuades

se,ukupnya hingga


5/9

mengalir hingga bersih! Setelah selesai

di,u,i buah ketapang ditiriskan pada

temepratur kamar dan ditimbang berat

buah segarnya! =uah tersebut kemuian

diperke,il dengan ,ara ditumbuk lalu

dikeringkan dengan ,ara diangin#

anginkan di udara terbuka dan

terlindungi dari sinar matahari

langsung selama $aktu tertentu (H ?

hari ) karena kandungan air pada buah

ketapang ,ukup banyak! Simplisia

buah ketapang yang sudah ,ukup

kering selanjutnya dimasukan ke

dalam lemari pengering dan ditimbang

berat buah kering guna menghitung

presentase perbandingan berat buah

kering terhadap berat buah segar

(susut pengering)! Simplisia yang telah

kering disortasi kembali untuk

memisahkan benda#benda asing

seperti bagian#bagian tanaman yang

tidak diinginkan dan pengotor lain

yang tertinggal kemudian dibuat

menjadi serbuk dengan menggunakanblender diayak dengan ayakan .&

mesh dan disimpan dalam $adah!

E/,#+!/,i serbuk simplisia

kering sebanyak * kg diekstraksi

dengan ,ara dingin yaitu maserasi

dengan bantuan shaker selama enam

jam menggunakan pelarut etanol %&'setinggi ;#* ,m diatas serbuk

simplisia! Saring maserat pertama

kemudian remaserasi sebanyak lima

kali hingga dihasilkan ekstak ,air

yang sudah tidak ber$arna pekat!

5emudian seluruh ekstrak ,air etanol

diuapkan dengan menggunakan rotary

evaporator pada suhu .*&0 hingga

etanol menguap seluruhnya!

Selanjutnya ekstak dikeringkan

dengan menggunakan "ree3e dry

(dengan dibekukan terlebih dahulu)

untuk mengasilkan ektrak etanol

kering (ampiran 1)! kstrak etanol

kering yang diperoleh ditimbang untuk

mengitung untuk menghitung

rendemen!

F+!/,i$!,i ekstrak etanol

kering di"raksinasi menggunakan

pelarut yang semakin meningkat

kepolarannya berturut#turut dari

pelarut nonpolar hingga pelarut polar

yaitu petroleum eter etil asetat

butanol dan metanol (ampiran ;)!

Fraksinasi dilakukan dengan

metode partisi menggunakan ,orong

pisah! Bamun sebelum di"raksinasi

ekstrak etanol kering didispersikan

dengan air panas terlebih dahulu

kemudian dipartisi dengan

menambahkan petroleum eter dengan

perbandingan 6 ko,ok kuat selama

H jam diamkan hingga terbentuk

dua lapisan dengan ekstrak air yang

berada di bagian ba$ah dan ekstrak :

lapisan petroleum eter di bagian atas

selanjutnya pisahkan keduannya!

kstraksi:"raksi petroleum eter

diuapkan dengan ,ara yang sama

menggunakan pelarut etil asetat dan

butanol hingga diperoleh

ekstrak:"raksi etil asetat kental

ekstrak:"raksi butanol kental dan

ekstrak air! ekstrak air kemudian

diuapkan dengan menggunakan rotary

evaporator hingga sedikit mengental

lalu ditambahkan metanol && m dan

dibiarkan menguap hingga diperoleh

ekstrak:"raksi metanol#air kental!

5emudian ekstraksi:"raksi petroleum

eter etil asetat butanol dan metanol#

air kental yang diperoleh ditimbang

dan disimpan dalam lemari pendingin

pada suhu .0!

HASIL DAN PEMBAHASAN

Pe$%i!&!$ !*!$ 8i

&e$%i!&!$ ,i1&'i,i! 8ibahan yang

digunakan dalam penelitian ini adalah

buah ketapang (+erminalia ,atappa

!) dari "amili 0ombreta,eae yang

diperoleh dari sekitar lingkungan

Universitas Indonesia dan telah telah


6/9

dideterminasi di /erbarium

=ogoriense (IPI) 0ibinong!

Determinasi dilakukan untuk

memastikan bah$a tanaman tersebut

adalah ketapang dan hasil

determinasi dapat dilihat pada

ampiran

digunakan adalah buah (beserta

bijinya) yang tua tetapi belum matang

: masih ber$arna hiaju dan belum

gugur! =uah ketapang yang digunakan

beserta bijinya karena mengikuti

prosedur dari penelitian sebelumnya!

=uah ketapang yang telahdikumpulkan selanjutnya disortasi

dibersihkan dari pengotor dan di,u,i

dengan air mengalir hingga bersih!

Setelah selesai d ,u,i buah ketapang

ditiriskan pada temperatur kamar dan

ditimbang berat buah segarnya! =uah

tersebut kemudian diperke,il dengan

,ara ditumbuk lalu dikeringkan

dengan ,ara diangin#anginkan di

udara terbuka dan terlindung dari

sinar mentari langsung selama $aktu

tertentu (H ? hari) karena kandungan

air pada buah ketapang ,ukup banyak!

Pengerinagn dilakukan untuk

mendapatkan simplisia yang tidak

mudah rusak karena dengan

mengurangi kadar air dapat men,egah

penurunan mutu atau perusakan

simplisa dari pembusukan (Depkes-I 2%*)!

Smplsia buah ketapang ang

sudah ,ukup kering selanjutnya

dimasukan ke dalam lemari

pengeringan dan ditimbang berat

buah kering guna menghitung

persentase perbandingan berat buah

kering terhadap berat buah segar

(susut pengeringan)!

Oi1!,i !/#ivi#!, -

4'/o,i!,e optimasi aktivitas #

glukosidase perlu dilakukan terlebih

dahulu sebelum uji penghambatan #

glukosidase sehingga diketahui

kondisi yang optimal agar en3im

bekerja se,ara optimal! /al ini

dilakukan untuk memastiakn bah$a

hasil yang diperoleh dari penghambat

terhadap aktivitas en3im tersebut!

Gptimis dilakukan karena laju reaksi

yang dikatalisis oleh en3im

dipengaruhi oleh beberapa "aktor

diantarnya adalah suhu p/ dan

konsentrasi substrat (Murray

4ranner 9 -od$ell 1&&2)! Gptimis

yang dilakukan adalah optimasi p/

dan konsentrasi substart (4ranner 9

-od$ell 1&&2)!

5e,epatan reaksi akan

bertambah seiring meningkatnya

konsentrasi seubstrat hingga

men,apai suatu keadaan yang

en3imnya sudah dapat dikatakan

jenuh oleh subtrat! Dalam hal ini

en3im dita"sirkan telah jenuh pada

konsentrasi substrat * mM dimana

konsentrasi tersebut memberikan

aktivitas en3im tertinggi yaitu ;22

U:mg! Dengan demikian konsentrasi

substrat yang digunakan untuk uji

penghabat aktivitas en3im #

glukosidase adalah *mM!

U8i &e$4*!1!# !/#ivi#!, -

G'/o,i!,e uji penghambat

aktivitas #glukosida dilakukan

dengan menggunakan larutan en3im&&1?2 U:m dan larutan substrat

dengan konsentrasi *nM! Pengujian

dilakukan dengan variasi konsentrasi

ekstrak terhadap daya hambat en3im

dengan melihat nilai persen inhibasi

serta mengetahui kekuatan

penghambatnya terhadap en3im

tersebut dengan melihat nilai I0*&I0*&

adalah konsentrasi yang dibutuhkanuntuk menghambat *&' aktivitas

en3im! 5onsentrasi ekstrak yang

digunakan adalah &1*'J &1*'J

&*'J dan '!

kstrak ditimbang H && mg

dan ditambhakna DMSG beberapa


7/9

tetes untuk mempermudah kelarutan!

Setelah sudah ,ukup larut larutan uji

dilarutkan dengan menggunakan

pelarut dapar "os"at (p/ ?&) hingga

konsentrasi ekstrak '! arutan uji

tersebut dien,erkan hingga

konsentrasi &*'J &1*'J dan

&1*'!

Pengamatan aktivitas en3im

dilakukan dengan membandingkan

nilai bsorbansi sampel (S) dengan

blanko (=)! larutkan blanko (=)

adalah larutan uji tanpa

sampel:ekstrak namun perlakuannyasama dengan larutan uji sampel!

5ontrol blanko (=&) pun perlakuannya

sama dengan kontrol sampel yaitu

dengan menukar posisi penmabhana

en3im dan natrum karbonat hanya

saja dilakukan tanpa sampel!

Pengujian larutan sampel (S)

dilakukan untuk mengetahui

kemampuan penghambat aktivitasen3im yang diberikan oleh ekstrakdan

akarbose (pembanding)! Sedangkan

pengujian larutan kontrol sampel (S&)

dilakukan sebagai "aktor koreksi

terhadap larutan sampel (S)! Produk

yang dihasilkan dari reaksi antara #

glukosidase diukur serapannya pada

panjang gelombang .&& nm!

KESIMPULAN

=erdasarkan uji penghambat

aktivitas #glukosidase pada "raksi

petroleum eter etil asetat butanol dan

metanol#air diperoleh hasil nilai I0*&

se,ara berturut#turut adalah .*1 ppmJ12. ppmJ *&& ppmJ dan .&; ppm!

/asil tersebut menunjukan bah$a

"raksi yang memiliki penghambat

aktivitas #glukosidase tertinggi dari

keempat "raksi tersebut adalah "raksi

etil asetat buah ketapang dengan

mekanisme penghambat kompetiti"!

/asil identi"ikasi golongan kimia

menunjukan bah$a "raksi etil asetat

buah ketapang mengandung terpen

"lavonoid dan glikosida!

SARAN

Untuk mendukung data

penelitian ini hendaknya dilakukan

penelitian lebih lanjut dengan

melakukan isolasi karakteristik dan

uji in vivo senya$a akti" pada buah

ketapang sehingga tanaman tersebut

lebih dimungkinkan untuk

dikembangkan dalam pengobatan

penyakit diabetes melitus!

DAFTAR ISI

Abrahamson M!@! (1&&.)!

Gptimal gly,emi, ,ontrol in type 1

diabetes mellitus6 "asting and

postprandial glu,ose in ,ontet! Ar,h

Intern Med


8/9

Pharma,ology 9 +herapeuti,s .6 ;


9/9

Documents

Uji Aktivitas Antidiabetes Fraksi