7/23/2019 Uji Aktivitas Antidiabetes Fraksi
1/9
UJI AKTIVITAS ANTIDIABETES FRAKSI-FRAKSI BUAH
KETAPANG (Terminalia catappaL.) DENGAN METODE
PENGHAMBAT AKTIVITAS -GLUKOSIDASE DAN
IDENTIFIKASI GOLONGAN SENYAWA KIMIA DARI FRAKSI
YANG AKTIF
Devi So!"!#i
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Program Studi Sarjana Farmasi
Depok Universitas Indonesia
ABSTRAK
Diabetes melltus (DM) adalah gangguan metabolisme yang ditandai dengan
hiperglikemia dan abnormalitas metabolisme karbohidrat lemak dan ptotein! Salah
satu terapi "armakologi yang digunakan dalam mengobati DM adalah agen
pengambath aktivitas #glukosidase yang dapat mengambat penguraian disakarida
sehingga menunda absorbsi glukosa dan menurunkan kadar glukosa postprandial!
Peneliian terdahulu membuktikan bah$a ektsrak etanol %&' buah ketapang
(Terminalia catappa!) memiliki pengambat aktivitas #glukosidase tertinggi bila
dibandingkan dengan * tanaman lain yang diuji! +ujuan penelitian ini adalah untuk
memperoleh "raksi dari ekstak buah ketapang yang memiliki pengmabath aktivitas #
glukosidase tertinggi dan mengetahui golongan senya$a kimia dari "raksi yang akti"!
Serbuk simplisia buah ketapang dimaserasi menggunakan etanol %&' kemudian
di"raksinsasi menggunakan petroleum eter etil asetat butanol dan metanol! Uji
penghambat aktivitas #glukosidase menggunakan metode Spe,triphotometri, Stop
-ate Determination! Absorbansi p#nitro"enol yang dilepaskan dari p#nitro"enil##D#
glukopiranosida sebagai substrat diukur pada panjang gelombang .&& nm! /asil
menunjukan bah$a "raksi etil asetat buah ketapang memiliki penghambat paling kuat
terhadap aktivitas #glukosidase dengan nilai I0*& 12. ppm! Uji kinetika en3im
menunjukan bah$a "raksi etil asetat buah ketapang mempunyai penghambat aktivitas
kompeteti"! 4olongan senya$a kimia yang terdapat pada "raksi etil asetat buah
ketapang adalah terpen "lavonoid dan glikosida!
5ata kun,i 6 diabetes melitus penghambat #glukosidase +erminaliae ,atappa
!buah ketapang!
7/23/2019 Uji Aktivitas Antidiabetes Fraksi
2/9
PENDAHULUAN
Diebetes Melitus (DM) adalah
gangguan metabolisme yang di tandai
denga hiperglikemia dan abnormalitas
karbohidart lemak dan protein yang
disebabkan oleh penurunan sekresi
insulin penuruna sensitivitas insulin
atau keduannya (Dipro +albert 7ees
Mat3ke 8ells 9 Posey 1&&*)!
Diabetes melitus merupakan salah satu
penyakit yang menyebabkan
peningkatan resiko kematian :
kesakitan dan penuruna kualitas hidup
pasien (Adisak$atana erdsu$ankijPoputta,hai Minipun 9 Suparpprom
1&)!
ebih dari ;&& juta orang
penderita diabetes dan jumlah ini
akan terus meningkat seiring dengan
pertumbuhan populasi! Prevalensi
diabetes global diperkirakan pada
tahun 1&;& jumlah penderita diabetes
akan meningkat menjadi .;2 juta!Diabetes merupakan penyakit kronis
yang menyebabkan komplikasi serius
seperti penyakit jantung ginjal ulkus
pada kaki yang dapat mengakibatkan
amputasi dan bahkan kematian dini di
banyak negara terutama negara#
negara yang berpengasilan rendah atau
mengngah (International Diabetes
Federation 1&&anatta et al!
1&&?)! Diabetes mellitus yang ditandai
dengan hiperglikemia dapat
menyebabkan komplikasi seperti
retinopati neuropati ne"ropati dan
penyakit jantung (/sieh et al! 1&&)!
5erajaan 6 Plantae
Divisi 6 Magnoliophyta
5elas 6 Magnoliopsida
=angsa 6 Mytrales
Suku 6 0ombreta,eae
Marga 6 +erminalia
@enis 6 +erminalia ,atappa !
Sinonim 6+erminalia
molu,,ana amk!
+erminalia pro,era
-ob!
+ermenlia
lati"olia =lan,o non S$art3!
Bama Daerah 6 5etapang ketapas
keta"a (Sumatera)!
5etapang katapnga
(@a$a)! 5atapang
klihi (Busa +enggara)!
+arisei salrise
atapang (Sula$esi)!
8e$a sarina sartalo(Maluku)! -uge
(Irian) (Materia
Medika 2%2)!
Pohon ketapang berukuran
besar tinggi hingga .& m dan diameter
batangnya 1 m! 5ulit kayu sepat
terdapat banyak damar! Daun#daun
7/23/2019 Uji Aktivitas Antidiabetes Fraksi
3/9
yang serupa kulit li,in di bagian atas
dan berambut halus di bagian ba$ah
tersebar di ujung ranting! =unga
berukuran ke,il terkumpulkan dalam
bulir dekat ujung ranting dan ber$arna
hijau kekuningan! =uah berbentuk
telur gepeng keras ber$arna
hijau:kuning:merah atau ber$arna
ungu kemerahan jika buah sudah
masak! Daging buahnya dapat
dimakan tapi berserabut di dalam
buah ketapang terdapat biji yang
berbentuk jorong bagian ujuang agak
merun,in" dan agak pipih sedangkan
bagian pangkal membulat (/yne
2%?)!
5etapang merupakan
tumbuhan asli Asia +enggara dan biasa
ditanam di Australia bagian utara
Inida Pakistan Madagaskar A"rika
=arat Amerika +engah dan Amerika
Selatan! Pohon ketapang ,o,ok
tumbuh di daerah panas dataran
rendah dan dekat pesisir hingga
ketinggian sekitar %&& m di atas
permukaan laut! (/eyne 2%?)!
5etapang menggurkan daeunnya
hingga dua kali dalam setahun! =uah
ketapang umumnya disebarkan oleh
kelela$ar!
Se,ara umum kandungan kimia
yang terkandung pada tanaman
ketapang adalah tannin (puni#,alagin
puni,alin tervla"in A dan =
tergallagin ter#,atin asam ,hebulagi,
geranin granatin = ,orilagin)
"lavonoid (isovitein vitein
isoorientin rutin) dan triterpenoid
(Ahmed et al! 1&&*)!
5ayu dan kulit pohon ketapang
mengandung tanin kitekin epikatekin
asam galat leukosianidin (emmens
9 Soetjipto 221)! Daun mengandung
banyak tannin "alvonoid saponin
triterpenoid "itosterol (Ahmed et al!
1&&*)! Pada daging buah terdapat *'
protein! Pada biji kering terdapat
sbegaian besar minyak yang teriri atas
beberapa asam lemak diantarnya asam
palmitat ***' asam oleat 1;;'asam linoleat ?
7/23/2019 Uji Aktivitas Antidiabetes Fraksi
4/9
Industries td! @epang) diemtil
sul"oksida (DMSG) (Mer,k @erman)
bovine serum albumin (=SA) (mer,k
@erman kalium dihidrogen"os"at
(Mer,k @erman) etnaol petroleum
eter etil asetat butanol metanol
akuades air bebas 0G1 asam klorida
(Mer,kC @erman) iodium (Mer,k
@erman) bismut (III) nitrat (Mer,k
@erman) asam nitrat (Mer,k @erman)
timbal (II) asetat natrium sul"at
anhidrart (Mer,k @erman) asam asetat
anhidrat (Univar USA) asam sul"at
(Mer,k @erman) #na"tol serbuk 3ink
(Mer,k @erman) serbuk magnesium
(Mer,k @erman) aseton serbuk asam
borat (Mer,k @erman) serbuk asam
oksalat (Mer,k @erman) eter besi (II)
klorida natrium klorida (Mallin,krodt
0hemi,als USA) gelatin (Mer,k
@erman) natrium hidroksida (Univar
USA) kuersetin (Mer,k @erman)
alumunium (III) klorida!
P+o,e+e &e'!/,!$!!$
&e$%i!&!$ '!+#!$ &e+e/!,i '!+#!$
&e+e/!,i Bo0*!+# larutan pereaksi
=ou,hardt dibuat dari ,ampuran
iodium dan kalium iodida! Sebanyak 1
g iodium P dan . dilarutkan dengan
akuades se,ukupnya hingga &&& m!
L!+#!$ +!/,! (II) /'o+i!
larutan raksa (II) klorida dibuatdengan ,ara melarutkan ;*% g raksa
(II) klorida dengan akuades
se,ukupnya hingga
7/23/2019 Uji Aktivitas Antidiabetes Fraksi
5/9
mengalir hingga bersih! Setelah selesai
di,u,i buah ketapang ditiriskan pada
temepratur kamar dan ditimbang berat
buah segarnya! =uah tersebut kemuian
diperke,il dengan ,ara ditumbuk lalu
dikeringkan dengan ,ara diangin#
anginkan di udara terbuka dan
terlindungi dari sinar matahari
langsung selama $aktu tertentu (H ?
hari ) karena kandungan air pada buah
ketapang ,ukup banyak! Simplisia
buah ketapang yang sudah ,ukup
kering selanjutnya dimasukan ke
dalam lemari pengering dan ditimbang
berat buah kering guna menghitung
presentase perbandingan berat buah
kering terhadap berat buah segar
(susut pengering)! Simplisia yang telah
kering disortasi kembali untuk
memisahkan benda#benda asing
seperti bagian#bagian tanaman yang
tidak diinginkan dan pengotor lain
yang tertinggal kemudian dibuat
menjadi serbuk dengan menggunakanblender diayak dengan ayakan .&
mesh dan disimpan dalam $adah!
E/,#+!/,i serbuk simplisia
kering sebanyak * kg diekstraksi
dengan ,ara dingin yaitu maserasi
dengan bantuan shaker selama enam
jam menggunakan pelarut etanol %&'setinggi ;#* ,m diatas serbuk
simplisia! Saring maserat pertama
kemudian remaserasi sebanyak lima
kali hingga dihasilkan ekstak ,air
yang sudah tidak ber$arna pekat!
5emudian seluruh ekstrak ,air etanol
diuapkan dengan menggunakan rotary
evaporator pada suhu .*&0 hingga
etanol menguap seluruhnya!
Selanjutnya ekstak dikeringkan
dengan menggunakan "ree3e dry
(dengan dibekukan terlebih dahulu)
untuk mengasilkan ektrak etanol
kering (ampiran 1)! kstrak etanol
kering yang diperoleh ditimbang untuk
mengitung untuk menghitung
rendemen!
F+!/,i$!,i ekstrak etanol
kering di"raksinasi menggunakan
pelarut yang semakin meningkat
kepolarannya berturut#turut dari
pelarut nonpolar hingga pelarut polar
yaitu petroleum eter etil asetat
butanol dan metanol (ampiran ;)!
Fraksinasi dilakukan dengan
metode partisi menggunakan ,orong
pisah! Bamun sebelum di"raksinasi
ekstrak etanol kering didispersikan
dengan air panas terlebih dahulu
kemudian dipartisi dengan
menambahkan petroleum eter dengan
perbandingan 6 ko,ok kuat selama
H jam diamkan hingga terbentuk
dua lapisan dengan ekstrak air yang
berada di bagian ba$ah dan ekstrak :
lapisan petroleum eter di bagian atas
selanjutnya pisahkan keduannya!
kstraksi:"raksi petroleum eter
diuapkan dengan ,ara yang sama
menggunakan pelarut etil asetat dan
butanol hingga diperoleh
ekstrak:"raksi etil asetat kental
ekstrak:"raksi butanol kental dan
ekstrak air! ekstrak air kemudian
diuapkan dengan menggunakan rotary
evaporator hingga sedikit mengental
lalu ditambahkan metanol && m dan
dibiarkan menguap hingga diperoleh
ekstrak:"raksi metanol#air kental!
5emudian ekstraksi:"raksi petroleum
eter etil asetat butanol dan metanol#
air kental yang diperoleh ditimbang
dan disimpan dalam lemari pendingin
pada suhu .0!
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pe$%i!&!$ !*!$ 8i
&e$%i!&!$ ,i1&'i,i! 8ibahan yang
digunakan dalam penelitian ini adalah
buah ketapang (+erminalia ,atappa
!) dari "amili 0ombreta,eae yang
diperoleh dari sekitar lingkungan
Universitas Indonesia dan telah telah
7/23/2019 Uji Aktivitas Antidiabetes Fraksi
6/9
dideterminasi di /erbarium
=ogoriense (IPI) 0ibinong!
Determinasi dilakukan untuk
memastikan bah$a tanaman tersebut
adalah ketapang dan hasil
determinasi dapat dilihat pada
ampiran
digunakan adalah buah (beserta
bijinya) yang tua tetapi belum matang
: masih ber$arna hiaju dan belum
gugur! =uah ketapang yang digunakan
beserta bijinya karena mengikuti
prosedur dari penelitian sebelumnya!
=uah ketapang yang telahdikumpulkan selanjutnya disortasi
dibersihkan dari pengotor dan di,u,i
dengan air mengalir hingga bersih!
Setelah selesai d ,u,i buah ketapang
ditiriskan pada temperatur kamar dan
ditimbang berat buah segarnya! =uah
tersebut kemudian diperke,il dengan
,ara ditumbuk lalu dikeringkan
dengan ,ara diangin#anginkan di
udara terbuka dan terlindung dari
sinar mentari langsung selama $aktu
tertentu (H ? hari) karena kandungan
air pada buah ketapang ,ukup banyak!
Pengerinagn dilakukan untuk
mendapatkan simplisia yang tidak
mudah rusak karena dengan
mengurangi kadar air dapat men,egah
penurunan mutu atau perusakan
simplisa dari pembusukan (Depkes-I 2%*)!
Smplsia buah ketapang ang
sudah ,ukup kering selanjutnya
dimasukan ke dalam lemari
pengeringan dan ditimbang berat
buah kering guna menghitung
persentase perbandingan berat buah
kering terhadap berat buah segar
(susut pengeringan)!
Oi1!,i !/#ivi#!, -
4'/o,i!,e optimasi aktivitas #
glukosidase perlu dilakukan terlebih
dahulu sebelum uji penghambatan #
glukosidase sehingga diketahui
kondisi yang optimal agar en3im
bekerja se,ara optimal! /al ini
dilakukan untuk memastiakn bah$a
hasil yang diperoleh dari penghambat
terhadap aktivitas en3im tersebut!
Gptimis dilakukan karena laju reaksi
yang dikatalisis oleh en3im
dipengaruhi oleh beberapa "aktor
diantarnya adalah suhu p/ dan
konsentrasi substrat (Murray
4ranner 9 -od$ell 1&&2)! Gptimis
yang dilakukan adalah optimasi p/
dan konsentrasi substart (4ranner 9
-od$ell 1&&2)!
5e,epatan reaksi akan
bertambah seiring meningkatnya
konsentrasi seubstrat hingga
men,apai suatu keadaan yang
en3imnya sudah dapat dikatakan
jenuh oleh subtrat! Dalam hal ini
en3im dita"sirkan telah jenuh pada
konsentrasi substrat * mM dimana
konsentrasi tersebut memberikan
aktivitas en3im tertinggi yaitu ;22
U:mg! Dengan demikian konsentrasi
substrat yang digunakan untuk uji
penghabat aktivitas en3im #
glukosidase adalah *mM!
U8i &e$4*!1!# !/#ivi#!, -
G'/o,i!,e uji penghambat
aktivitas #glukosida dilakukan
dengan menggunakan larutan en3im&&1?2 U:m dan larutan substrat
dengan konsentrasi *nM! Pengujian
dilakukan dengan variasi konsentrasi
ekstrak terhadap daya hambat en3im
dengan melihat nilai persen inhibasi
serta mengetahui kekuatan
penghambatnya terhadap en3im
tersebut dengan melihat nilai I0*&I0*&
adalah konsentrasi yang dibutuhkanuntuk menghambat *&' aktivitas
en3im! 5onsentrasi ekstrak yang
digunakan adalah &1*'J &1*'J
&*'J dan '!
kstrak ditimbang H && mg
dan ditambhakna DMSG beberapa
7/23/2019 Uji Aktivitas Antidiabetes Fraksi
7/9
tetes untuk mempermudah kelarutan!
Setelah sudah ,ukup larut larutan uji
dilarutkan dengan menggunakan
pelarut dapar "os"at (p/ ?&) hingga
konsentrasi ekstrak '! arutan uji
tersebut dien,erkan hingga
konsentrasi &*'J &1*'J dan
&1*'!
Pengamatan aktivitas en3im
dilakukan dengan membandingkan
nilai bsorbansi sampel (S) dengan
blanko (=)! larutkan blanko (=)
adalah larutan uji tanpa
sampel:ekstrak namun perlakuannyasama dengan larutan uji sampel!
5ontrol blanko (=&) pun perlakuannya
sama dengan kontrol sampel yaitu
dengan menukar posisi penmabhana
en3im dan natrum karbonat hanya
saja dilakukan tanpa sampel!
Pengujian larutan sampel (S)
dilakukan untuk mengetahui
kemampuan penghambat aktivitasen3im yang diberikan oleh ekstrakdan
akarbose (pembanding)! Sedangkan
pengujian larutan kontrol sampel (S&)
dilakukan sebagai "aktor koreksi
terhadap larutan sampel (S)! Produk
yang dihasilkan dari reaksi antara #
glukosidase diukur serapannya pada
panjang gelombang .&& nm!
KESIMPULAN
=erdasarkan uji penghambat
aktivitas #glukosidase pada "raksi
petroleum eter etil asetat butanol dan
metanol#air diperoleh hasil nilai I0*&
se,ara berturut#turut adalah .*1 ppmJ12. ppmJ *&& ppmJ dan .&; ppm!
/asil tersebut menunjukan bah$a
"raksi yang memiliki penghambat
aktivitas #glukosidase tertinggi dari
keempat "raksi tersebut adalah "raksi
etil asetat buah ketapang dengan
mekanisme penghambat kompetiti"!
/asil identi"ikasi golongan kimia
menunjukan bah$a "raksi etil asetat
buah ketapang mengandung terpen
"lavonoid dan glikosida!
SARAN
Untuk mendukung data
penelitian ini hendaknya dilakukan
penelitian lebih lanjut dengan
melakukan isolasi karakteristik dan
uji in vivo senya$a akti" pada buah
ketapang sehingga tanaman tersebut
lebih dimungkinkan untuk
dikembangkan dalam pengobatan
penyakit diabetes melitus!
DAFTAR ISI
Abrahamson M!@! (1&&.)!
Gptimal gly,emi, ,ontrol in type 1
diabetes mellitus6 "asting and
postprandial glu,ose in ,ontet! Ar,h
Intern Med
7/23/2019 Uji Aktivitas Antidiabetes Fraksi
8/9
Pharma,ology 9 +herapeuti,s .6 ;
7/23/2019 Uji Aktivitas Antidiabetes Fraksi
9/9