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Ultra-eficiencia con UHPLC.
Optimización de rendimiento
y productividad
April 22, 2016
1
Jaume C. Morales
Especialista de Producto
Cromatografía Liquida – Evolución…
April 22, 2016
2
1872 - 1919
La historia de la cromatografía líquida (CL) se inició a principios del siglo XX.
En 1906, el botánico ruso Mikhail Tswett invento CL para separar varios
pigmentos de plantas.
Mikhail Tswett
Tiempo de análisis ~ horas
1906 – Primera Cromatografía Líquida en Columna
Cromatografía Liquida – Evolución…
April 22, 2016
3
No fue hasta 50 años más tarde que, como en todas las técnicas analíticas, se buscara un
mayor rendimiento en términos de : rapidez, selectividad, sensibilidad y usabilidad.
En la década de los 70 se introduce el término HPLC
A pesar de que la gran diferencia respecto a los equipos anteriores era la presión del
disolvente (400bar), el término HPLC es el acrónimo de
HIGH PERFOMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY
ALTO RENDIMIENTO
El sistema de detección fue también uno de los mayores avances pasando de los ojos a
técnicas espectroscópicas (UV-VIS, IR, FLD) y primeros MS.
En paralelo aparece también la FLASH LC (1978) basada en la cromatografía clásica de
columna pero presurizando el solvente (a baja presión, ~ 10-20bar ) y acoplándola también
a los nuevos detectores y recolectores de fracciones para técnicas preparativas.
Cromatografía Liquida – Evolución…
April 22, 2016
4
A partir de la aparición de la HPLC y viendo el enorme potencial de la técnica, la comunidad
científica no esperó otros 50 años para hacer evolucionar la tecnología.
Desde su inserción como técnica analítica en los años 1970, la CLAR ó HPLC ha
evolucionado constantemente para lograr cada vez mayor eficiencia, aumentando la
selectividad, sensibilidad y la velocidad de los análisis.
Principales desarrollos para el avance tecnológico:
• Partículas cada vez más pequeñas y con soportes de mejor calidad
• Introducción de otros tipos de columnas - monolíticas, núcleo sólido y superficie porosa
• Utilización de nuevos instrumentos de mayor robustez y resistencia
• Introducción de los sistemas de bajo flujo NanoLC, CapliaryLC, (CEC)
• Uso de altas temperaturas
• 2D LC
Cromatografía Liquida – Evolución…
April 22, 2016
5
La UHPLC es uno de los modernos desarrollos que mayor eco ha tenido entre los usuarios
de HPLC ………………….
………………………………….Sin embargo es el que más confusión crea en cuanto a
• Concepto
• Uso
• Requerimientos
• Ventajas
• Inconvenientes
• Aplicabilidad día a día
Page 6
UHPLC es :
• Ultra High Perfomance Liquid Chromatography.
• Cromatografía de ultra alto rendimiento en columnas con relleno de alta
eficiencia :
o partículas sub-2-micron (STM)
o de núcleo sólido / superficie porosa
• Cromatografía de alta velocidad y/o mayor separación cromatográfica
La UHPLC es una paso más en la búsqueda de un mayor rendimiento
basado en un relleno que otorga una salto importante en la eficiencia
cromatográfica
Page 7
UHPLC NO es :
• No es un equipo determinado (al menos en Agilent)
• No es necesariamente Ultra Alta presión.
La presión no es ninguna ventaja, sino un efecto colateral indeseado.
¡¡La Alta Presión no separa nada !!
• No es tan sólo usar columnas de 2.1mm.
Cualquier diámetro de columna puede empaquetarse con partículas de
alta eficiencia (4.6 , 4.3, 3.0…)
La UHPLC es un paso más en la búsqueda de un mayor rendimiento
basado en un relleno que otorga una salto importante en la eficiencia
cromatográfica
Page 8
1. Las partículas más pequeñas permiten una menor altura de
plato teórico mostrando pues una mayor resolución
cromatográfica.
2. La resolución cromatográfica sufre menos al incrementar el
flujo cuanto más pequeña es la partícula
Características de UHPLC con STM
Resolución y Flujo
< 2 µm
Totalmente porosas< 2 µm , sub-two-micron (STM)
SOLID CORE < 3 µm
Superficialmente porosas
~ 0.5µm
• Distancia de difusión es menor.
• Luego también la resistencia a la transferencia de masa.
• Eficacia similar (80%) a las totalmente porosas STM.
• Aproximadamente 40-50% presión de las STM.
C
Tipos de partículas
Columnas Poroshell 120 para HPLC y UHPLC:
Características de las Poroshell 120 :
• 80-90% eficacia de las sub 2um
• A ~40-50% menor presión
• 2X eficacia de 3.5um (totalmente porosa)
Sin el doble de presión de las 3.5um
• Frita de 2um para reducir obturaciones
• Límite de presión de 600 bar para el uso en HPLC o
UHPLC.
• La partícula porosa está formada por un núcleo sólido de
1.7um diam. y una capa porosa exterior con un grosor de
difusión de 0.5um.
Poroshell 120 es una opción de columna de alta eficacia y resolución
para mejorar la productividad en LC y LC/MS
1.7um
0.5um
0.5um
Análisis Rápido de Analgésicos con Columna Poroshell 120
Page 12
Optimizando el tiempo de análisis Regla genérica
Longitud / Diam.Part
2
2
1
1~p
c
p
c
d
L
d
LN
Al final obtenemos un método más rápido con la misma resolución cambiando :
• Columna más corta (Lc)
• Diámetro de partícula más pequeño (dP)
• Gradiente más rápido (tG)
13
2.1mm x 50mm 1.8µm
1.00ml/min, 40°C
Grad.: 35-95% en 0.9 min
Analysis Time= 1.1min
UHPLC/RRLC, 40°C
10x faster
PW = 0.5 sec
min0.2 0.4 0.6 0.8 10
Ejemplo de Mejora de Velocidad HPLC vs UHPLC Agilent 1200-RRLC
HPLC, 40°C
PW = 3.4sec
4.6 x 150mm, 5µm
1.20ml/min, 40°C
Grad.: 35-95% en 10.8 min
Analysis Time = 11minmin0 2 4 6 8 10
0.2 0.60 0.4 min
2.1mm x 50mm 1.8µm
2.40ml/min, 95°C
Grad.: 35-95% en 0.38 min
Analysis Time: 0.4min
UHPLC/RRLC, 95°C
27x faster
PW = 197msec
150mm > 50mm: 3x
1.2ml/min on 4.6 > 2.4ml/min on 2.1: 10x3 x 10 = 30x
Hasta 20x más rápido que un HPLC. Manteniendo la resolución
Página 13
4.6 x 150, 1.8um
490 barN = 28669
RS = 1.80 (+ 57%)
S/N = 44
7 Impurezas
Las 7 Separadas
a línea de base
4.6 x 150, 5um
93 bar
N = 7259
RS = 1.15
S/N = 42
Ejemplo de un cliente
Método Impurezas Isocr.
Zoom zona critica
rango tiempo @ 7min
4.6 x 150, 3.5um
165 bar
N = 14862
RS = 1.37
S/N = 50
7 Impurezas
6 No Separadas
a línea de base
Ejemplo de Mejora de Resolución HPLC vs UHPLC con
Columnas de 150mm x 1.8µmEjemplo con muestra compleja: hasta un 60% de Mejora en la Resolución
4 Impurezas
2 No Separadas
a línea de base
HPLC UHPLC
Página 14
Columnas Rapid Resolution High Throughput Zorbax RRHT columns – Partículas 1.8 µm para HPLC rápida con límites de presión
de 600 bar
• Ideal para equipos de pres Max de 600 bar.
• Disponibles en longitudees de 20 mm a 150 mm.
• Para columnas de 150 mm se requiere trabajar a temperatura superior.
• Las columnas de 20, 30, 50 y 75 mm son ideales para separaciones rápidas y
de alta resolución.
• Las columnas de 4.6 mm d.i. son ideales para su uso a la más baja presión.
• También hay columnas de 3.0 y 2.1 mm d.i.
• 140 combinaciones en 15 diferentes fases estacionarias.
RRHT 600 Bar Columns
2 recommended for
Beginning method
development:
• 959941-902.
• 959741-902.
Rapid Resolution High Definition ColumnsZorbax RRHD Columns – 1.8 µm columns for UHPLC with a 1200 bar pressure limit.
• Ideal for fast or high resolution HPLC working at > 1000 bar.
• Available in lengths from 50 mm to 150 mm.
• Available in 2.1 and 3.0 mm i.d.
• Same particles and bonded phases as RRHT columns.
Gains over RRHT Columns
• Use a wider range of solvents in mobile phase (i.e. more methanol
instead of acetonitrile, use solvents with more viscosity).
• Gain resolution with complex samples because you can use longer
column lengths and accompanying increased pressure.
• Gain speed – use higher flow rates (more pressure) for faster analyses.
•
3 minute analysis, Zorbax Eclipse + C18 2.1x100mm, 1.8um100pg on-column, 10 Hz Acquisition.162/220 Pesticides Identified using TOF,
Agilent 1290 with RRHD Eclipse Plus C18
19
Beneficios de la UHPLC
22 de abril de 2016
19
Las nuevas partículas
permiten una menor altura de
plato teórico mostrando pues
una mayor resolución
cromatográfica.
La resolución cromatográfica
sufre menos al incrementar el
flujo
Las nuevas partículas
consiguen picos más estrechos
y más altos.
¡Mayor resolución!
¡Sin incremento de tiempo de
analisis!
¡Menor tiempo de
analisis!
¡Menor consumo de
disolventes sin perdida de
resolución!
¡Mayor sensibilidad!
Si no se aumenta el flujo
Page 20
Serie Agilent 1200 InfinityElevando el Estandard en UHPLC para el Laboratorio
1260
Infinity LC
Modular
600 bar
80 Hz
2x ó 10x Sensivilidad UV
100% HPLC Compatible
Precio HPLC
Capacidades UHPLC
1220
Infinity LC
Integrado
600 bar
80 Hz
El más económico
HPLC y UHPLC
Tecnologia 1260/1290
1290
Infinity LC
Modular
1300 bar
240 Hz
Máximo rendimiento UHPLC
Máxima Flexibilidad
Coste Servicio HPLC
April 22, 201621
Aportaciones de la
UHPLC en el
Análisis Alimentario
22
PAHs en suelos (Hidrocarburos Poli-Aromáticos)
Análisis de suelos
April 22, 2016
22
Agilent Application
Solution
Analysis of PAHs in
soil according
to EPA 8310 method
with UV and
fluorescence
detection
Agilent Application
Note 5990-8414EN
23
Análisis de la mezcla de Patrones
April 22, 2016
23
No: Name:
1 Napthalene
2 Acenaphtylene
3 Acenaphtene
4 Fluorene
5 Phenantrene
6 Anthracene
7 Fluoranthene
8 Pyrene
9 Benzo(a)anthracene
10 Chrysene
11 Benzo(b)fl uoranthene
12 Benzo(k)fl uoranthene
13 Benzo(a)pyrene
14 Dibenzo(a,h)anthracene
15 Benzo(g,h,i)perylene
16 Indeno(1,2,3-cd)pyrene
Column ZORBAX Eclipse PAH 4.6 x 150 mm, 5 μm
Mobile phase A Water
Mobile phase B Acetonitrile
Gradient at 0 min 40%B, at 20 min 95%B
Flow rate 1.5 mL/min
Col.temp.: 25 °C
Inj. volume 3 µL
Data acq. 230 nm (ref. 400 nm) (DAD), 260 nm (Ex.) 350 nm, 420 nm, 440 nm, 500 nm (Em.) (FLD)
24
Column ZORBAX Eclipse PAH RRHT 2.1 x 50 mm, 1.8 μm
Mobile phase A Water
Mobile phase B Acetonitrile
Gradient at 0 min 40%B, at 4 min 95%B
Flow rate 0.85 mL/min
Col.temp.: 25 °C
Inj. volume 0.3 µL
Data acq. 230 nm (ref. 400 nm) (DAD), 260 nm (Ex.) 350 nm, 420 nm, 440 nm, 500 nm (Em.) (FLD)
Cambio a método UHPLCAhorro de Tiempo y Disolvente
April 22, 2016
24
Ahorro de tiempo: 80 %
Ahorro en disolventes: 88 %
No: Name:
1 Napthalene
2 Acenaphtylene
3 Acenaphtene
4 Fluorene
5 Phenantrene
6 Anthracene
7 Fluoranthene
8 Pyrene
9 Benzo(a)anthracene
10 Chrysene
11 Benzo(b)fl uoranthene
12 Benzo(k)fl uoranthene
13 Benzo(a)pyrene
14 Dibenzo(a,h)anthracene
15 Benzo(g,h,i)perylene
16 Indeno(1,2,3-cd)pyrene
From :
ZORBAX Eclipse PAH 4.6 x 150 mm, 5 μm
25
Antioxidantes en Zumo de NaranjaSuplementos Dietéticos, Compuestos Naturales y Aditivos
April 22, 2016
25
Agilent Application
Solution
Analysis of
ascorbic acid,
citric acid and
benzoic acid in
orange juice
Agilent Application
Note 5990-8720EN
26
Análisis de Patrones
April 22, 2016
26
No: Name:
1 Ascorbic acid
2 Citric acid
3 Benzoic acid
1
2
3
min2.5 5 7.5 10 12.5
mAU
0
200
400
600
800
Column Poroshell 120 EC-C18 4.6 x 100 mm, 2.7 μm
Mobile phase A 20 mM HK2PO
4in water, pH 2.5
Mobile phase B Acetonitrile/methanol 40 : 60
Gradient at 0 min 5%B, at 2 min 5%B, at 2.1 min 25%B, at 13 min 25%B, at 13.1 min 90%B, at 18 min 90%B, at 18.1 min 5 % B
Stop time: 25 min
Flow rate 1 mL/min
Col.temp.: 20 °C
Inj. volume 5 µL
Sample therm.: 4 °C
Data acq. 210 nm, 230 nm, 243.5 nm, 10 Hz (DAD)
27
Método UHPLCAhorro de Tiempo y Disolvente
April 22, 2016
27
Column Poroshell 120 EC-C18 4.6 x 100 mm, 2.7 μm
Mobile phase A 20 mM HK2PO
4in water, pH 2.5
Mobile phase B Acetonitrile/methanol 40 : 60
Gradient at 0 min 5%B, at 0.5 min 5%B, at 0.6 min 25%B, at 3 min 25%B, at 3.1 min 70%B, at 3.9 min 70%B, at 4 min 5 % B
Stop time: 5 min
Flow rate 1.5 mL/min
Col.temp.: 20 °C
Inj. volume 4 µL
Sample therm.: 4 °C
Data acq. 210 nm, 230 nm, 243.5 nm, 40 Hz (DAD)
min1 2 3
mAU
0
100
200
300
400
No: Name:
1 Ascorbic acid
2 Citric acid
3 Benzoic acid
1
2
3
Ahorro de tiempo: 80 %
Ahorro en disolventes: 68 %
28
Vitaminas HidrosolublesSuplementos Dietéticos, Compuestos Naturales y Aditivos
April 22, 2016
28
Agilent Application
Solution
Analysis of water-
soluble vitamins
from multivitamin
tablets for
nutrition labeling
Agilent Application
Note 5990-7950EN
29
Analysis of Standard Mixture
April 22, 2016
29
Column Poroshell 120 EC-C18 3 x 150 mm, 2.7 μm
Mobile phase A 25 mM HK2PO
4in water
Mobile phase B Acetonitrile
Gradient at 0 min 1%B, at 5 min 1%B, at 15 min 30%B, at 20 min 30%B, at 20.1 min 1%B
Stop time: 20.1 min
Post time: 5 min
Flow rate 0.45 mL/min
Col.temp.: 35 °C
Inj. volume 5 µL
Sample therm.: 5 °C
Data acq. 205 nm, 214 nm, 220 nm, 232 nm, 266 nm, 280 nm, 20 Hz (DAD)
No: Name:
1 Ascorbic acid
2 Nicotinic acid
3 Calcium pantothenate
4 Pyridoxine
5 Niacinamide
6 Thiamin
7 Folic acid
8 Biotin
9 Cyanocobalamine
10 Riboflavin
30
Fast UHPLC Method
April 22, 2016
30
Column Poroshell 120 EC-C18 2.1 x 75 mm, 2.7 μm
Mobile phase A 25 mM HK2PO
4in water
Mobile phase B Acetonitrile
Gradient at 0 min 1%B, at 0.56 min 1%B, at 1.66 min 30%B, at 2.2 min 30%B, at 2.22 min 1%B
Stop time: 2.22 min
Post time: 1 min
Flow rate 1 mL/min
Col.temp.: 35 °C
Inj. volume 1 µL
Sample therm.: 5 °C
Data acq. 205 nm, 214 nm, 220 nm, 232 nm, 266 nm, 280 nm, 80 Hz (DAD)
No: Name:
1 Ascorbic acid
2 Nicotinic acid
3 Calcium pantothenate
4 Pyridoxine
5 Niacinamide
6 Thiamin
7 Folic acid
8 Biotin
9 Cyanocobalamine
10 Riboflavin
From :
Poroshell 120 EC-C18 3 x 150 mm, 2.7 μm
0.45 mL/min
Ahorro de tiempo: 90 %
Ahorro en disolventes: 70 %
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Serie Agilent 1200 InfinityElevando el Estandard en UHPLC para el Laboratorio
1260
Infinity LC
Modular
600 bar
80 Hz
2x ó 10x Sensivilidad UV
100% HPLC Compatible
Precio HPLC
Capacidades UHPLC
1220
Infinity LC
Integrado
600 bar
80 Hz
El más económico
HPLC y UHPLC
Tecnologia 1260/1290
1290
Infinity LC
Modular
1300 bar
240 Hz
Máximo rendimiento UHPLC
Máxima Flexibilidad
Coste Servicio HPLC
Infinity II - Foco en la Eficiencia:
April 22, 2016
32
Eficiencia Analítica
Eficiencia Instrumental
Eficiencia Laboratorio
Un Nuevo Punto de
Referencia
en Eficiencia
Agilent 1290 Infinity II LC, la nueva
generación en “Ultra High
Performance Liquid Chromatography”
Aumenta la eficacia de su empresa
en tres dimensiones:
Eficiencia Analítica
Eficiencia Instrumental
Eficiencia Laboratorio
April 22, 2016
33
:
Eficiencia Analítica.Incomparable rendimiento de Separación y Detección entregar los
datos de análisis de la más alta calidad para la máxima confianza en
sus resultados :
• Máxima eficacia en la separación mediante UHPLC:
• Ultra low Dispersion kits (ULD)
• LC-1DLC-2D comprehensive multidimensional
• 1300 bars a 2mL/min, hasta 5mL/min a 800 bars
• Mínimo “carryover” (contaminación cruzada): <9 ppm con la opción
de multi-lavado con 3 solventes y limpieza del asiento de la aguja.
• Máxima sensibilidad y rango dinámico: DAD: 60mm max Ligth cell
y HDR. // nuevo ELSD 1290 Series II.
• Máxima precisión de tiempos de retención (flujo y composición).
Efficiency MessagingInfinity II – La clave de la Eficiencia
Eficiencia Analítica
Eficiencia Instrumental
Eficiencia Laboratorio
April 22, 2016
34
Efficiency MessagingInfinity II – La clave de la Eficiencia
Eficiencia Instrumental
• Ciclos de inyección más rápidos: hasta 5 seg. con opción de doble
aguja y sin comprometer “carryover” o discriminación de muestras por el
solapamiento inyección & análisis.
• Mayor capacidad de muestras refrigeradas: hasta 6144 muestras en
microplacas, 432 viales 2ml, combinaciones entre múltiples tipos de placas,
viales, eppendforfs,…..
• Mayor Flexibilidad: para todo tipo de cromatografías UHPLC/ HPLC
/Semi-preparativo/ Muldimensional/….
• Trabajar con todo tipo de diámetros de columnas desde 1 hasta 8 mm. d.i.:
• Inyectar desde menos de 1µL hasta 900µL sin intervención del usuario y sin
comprometer prestaciones, gracias a la opción de doble aguja.
• Nuevos conectores para intercambiar muy fácilmente columnas hasta 1300
bars y SIN necesidad de herramientas
• Hasta 8 columnas de 20º por debajo de temperatura ambiente hasta 110ºC
• Mayor capacidad de Automatización:
• Múltiples tipos de válvulas muy fácilmente intercambiables, para selección
de disolventes, intercambio y regeneración de columnas, limpieza o
enriquecimiento de muestra.
• Inyectores programables para preparación de muestra: dilución, mezclado,
derivatización,……
Eficiencia Analítica
Eficiencia Instrumental
Eficiencia Laboratorio
April 22, 2016
35
Eficacia del Laboratorio• Emulación de otros U/HPLC’s (opción ISET): facilitar la transferencia de
métodos.
• Poder disponer de todas las prestaciones de los Agilent 1290 II Infinity
incluso controlándolos desde softwares de otras firmas, gracias a los nuevos
Drivers RC.net.
• Reducir el coste operativo
• Compatible con los módulos 1100/1200/1260/1290.
• “Early Maintenance Feedback” (EMF) y “Lab Advisor”: para que el propio usuario
pueda monitorizar, prever, mejorar el mantenimiento (guiado) del equipo.
• Compromiso Agilent de un mínimo de 10 años de valor de la inversión.
Efficiency MessagingInfinity II – La clave de la Eficiencia
El Nuevo Agilent 1290 Infinity II LC
Page 36
April 22, 2016
37
1290 Infinity II
Sistemas de
Bombeo
Evolución
• Nuevos modelos:
• 1290 Infinity II High Speed Pump (HPM)
• 1290 Infinity II Flexible Pump (LPM)
• Rango de Potencia mejorado con 1300bar
• Nuevo diseño con 2 puertas del
1290 Infinity II
Bombas1290 Infinity II¿Que es nuevo?
Mezcla en baja presión Mezcla en alta presión
Page 38
Alta velocidad y resolución
1300 bar @ 2.0 mL/min
800 bar @ 5.0 mL/min
Volumen muerto: 10 µl / 45 µl
Amortiguador electrónico de pulsos
Procesador de doble nucleo
dedicado al control de pulsos
Motores de 300 picolitros por
paso
Largos intervalos de mantenimiento
“Automatic Leak-Correction“
150 Litros de disolvente
Automatismo
Purga automática
Válvula de
Selección de disolvente
Mezclador
“Jet Weaver“
Desgasificador
Pistones de
“Silicon –Carbide“ Válvula de
purga
Canal
B
Canal
A
Page 39
1290 Infinity II LC Binary PumpLa siguiente generación en Tecnología de Bombas LC
ON
OFFMotor del Pistón
1290 Inifinity II
Chanel A
1290 Inifinity II
Chanel B
• Motores independientes
para cada pistón
• Pasos de 300 picolitros
HPLC 1200
UHPLC 1290-II
Page 40
1290 Infinity Binary PumpAmortiguación electrónica de pulsos
1200 Series
Channel A
Passive Damper
0 - 300 µl
Passive Mixer
400 µl
1200 Series
Channel B
1290 Inifinity II
Chanel A
1290 Inifinity II
Chanel B
Very Low Noise
~ 800 µl
+ =Aktive Damping
10µl
Jet Weaver Mixer
35µl
Lowest Noise
• min. 50% lower
Delay Volume
• 10µl / 45µl
• 80x / 20x lower
Page 41
1290 Infinity Binary PumpEl mas bajo volumen muerto y el mas bajo ruido de mezcla
Tecnología:
• Tecnología Propietaria de Microfluidos Multi-capa.
• Bandas de difusión de acero con estructuras de
(100x120µm)
La mas alta eficiencia de mezcla con el mínimo
volumen
• 35 µl para aplicaciones UV estándar
• 100 µl para Aplicaciones TFA
Page 42
Agilent Jet WeaverSiguiente generación: Mezclador de alta eficacia
El 1290 Infinity II “Flexible Pump” es la única Bomba con
mezcla en baja presión que combina el rendimiento de la
mezcla en alta presión de las bombas UHPLC, con la
flexibilidad de la Bomba Cuaternaria. Esta Bomba alcanza
la máxima calidad de gradiente en el rango de composición
del 1 to 99 %.
Mayor precisión del tiempo de retención para una
Identificación de picos mas segura
Page 43
44
Nuevo mezclador InletWeaver
basado en la super-eficiente
tecnología Jet Weaver
Mezclador opcional en alta presión (sólo para
condiciones muy críticas- p.e. TFA)
Premezcla el eluyente
antes de entrar en el
cabezal de bombeo
Agilent Inlet WeaverPremezclador en baja presión de alta eficacia
45
0 10 20 30 40 50
mAU
0
50
100
150
200
250
Gradiente EscalonadoSaltos 1 % del 0 a 10 %
1290 Infinity II Quaternary systemQuaternary UHPLC from other vendor
1%
3%
7%
10%
Salto in
icia
l
Influencia Rango Composición: Prestaciones con Pequeñas Proporciones de % Orgánico
Purga Automática (controlada por software)
Page 46
Válvula Multifunción Mayor Comodidad y Flexibilidad
Filtrado de eluyentes en línea
para proteger la columna
Page 47
Válvula Multifunción Mayor Comodidad y Flexibilidad
Lavado Automático del filtro
en contracorriente (backflush)
Page 48
Válvula Multifunción Mayor Comodidad y Flexibilidad
Mezclado Extra para las aplicaciones más exigentes
Para el mínimo rizado/ruido de la línea de base
(p.e.TFA como modificador)
Page 49
Válvula Multifunción Mayor Comodidad y Flexibilidad
1290 Infinity II
Inyectores Automáticos
Evolución y Revolución
April 22, 2016
51
Nuevo Multisampler Revolución
1260 Multisampler
600 bar
Infinity II Multisampler
1300 bar
Refrigeración por compresor interno (opcional)
Doble puerto de Inyección (opcional)
Multi-lavado (opcional)
Infinity II 12901260
52
April 22, 2016
1290 Infinity LCpág.: 53
Opción Multi-lavado• Sofisticada opción de lavado integrada: para el asiento y el exterior de la la aguja en
“contra corriente”, con 3 disolventes.
Opción de refrigeración • Refrigeración basada en compresor, de: 4°C – en adelante!
• Integrada en el Inyector y auto instalable por el usuario
Programa Manual de Inyección• Permite realizar mezclas, derivatizaciones, diluciones …..
Alta capacidad de muestras• Hasta 16 Well Plates (8 Deep), 8 Vial Plates / 6144 muestras).
• 432 viales 2ml refrigerados
• Combinaciones de multiples tipos de placas, viales, eppendfor’s,….
Opción Doble Jeringa de Inyección• La Inyección con doble jeringa permite realizar inyecciones cada “5 sec”
• La Inyección con doble jeringa permite configurar los dos puertos con loops
preparativos / analíticos sin contaminaciones ni cambios en el Hardware
Nuevo Agilent 1290 Infinity “Multisampler”Capacidades principales
pág.: 541290 Infinity LC
Bomba de lavado de aguja
Dispositivos de medida de muestra
Opciones de cabezales:
• 40 µL (1300 bars)
• 100 µL (1300 bars)• 500 µL (600 bars) / 900µL (400bars)
• Opción Multi-draw
Doble Aguja setup
• Idénticos o Diferentes
volúmenes de Inyección
Válvula de 6 puertos
• Rápido intercambio
• 1300 bar
• Bomba peristaltica
• Lavado de aguja (1 solvente)
Hidraulica del MultisamplerDoble-aguja setup
1290 Infinity LCpág.: 55
Único sistema de Doble Aguja
• Incremente la velocidad de Inyección
Eliminando el tiempo extra necesario para la
aspiración de la muestra y de lavado de la
aguja, al usar 2 bucles de tamaño similar
(e.g. 20µL/20µL)
• Flexibilidad única
Permite montar Loop´s analíticos y
Preparativos en cada puerto de Inyección, sin
compromisos de contaminación ni cambios en
el Hardware (e.g. 20µL/500µL)
• Sin Contaminación Cruzada
Se puede utilizar un puerto para los Standard y
otro para las muestras
1 ÚNICO
Meetering device
con 2 loops
Injection de Doble AgujaLa Inyección separada para calibrantes & muestras previene la
contaminación
1290 Infinity II Multisampler
pág.: 561290 Infinity LC
• 3 diferentes disolventes de lavado
• Bomba inerte para el lavado de la aguja
• Bomba de alta presión
• Lavado del asiento en contra
corriente
Dispositivos de medida de muestra
Opciones de cabezales:
• 40 µL
• 100 µL
• 500 µL / 900µL
• Opción Multi-draw
Valvula de selección de disolventes
Bomba de lavado
Válvula de 6 puertos
• Rápido intercambio
• 1200 bar
Hidraulica del MultisamplerMulti lavado setup
1290 Infinity LCpág.: 57
Lavado del interior de la aguja
Se hace pasar flujo por el interior de la
aguja.
Lavado del exterior de la aguja
Programa de selección de tres disolventes
externos para el lavado exterior de la aguja.
Lavado del asiento de la aguja en
contracorriente
Programa de selección de tres disolventes
externos para el lavado del asiento
Utilizando la nueva Opción de Multi-lavado se podrán
lavar interna y externamente todos los conductos y aguja
con tres distintos disolventes, así como el asiento de la
aguja, en contracorriente
Baja contaminación cruzada Para una alta calidad de sus datos
1290 Infinity LCpág.: 58
El 1290 Infinity II Multisampler con Multi-Lavado
reduce la contaminación cruzada a menos de 9 ppm!
Baja contaminación cruzada Para una alta calidad de sus datos
1290 Infinity LCpág.: 59
El 1290 Infinity II Multisampler permite la carga de hasta 16
shallow well MTPs. Con una capacidad máxima de hasta
6144 muestras en un módulo igual de ancho que el resto
del equipo LC.
Además de la alta capacidad, admite un variado elenco de
formatos de contenedor de muestra : vial 2mL, vial 6mL,
wellplate96, wellpalte384, wellp fondo/medio, eppendorf,
etc…sin necesidad de reconfiguración del sistema.
Deep-well MTPs, large vials
Medium-well MTPs (96/384),
std. 2ml vials
Shallow-well MTPs (96/384)
Alta capacidad de muestras con diferentes
formatos en el tamaño de un módulo normal
1290 Infinity II - Máxima EficienciaIntuitivo y fácil de usar
60
Entrada de Muestras Grafica
• Simple y efectiva herramienta
grafica para la entrada de
muestras en OpenLAB-CDS
• Para todos los Agilent LC
Autosamplers
• Configurable para cualquier
tipo de bandeja de viales o
pocillos
Blancos
Muestras?
Patrones?
April 22, 2016
Horno de Columnas
1290 Infinity II
Multicolumn
April 22, 2016
61
Máxima Eficiencia de la Industria- Significativas mejoras – MCT
Horno de Columnas Multicolumn con acceso a las
columnas mucho mas fácil
• Capacidad para 4 columnas de (30 cm)
• 4°C hasta110°C
Tapa vasculante: • Apertura 90°utilizable como soporte para facilitar la instalación de las columnas
• Apertura 180 ° para facilitar el acceso a las columnas
• Retirada de la Tapa para un acceso total
El 1290 Infinity II Horno Multicolumn con espacio para
alojar hasta ocho columnas cortas, o cuatro columnas
de 30 cm o cualquier combinación de columnas conectadas
a la válvula de selección interna, permite un rápido y simple
cambio de método.
Flexible para todas las aplicaciones
Page 63
Un nuevo nivel de automatización
Page 64
65
Nuevos Conectores: Pequeños detalles que facilitan el trabajo
El muelle empuja al capilar constantemente hacia el puerto receptor
Volumen muerto
cero garantizado
Nuevo conector
Quick-Connect Conector sin Herramientas
hasta1300 bar
Nuevo conector
Quick-Turn Apretado manual hasta 600 Bar
Utilizando una llave hasta 1300 Bar
• Capilar intercambiable.
• Reutilizable (+200 veces)
para todos tipo de columnas.
Maxima Eficiencia Instrumental: Sin Herramientas
Conectores “Quick-Connect“ - Mejora significativa
Revolucionario Conector sin Herramientas Quick-Connect
con cero volumen muerto para conexiones en UHPLC
66
Preparado para soportar presiones hasta 1300 bar
Diseño con muelle de presión que garantiza un “cero“ volumen muerto
Reutilizable (+200 veces) para todos los tipos de columnas
Capilar intercambiable
1. 2.
3. 4.
April 22, 2016
El Conector Rápido Agilent, A-Line para columnas UHPLC
para conexiones con cero volumen muerto
• Sin necesidad de Herramientas hasta 1300 bar
• Diseño con muelle de presión que garantiza un volumen
muerto cero
• Reutilizable para todos los tipos de columna
Baja dispersión para una alta resolución
Muelle
Page 67
1290 Infinity II
Detectores
April 22, 2016
68
Evolución
1290 Infinity II VWD (G7114B) Doble Longitud de Onda (hasta 5 Hz) con mejores especificaciones
de ruido
Velocidad de adquisición 240 Hz para separaciones ultra rápidas
3 Celdas Preparativas compatibles con 1290 Infinity I VWDs
1290 Infinity II DAD (G7117B) Rendija programable 1,2,4 8 nm
Velocidad de adquisición 240 Hz para separaciones ultra rápidas
Mejores especificaciones de precisión en la Longitud de Onda
Segunda generación de Control Electrónico de Temperatura ETC
proporciona la máxima estabilidad de línea de base haciendo el
Detector, insensible a las condiciones de temperatura y humedad del
laboratorio.
1290 Infinity II DAD FS (G7117A) Precio mas bajo que el 1290 Infinity DAD G7117B
Rendija fija de 4 nm
Velocidad de adquisición 120 Hz para separaciones rápidas
Resto de especificaciones similares al modelo1290 Infinity DAD G7117B
1290 Infinity II Detectores UV
Page 69
1290 Infinity UHPLC Diode Array Detector- La necesidad de una nueva tecnología
10 mm camino óptico13 µL volumen
4.6 mm id column
+ =
Columna corta
d.i. 2.1 mm
?Dispersión pico• Pérdida de resolución• Menor señal (S/N)
¿Cómo lograr celdas de menor volumen?
Corto camino óptico (3 mm, 2 µL)
Alta transmisión de luz => bajo ruido Baja S/N Baja transm. de luz => elevado ruido Low S/N
Largo camino óptico (10 mm, 0.5 µL)
Guía de ondas Optofluídica
• Largo camino óptico
• Pequeño d.i./ volumen de celda
• Alta transmisión de luz La mayor S/N
Solución:
Non-coated fiber (fused
silica)
CELDA Estandard: De 10 mm de camino óptico y tan solo 1 µl de volumen
CELDA de Alta Sensibilidad: De 60 mm de camino óptico y tan solo 4,8 µl de volumen
DISEÑO OPTICO PARA OFRECER UNA MINIMA DISPERSIÓN
Page 71
Cartucho de Celda “Max-Light“Tipos de Celda
72
Deuterium lamp
Max-Light cartridge cell
Programmable
slit
1024 element
diode-array
GratingMirror 240 Hz
Guía de ondas optofluídica
1290 Infinity II Detector Diode Array Como trabaja la óptica
min0 0.1 0.2 0.3 0.4
mAU
0
10
20
30
40
50
60
La nueva Celda de Flujo ULD optimizada y la velocidad de
adquisición hasta 240 Hz incrementan dramáticamente la
resolución Cromatográfica en sus separaciones ultra rápidas
min0 0.1 0.2 0.3 0.4
mAU
0
20
40
60
80
100
Data rate = 240 Hz
Data rate = 20 Hz
Baja dispersión para una alta resolución
Page 73
La celda con camino óptico de 60 mm del 1290 Infinity II
DAD permite alcanzar niveles de ruido típicos de menos de
± 0.6 μAU/cm para alcanzar los mas bajos niveles de
detección.
1290 Infinity II DAD con
celda de Alta Sensibilidad
Detector convencional
Capacidades de detección únicas
Page 74
G7102A
Nombre
1290 Infinity II
ELSD
(No-Refrigerado)
1290 Infinity II
ELSD
(Refrigerado)
Modelo anterior G4261B
Fuente de Luz Laser azul
Capacidades
• 90 x Rango Dinámico (HDR)
• Hasta 9x mas sensible que modelos anteriores
• Puede trabajar a temperatura Sub-ambiente
(mejor respuesta para componentes volátiles)
• Flujo de nebulización variable para una
uniformidad en la respuesta
• Velocidad de adquisición (80Hz)
• Comunicación LAN
Nuevo 1290 Infinity II ELSDMáxima eficiencia Analítica
Page 77
Detector
noise
1*10-2
Conc [µg/mL]
Detector Signal
[mV]
LOD
(3x S/N)
Upper limit
1000
Upper HDR limit
70,000
HDR range
90 x Rango Dinámico Lineal (HDR)
Un Rango Dinámico Lineal mas alto,
proporciona mayor precisión.
Respuesta típica
otros modelos ELSD
1290 Infinity II ELSD Consiguiendo Alto Rango Dinámico
Page 78
Infinity II
Aplicaciones
especiales
April 22, 2016
81
La innovadora tecnologia de emulación Agilent iSET permite
utilizar sus metodos validados sin ninguna modificación,
consiguiendo los mismos resultados en el 1290 Infinity II
que el LC de origen. Ya es posible reemplazar sus viejos
LC´s sin necesidad de modificar sus preciados métodos.
Todos los 1290 Infinity II pumps viene con iSET incluido.
Sistema de emulación iSET
Page 82
83
Tecnología de Emulación Inteligente ISET¿Como funciona?
84
Programa de gradiente
1290 gradiente
1200 gradiente
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
0
50
100
150
200
250
300
350
400
min
mAU
InjecciónMismas condiciones de gradiente pero
desplazando el gradiente y emulando el
perfil de gradiente a clonar
Tecnología de Emulación Inteligente ISET¿Como trabaja (p.e. 1290 con un 1200)?
85
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
0
50
100
150
200
250
300
350
400
min
mAU
InyecctiónMismas condiciones de gradiente pero
desplazando el gradiente y emulando el
perfil de gradiente a clonar
Programa de gradiente
1290 gradiente
1200 gradiente
Tecnología de Emulación Inteligente ISET¿Como trabaja (p.e. 1290 con un 1200)?
La innovadora tecnologia de emulación Agilent iSET permite
utilizar sus metodos validados sin ninguna modificación,
consiguiendo los mismos resultados en el 1290 Infinity II
que el LC de origen. Ya es posible reemplazar sus viejos
LC´s sin necesidad de modificar sus preciados métodos.
Todos los 1290 Infinity II pumps vienen con iSET incluido.
Sistema de emulación iSET
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87
Alliance
2695
345 bar
1290 Infinity
1200 bar
1290 Infinity
1200 bar
with ISET
EJEMPLO DE TRANSFERENCIA DE METODO4.6 x 100 mm Zorbax Eclipse Plus, 5 µm, flow: 2 mL/min, 25-95% ACN-Water
Used Method: % B: 25-95 %; Time : 8 min; Flowrate: 2 ml/min
1290
ISET
1200
1290
1260
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EJEMPLO DE TRANSFERENCIA DE METODO4.6 x 100 mm Zorbax Eclipse Plus, 5 µm, flow: 2 mL/min, 25-95% ACN-Water
Seleccione el tipo de separación deseada con un simple giro de conmutador
para seleccionar Cromatografía convencional o 2D, dependiendo de la
complejidad de la muestra.
Flexible para todas las aplicaciones
Page 89
La solución 1290 Infinity II 2D-LC lleva la tecnología 2D-LC a una nueva
dimensión de facilidad de uso para un acceso rápido a datos ortogonales
2D-LC bien sea por heart-cutting, multiple heart-cutting o comprehensive.
Alta capacidad de picopara separaciones complejas
1D-Setup
2D-Setup
Technical Note 5991-4843EN
Conmutable Cromatografía 1D/2DCambie entre UHPLC y 2D-LC sin modificaciones manuales
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1D-LC 2D-LC
Flexible para todas las aplicaciones
Page 92
OpenLAB Enterprise Content Management Share standard methods and data worldwide
Secure results for compliance
Combine data into reports from multiple vendors
OpenLAB Chromatography Data
System Gain new insights into your data with
advanced visualization tools
Get the most out of your instruments by controlling all parameters
Provide tailored reports to your clients
Nueva referencia
en
OpenLAB Electronic Lab Notebook Search all lab notebooks in seconds –make
smarter, faster decisions.
Send/receive analysis requests & view status at-a-glance
Share results with clients in real time
OpenLAB Data Store Store methods centrally
Find & retrieve results quickly
Streamline data backup in smaller labs
OpenLAB CDS, el mejor software cromatográfico del
mer
Page 93
El nuevo Wizard de Mantenimiento Agilent le muestra en
videos las tareas mas usuales de mantenimiento de su
equipo asi como las referencias de las piezas a sustituir.
Available for 1290 Infinity II LC ca. March 2015
Ahorre costes realizando el mantenimiento de su
UHPLC
Page 94
La nueva eFamiliarization for the 1290 Infinity II UHPLC y
OpenLAB CDS nos permitira realizar una familiarización
mas efectiva asi como entrenar a los nuevos técnicos que
se incorporen al laboratorio.
Nueva e-Familiarización para el 1290 infinity II y
OpenLAB-CDS
Page 95
96
Herramienta transformación métodos
HPLC => UHPLC
22 de abril de 2016
96
“Method Translator and Cost Saving Calculator”
Esta avanzada calculadora le permite
calcular el ahorro en coste del análisis
basado no solo en los costes de
disolventes sino también de los gastos
regulares de un laboratorio.
Utilícela on-line aquí
ó
descárguela para instalarla en su PC.
Renovar todos los sistemas de un laboratorio es un gran reto.
Gracias a la inter-compatibilidad de todas las series LC de
Agilent, la actualización puede afrontarse gradualmente y
facilita el reto tecnológico.
Transición de bajo coste con la actualización
progresiva
Agilent Confidential
98
Proporcione a su HPLC 1100/1200 ó 1260
Infinity LC, un aumento de rendimiento
• Agilent ofrece una compatibilidad casi ilimitada entre los
módulos 1260 y 1290 Infinity con los modelos anteriores
series 1100 o 1200.
• Esta capacidad única de los HPLC Agilent, facilita la
mejora paso a paso para cualquier sistema LC Agilent -
¡ahora o en el futuro!
• Actualice su Detector para incrementar 10x la
sensibilidad
• Actualice su compartimento de columnas para
incrementar su capacidad y rango de temperaturas
• Actualice su Autosampler para ganar en velocidad y
capacidad
98
April 22, 2016
Actualice sus antiguos HPLC 1100 paso a paso
April 22, 2016
Confidentiality Label
99
April 22, 2016
Confidentiality Label
100
April 22, 2016
Ultra-eficiencia con UHPLC
¿Preguntas?
