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I
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
EVALUACIÓN DEL EFECTO DE TRES CONCENTRACIONES DE MIEL
DE ABEJAS EN EL TRATAMIENTO DE MASTITIS SUBCLÍNICA
BOVINA
Autora: Carpio Espinosa Ana Carolina
Tutor: Dr. Mosquera Andrade Jorge Adalberto
Quito, abril 2018
II
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
Evaluación del efecto de tres concentraciones de miel de abejas en el
tratamiento de mastitis subclínica bovina
Trabajo de titulación presentado como requisito previo a la obtención del
Título de Médico Veterinario y Zootecnista
Autora: Carpio Espinosa Ana Carolina
Tutor: Dr. Mosquera Andrade Jorge Adalberto
Quito, abril 2018
I
DERECHOS DE AUTOR
Yo, Ana Carolina Carpio Espinosa en calidad de autor y titular de los
derechos morales y patrimoniales del trabajo de titulación “Evaluación del
efecto de tres concentraciones de miel de abejas en el tratamiento de
mastitis subclínica bovina”, modalidad proyectos de investigación , de
conformidad con el Art. 114 del CÓDIGO ORGÁNICO DE LA ECONOMÍA
SOCIAL DE LOS CONOCIMIENTOS, CREATIVIDAD E INNOVACIÓN,
concedo a favor de la Universidad Central del Ecuador una licencia gratuita,
intransferible y no exclusiva para el uso no comercial de la obra, con fines
estrictamente académicos. Conservo a mi favor todos los derechos de autor
sobre la obra, establecidos en la normativa citada.
Así mismo, autorizo a la Universidad Central del Ecuador para que realice
la digitalización y publicación de este trabajo de titulación en el repositorio
virtual, de conformidad a lo dispuesto en el Art. 144 de la Ley Orgánica de
Educación Superior.
El autor declara que la obra objeto de la presente autorización es original
en su forma de expresión y no infringe el derecho de autor de terceros,
asumiendo la responsabilidad por cualquier reclamación que pudiera
presentarse por esta causa y liberando a la Universidad de toda
responsabilidad.
Firma: ________________________________
Ana Carolina Carpio Espinosa
CC. 171793245-1
Dirección electrónica: [email protected]
II
APROBACIÓN DEL TUTOR
DEL TRABAJO DE TITULACIÓN
Yo, Jorge Adalberto Mosquera Andrade en mi calidad de tutor del trabajo
de titulación, modalidad proyectos de investigación, elaborado por ANA
CAROLINA CARPIO ESPINOSA; cuyo título es: EVALUACIÓN DEL
EFECTO DE TRES CONCENTRACIONES DE MIEL DE ABEJAS EN EL
TRATAMIENTO DE MASTITIS SUBCLÍNICA BOVINA, previo a la
obtención del Grado de Médico Veterinario y Zootecnista; considero que el
mismo reúne los requisitos y méritos necesarios en el campo metodológico
y epistemológico, para ser sometido a la evaluación por parte del tribunal
examinador que se designe, por lo que lo APRUEBO, a fin de que el trabajo
sea habilitado para continuar con el proceso de titulación determinado por
la Universidad Central del Ecuador.
En la ciudad de Quito, a los 27 días del mes de Marzo de 2018.
___________________________________
Dr. Jorge Adalberto Mosquera Andrade
DOCENTE-TUTOR
CC. 1702609197
III
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL
El tribunal constituido por:
Presidente Dr. Gustavo Salgado
Vocal principal Dr. Christian Vinueza
Vocal principal Dr. Javier Vargas
Luego de receptar la presentación oral del trabajo de titulación previo a la
obtención del título (o grado académico) de Médico Veterinario y
Zootecnista presentado por la señorita ANA CAROLINA CARPIO
ESPINOSA
Con el título: EVALUACIÓN DEL EFECTO DE TRES
CONCENTRACIONES DE MIEL DE ABEJAS EN EL TRATAMIENTO DE
MASTITIS SUBCLÍNICA BOVINA
Emite el siguiente veredicto: _______________________
Fecha: _________________________________
Para constancia de lo actuado firman:
Nombre y Apellido Calificación Firma
Presidente _______________ __________ ____________
Vocal 1 _______________ __________ ____________
Vocal 2 _______________ __________ ____________
IV
DEDICATORIA
“Si hablas con los animales ellos hablarán contigo y os conocereis
mutuamente. Si no hablas con ellos, no los conocerás. Y lo que no conoces
lo temerás. Lo que uno teme, uno lo destruye”. Chief Dan George
Dedico ésta tesis a mis Padres: Laurentina y Diego y a mi hermana Majito,
quienes desde pequeña, me enseñaron a luchar por mis sueños.
¡Lo logré!
Ana carolina Carpio Espinosa
V
AGRADECIMIENTOS
A mi papá Dieguito, durante todo mi proyecto de tesis, estuviste para mí y
es algo que nunca olvidaré, todo tu apoyo incondicional especialmente por
acompañarme en las madrugadas de ordeño a pesar de que no te gusten
las haciendas, ¡te confundían con el dueño, todo un hacendado! Gracias
papito.
A mi mamá Lauri, que ha sido y será siempre mi motivación número uno
para seguir adelante, t fuerza, valentía y amor han hecho de mi lo que soy
ahora. ¡Eres perfecta mamá!
A mi ñañita Majita, mi mejor amiga, que a pesar de la distancia siempre
estás ahí para mí, eres mi ejemplo sin ti no sería completa, Te adoro ñañi.
A mi tutor y amigo el Dr. Jorge Mosquera por ser único como es él, gracias
por brindarme tanta sabiduría.
A mi querida Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia y al Centro
Experimental Uyumbicho, por permitirme ser una profesional de gran valor
ético y moral.
Al laboratorio de Bacteriología y a todos sus miembros, gracias por abrirme
sus puertas y aprender de ustedes.
A la Hacienda Casiganda, al propietario y trabajadores por permitirme
realizar un proyecto de investigación con sus animales.
A mis abuelitos: Henry por estar siempre pendiente de mí y Abuelito Mario,
propietario de los panales de abejas de la miel utilizada en éste proyecto.
Gracias Abuelitos
A mis tías, mi prima Janin y mi primito Gabrielito que son siempre motivo
de felicidad.
A mis amigos Alejo P. y J. Morocho quienes me ayudaron en el desarrollo
de mi proyecto de tesis, a Yadi, Flaco, Alj, Lucho, Diego y a mis queridas
amigas del colegio por compartir momentos de felicidad siempre.
VI
Y a mi felicidad entera de cuatro patas; a mis preciosos perritos que me han
acompañado en toda mi carrera de veterinaria y son mi inspiración: Mi
adorado y eterno Pinky, mi princesita Patitas, Pelusa, Adolfo, Sochita, Rafa
y Betina.
VII
ÍNDICE GENERAL
DERECHOS DE AUTOR ............................................................................ I
APROBACIÓN DEL TUTOR ...................................................................... II
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL .................... III
DEDICATORIA ......................................................................................... IV
AGRADECIMIENTOS ................................................................................ V
RESUMEN ............................................................................................. XIV
ABSTRACT ............................................................................................. XV
CAPÍTULO I ............................................................................................... 1
INTRODUCCION ....................................................................................... 1
CAPÍTULO II .............................................................................................. 4
OBJETIVOS ............................................................................................... 4
Objetivo general ..................................................................................... 4
Objetivos específicos .............................................................................. 4
CAPÍTULO III ............................................................................................. 5
REVISIÓN DE LITERATURA..................................................................... 5
Fisiología de la glándula mamaria bovina ............................................... 5
Mastitis Bovina ....................................................................................... 5
Mecanismos de defensa ante la mastitis ............................................. 6
Mecanismos no inmunológicos ........................................................... 6
Mecanismos inmunológicos ................................................................ 6
Patogenia de la mastitis .......................................................................... 7
Etiología .................................................................................................. 7
Patógenos ambientales ....................................................................... 7
Patógenos contagiosos ....................................................................... 9
Patógenos oportunistas ..................................................................... 10
Clasificación de la mastitis .................................................................... 11
Mastitis clínica ................................................................................... 12
VIII
Mastitis subclínica ............................................................................. 13
Diagnóstico de Mastitis ......................................................................... 13
Observación y palpación de la ubre .................................................. 13
Pruebas químicas .............................................................................. 13
Pruebas biológicas ............................................................................ 13
Pruebas bacteriológicas .................................................................... 14
Factores predisponentes de la mastitis ................................................ 15
Del animal ......................................................................................... 15
Del manejo ........................................................................................ 15
Del medio ambiente .......................................................................... 16
Tratamiento .......................................................................................... 16
Control de Mastitis ................................................................................ 17
Pérdidas económicas de la mastitis ..................................................... 17
Miel de abejas ...................................................................................... 18
La miel a través de los siglos ................................................................ 18
Composición de la miel ......................................................................... 18
Clases de miel ...................................................................................... 19
Mieles multiflorales: ........................................................................... 19
Mieles uniflorales: .............................................................................. 19
Miel de mielada: ................................................................................ 19
Características físicas de la miel .......................................................... 19
Color ........................................................................................... 19
Viscosidad .................................................................................. 19
Densidad ..................................................................................... 19
Conductividad eléctrica ............................................................... 19
Higroscopía ................................................................................. 20
Cristalización .............................................................................. 20
Características químicas de la miel ...................................................... 20
Humedad .................................................................................... 20
Azúcares ..................................................................................... 20
Acidez y pH ................................................................................. 20
Enzimas ................................................................................................ 21
Sustancias insolubles ........................................................................ 21
Actividad antibacteriana de la miel ....................................................... 21
IX
Actividad no peróxida ........................................................................ 22
Actividad peróxida ............................................................................. 23
Acción antiinflamatoria de la miel ......................................................... 24
CAPITULO IV ........................................................................................... 25
MATERIALES Y METODOS .................................................................... 25
Materiales ............................................................................................. 25
Recursos Biológicos .......................................................................... 25
Materiales de campo ......................................................................... 25
Animales ............................................................................................ 25
De escritorio ...................................................................................... 25
Recursos de laboratorio .................................................................... 25
Metodología .......................................................................................... 26
Características de la zona de estudio ............................................... 26
Tipo de investigación ............................................................................ 27
Variables de estudio ............................................................................. 27
Variables independientes............................................................ 27
Variables dependientes .............................................................. 27
Tratamientos ......................................................................................... 28
Unidades Experimentales ..................................................................... 28
Análisis de efectividad .......................................................................... 28
Manejo del experimento ....................................................................... 29
CAPÍTULO V............................................................................................ 32
RESULTADOS Y DISCUSIÓN ................................................................ 32
CAPÍTULO VI ........................................................................................... 42
CONCLUSIONES .................................................................................... 42
BIBLIOGRAFÍA ........................................................................................ 43
ANEXOS .................................................................................................. 53
X
LISTADO DE TABLAS
Tabla 1.- Formas de mastitis ................................................................... 12
Tabla 2.-Resultados del CMT .................................................................. 14
Tabla 3.- Principales enzimas presentes en la miel de abejas ................ 21
Tabla 4.-Ubicación geográfica de la zona de estudio .............................. 26
Tabla 5.-Características ambientales de la zona de estudio .................... 27
Tabla 6.-Tratamientos evaluados ............................................................. 28
Tabla 7.-Resultados del ensayo de la evaluación de la miel administrada
por vía intramamaria en vacas lecheras con mastitis subclínica ............. 33
Tabla 8.-Crecimiento bacteriano a las 24 y 72 horas post tratamiento según
el agente causal encontrado en cada grupo experimental ....................... 34
Tabla 9.-Crecimiento bacteriano a las 24 y 72 horas post tratamiento según
el agente causal encontrado en cada grupo experimental ....................... 35
XI
LISTADO DE GRÁFICOS
Gráfico 1.- Georreferenciación de la zona de estudio .............................. 26
Gráfico 2.-Diagrama de flujo para la identificación de o los microorganismos
causantes de mastitis subclínica en las muestras de leche cruda ........... 31
Gráfico 3.-Crecimiento bacteriano a las 24 horas post tratamiento ......... 36
Gráfico 4.-Crecimiento bacteriano a las 72 horas post tratamiento ......... 36
XII
LISTADO DE ANEXOS
Anexo 1. Resultados de laboratorio ......................................................... 53
Anexo 2. Instalaciones ............................................................................. 58
Anexo 3. Manejo del experimento en campo ........................................... 59
Anexo 4. Manejo del experimento en el laboratorio ................................. 61
Anexo 5. Hoja de campo para el control de Mastitis en el establecimiento
................................................................................................................. 63
XIII
GLOSARIO
CMT: Californian Mastitis test
RCS: Recuento de células somáticas
UFC: Unidades formadoras de colonias
IIM: Infecciones intramamarias
CB: Crecimiento bacteriano
RAM: Resistencia a los antimicrobianos
OMS: Organización Mundial de la Salud
CODEX Alimentarius: Código de alimentación
FAO: Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la
Alimentación
CAMP: Prueba para identificación presuntiva de estreptococos del grupo B
(Streptococcus agalactie)
SIM: Sulfuro-Indol-Motilidad
TSI: Triple Sugar Iron
SCN: Staphylococcus coagulasa negativo
XIV
TEMA: “Evaluación del efecto de tres concentraciones de miel de abejas
en el tratamiento de mastitis subclínica bovina”
RESUMEN
Una de las enfermedades más desafiantes para la ganadería e industria
lechera es la mastitis, que puede ocurrir de forma clínica o subclínica. La
forma subclínica es a menudo indetectada al carecer de signos visibles y
resulta ser la pérdida menos evidente pero la más importante
económicamente. Debido a la incidencia de las bacterias resistentes a los
antibióticos, la miel de abejas se aprecia cada vez más por su actividad
antibacteriana, por lo que en el siguiente ensayo se evaluaron tres
concentraciones de miel de abejas, al 100% (miel pura), al 50% y al 30%,
para el tratamiento intramamario de mastitis subclínica en ganado lechero;
adicionalmente se trabajó con un grupo control. Se aplicó dos dosis
sucesivas de 10 ml cada una con un intervalo de 12 horas (ordeño de la
mañana y de la tarde) en los tres grupos experimentales. En el cultivo
bacteriano previo al tratamiento, en las muestras de leche se encontraron
Staphylococcus aureus y Staphylococcus coagulasa negativo en las vacas
de los 4 grupos y en los grupos 1 y 2 además se encontró Streptococcus
spp. A las 72 horas post tratamiento, no hubo crecimiento bacteriano de los
patógenos, con excepción del grupo control y del Streptococcus spp que sí
creció en el grupo 2 (miel al 50%). A la prueba CMT post tratamiento, hubo
disminución de células somáticas, dando negativo a la prueba en los 3
grupos experimentales. Se concluye que la miel de abejas es una
alternativa efectiva en el control de mastitis subclínica en vacas lecheras.
PALABRAS CLAVES
MASTITIS SUBCLÍNICA, ACTIVIDAD ANTIBACTERIAL, TRATAMIENTO
INTRAMAMARIO, MIEL DE ABEJAS, CMT
XV
TITLE: Evaluation of the effect of three concentrations of honey in the
treatment of bovine subclinical mastitis
ABSTRACT
One of the most challenging diseases for livestock and dairy industry is
mastitis, which can occur clinically or subclinically. The subclinical form is
often undetected in the absence of visible signs and turns out to be the least
obvious but economically most important loss. Due to the incidence of
bacteria resistant to antibiotics, honey is increasingly vital for its antibacterial
activity. Thus, this research evaluated three concentrations of honey, a pure
honey bee, 50% honey and 30% honey with distilled water as diluent. These
were utilized for intramammary treatment in subclinical mastitis of dairy cow.
Three groups consisting of four cows were sampled and a controlled set.
Two successive doses of 10 ml each were applied with an interval of 12
hours (milking in the morning and in the afternoon) in the three experimental
groups. Besides, the control group was not exposed to any treatment. To
the bacterial culture in the laboratory, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus coagulase negative were isolated in both the three
sampling and the control group. Additionally, Streptococcus spp was
isolated from group one (pure honey) and two (50% honey). At 72 hours
post treatment, there was no bacterial growth of the pathogens, with the
exception of the control group and Streptococcus spp, which did grow in
group 2 (50% honey). To the Californian mastitis test (CMT) test after
treatment, there was a decrease in somatic cells resulting to a negative test
in the 3 experimental treatments. It is concluded that honey from bees is an
effective alternative in the control of subclinical mastitis in dairy cows.
KEYWORDS
SUBCLINICAL MASTITIS, ANTIBACTERIAL ACTIVITY,
INTRAMAMMARY TREATMENT, HONEY BEES, CMT
I CERTIFY that the above and foregoing is a true and correct translation of the original document in Spanish. MSc. Janina Carrera Firma electrónica ID: 1718826819
1
CAPÍTULO I
INTRODUCCION
Una de las enfermedades más frecuentes y costosas para la ganadería e
industria lechera es la mastitis, la cual consiste en la inflamación de la
glándula mamaria por daño local, ya sea por origen infeccioso, traumático,
ambiental o tóxico (Novoa, 2003). La mastitis, además de ser un riesgo
potencial dentro de la sanidad del rebaño, afecta la calidad y composición
de la leche y suprime el rendimiento productivo; el grado de cambios está
ligado al agente infeccioso y la respuesta inflamatoria (Pyörälä, 2003). Por
todo esto, la mastitis constituye un importante problema en las
explotaciones asi como en la industria láctea y puede ocurrir de forma
clínica o subclínica. La mastitis clínica se puede detectar por signos clínicos
tales como hinchazón o enrojecimiento de la ubre visibles a simple vista a
diferencia de la forma subclínica la cual es más difícil de detectar, requiere
de herramientas de diagnóstico ya sea por recuento de células somáticas
o determinación de enzimas inflamatorias (Rodriguez, 2012); sin embargo,
al carecer de signos clínicos es a menudo indetectada y resulta ser la
pérdida menos evidente pero la más importante económicamente (Hortet &
Seegers., 1998).
Las pérdidas económicas son trascendentales para los productores de
leche ya que las vacas con mastitis subclínica son conocidas por producir
menos leche y ser reservorio de infección dentro del ganado,
incrementando la exposición de las vacas sanas a contagiarse de
patógenos, sin destacar el aumento de tratamientos clínicos que se
practican y el descarte temprano de los animales (Redvet, 2008). Es
ineludible para los productores, ganaderos y asesores veterinarios orientar
su principal interés en controlar la mastitis subclínica debido a que su
2
presentación es 15 a 40 veces superior a la mastitis clínica, puede llegar a
ser crónica e incluso desencadenar en una mastitis clínica y por su difícil
diagnóstico debido a su origen multifactorial (Acuña & Rivadeneria, 2008).
Dentro del manejo cotidiano de las mastitis, sean clínicas o subclínicas, se
utilizan antimicrobianos intramamarios o vía sistémica, por lo general los
fármacos más empleados son los betalactámicos, macrólidos y
aminoglucósidos (Neacato, 2005). Actualmente, se reportan más de 100
microorganismos responsables de la infección intramamaria, entre éstos se
encuentran especies de estafilococos, estreptococos, bacterias Gram
negativas y coliformes (Novoa, 2003). El uso indiscriminado de los
antibióticos, las dosis subterapéuticas, la administración de fármacos en los
bovinos por personal no apto, formulación de fármacos como promotores
de crecimiento y los residuos de antibióticos en alimentos de origen animal
crean una resistencia por parte de los microorganismos originando un
fracaso en los tratamientos de la mastitis e impactando la inocuidad
alimentaria (Neacato, 2005).
Debido a la incidencia de las bacterias resistentes a los antibióticos, la miel
de abejas se aprecia cada vez más por su actividad antibacteriana
(Ordoñez, 2005). Desde hace décadas la medicina natural ha tenido gran
éxito; la miel de abejas ha sido utilizada con eficacia en heridas,
quemaduras, enfermedades respiratorias, infecciones, etc (Estrada,
Gamboa, Chaves, & Arias, 2005). El pH de la miel es de 3.2- 4.5 siendo
suficientemente ácido para inhibir el crecimiento de bacterias, las que en
su mayoría van de 7.2- 7.4 en heridas infecciosas (Ordoñez, 2005).
Ordoñez (2005) afirma que debido a los resultados, la miel administrada
por vía intramamaria en bovinos es una opción económica en lugares de
escasos recursos o cuando no se tiene fácil acceso a los antibióticos y
medicinas, reduciendo la carga bacteriana cuando se tiene un caso de
mastitis.
En su mayoría, la principal actividad antimicrobiana de la miel de abejas es
gracias al peróxido de hidrógeno producido enzimáticamente por la
3
glicooxidasa y compuestos fenólicos y gracias a las moléculas efectoras
de la inmunidad innata llamadas defensina que forman parte del sistema
inmune de la abeja y son transmitidas a la miel de los panales. El peróxido
de hidrógeno se encuentra inactivo en la miel pura, mientras que cuando la
miel de abejas se encuentra diluida da lugar a su formación (Ordoñez,
2005); sin embargo, Taormina, Niemira & Beuchat (2001) señalan que el
desarrollo de zonas de inhibición del crecimiento bacteriano depende del
tipo y concentración de miel, así como del patógeno de prueba.
Los antibióticos utilizados normalmente para el tratamiento de mastitis se
conservan en los tejidos y en la leche por algunos días al ser lipofílicos; por
otro lado, la miel es hidrófila y no se conservará en los tejidos, incluso
cualquier residuo sería más aceptable e inocuo para el consumidor que el
de un antibiótico. El uso práctico de la miel de abejas no ha generado
lesiones ni daño tisular, por el contrario promueve la regeneración y
reparación tisular (Allen & Molan, 1997). La miel de abejas resulta ser
inofensiva para los tejidos y gracias a todas sus propiedades
antibacterianas, justifica realizar un ensayo para evaluarla
terapéuticamente en el tratamiento de la mastitis subclínica por vía
intramamaria como una alternativa importante e innovadora en las
ganaderías e industrias lecheras del Ecuador.
Finalmente, en el país no se han realizado trabajos similares al presente
estudio, lo que justifica sobremanera la realización del mismo.
4
CAPÍTULO II
OBJETIVOS
Objetivo general
Determinar qué concentración de miel de abejas es la más
efectiva para el tratamiento de mastitis subclínica bovina.
Objetivos específicos
Evaluar el efecto de la aplicación intramamaria de la miel de
abejas en tres concentraciones en el tratamiento de mastitis
subclínica bovina.
Evaluar la disminución de los microorganismos causantes de
mastitis subclínica determinada por cultivos bacteriológicos.
Establecer información acerca del uso de la miel de abejas como
tratamiento alternativo en la mastitis subclínica en ganado
lechero.
5
CAPÍTULO III
REVISIÓN DE LITERATURA
Fisiología de la glándula mamaria bovina
La glándula mamaria se caracteriza por ser una glándula exocrina capaz
de transmitir el alimento de la madre a la cría (Elizondo, 2010), al inicio de
la lactancia se aumenta la producción cardíaca, volumen sanguíneo, flujo
sanguíneo gastrointestinal, hepático y mamario, siendo la ubre la
responsable de transformar en leche todos los nutrientes de la sangre
(Glauber, 2007). Para 1 litro de leche son necesarios de 400 a 500 litros de
sangre (Elizondo, 2010), por lo que es indispensable una buena
alimentación de las vacas, más aun si la vaca es alimentada durante el
ordeño ya que obtiene una mayor respuesta por parte de la oxitocina,
hormona relacionada directamente con el reflejo de eyección de la leche.
Otra hormona involucrada en la eyección de leche es la vasopresina
(Elizondo, 2010). Existen factores que pueden alterar el ciclo normal de la
lactancia como la mastitis, catalogada como la afección en las vacas
lecheras más costosa a nivel mundial (Bedolla, 2008).
Mastitis Bovina
La mastitis o inflamación de la glándula mamaria (del griego mastos =
glándula mamaria y del sufijo itis = inflamación), como su nombre lo indica
es una reacción inflamatoria de la glándula mamaria; considerada como la
afección más común y costosa en el ganado lechero a nivel mundial (Acuña
6
& Rivadeneria, 2008). A menudo es asociada con infecciones bacterianas
intramamarias, sin embargo se han reportado que virus, hongos, daños
físicos, traumas, disturbios secretorios de origen metabólico-nutricional,
toxinas, situaciones de estrés, neoplasias o cualquier otro tipo de problema
que cause inflamación en el tejido mamario puede ser la causa de la
mastitis en el ganado (Green, 2002). La mastitis es considerada una
afección multifactorial debido a que depende de la virulencia del patógeno
involucrado y la susceptibilidad del animal frente a cada infección (Bonetto,
2014).
Mecanismos de defensa ante la mastitis
Mecanismos no inmunológicos
Barreras del pezón: La ubre consta de alveolos, conductos
mamarios, cisterna de la ubre, cisterna del pezón y esfínter del
pezón. El esfínter del pezón junto con la roseta de Füstenberg
forman pliegues que impiden el paso de contaminantes, por un
mecanismo natural de cierre como defensa. Adicional a esto se
produce un tapón de queratina que funciona como bactericida en el
canal del pezón (Wolter, Castañeda, & Kloppert, 2002).
Mecanismos inmunológicos
Mediadores de la inflamación y células de defensa: La citocinas
son proteínas que se encuentran como mediadores ante la
inflamación intramamaria (IIM), así mismo, linfocitos, neutrófilos,
macrófagos y células plasmáticas actúan como defensa natural en
contra de patógenos invasores; sin embargo todo esto desencadena
en un aumento de células somáticas en la leche (Hernández &
Bedolla, 2008).
Factores de defensa celulares y humorales de la leche: Los
linfocitos, macrófagos y leucocitos polimorfonucleares participan
como células de defensa natural en la leche para evitar la
contaminación de patógenos, por otro lado están las
7
inmunoglobulinas, en la ubre hay cuatro clases: IgG 1, IgG2, IgM e
IgA ; aparte se encuentran la lizosima y lactoferrina constituyendo
los factores humorales de la leche (Hernández & Bedolla, 2008)
(Ordoñez, 2005).
Patogenia de la mastitis
La respuesta inmunológica humoral y celular se desata ante la presencia
de patógenos infecciosos, liberando moduladores de la inflamación como
las citocinas, proteínas como las quimiocinas y una serie de
inmunoglobulinas, con el fin de controlar y expulsar los microorganismos
patógenos; si la invasión es más fuerte de lo que naturalmente los
mecanismos de defensa pueden controlar, las células somáticas en la leche
se verán elevados y se presentará la inflamación intramamaria “mastitis”
(Hernández & Bedolla, 2008) .
Etiología
Se ha reportado que la mastitis o mamitis bovina es una enfermedad
infecciosa causada por más de 137 microorganismos los cuales están
presentes en el mismo animal y en su entorno (Chasi, 2015), siendo una
interacción constante entre el animal, los microorganismos y el medio
ambiente (Ordoñez, 2005). Según las características, reservorios, hábitat,
transmisión e interacción con el pezón de la ubre de la vaca, los
microorganismos causantes de mastitis bovina han sido clasificados en
patógenos contagiosos y ambientales, conocidos como patógenos
mayores y como patógenos menores a los microorganismos oportunistas
(Calvinho, 2005).
Patógenos ambientales
El principal reservorio de estos microrganismos es el medio donde vive el
ganado, que son transmitidos a la ubre entre ordeños, camas
contaminadas, exposición de estiércol, suciedad del suelo, forrajes,
8
ensilados, etc (Calvinho, 2005). Entre los principales patógenos se
encuentran especies de estreptococos ambientales (Streptococcus uberis,
Streptococcus dysgalactiae), bacterias coliformes (Escherichia coli,
Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes) y especies de
enterococos (Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium) (Calvinho,
2005).
Estreptococos ambientales
Dentro de los microorganismos causantes de mastitis S. uberis y S.
dysgalactiae son los más prevalentes, en condiciones favorables.
Streptococcus uberis : Microorganismo ambiental responsable de
mastitis clínica y, en mayor proporción, de mastitis subclínica. Dentro
de la patogenia de la mastitis el principal factor es la adhesión a las
células del hospedador provocando la colonización y
establecimiento de la infección al impedir que los patógenos salgan
durante el ordeño. S. uberis se adhiere a las células epiteliales de la
glándula mamaria convirtiéndose en un patógeno con gran nivel de
protección frente a antibióticos o incluso frente a los mecanismos de
defensa propios del animal (Timón & Jiménez, 2008).
Streptococcus dysgalactiae : Es un microorganismo que tiene la
característica única de ser considerado un patógeno ambiental y
contagioso. Interactúa con proteínas extracelulares y derivadas del
plasma, y produce hialuronidasa y fibrinolisina, lo que le ayuda a
diseminarse dentro del tejido del huésped. Al igual que S. uberis es
capaz de adherirse e internalizarse a las células epiteliales de la
glándula mamaria (Calvinho, Almeida, & Oliver, 1998).
Coliformes
Los coliformes son microorganismos que se encuentran en gran número en
el estiércol; la vaca se infecta cuando éstos patógenos medio ambientales
entran en contacto con la ubre, una vez infectado el animal, los
microorganismos se multiplican con rapidez en la leche liberando toxinas
9
que afectarán al sistema circulatorio, provocando graves infecciones, a
pesar de que los coliformes no son capaces de adherirse internamente a
los alveolos ni conductos de la ubre (Acuña & Rivadeneria, 2008).
Patógenos contagiosos
Los patógenos contagiosos se transmiten por lo general en el momento del
ordeño, de cuartos infectados a cuartos sanos y de vacas infectadas a
sanas por medio de los equipos de ordeño y manos de los operarios. El
hábitat y reservorio de estos microorganismos son la glándula mamaria y
principalmente, la leche de las vacas infectadas. Entre los microorganismos
más importantes de este grupo se encuentran bacterias como:
Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae entre las más comunes
y Corynebacterium bovis y Mycoplasma spp en menor proporción
(Calderón & Rodríguez, 2008). Por su gran presencia en la leche, estos
patógenos contagiosos son causantes de mastitis subclínicas de larga
duración, conocidas como infecciones crónicas (Ordoñez, 2005).
Staphylococcus aureus: Considerado como el patógeno más
común, responsable de la mastitis contagiosa en rumiantes. S.
aureus tiene la característica de formar conglomerados dentro de los
alveolos y en los conductos lácteos junto al tejido epitelial,
provocando una invasión en el tejido intersticial, los estafilococos
son capaces de producir cápsulas de exopolisacáridos que
envuelven a los conglomerados que son colonias de crecimiento
bacteriano y en conjunto forman biofilmes, lo que le da a la bacteria
el nivel de dificultad contra fármacos y su inmunización (Peña & Uffo,
2013).
Streptococcus agalactiae: Es un patógeno intramamario obligado
siendo la ubre la única fuente de contaminación en la leche. La
virulencia de S. agalactie depende de la habilidad de adherirse al
10
tejido mamario ya que solo se necesita del microambiente de la ubre
para que se pueda proliferar la bacteria (Keefe, 1997).
Corynebacterium bovis: Patógeno intramamario caracterizado por
producir un exudado purulento y olor pestilente. Suele ser resistente
en los exudados y en el material contaminado (Acuña & Rivadeneria,
2008).
Mycoplasma spp: Patógeno que causa una reducción de la
producción, tiene un inicio violento, involucra la contaminación de
varios cuartos y al ser un microorganismo contagioso su reservorio
es otra vaca infectada e incluso las crías (Fonseca, 2014).
Patógenos oportunistas
Los patógenos oportunistas se encuentran normalmente colonizando la
superficie de la ubre y pezones así como en las manos de los operarios
durante el ordeño, esperando colonizar el canal del pezón, siendo una
fuente constante de infección intramamaria (IIM) (Bonetto, 2014). Dentro
de estos microorganismos oportunistas se encuentran más de 20 especies
de estafilococos, que a diferencia del S. aureus a éstos se los denomina
Staphylococcus sp o Staphylococcus coagulasa negativo (SCN) (Ordoñez,
2005). Durante el período seco, la ubre no está expuesta a diario a los
desinfectantes, por lo que las infecciones por SCN son de gran importancia
generando mayor incidencia de IIM en el parto y primer parto de
vaquillonas. A pesar de que las infecciones por SCN suelen ser leves y son
considerados patógenos menores, actualmente se les atribuye como la
causa principal de mastitis subclínica, al ser los microorganismos más
frecuentemente aislados en la mayoría de los hatos (Bonetto, 2014).
Staphylococcus coagulasa negativa (SCN) : En la actualidad, son
considerados como patógenos emergentes de mastitis bovina; en
11
general, suelen aislarse dos meses antes del parto y el SCN más
frecuente es S. chromogenes , sobre todo en mastitis tipo subclínica
, con menor frecuencia también se encuentran a S. simulans, S.
epidermidis y S. hycus. Se ha logrado clasificar a los SCN de
acuerdo a la novobiocina según la sensibilidad y resistencia, siendo
los SCN novobiovina sensibles los más patógenos al ser capaces de
permanecer en el conducto del pezón por largo tiempo (Bonetto,
2014).
Otros patógenos
Además de los patógenos ya mencionados, existen más microorganismos
capaces de producir mastitis en los bovinos y entre los más mencionados
están: Pseudomonas sp, Mycobacterium sp, Arcanobacterium pyogenes,
Nocardia sp, y una gran variedad de mohos, algas como la Prototheca zopfii
y levaduras como Cryptococcus y Cándida albicans (Ordoñez, 2005).
Vacas contaminadas con especies de Prototheca no tienen cura y suelen
ser sacrificadas (Bedolla, 2008).
Clasificación de la mastitis
En función a la duración, la mastitis puede clasificarse como aguda y
crónica sin embargo en función a la sintomatología se clasifica como
mastitis subclínica y clínica. Las formas de mastitis se describen en la Tabla
1 a continuación:
12
Tabla 1.- Formas de mastitis
Formas
de
Mastitis
Subtipos de
Mastitis
Vaca Leche Ubre
Clínica Clínica aguda - °T rectal
-Pérdida de apetito
- Función rumen
- Pulso acelerado
- Deshidratación,
Debilidad,temblores,
diarrea.
-Aspecto
purulento, seroso
y sanguinolento
-Enrojecimiento
-Hinchazón
-Endurecimiento
-Sensible al tacto
Clínica
subaguda
-No presenta signos
sistémicos.
-Grumos
-Flóculos
-Aspecto
descolorido
-Hinchazón leve
-Sensibilidad
-Calor localizado
Clínica
hiperaguda
-Shock
-Septicemia
- coordinación
muscular extremidades
frías
- reflejo pupilar
-Acuosa
-Sanguinolenta
-Fibrosis en la ubre
Latente - Apariencia normal -Aislamiento del
patógeno sin
causar daño
-Apariencia normal
con colonizaciones
del orificio o canal
del pezón.
Crónica -Alteraciones intensas
de los tejidos
- Probabilidad de
curación.
-No siempre se
ve alterada
-grumos
-aspecto mucoso
-amarillenta
-gris
-Nódulos
cicatrizales
-Abscesos de las
zonas inflamadas
Subclínica Subclínica -Apariencia normal -Apariencia
normal
-Apariencia normal
Fuente: Modificado de Bedolla, (2008)
Mastitis clínica
Se presenta de forma repentina y manifiesta tres grados de cambios los
cuales son: leve (coagulación de la leche), moderado (cambios en la leche
13
y signos visibles de inflamación de la ubre), o grave (cambios en la leche y
la ubre y signos sistémicos) (Lundberg, 2015).
Mastitis subclínica
La forma subclínica requiere de herramientas diagnósticas ya que carece
de signos visibles y la forma más común para medirla es a través del
recuento de células somáticas (RCS) en la leche; en una ubre sana el RCS
es de 70.000 células / ml, difiriendo según variables como la edad,
producción de leche, etapa de gestación… Conteos de células somáticas
mayores a 500.000/ml se consideran como mastitis subclínica (Hernández
& Bedolla, 2008).
Diagnóstico de Mastitis
Observación y palpación de la ubre: Con el fin de tener un diagnóstico
de mastitis en el hato lechero, lo que primero se debe hacer es realizar un
examen clínico a la ubre de la vaca, observar signos tales como
enrojecimiento, dolor, aumento de calor en la zona afectada, cambios en la
leche (coágulos, sangre, pus). Si bien en la mastitis subclínica no se
aprecian signos evidentes, la infección podría estar dañando internamente
el tejido glandular, lo que puede reflejarse en la producción y alteración de
la leche (Fernández, Trujillo, Peña, Cerquera, & Granja, 2012).
Pruebas químicas: Existen pruebas químicas como el papel indicador de
mastitis, la prueba de la conductividad eléctrica y la prueba de Whiteside
(Fernández, Trujillo, Peña, Cerquera, & Granja, 2012).
Pruebas biológicas: Dentro de las pruebas biológicas están la prueba de
catalasa, de Wisconsin, de CAMP, conteo de células somáticas y la prueba
utilizada con mayor frecuencia en hatos lecheros, la prueba de Californian
Mastitis Test (CMT) (Fernández, Trujillo, Peña, Cerquera, & Granja, 2012).
14
Californian Mastitis Test
Mide de manera semicuantitativa el recuento de células somáticas
(RCS) de la leche, obtenidas del reactivo alquilauril sulfonato de sodio
al 3%, el cual libera el ADN de los leucocitos actuales en la leche,
generando grados de espesamiento, formando una especie de gelatina
o coágulo cuando hay mayor presencia de células debido a la infección
(Fernández, Trujillo, Peña, Cerquera, & Granja, 2012).
Tabla 2.-Resultados del CMT
CMT Recuento de células
somáticas
N (Negativo) < 200.000
T (Trazas) 200.000 - 500.000
1 500.000 - 1.500.000
2 1.500.000 - 5.000.000
3 > 5.000.000
Fuente: (Ordoñez, 2005)
La lectura de los resultados serán desde N= Negativo, cuando no
hay espesamiento de la muestra y ésta es líquida, T= Trazas con
ligero espesamiento (velo); 1= Ligeramente positiva (+), por un
espesamiento viscoso de la mezcla; 2= Positiva (++), la mezcla
tiende a formar una gelatina y 3= Altamente positiva (+++), cuando
hay formación de gel de la muestra (coágulo) (Ordoñez, 2005).
Pruebas bacteriológicas: El diagnóstico bacteriológico es fundamental al
momento de optar por un tratamiento, ya que mediante métodos de
aislamiento, cultivo, tinción gram y pruebas bioquímicas se puede identificar
el agente causal de la mastitis de cada vaca, tomando en cuenta siempre
las condiciones sanitarias con las que se debe realizar la toma de muestras
15
de leche para evitar la contaminación (Fernández, Trujillo, Peña, Cerquera,
& Granja, 2012).
Factores predisponentes de la mastitis
Del animal
Edad
El riesgo de contraer mastitis avanza con los años; su mayor pico es a
los 7 años, por el mayor tiempo de exposición a patógenos y debido a
que el sistema inmunológico de la vaca se reduce con la edad (Ballón,
Gómez, Cárdenas, Escobedo, & Peña, 2013).
Etapa de lactancia
Durante el período seco las vacas se encuentran más susceptibles a la
mastitis (dos semanas antes del parto y dos semanas después del
secado) (Mora, Vargas, Romero, & Camacho, 2015).
Raza
Ballón, Gómez, Cárdenas, Escobedo & Peña, (2013) reportan que
existe mayor predisposición genética de la raza Holstein de padecer
mastitis en comparación a la raza Jersey y que las razas mestizas son
más predisponentes a mastitis que el ganado cebú.
Nivel de producción y configuración de la ubre
Vacas que poseen pezones largos y grandes tienden a estar en mayor
exposición a patógenos por el diámetro que tiene el canal del pezón.
Ballón, Gómez, Cárdenas, Escobedo & Peña, (2013) mencionan que
vacas con alto rango de producción son más susceptibles en adquirir
infecciones intramamarias.
Del manejo
16
Castillo, (2014) cita que uno de los principales problemas de presentación
de mastitis es debido a que las producciones no cuentan con un programa
integral de control, por lo tanto los procedimientos de ordeño serán
erróneos e incluso los tratamientos que se imparten no suelen ser los
adecuados.
Nutrición
Vitaminas E, A y minerales como el selenio pueden prevenir la aparición
de mastitis en el ganado, por otro lado una dieta con excesivas
cantidades de proteína podría actuar como un factor de riesgo (Ballón,
Gómez, Cárdenas, Escobedo, & Peña, 2013).
Higiene
La mayor fuente de contaminación de patógenos ambientales se
encuentra en: el estiércol, materiales de la cama, lodo, agua, alimento,
entre otros (Ballón, Gómez, Cárdenas, Escobedo, & Peña, 2013). Es
fundamental la limpieza de las fuentes de contaminación, en especial
de la cama donde los pezones de la vaca tienen contacto directamente
con los posibles patógenos encontrados, un ejemplo de esto es
Klebsiella spp que se encuentra en el aserrín de las camas húmedas
(Castillo, 2014).
Del medio ambiente
Clima y época del año
En épocas lluviosas es cuando hay mayor proliferación de bacterias y
una gran posibilidad de transmisión de patógenos, siendo la mastitis un
problema en las producciones en esta época del año. Las vacas sufren
un stress ambiental liberando cortisona y generando una
inmunosupresión que favorece a las infecciones intramamarias
(Castillo, 2014).
Tratamiento
17
Los antibióticos más utilizados en el tratamiento de mastitis son: Neomicina,
Bencilpenicilina G, Gentamicina, Estreptomicina y dihidroestreptomicina,
cloranfenicol, ampicilina y cloxacilina. Cuando se utiliza antimicrobianos es
esencial para su eficacia los exámenes previos de laboratorio con el
respectivo antibiograma, así como el personal calificado para su aplicación
(Ordoñez, 2005).
Control de Mastitis
Existen 5 puntos establecidos para el control de mastitis según el National
Mastitis Council y son: (a) desinfección de pezones post-ordeño, (b)
utilización generalizada de la terapia antimicrobiana intramamaria al
secado, (c) sacrificio de las vacas con infección crónica, (d) tratamiento
adecuado de casos clínicos y (e) mantenimiento regular de la máquina de
ordeño (ANEMBE, 2010).
Pérdidas económicas de la mastitis
En general la mastitis ha sido considerada la enfermedad que genera más
pérdidas económicas a los productores lecheros a nivel mundial y esto es
debido a la reducción de la producción de leche en un 4 al 30 %, y junto
con los gastos adicionales de tratamientos, eliminación temprana de
animales, servicios profesionales, entre otros (Bedolla, 2008). Estudios de
este autor realizados en importantes países productores de leche,
concluyen que un 50% de las vacas presentan mastitis de tipo subclínico
principalmente y que las vacas “producen 5% menos de leche por cada 100
000 células somáticas adicionales en ml de leche”.
18
Miel de abejas
Según la Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la
Alimentación “FAO”, se define por miel “la sustancia dulce natural
producida por abejas Apis mellifera a partir del néctar, secreciones o
excreciones de insectos succionadores de las plantas y que las abejas
recogen, transforman y combinan con sustancias específicas propias,
depositan, deshidratan, almacenan y dejan en el panal para que madure y
añeje” (Suescún & Vit, 2008) (CODEX, 1981).
La miel a través de los siglos
Desde la antigüedad, la miel de abejas ha sido identificada por su poder
antibacteriano y antiinflamatorio en el tratamiento de quemaduras, heridas,
úlceras, trastornos del sistema respiratorio, etc (Cabrera, Ojeda, Céspedes,
& Colina, 2003). Actualmente con el problema mundial de la resistencia a
los antimicrobianos, la miel de abejas es más cotizada por sus propiedades
curativas y se la utiliza como un tratamiento alternativo con resultados
importantes. Zamora & Arias, (2011) reportan que alrededor de 60 especies
bacterianas presentan sensibilidad a la miel de abejas e incluso ésta tiene
propiedades antifúngicas contra levaduras y dermatofitos.
Composición de la miel
La composición, en general, de la miel de abejas consta de azúcares como
glucosa, sacarosa, fructosa, maltosa, entre otros. Proteínas y aminoácidos,
energía, vitaminas como tiamina, riboflavina, niacina, ácido ascórbico.
Minerales como el calcio , cobre, hierro, magnesio, manganeso, fósforo,
potasio, sodio, zinc, cenizas (Suescún & Vit, 2008).
La intensidad de los constituyentes de la miel se modifica según el tipo de
néctar con el cual se elabora (Cabrera, Ojeda, Céspedes, & Colina, 2003).
19
Clases de miel
Mieles multiflorales: Su procedencia es difícil de identificar ya que
proviene de una variedad de flores (Prior, 1989).
Mieles uniflorales: Al provenir de una sola especie floral, se identifica con
facilidad todas las características que le atribuyen al tipo de miel, ejm: miel
de aguacate, de tomillo, de trébol, de alfalfa, de eucalipto, de romero…
(Prior, 1989). Debe contener más del 45% del pólen de la flor para
considerarse unifloral o monofloral (Suescún & Vit, 2008).
Miel de mielada: Proviene de las secreciones azucaradas y de las
excreciones de los insectos succionadores (áfidos). Se la conoce también
como miel de rocío o del bosque (Suescún & Vit, 2008).
Características físicas de la miel
Color: El color de la miel puede ser definido por flavonoides,
carotenos, xantofilas, taninos, pH y minerales (Maradiaga, 2005).
Mieles con color más oscuro es debido a que son más antiguas, y
cuando presentan un color más claro es porque son cristalizadas
(Suescún & Vit, 2008).
Viscosidad: La miel de abejas es viscosa y está relacionada con el
contenido de agua; cuando la miel ha sido adulterada, la viscosidad
suele ser baja y este factor se da cuando la temperatura se
incrementa (Maradiaga, 2005).
Densidad: Va de 1.38 – 1,44 kg/L (Suescún & Vit, 2008)
Conductividad eléctrica: Propiedad que diferencia cuando el tipo
de miel es mielada debido a que la conductividad eléctrica depende
de los electrolitos presentes, los cuales contienen ácidos orgánicos,
aminoácidos y sales minerales (Suescún & Vit, 2008)
20
Higroscopía: La miel es higroscópica, es decir que puede absorber
la humedad (Maradiaga, 2005).
Cristalización: La miel es una solución rica en azúcares, cuando la
glucosa presente en la miel se encuentra en gran proporción, tiende
a precipitar primero liberando humedad y acelerando la
cristalización. La temperatura juega un papel importante en éste
proceso, siendo la temperatura más fría (menos de 10°C) la que
detiene la cristalización y temperaturas más calientes (10-21°C) las
que la promueven (Pérez, 1985).
Características químicas de la miel
Humedad: Ésta propiedad depende del clima, época del año, nivel
de maduración de la colmena, entre otros. La humedad en la miel va
del 14 al 22% y es importante porque influye en el grado de
conservación y fermentación de la miel (Maradiaga, 2005).
Azúcares: Conforman alrededor del 78 al 80% de la composición de
la miel (sólidos solubles totales) e influyen en propiedades como la
higroscopicidad, cristalización y viscosidad (Suescún & Vit, 2008).
Acidez y pH: La acidez de la miel se da en su mayoría, gracias al
ácido glucónico presente, así como otros ácidos orgánicos como el
málico, cítrico, succínico, fórmico, oxálico y butírico. Maradiaga,
(2005) menciona que la acidez de la miel no debe sobrepasar los 50
mili equivalentes /kg. En mieles fermentadas la acidez es mayor.
El pH de la miel va de 3.5 - 4.5 siendo lo suficientemente ácido para
inhibir el crecimiento de bacterias responsables de heridas
infecciosas. En mieles de mielada el pH tiende a ser más básico, de
5.5 en promedio (Suescún & Vit, 2008).
21
Enzimas
Las enzimas presentes en la miel de abejas se encuentran detalladas en la
Tabla 3.
Tabla 3.- Principales enzimas presentes en la miel de abejas
Enzima Función
Diastasa o Amilasa Hidroliza almidones en dextrinas y azúcares. Se
degrada por calentamiento o envejecimiento de
la miel.
Invertasa Cataliza la transformación de sacarosa del
néctar en fructosa y glucosa.
Glucosa oxidasa Oxida la glucosa a ácido glucónico y peróxido de
hidrógeno.
Fosfatasa Ácida Remueve fosfatos inorgánicos y permite saber
valores relacionados a la fermentación de la miel.
Catalasa Degrada al peróxido de hidrógeno en oxígeno y
agua
Fuente: Modificado de Ordoñez, (2005) y Montenegro, Avallone, Aztarbe,
& Osuna, (2006).
Sustancias insolubles: La cera, el propóleos, partes del cuerpo de las
abejas, entre otros, son parte de las materias ajenas a la miel de abejas
(Suescún & Vit, 2008).
Actividad antibacteriana de la miel
La actividad antibacterial de la miel de abejas fue comprobada en 1892 por
Van Ketel (Dustmann, 1979). Existen dos tipos de factores que le dan a la
miel el poder antibacteriano y son: la actividad peróxida y la no peróxida.
Siendo la actividad no peróxida la que tiene que ver con la osmolaridad, el
pH, metilglioxal, proteínas como la defensina -1, fitoquímicos como
22
flavonoides, ácidos aromáticos y antioxidantes fenólicos. Y la actividad
peróxida se refiere a todo lo que tiene que ver con la producción de peróxido
de hidrógeno en la solución de miel (Vargas, 2016).
Actividad no peróxida
Acidez
Como ya se mencionó dentro de las propiedades químicas de la miel de
abejas , el pH es lo suficientemente ácido para inhibir el crecimiento de
bacterias, Cabrera, Ojeda, Céspedes, & Colina, (2003) reportan que se
ha demostrado la efectividad de varios tipos de miel contra bacterias
tales como Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella dublin
y Pseudomonas aeruginosa, entre otras.
Efecto osmótico
El volumen de agua contenido en la miel conforma alrededor de 15 a
21% del peso total y al ser una solución sobresaturada de azúcares (78-
80%), genera presión en la gradiente osmótica; éste choque de
composición en la solución de miel provoca, que en heridas infecciosas,
todo el exudado brote a la superficie y lleve consigo el tejido destruido
por la infección (Vargas, 2016).
Defensina -1
Animales invertebrados como los insectos polinizadores dependen
exclusivamente de péptidos antimicrobianos como defensores del
sistema inmunológico. En las abejas, Apis mellifera, la defensina -1,
también llamada royalisina, se secreta en la glándula hipofaríngea y se
transmite a la miel del panal (Kwakman & Zaat, 2011). La defensina -1
es un péptido compuesto por gran cantidad de cisteína y tiene una
poderosa actividad antimicrobiana de amplio espectro (bacterias,
hongos, virus) (Vargas, 2016). En un estudio realizado en el 2011 por
Kwakman & Zaat, se demostró la presencia de Defensina -1 en varias
muestras de miel en Amsterdam y tras pruebas experimentales se
demostró que la defensina -1 fue capaz de matar microorganismos tales
23
como Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus y larvas de Paenibacillus
las cuales causan enfermedad en la etapa larval de las abejas.
Metilglioxal
El compuesto orgánico Metilglioxal posee actividad antibacteriana no
peróxida y está presente en la miel de abejas, especialmente en la miel
de manuka. El Metilglioxal se forma a partir un carbohidrato llamado
dihidroxiacetona, el cual se encuentra en el néctar de las flores,
Kwakman & Zaat (2011) realizaron un ensayo bactericida con miel de
manuka para evaluar al metilglioxal, donde reportaron su eficacia contra
Staphylococcus aureus y bacillus subtilis sin embargo contra E. coli y P.
aeruginosa no obtuvieron efectividad.
Flavonoides y compuestos fenólicos
Los flavonoides son pigmentos naturales de origen vegetal y junto a los
polifenoles y los ácidos fenólicos conforman el sistema antioxidante de
la miel de abejas, siendo capaces de bloquear los efectos nocivos de
los radicales libres (Gutierrez & Antonio Rodriguez, 2008). Entre otras
funciones que ofrecen éstos fotoquímicos son el poder bactericida y
antifúngico, además de aportar con la coloración y ayudar en la
polinización (Martínez, González, Culebras, & Tuñón, 2002).
Actividad peróxida
Peróxido de Hidrógeno
La abeja posee una glándula hipofaríngea, la cual secreta la enzima
glucosa oxidasa que como su nombre lo indica, oxida la glucosa del
néctar de la flor con la consecuente liberación de peróxido de hidrógeno
(Vargas, 2016). Cuando la miel es diluida, la tasa de producción de
peróxido de hidrógeno es mayor. Bang, Buntting, & Molan, (2003)
reportan que al 30 y 50 % de dilución de la miel, el peróxido de
hidrógeno llega a su nivel máximo de producción (1-2mmol/L). Uno de
24
los principales atributos antibacterianos de la miel de abejas se debe al
peróxido de hidrógeno, el cual contribuye de igual manera en la
estimulación del tejido de granulación en heridas (Bang, Buntting, &
Molan, 2003).
Acción antiinflamatoria de la miel
Además de que la miel posee actividad antimicrobiana y con ésta función
genera una disminución en la inflamación, actúa de manera directa en la
actividad antiinflamatoria con la acción de varios factores como: la
infiltración de leucocitos, inhibición del sistema de complemento,
fagocitosis de los macrófagos, producción de citoquinas, inhibición del
óxido nítrico, también actúan los compuestos fenólicos presentes en la miel.
Principalmente en una inflamación o lesión, la miel de abejas activará los
linfocitos y con esto estimulará el tejido de granulación, la epitelización y la
angiogénesis (Morphol, 2016).
25
CAPITULO IV
MATERIALES Y METODOS
Materiales
Recursos Biológicos
Muestras de leche cruda
de vacas
Miel de abejas
Materiales de campo
Overol
Sondas intramamarias
Jeringas 20 ml
Frascos estériles
Cooler + refrigerantes
Agua destilada
Sellador de pezones
Reactivo de CMT
Paleta de CMT
Animales
16 Vacas en producción
De escritorio
Libreta de apuntes
Esferográficos
Recursos de laboratorio
Guantes
Mandil
Tubos de ensayo
Pipetas
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Manitol
Agar MacConkey
Incubadora
Microscopio
Reactivos para tinción
gram
Balanza
Portaobjetos
Pipetas 10ml
Probetas 500 ml
Hisopos
Palillos
Agua oxigenada
Plasma de conejo
26
Metodología
Características de la zona de estudio
El siguiente ensayo experimental se realizó en la Hacienda Lechera
Casiganda, ubicada en la parroquia de Uyumbicho, cantón Mejía en la
provincia de Pichincha, Ecuador. La Hacienda Casiganda lleva más de 40
años dentro de la industria lechera del Ecuador.
Gráfico 1.- Georreferenciación de la zona de estudio
Fuente : Google maps, 2018
Tabla 4.-Ubicación geográfica de la zona de estudio
País Ecuador
Provincia Pichincha
Cantón Mejía
Parroquia Uyumbicho
Altitud 2740 m.s.n.m
Latitud 0o24´Sur
Longitud 78o 32´Oeste
Fuente : INAMHI, 2013
27
Tabla 5.-Características ambientales de la zona de estudio
Temperatura máxima 26o C
Temperatura mínima 3o C
Temperatura media anual 18,1o C
Humedad relativa 79%
Clima Frio-templado
Precipitación media anual 1.238,8 mm
Vientos Velocidad: 1,6m/s. Mayor
intensidad norte sur
Fuente: INAMHI, 2013
Tipo de investigación
Para la evaluación precisa de la efectividad de los tratamientos, en el
siguiente ensayo se utilizó un diseño experimental de bloques
completamente al azar (Badii & Villalpando, 2007).
Variables de estudio
Variables independientes
Durante el ensayo se evaluaron tres concentraciones de miel de
abejas, una con miel de abeja pura y dos con miel diluida con agua
destilada, al 30% y 50%; adicionalmente se trabajó con un grupo
control. A los tres grupos experimentales se les aplicó dos dosis
sucesivas de 10 ml cada una con un intervalo de 12 horas (ordeño
de la mañana y de la tarde).
Variables dependientes
Se determinó el agente causal de mastitis subclínica en cada vaca
del ensayo y se evaluó el crecimiento o ausencia de los
microorganismos causantes de mastitis subclínica bovina pos
tratamiento.
28
Tratamientos
En la Tabla 6 se especifican los tratamientos evaluados.
Tabla 6.-Tratamientos evaluados
Concentración
Miel de abejas
No. de
animales
Dosis Frecuencia No. De
aplicacio
nes
Vía de
Administ.
1 100%
Miel pura
4 10 ml c/12 h 2 dosis Intramamaria
2 50% 4 10 ml c/12 h 2 dosis Intramamaria
3 30% 4 10 ml c/12 h 2 dosis Intramamaria
4 (sin aplicación)
Grupo control
4
--------
---------
---------
--------
Fuente: El autor
Unidades Experimentales
Vacas que se encuentren en producción, positivas a mastitis subclínica a
la prueba de CMT.
Análisis de efectividad
Debido al tamaño muestral y a que los resultados se dieron de manera
cualitativa se procedió a realizar una tabla comparativa de los tratamientos
realizados (Tabla 9), y se evaluó la efectividad de los tratamientos con la
siguiente fórmula (Martínez, 2015):
𝐸% =𝐶𝐵% 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 − 𝐶𝐵% 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙
𝐶𝐵% 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑥 100
Donde:
E%: Efectividad
CB% inicial: Porcentaje de crecimiento bacteriano inicial
CB% final: Porcentaje de crecimiento bacteriano final
29
Se comparó la efectividad de los tratamientos a las 24 y 72 horas pos
tratamiento.
Manejo del experimento
Se abordó el ensayo muestreando a las vacas en producción de la
Hacienda Casiganda, con el fin de identificar 16 vacas positivas a
mastitis subclínica a través de la prueba de California Mastitis Test
(CMT).
De las vacas positivas a mastitis subclínica se obtuvo muestras de
leche, las cuales se llevaron al laboratorio de Bacteriología de la
Universidad Central del Ecuador para determinar el agente causal
de cada muestra, mediante la técnica de aislamiento e identificación
del patógeno resumida en el Gráfico 2. Se identificaron los agentes
causales de cada muestra antes de iniciar el tratamiento.
Las vacas del estudio poseían un grado de mastitis subclínica similar
entre todas. Se organizaron 4 grupos de 4 animales cada uno y con
un diseño completamente al azar, se procedió a administrar al primer
grupo 10 ml de miel de abejas pura en el pezón que correspondía,
al segundo grupo se le administró 10 mL de miel de abejas al 50 %,
al tercer grupo se administró miel de abejas al 30 % y al grupo control
no se le administro ningún tratamiento. Los tratamientos se hicieron
después de cada ordeño durante dos ordeños consecutivos (ordeño
madrugada y tarde).
Se iniciaron los tratamientos una vez que se prepararon las
concentraciones de miel de abejas al 30 y 50 % con agua destilada.
En la concentración al 50 %, se midió 5mL de miel de abejas y se
completó con agua destilada, hasta alcanzar los 10 mL, se mezcló
para obtener una solución homogénea y se administró al grupo de
vacas inmediatamente seguido de su preparación.
30
Para la concentración al 30 %, se midió 3mL de miel de abejas y se
completó con agua destilada, hasta alcanzar los 10 mL, se mezcló
para obtener una solución homogénea y se administró al grupo de
vacas inmediatamente seguido de su preparación.
Una vez concluidos los tratamientos se procedió a tomar muestras
de leche a las 24 horas post tratamiento y otra toma a las 72 horas
post tratamiento.
En el laboratorio de Bacteriología se sembraron las muestras de
leche para evaluar el crecimiento bacteriano post tratamiento.
Se confirmó la efectividad del tratamiento en cada vaca a través de
la prueba CMT a los 7 días post tratamiento.
Con los resultados obtenidos se estructuró el informe definitivo.
En el Gráfico 2 se explica a través de un diagrama de flujo los pasos para
la identificación y aislamiento de los microorganismos causantes de mastitis
subclínica presentes en la leche de los bovinos.
31
Gráfico 2.- Diagrama de flujo para la identificación de o los microorganismos causantes de mastitis subclínica en las muestras de leche cruda
siembra siembra siembra siembra
*CAMP= Prueba para identificación presuntiva de estreptococos del grupo B
(Streptococcus agalactie)
**SIM= (Sulfuro-Indol-Motilidad) Medio para determinar motilidad, sulfuro de hidrógeno y
producción de indol.
***TSI= (Triple Sugar Iron) Medio para determinar la capacidad de la bacteria para
degradar azúcares, producción de gas y sulfuro de hidrógeno.
Fuente: (Calvinho, s.f.)
Agar sangre Agar chocolate Agar sal manitol Agar Mackonkey
Tinción Gram
Catalasa Oxidasa
-
Batería
bioquímica
SIM**
TSI***
Urea
Lisina
citrato
+ - +
Prueba CAMP* Coagulasa
+
Muestras De Leche
Tinción Gram
Cocos gram + Bacilos gram -
API 20NE
-
Cocos gram +
Tinción Gram
Coagulasa
+
-
Tinción Gram
-
+
32
CAPÍTULO V
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Durante el ensayo experimental se evaluó el efecto antibacteriano de la
miel de abejas en tres concentraciones (30%, 50% y 100%), se
administraron las soluciones vía intramamaria a 16 vacas positivas a
mastitis subclínica. Las vacas fueron establecidas en 4 grupos al azar con
4 vacas en cada grupo. Al primer grupo se le administró la solución de miel
de abejas al 100%, al segundo grupo al 50%, al tercer grupo al 30% y al
cuarto grupo no se le administró tratamiento alguno ya que era el grupo
testigo. Se realizaron muestreos post tratamiento a las 24 y 72 horas.
Se inició muestreando la leche de todas las vacas del estudio para
determinar el agente causal de la mastitis subclínica antes de los diferentes
tratamientos para evaluar la efectividad de la miel de abejas sobre los
microorganismos.
Los resultados obtenidos en los 4 grupos, se encuentran detallados en la
Tabla 7.
33
Tabla 7.- Resultados del ensayo de la evaluación de la miel administrada por vía intramamaria en vacas lecheras con mastitis subclínica
Número
(animal)
Agente causal Tratamiento CMT
Antes del
trat.
Crecimiento
bacteriano
CMT 7
d. post
trat. 24 h
post
trat.
72 h
post
Trat.
1. S. aureus 100% ++ S/C S/C N
2. S .aureus 100% ++ S/C S/C N
3. Streptococcus
sp
100% ++ C S/C N
4. SCN 100% ++ S/C S/C N
5. SCN 50% ++ C S/C N
6. Streptococcus
sp
50% ++ C C N
7. S. aureus 50% ++ S/C S/C N
8. SCN 50% ++ S/C S/C N
9. SCN 30% ++ C S/C N
10. SCN 30% ++ S/C S/C N
11. S. aureus 30% ++ S/C S/C N
12. SCN 30% ++ S/C S/C N
13. S. aureus Sin trat. ++ C C ++
14. SCN Sin trat. ++ C C ++
15. SCN Sin trat. ++ C C ++
16. S. aureus Sin trat. ++ C C ++
SCN=Staphylococcus coagulasa negativo, S/C= sin crecimiento, C= Crecimiento,
++ = Positivo, N= Negativo
Fuente: El autor
El primer muestreo se realizó 24 horas después del último tratamiento y el
segundo muestreo se realizó a las 72 horas post tratamiento.
A las 24 horas post tratamiento los resultados fueron: En el tratamiento con
miel de abejas pura, el 75% de las muestras no presentó crecimiento
bacteriano, mientras que el 25% presentó crecimiento del patógeno. En el
tratamiento con una concentración al 50% de miel, el 50% de las muestras
no presentó crecimiento bacteriano mientras que el 50% restante, presentó
34
crecimiento del patógeno y en el tratamiento con una concentración al 30%
de miel, el 75% de las muestras no presentó crecimiento bacteriano,
mientras que el 25% si presentó crecimiento bacteriano. El grupo testigo
presentó crecimiento bacteriano en el 100% de las muestras.
A las 72 horas post tratamiento los resultados fueron: Con el tratamiento
de miel de abejas pura, el 100% de las muestras (4/4) no presentó
crecimiento bacteriano. En el tratamiento con una concentración al 50% de
miel, el 75% de las muestras (3/4) no presentó crecimiento bacteriano,
mientras que el 25% (1/4) presentó crecimiento del patógeno y, en el
tratamiento con una concentración al 30% de miel, el 100% de las muestras
(44⁄ ), no presentó crecimiento bacteriano. El grupo testigo presentó
crecimiento bacteriano en el 100% de las muestras.
Los patógenos contra los cuales el tratamiento intramamario fue evaluado,
fueron: Staphylococcus coagulasa negativo (SCN), Staphylococcus aureus
(SA) y Streptococcus spp (ES), y se encuentran detallados en la Tabla 8.
Tabla 8.-Crecimiento bacteriano a las 24 y 72 horas post tratamiento según el agente causal encontrado en cada grupo experimental
TRATAMIENTO Agente causal CRECIMIENTO BACTERIANO
24H 72H
Miel pura S. aureus NO NO
Estreptococcus sp
SI NO
SCN NO NO
50% S. aureus NO NO
Estreptococcus sp
SI SI
SCN NO NO
30% S. aureus NO NO
SCN SI NO
testigo S. aureus SI SI
SCN SI SI
SCN=Staphylococcus coagulasa negativo
Fuente: El Autor
35
En las pruebas de campo post tratamiento, se evaluaron a los animales a
los 7 días a través de la prueba de CMT para confirmar la efectividad de los
tratamientos (Tabla 7). En los tres tratamientos experimentales con miel de
abejas pura , miel de abejas al 50% y miel de abejas al 30%; las vacas en
estudio, resultaron negativas al CMT. El grupo testigo continuó presentando
mastitis subclínica con dos cruces al CMT.
Se logra demostrar la efectividad de la miel de abejas en sus tres
concentraciones detallada en la Tabla 9. En el Gráfico 3 y Gráfico 4 se
evidencian los claros efectos antibacterianos de la miel de abejas en sus
tres concentraciones.
Tabla 9.-Crecimiento bacteriano a las 24 y 72 horas post tratamiento en cada grupo experimental
[ c ] = Concentración de miel de abejas, C= Crecimiento
Fuente: El autor
Tratamientos [ c ] Miel 24 horas 72 horas
C C
n % n %
1 100% 1/4 25% 0/4 0%
2 50% 2/4 50% 1/4 25%
3 30% 1/4 25% 0/4 0%
4 (Control) 0% 4/4 100% 4/4 100%
36
Gráfico 3.-Crecimiento bacteriano a las 24 horas post tratamiento
Fuente: El autor
Gráfico 4.-Crecimiento bacteriano a las 72 horas post tratamiento
Fuente: El autor
Los resultados obtenidos en el presente ensayo experimental se dan
gracias a las características antibacterianas de la miel de abejas pura y
diluida. El alto contenido de azúcares en la miel, la baja cantidad de agua
y la acidez contribuyen en conjunto para crear un ambiente no condicionado
para el crecimiento bacteriano (Mustafa, Hassan, Muhialdid, Eljamed, &
Saleh, 2012). El bajo contenido de agua en la miel provoca una alta
osmolaridad, lo que permite al plasma y la linfa, migrar afuera del tejido,
inhibiendo el crecimiento bacteriano y creando un ambiente húmedo en la
zona afectada, libre para la formación del tejido de granulación,
angiogénesis y epitelización (Cabrera, Ojeda, Céspedes, & Colina, 2003).
37
La capacidad antiinflamatoria de la miel de abejas, además de disminuir el
dolor local, previene que se acumulen exudados intramamarios que pueden
ayudar a formar un medio de cultivo para más bacterias (Bourabah, Ayad,
Hammoudi, Boukraa, & Benbarek, 2014). A la vez que la miel de abejas
ataca el agente causal de la mastitis subclínica en el bovino, le brinda al
tejido mamario la capacidad de reparar el tejido dañado ya que atrae
macrófagos para limpiar y desprender tejido desvitalizado formando una
capa protectora proteica en la zona; adicionalmente la miel de abejas posee
propiedades desodorizantes debido a su alto contenido de glucosa, lo que
evita que las bacterias produzcan malos olores por el amonio, compuestos
azufrados y aminas, produciendo ácido láctico que inhibe el mal olor
(Rodríguez, 2011).
La acidez de la miel de abejas participa en la estabilidad frente a la invasión
de microorganismos patógenos; el principal ácido presente en la miel de
abejas es el ácido glucónico, que se forma de la glucosa del néctar, cuando
reacciona con la enzima glucosa oxidasa, también presente en la miel de
abejas (Lozano, 1984 ). El pH de la miel es lo suficientemente ácido (3.5 -
4.5) para inhibir el crecimiento bacteriano y favorece el efecto antibacterial
en los macrófagos provocando una lisis bacteriana por la acidez,
reduciendo la formación de amonio tóxico (Rodríguez, 2011).
Cuando la miel se encuentra diluida con agua se activa la liberación de
peróxido de hidrógeno a través de la reacción de la enzima glucosa oxidasa
que oxida a la glucosa del néctar obtenido de la fuente floral. El peróxido
de hidrógeno actúa como un potente antibacterial y a éste se le debe gran
parte de las propiedades bactericidas de la miel, mata los microorganismos
por medio de oxidación cuando reacciona con materia orgánica liberando
oxígeno y agua, siendo lo suficientemente tóxico para los patógenos pero
lo suficientemente seguro para el tejido lesionado ya que no llega a
provocar ningún tipo de daño citotóxico por sus pequeñas cantidades de
producción (1-2mmol/L), el peróxido de hidrógeno aumenta su efecto al
38
combinarse con el ácido ascórbico (Vitamina C) contenido en la
composición normal de la miel (Dustmann, 1979).
Debido a la peroxidación de los lípidos de la pared celular y bacteriana, en
infecciones intramamarias se producen radicales libres que dañan la
integridad celular; la miel de abejas juega un papel fundamental al proteger
al tejido dañado de radicales libres por su alta cantidad de fitoquímicos
como flavonoides, ácidos aromáticos, polifenoles y glucósidos, los cuales
conforman el sistema antioxidante que brinda la miel de abejas (Rodríguez,
2011). Almasaudi, et al. (2017) demuestran el efecto del compuesto
fenólico: Siringato de metilo, presente en la miel de abejas pura por su
capacidad de eliminar radicales libres, ejerciendo actividad antibacteriana.
Recientemente, se mencionan estudios acerca del metilglioxal y la
defensina -1, presentes en la miel de abejas, que forman parte de la acción
antibacteriana de la miel. Kwakman & Zaat (2011) mencionan que la
defensina -1 es un péptido que forma parte del sistema inmune de las
abejas que se encuentra en la hemolinfa del insecto, en la jalea real y en la
miel. El metilglioxal como tal ha sido probado contra colonias de
Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis dando como resultado la
inhibición del crecimiento de los patógenos (Montenegro, Avallone,
Aztarbe, & Osuna, 2006).
Actualmente la aplicación profiláctica de la miel de abejas es más utilizada
debido a que proviene de una fuente natural, pero principalmente debido a
la problemática mundial de la resistencia a los antimicrobianos (RAM).
Dentro del sector agropecuario, en la ganadería, la RAM es una fuerte
preocupación para los productores, ya que al momento de aplicar los
tratamientos a sus animales para combatir algún tipo de enfermedad, se
encuentran con fallas de efectividad de los medicamentos que usan
habitualmente y esto se debe al gran riesgo de exposición de aquellos
animales que portan bacterias resistentes, generando una cadena de
39
contaminación y transmisión de los patógenos resistentes: entre animales,
entre animales a los alimentos y finalmente de los alimentos al ser humano
(OMS, 2015). Los problemas de la RAM surgen con el mal uso de los
antibióticos, su mala calidad, las insuficientes regulaciones para el control
de los antibióticos, subdosificaciones, entre otros. Al presentarse la
resistencia de una bacteria a un antibiótico, puede afectar indirectamente a
toda la familia perteneciente a dicho antibiótico (OMS, 2015). Almasaudi, et
al, (2017) reportan que no hay informes acerca de la resistencia bacteriana
a la miel de abejas, debido a su excepcional composición.
Bacterias comunes como Staphlylococcus aureus presentes por lo general
en infecciones graves y heridas, presentan resistencia a la meticilina,
provocando, según informes de la OMS, (2017) una probabilidad de morir
por infecciones de ésta bacteria, de un 64% en seres humanos. Aamer,
Abdul, & Hafeez (2014), afirman que S. aureus es el patógeno más sensible
a la acción antimicrobiana de la miel de abejas de todas las especies de
bacterias estudiadas en similares ensayos.
En la Tabla 9 se puede observar que en los tres tratamientos aplicados, el
Staphylococcus aureus no presentó crecimiento bacteriano a las 24 y 72
horas post tratamientos, comprobando la gran sensibilidad del patógeno
frente a la miel pura y diluida; Almasaudi et al. (2017) coinciden, al
demostrar la inhibicion del 100% de Staphylococcus aureus, tanto sensible
a la meticilina como resistente, frente a 5 tipos de miel de abejas en
comparación con la aplicación habitual de antibióticos, adicionalmente
mencionan el poder inhibitorio de la miel de abejas sobre las formaciones
de biofilms por S. aureus. Rindt, Niculae, & Brudasca (2007), en un estudio
de dermatitis ocasionada por S. aureus, y Naama (2009), en un ensayo in
vitro contra S. aureus, Escherichia coli y Pseudomonas spp; demostraron
al patógeno S. aureus como el más susceptible a los efectos
antimicrobianos de la miel de abejas.
40
Los tres tratamientos evaluados en el ensayo demuestran resultados
evidentes de la eficacia de la miel de abejas contra los diferentes agentes
causales encontrados. Ordoñez (2005) y Rodriguez (2012) coinciden con
el poder antibacterial de la miel de abejas pura y diluida contra agentes
causales de mastitis bovina. Estudios realizados por Bourabah, Ayad,
Hammoudi, Boukraa, & Benbarek (2014), revelan los distintos efectos
antibacterianos de la miel de abejas contra diferentes agentes causales de
mastitis, entre ellos: Micrococcus spp., Klebsiella spp., Pseudomonas
aeruginosa, E coli, Enterobacter spp., Bacillus spp., SCN y Estreptococcus
D. Además, autores como Piccart, Vásquez, Piepers, Vliegher, & Olofsson
(2016), investigan bacterias ácido lácticas aisladas de cultivos de miel de
la abeja melífera, donde prueban la inhibición bacteriana sobre patógenos
que provocan mastitis , dejando un panorama amplio sobre la prevención y
tratamientos alternativos contra la mastitis bovina.
La efectividad de los tratamientos realizados sobre SCN, se suman a los
ensayos realizados por Rodriguez, (2012) y por French, Cooper, & Molan,
(2005), los mismos que, debido a la preocupación actual de la RAM y del
dificil manejo de los microorganismos; demostraron la sensibilidad in vitro
de la miel de abejas sobre cepas de SCN, lo que deja comprobada la
importancia de la miel de abejas durante la profilaxis y control de afecciones
tales como la mastitis subclínica en bovinos causadas por SCN.
Dustmann (1979) revela que las colonias de Staphylococus aureus
demuestran mayor sensibilidad a la miel de abejas, mientras que colonias
de Streptococcus spp, Salmonella spp y Pseudomonas presentan menos
sensibilidad. Manrique, (2011) trabajó con concentraciones al 30% de miel
de abejas sobre cepas de Streptococcus spp (ES) y no obtuvo eficacia,
mientras que con la concentración al 100% (miel pura) obtuvo eficacia total
del tratamiento, por lo que concluyó que a concentraciones mayores de miel
de abejas, mayor es el efecto antibacteriano sobre cepas de ES. En el
presente ensayo, con el tratamiento de miel al 50% sobre ES se presentó
crecimiento bacteriano en el laboratorio, a diferencia de los patógenos
41
Staphylococcus aureus y SCN, que no presentaron crecimiento; al no
determinarse las unidades formadoras de colonia (UFC/ml) en el estudio,
no se pudo obtener un valor cuantitativo de la reducción de la carga
bacteriana de cepas de ES, sin embargo el tratamiento al 50% de miel
eliminó la mastitis subclínica provocada por ES, dando un valor negativo en
la prueba CMT, concluyendo que, el tratamiento actuó sobre las colonias
de ES y posiblemente se redujo la carga bacteriana. Por otro lado con el
tratamiento de miel pura al 100% sobre ES, no se presentó crecimiento
bacteriano en el laboratorio y se obtuvo un valor negativo de mastitis
subclínica al CMT, concordando con los ensayos realizados por Manrique
(2011).
Cabe mencionar una ligera variación que se observó en la leche de las
vacas tratadas con miel de abejas pura, en la coloración que cambió
levemente a marrón hasta las 72 horas lo que sugiere que posiblemente la
miel pura no se absorbe por completo en el canal del pezón. La miel de
abejas tiene la capacidad de proveer un ambiente húmedo en los tejidos,
con el fin de promover la recuperación del tejido lesionado (Martínez, 2014),
lo que explicaría el efecto sobre el color que causó en la leche al
permanecer en el canal del pezón, durante las 72 horas post tratamiento
en su concentración pura.
42
CAPÍTULO VI
CONCLUSIONES
La miel de abejas posee un efecto antibacteriano, administrada vía
intramamaria, en vacas con mastitis subclínica en concentraciones
al 30, 50 y 100% sobre Staphylococcus coagulasa negativo y
Staphylococcus aureus.
La concentración al 100% (miel pura) sobre Streptococcus spp
resultó más efectiva que la concentración de miel al 50%.
La concentración al 100% (miel pura) demostró ser la más efectiva
en contra de todos los agentes causales de mastitis subclínica en el
presente estudio
Se estableció información útil acerca del uso de la miel de abejas
como tratamiento alternativo en la mastitis subclínica en ganado
lechero, destacando la actual preocupación de la resistencia a los
antimicrobianos.
Es necesario continuar con la investigación del efecto de la miel de
abejas sobre diferentes agentes causales de mastitis bovina.
43
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66.
53
Figura 1. Staphylococcus Aureus en: A) Agar Manitol, B) Agar Chocolate, C) Agar Sangre
ANEXOS
Anexo 1. Resultados de laboratorio
Figura 4. Staphylococcus aureus En Agar Manitol
2.
Figura 5. Post trat. (100%) 24 h. Sin crecimiento
Figura 6. Post trat. (100%) 72 h. Sin crecimiento
Figura 7. Streptococcus spp.
En prueba de CAMP
Figura 8. Post trat. (100%)
24 h. Crecimiento parcial
Figura 9. Post trat. (100%)
72 h. Sin crecimiento
1.
Figura 2. Post trat. (100%)
24 h. Sin crecimiento
A
B
C
Figura 3. Post trat. (100%) 72 h. Sin crecimiento
3.
54
Figura 13. Staphylococcus coagulasa negativo. A)Agar chocolate, B)Agar Manitol, C)
Tinción gram; cocos gram+
A
B
C
Figura 14. Post trat. (50%)
24 h. Crecimiento parcial
Figura 15. Post trat. (50%)
72 h. Sin crecimiento
4.
Figura 10. Staphylococcus
coagulasa negativo en Agar Manitol
Figura 11. Post trat. (100%)
24 h. Sin crecimiento
6.
Figura 16. Streptococcus spp. En prueba de CAMP
Figura 12. Post trat. (100%) 72 h. Sin crecimiento
Figura 18. Post trat. (50%)
72 h. Crecimiento parcial
Figura 17. Post trat. (50%)
24 h. Crecimiento parcial
5.
55
7.
Figura 19. Staphylococcus
Aureus en: A) Coagulasa (+), B) Tinción Gram, C) Cultivo
C
A B
Figura 20. Post trat. (50%) 24 h. Sin crecimiento
Figura 21. Post trat. (50%)
72 h. Sin crecimiento
A B
Figura 22. Staphylococcus coagulasa negativo. A)Agar chocolate, B)Agar Manitol, C)
Tinción gram; cocos gram+
Figura 23. Post trat. (50%) 24 h. Sin crecimiento
Figura 24. Post trat. (50%)
72 h. Sin crecimiento
Figura25. Staphylococcus coagulasa negativo
Figura 26. Post trat. (50%)
24 h. Crecimiento parcial
Figura 27. Post trat. (50%)
72 h. Sin crecimiento
8.
9.
56
12.
Figura34. Staphylococcus
coagulasa negativo en Agar Manitol
Figura 28. Staphylococcus
coagulasa negativo en: A) Tinción gram; cocos gram+, B)Agar chocolate y agar sangre
B
A
A
B
C
Figura 31. Staphylococcus Aureus en: A) Agar Manitol, B)
Agar chocolate y agar sangre, C) Tinción gram
Figura 33. Post trat. (30%)
72 h. Sin crecimiento
Figura 35. Post trat. (30%)
24 h. Sin crecimiento
Figura 29. Post trat. (30%)
24 h. Sin crecimiento
Figura 36. Post trat. (30%)
72 h. Sin crecimiento
Figura 30. Post trat. (30%)
72 h. Sin crecimiento
Figura 32. Post trat. (30%)
24 h. Sin crecimiento
10.
11.
57
14. 13.
15. 16.
Figura 37. Staphylococcus
Aureus en Agar Manitol
Figura38. Staphylococcus
coagulasa negativo en Agar Manitol
Figura39. Staphylococcus
coagulasa negativo en Agar Manitol
Figura 40. Staphylococcus Aureus en Agar Manitol
Figura 41. Staphylococcus Aureus
visto en lente 100x. Cocos gram (+)
58
Anexo 2. Instalaciones
Figura 42. Sala de ordeño y Tanque de enfriamiento de la leche. Hacienda Casiganda
Figura 43. Sala de ordeño Figura 44. Entrada a la sala de ordeño
Figura 45. Establo Figura 45. Crianza de ternaras
59
Anexo 3. Manejo del experimento en campo
Figura 47. Potreros Figura 48. Entrada a la Hacienda Casiganda
Figura 49. Ordeño
Figura 51. Realización de prueba CMT
Figura 50. Prueba CMT
60
Figura 52. Resultado positivo (xx) al CMT Figura 52. Resultado negativo al CMT
Figura 53. Materiales de campo
Figura 54. Sondas intramamarias
61
Anexo 4. Manejo del experimento en el laboratorio
Figura 55 . Aplicación intramamaria de los tratamientos
Figura 56. Materiales de laboratorio
62
Figura 57. Elaboración del Agar Figura 58. Etiquetado de cajas petri
Figura 59. Siembra de muestras de leche
63
Anexo 5. Hoja de campo para el control de Mastitis en el establecimiento
CONTROL DE MASTITIS
FECHA:___________________________
HACIENDA:________________________
NOMBRE DEL
PROPIETARIO:_____________________
NOMBRE RESULTADO NOMBRE RESULTADO
OBSERVACIONES:___________________________________________
___________________________________________________________
___________________________________________________________
RESPONSABLE: ____________________________________________
FIRMA: ____________________________________________________
PD AD
PI AI
