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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
CARRERA DE ODONTOLOGÍA
UNIDAD DE INVESTIGACION Y TITULACION
“EFECTIVIDAD ANTIMICÓTICA DE SOLUCIONES QUELANTES USADAS
EN ENDODONCIA: EDTA 17% Eufar y MD CLEANSER Meta Biomed Co.”.
Tesis de Grado presentada como requisito para la obtención del título de
Odontólogo
Autor: MARÍA ALEXANDRA GUILLEN ROJAS
Tutor: Dra. RAQUEL GUILLEN G.
Quito, 2015
ii
DEDICATORIA
A mi mami Albita que ha sido siempre la guía, inspiración, y sustento en todo
sentido de mi vida.
Y a mi padre que al no estar físicamente a mi lado me ha iluminado como un faro en
este camino profesional.
A mi hermana Eliana que es mi motivación para seguir adelante.
iii
AGRADECIMIENTO
A toda mi familia por todo su apoyo y amor constante, en especial por su
preocupación es esta etapa.
A mi tutora Dra. Raquel Guillén, un profundo agradecimiento por su dedicación y
entrega; a todas esas personas como que fueron el soporte necesario para la realización
de este proyecto de investigación.
A mis amigos, que de una u otra forma me dieron su empuje para culminar es
trabajo.
iv
v
vi
vii
ÍNDICE DE CONTENIDOS
DEDICATORIA ............................................................................................................... ii
AGRADECIMIENTO ..................................................................................................... iii
AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL................................................iv
APROBACIÓN DEL TUTOR ..........................................................................................v
CERTIFICADO DE APROBACIÓN DE TESIS ............................................................vi
ÍNDICE DE CONTENIDOS .......................................................................................... vii
ÍNDICE DE TABLAS ..................................................................................................... xi
ÍNDICE DE GRÁFICOS ............................................................................................... xii
ÍNDICE DE FIGURAS ................................................................................................. xiii
RESUMEN .................................................................................................................... xiv
ABSTRACT ................................................................................................................... xv
Introducción ...................................................................................................................... 1
Capítulo I .......................................................................................................................... 3
1. Planteamiento del problema ...................................................................................... 3
2 Objetivos ................................................................................................................... 4
3. Justificación. ................................................................................................................. 5
4. Hipótesis .................................................................................................................... 5
Capítulo II ......................................................................................................................... 6
2. Marco Teórico. .......................................................................................................... 6
2.1 Infección de los Conductos Radiculares ................................................................ 6
2.2 Fracasos Endodóncicos ......................................................................................... 8
2.3 Endodoncia y Candida albicans .......................................................................... 10
2.4 Levaduras............................................................................................................. 14
2.4.1 Generalidades ....................................................................................................... 14
2.4.2 Levadura Candida albicans .................................................................................. 14
2.4.2.3 Definición ......................................................................................................... 14
2.4.2.4 Historia ............................................................................................................. 15
2.4.2.5 Reproducción .................................................................................................... 15
2.4.2.6. Taxonomía ...................................................................................................... 16
2.4.3. Relación Hospedador – Huésped. ...................................................................... 16
2.4.3.1. Mecanismos defensivos .................................................................................... 16
viii
2.4.4. Factores de virulencia de Candida albicans. ....................................................... 17
2.4.5. Fases de infección de Candida albicans ........................................................... 18
2.4.5. 1. Adhesión y colonización: ................................................................................ 18
2.4.5. 2. Formación de Biopelículas .............................................................................. 18
2.4.5. 3. Morfogénesis ................................................................................................... 19
2.4.5. 4. Producción de enzimas hidrolíticas. ................................................................ 19
2.4.6. Resistencia de Candida albicans ......................................................................... 19
2.4.7. Candida albicans Dentinofílica ........................................................................... 21
2.4.8. Barrillo Dentinario y Candida albicans. ............................................................. 21
2.5 Irrigación en Endodoncia ....................................................................................... 23
2.5.1 Historia ................................................................................................................. 23
2.5.2. Importancia de la Irrigación. .............................................................................. 24
2.5.3. Requisitos de un Irrigante Endodóncico. ............................................................. 26
2.5.4. Sistemas utilizados en la irrigación ..................................................................... 26
2.5.4. 1. Irrigación Pasiva .............................................................................................. 26
2.5.4. 2. Irrigación activada por máquinas ................................................................... 27
2.5.5. Irrigantes comúnmente utilizados en endodoncia. .............................................. 28
2.6 Clorhexidina en Endodoncia .................................................................................. 29
2.6.1 Mecanismo de acción ........................................................................................... 29
2. 7. Quelantes ............................................................................................................... 30
2.7.1. Historia ................................................................................................................ 31
2.7.2. Clasificación de Quelantes .................................................................................. 31
2.7.3 Ácido Etilendiaminotetracético (EDTA) ............................................................. 33
2.7.3.1 Mecanismo de Acción ........................................................................................ 33
2.7.3.2. EDTA en el control de Barrillo Dentinario y Reducción de Actividad
microbiana. ..................................................................................................................... 35
2.7.3.4. Indicaciones del EDTA .................................................................................. 37
2.7.4 MD Cleanser Meta Biomed Co. ......................................................................... 38
2.7.4.1. Composición .................................................................................................... 38
2.7.4.1. Mecanismo de acción ..................................................................................... 39
Capítulo III ..................................................................................................................... 41
3. METODOLOGÍA .................................................................................................... 41
3.1 Diseño de estudio ................................................................................................. 41
ix
3.2 Criterios de Inclusión ............................................................................................ 41
3.3 Criterios de exclusión ............................................................................................. 41
3.4 Variables .................................................................................................................. 41
3.4.1 Dependientes ........................................................................................................ 41
3.4.2 Independientes .................................................................................................... 42
3.4.3 Operacionalización de las Variables...................................................................... 43
3.5 Metodología ............................................................................................................ 44
3.5.1.1 Materiales .......................................................................................................... 44
3.5.1.2. Sustancias ........................................................................................................ 44
3.5.3. Muestra ................................................................................................................. 45
3.5.3.1 Irrigantes Analizados ......................................................................................... 45
3.5.4. Procedimiento. ...................................................................................................... 47
3.5.4. 1 Preparación del medio de cultivo inicial. ......................................................... 47
3.5.4.2 Siembra de C. albicans en Agar Sabouraud ...................................................... 49
3.5.4. 3. Preparación de los discos de papel filtro ......................................................... 51
3.5.4. 4. Evaluación del efecto antimicrobiano por difusión con disco ......................... 53
3.5.4. 4.1 Preparación de medios de cultivo con Agar MuellerHinton ....................... 53
3.5.4.4.2 Preparación del inoculo de C. albicans mediante la escala de Mc. Farland 56
3.5.4.4.3. Preparación de cajas Petri. ........................................................................... 57
3.5.4.4.4. Inoculacion de C. albicans en Agar Muller Hinton....................................... 58
3.5.4.4.5. Colocación de papeles filtro en cada cultivo ................................................. 59
3.5.4.4.6. Medición de halos de inhibición ..................................................................... 60
CAPITULO IV ............................................................................................................... 62
4. RESULTADOS ........................................................................................................ 62
4.1 Recolección de datos ............................................................................................... 62
4.2 Análisis de resultados ............................................................................................. 64
4.3 Discusión ................................................................................................................. 71
CAPÍTULO V ................................................................................................................ 76
5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ...................................................... 76
5.1 CONCLUSIONES .................................................................................................. 76
5.2 RECOMENDACIONES ......................................................................................... 77
ANEXOS ........................................................................................................................ 85
x
ÍNDICE DE ANEXOS
Anexo No. 1 ..................................................................................................................... 85
Anexo No. 2 ..................................................................................................................... 86
Anexo No. 3………..…………………………………………………………………...87
xi
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla No. 1 Hallazgos bacteriológicos en raices con lesión periapical persistente ...... 13
Tabla No. 2 Recolección de datos por cada muestra. .................................................... 63
Tabla No. 3 Datos estadísticos descriptivos de la variable de respuesta. ...................... 65
Tabla No. 4 Valor medio para la variable de respuesta ............................................... 66
Tabla No. 5 Prueba de comparaciones de Tukey. ......................................................... 68
Tabla No. 6 Resultados cualitativos de la sensibilidad por grupo ................................. 69
xii
ÍNDICE DE GRÁFICOS
Gráfico No. 1. Diagrama de caja y bigotes para la variable de respuesta (diámetro de
inhibición del crecimiento de C. albicans ATCC 10231 alrededor del disco con la
solución antifúngica de prueba) ...................................................................................... 65
Gráfico No. 2. Valor medio para la variable de respuesta (diámetro de inhibición del
crecimiento de C. albicans ATCC 10231 alrededor del disco con la solución antifúngica
de prueba) ....................................................................................................................... 67
Gráfico No. 3. Resultados cualitativos e a sensibilidad por grupo ................................ 70
xiii
ÍNDICE DE FIGURAS
FiguraN°.1. (a) Micrografía electrónica de barrido de C. albicans en blastosporas
(b) Micrografía electrónica de barrido de C. albicans hifas ............................................ 11
Figura N°. 2. Biofilm- levaduras corresponde al grupo no tratado ............................. 23
Figura N°. 3. Hifas y Pseudohifas en dentina tratada ................................................ 23
Figura N°. 4. Microfotografías muestran la presencia de barrillo dentinario. ............. 40
Figura N°. 5. Candida albicans ATCC 10231 ............................................................. 45
Figura N°. 6. Solución de MD Cleanser de Meta Biomed Co. .................................... 46
Figura N°. 7. Solución de EDTA 17% (Acido etilendiaminotetracético) Eufar. ........ 46
Figura N°. 8. Clorhexidina 2% (Lira S.A.) ................................................................. 47
Figura N°. 9. Agar Sabouraud deshidratado; suspensión en agua destilada................ 48
Figura N°. 10. Preparación del medio Sabouraud Agar .............................................. 48
Figura N°. 11. Almacenamiento de las cajas petri con Sabouraud de Agar ............... 49
Figura N°. 12. Siembra de Candida albicans ATCC 10231 en Sabouraud Agar. ...... 50
Figura N°. 13. Candida albicans ATCC 10231 en Sabouraud Agar ............................. 51
Figura N°. 14. Preparación de MuellerHinton Agar. .................................................... 53
Figura N°. 15. Valoración de PH del medio de cultivo MuellerHinton Agar. ............ 54
Figura N°. 16. Distribucion del volumen de MuellerHinton Agar en cajas petri. ......... 54
Figura N°. 17. Distribución del Agar en 20 cajas Petri. ................................................ 55
Figura N°. 18. Almacenamiento de medios de cultivo. ................................................ 55
Figura N°. 19 Preparación de la elución del microorganismo ..................................... 56
Figura N°. 20. Comparacion de elución con escala Mc Farland. ............................. 57
Figura N°. 21. Rotulación de cajas Petri. ................................................................... 57
Figura N°. 22. Preparación del Inoculo de Candida albicans (a), (b) y (c). ............. 58
Figura N°. 23. Discos de papel filtro en cajas Petri con Muller Hinton. .................... 59
Figura N°. 24. Incubación de inoculos por 48 horas a 35 ˚C. .................................... 59
Figura N°. 25. Medios de cultivo con antibiogramas ................................................ 60
Figura N°. 26. Medición de halos de inhibición con calibrador ................................ 61
xiv
RESUMEN
Una de las causas de fracasos en el tratamiento endodóncico tiene origen microbiano,
considerando que Candida albicans está en el grupo de microorganismos persistentes a
la terapia endodóncica ya que tiene la capacidad de supervivencia a medios adversos en
los túbulos dentinarios como la escases de nutrientes, es por eso que se realizó este
estudio comparativo, descriptivo y de laboratorio in vitro con el fin de comprobar la
capacidad antifúngica de sustancias quelantes utilizadas en el control de la infección.
Se evaluó la susceptibilidad in vitro de Candida albicans sobre quelantes como
EDTA 17% y MD Cleanser Meta Biomed Co. Por medio de la medición de halos de
inhibición originados alrededor de papeles filtro de 6mm. de diámetro embebidos en
dichas sustancias y suspendidos en cultivos de C. albicans ATCC 10231, inoculados
por difusión en Agar Muller Hinton. Luego de realizar la prueba ANOVA y el test de
TUKEY, se presentó una diferencia significativa y se pudo determinar la actividad
antimicótica de estas sustancias, y se observó la gran capacidad inhibitoria de C.
albicans con el quelante MD CLEANSER Meta Biomed Co., superando al control
positivo que fue Clorhexidina 2%; de esta manera se ubicó como segunda opción la
capacidad antimicótica del EDTA 17%. Indicándose que la solución quelante MD
Cleanser Meta Biomed Co. es una excelente opción en los protocolos endodócicos por
su capacidad antifúngica.
PALABRAS CLAVES: EDTA, ÁCIDO ETILEN-DIAMINOTETRACÉTICO, MD
CLEANSER, CANDIDA ALBICANS, QUELANTES, AGENTES ANTIFÚNGICOS.
xv
ABSTRACT
“ANTIMYCOTIC EFECTIVENESS OF CHELANTING SOLUTIOS USED
IN DENTISTRY: EDTA 17% Eufar AND MD CLEANSER MetaBiomed Co.”
One of the causes of endodontic treatment failure is of microbial origin, Candida
albicans is considered one of the most persistent microorganisms to the endodontic
therapy because it has the capability to survive in adverse environments within the
dentinal tubules. For this reason, the present work is a comparative, descriptive and in
vitro laboratory study that pretended to prove the antifungal capability of chelating
agents used in the infection control.
The susceptibility of the Candida albicans to chelating agents like EDTA
17% y MD CLEANSER Meta Biomed Co was evaluated in vitro, by measuring the
inhibition halos formed around the 6mm diameter filter paper that were embedded in the
aforementioned agents and suspended in C. albicans ATCC 10231, inoculated by
diffusion in Muller Hinton Agar. After performing the ANOVA and the Tukey test, it
was evident that there exists an antifungal capability difference between the substances.
Also, it was noticeable that the inhibitory capability of the C. albicans was greater with
the MD CLEANSER Meta Biomed Co. chelating than with the Chlorhexidine 2%
control, by this approach it was established as a second option the antifungal capability
of the EDTA 17%. In conclusion, MD CLEANSER Meta Biomed Co. quelating agent
is an excellent option for the endodontic protocols because of its antifungal capability.
KEYWORDS: EDTA, ETHYLENE-DIAMINETETRAACETIC ACID, MD
CLENASER, CANDIDA ALBICANS, CHELATING AGENTS, ANTIFUNGAL
AGENTS.
1
INTRODUCCIÓN
La satisfacción en el tratamiento endodóncico está directamente influenciado por la
reducción total de la microflora bacteriana, así como de sus toxinas y endotoxinas, pues
se ha manifestado que alteraciones periapicales son producidas por la presencia de estas
en del sistema de conductos radiculares (Balandrano, 2007). Para ello es importante
también la eliminación del barrillo dentinario ya que contribuye del desarrollo de
biofilms bacterianos (Villa, 2012) .
Diversos microorganismos y sus subproductos contribuyen al desarrollo de la
infección endodóncica de la periodontitis apical crónica, esto se debe según (Lima
Machado, 2009) a que las bacterias alcanzan 300µm de profundidad en los túbulos
dentinarios, complicando su reducción.
Se ha encontrado que las bacterias son las protagonistas principales de las
infecciones, pero en investigaciones se han detectado también la presencia de levaduras
como Candida albicans. Se detalla su presencia en un 21 % de las muestras de
conductos con infecciones primarias y en dientes tratados en el 18 % de los casos. Esta
especie puede persistir después del tratamiento por su capacidad de colonizar y penetrar
la dentina además de la resistencia al hidróxido de calcio según (Siqueira, 2011).
La instrumentación mecánica por sí sola no alcanza una desinfección suficiente en
los conductos radiculares, para lo cual es indispensable complementar dicha
preparación con sustancias irrigantes; además de que existe una amplia diversidad de
sustancias químicas se han propuesto también sus combinaciones.
Según (Cohen, 2011), un irrigante ideal debe cumplir con ciertas expectativas,
como disminuir la microflora bacteriana, tener la capacidad de disolver tejido necrótico
además de lubricar y eliminar el biofilm, sin que cause daño en tejidos sanos.
Las propiedades de desinfección y disolución hacen que el irrigante de primera
elección sea el Hipoclorito de Sodio en los tratamientos endodóncicos, pero se conoce
que dicha sustancia no tiene la propiedad de eliminar el barrillo dentinario, siendo
2
primordial la utilización de sustancias quelantes, que son capaces de desprender
biopelículas de las paredes radiculares, utilizándolas como complemento de
desinfección en el proceso de preparación radicular. Actualmente existe una diversidad
de quelantes a base de EDTA, ya sea en combinación con otros componentes y en
diferentes presentaciones como en líquido, pasta o gel (Cohen, 2011). Como es el caso
de MD Cleanser MetaBiomed Co., prácticamente nuevo en el mercado es una solución
líquida que es a base de EDTA 17 % y Amoniaco 13.4 %.
Es así que se ha interrogado la capacidad antimicótica de las sustancias quelantes
que complementan la preparación radicular. Este estudio se llevó a cabo con Candida
albicans ATCC 10231, principal hongo presente en infecciones secundarias
específicamente en casos de periodontitis apical crónica. Fue necesario determinar si
sustancias quelantes como EDTA 17% y MD Cleanser MetaBiomed Co. tienen
capacidades antimicóticas al momento de utilizarlas en el proceso de irrigación, ya que
MD Cleanser Co. es nuevo en el mercado. Por lo que se decidió ejecutar esta
investigación de manera in vitro en el laboratorio microbiológico Safem Lab. Se realizó
con pruebas de difusión en agar y halos de inhibición con todas las normas de
bioseguridad para poder constatar la capacidad antimicótica de estos productos
quelantes. Se determinó que MD Cleanser Co. posee mayor efecto antimicótico que las
demás sustancias como EDTA 17% y Clorhexidina 2% que fue utilizado como control
positivo. Se pudo concluir que el quelante MD Cleanser Co. posee una potente actividad
antimicótica que complementa el tratamiento endodóncico.
3
CAPÍTULO I
1. Planteamiento del problema
1.1 El Problema
En el ámbito de la endodoncia el éxito depende en gran parte de una correcta
irrigación del sistema de conductos radiculares y por lo tanto del irrigante a utilizar, es
por eso la importancia que el profesional tenga conocimientos amplios sobre las
propiedades como la disminución de la infección y la carga microbiana de dichas
sustancias irrigantes para una preparación exitosa del conducto radicular.
La cantidad de irrigantes que existen en el mercado y su principal uso en el
tratamiento endodóncico nos conlleva al estudio de estos para así poder determinar que
irrigantes es más apto para el tratamiento y poder combatir a Candida albicans casi
siempre presente en reinfecciones y tratamientos fallidos.
De esta manera en la presente investigación se pretende evaluar in vitro el efecto
antimicótico de sustancias quelantes utilizadas en el protocolo endodóncico que
contiene tanto EDTA 17%, así como MD Clenser que es la combinación de EDTA
17% y Amónico 13.4% .
4
2 Objetivos
2.1 Objetivo General
Determinar el efecto antimicótico de EDTA al 17% (Ácido
etilendiaminotetraacético) en comparación con MD Cleanser (MetaBiomed Co.) sobre
cultivos de Candida albicans.
2.2 Objetivos Específicos
- Demostrar la capacidad antimicótica del EDTA al 17% (Ácido
etilendiaminotetraacético) frente a colonias de Candida albicans.
- Determinar el potencial antimicótico de MD Cleanser (Meta Biomed Co.) frente
a colonias de Candida albicans.
- Establecer cuál de los dos quelantes antes mencionados tiene mayor halo de
inhibición micótico.
5
3. Justificación.
Dentro de la terapia endodóncica uno de los principales objetivos es la reducción de
la amplia diversidad de microorganismos, la misma que complica el proceso infeccioso
y su tratamiento, dentro de esta microflora está presente la levadura de Candida
albicans (Sen et al.1997). En la actualidad existen pocos estudios detallados con
respecto a la eliminación de levaduras en el fracaso endodóncico, específicamente de
Candida albicans, ya que la mayoría de investigaciones en endodoncia están enfocadas
a mitigar bacterias como Enterococcus faecalis. ( Waltimo, Orstavik, Siren, &
Haapasalo, 1999)
Para poder reducir la carga bacteriana y el barillo dentinario presente en el complejo
dentinopulpar, se ha introducido una variedad de sustancias irrigantes tanto
antibacterianas como sustancias quelantes. Los quelantes aparte de eliminar el barrillo
dentinario, se sabe que tienen propiedades antimicóticas (Medina, 2001) y es así que
estas sustancias son un coadyuvante dentro del sistema de irrigación, ya que el
hipoclorito de sodio no elimina al barrillo dentinario que es considerado retención
principal de contaminación.
Se sabe de ante mano la capacidad antimicótica de EDTA al 17% (Ácido
etilendiaminotetraacético), (Sen, Akdeniz, & Denizci, 2000; Guillen, 2008) pero
últimamente se han introducido nuevos productos a base de EDTA en el mercado con
otras componenetes como es el caso de MD Cleanser de Meta Biomed Co, el mismo
que se desea poner a prueba su principio antimicótico pues en su composición se
encuentra un porcentaje de Amoniaco, al mismo tiempo que no existen cuantiosas
investigaciones acerca de este microorganismo en endodoncia.
4. Hipótesis
El efecto antimicótico de la sustancia quelante MD Cleanser MetaBiomed Co. es
mayor que EDTA al 17% (Ácido etilendiaminotetraacético) frente a cepas de Candida
albicans.
6
CAPÍTULO II
2. Marco Teórico.
2.1 Infección de los Conductos Radiculares
Existen diferentes razones por las que se puede ver afectada la pulpa, como
exposición pulpar directa, sea de origen traumático, como una fractura coronaria o
iatrogénica causada por procedimientos operatorios, o por procesos cariosos, ya que se
interrumpe la barrera protectora impuesta por las estructuras dentarias, exponiendo a la
pulpa con el ambiente séptico bucal (Estrela, 2005), del mismo modo filtraciones
marginales de restauraciones o coronas defectuosas que faciliten a la diseminación
microbiana hacia la pulpa a través de los túbulos dentinarios (Liébana Ureña, 2002).
Además, el tejido pulpar se prolonga con el tejido periodontal mediante el foramen
apical y conductos laterales que se encuentran en diversas partes de la raíz (Canalda C. ,
2006). De esta manera se propagan microorganismos, uno de ellos es Candida albicans
que es considerado un patógeno oportunista.
Según Siqueira y Roca (2011) en la cavidad oral existe una gran acumulación de
microorganismos entre ellos virus, bacterias y hongos; de los cuales 700 taxones
bacterianos han podido ser identificados, de ellos trece grupos microbianos que se
encuentran primordialmente a nivel bucal y nueve pertenecen a la microbiota
endodóncica.
Las infecciones endodóncicas se pueden clasificar según el momento en que los
microorganismos invaden los conductos: Infección primaria o virgen es decir cuando
los microorganismos invaden por primera vez la pulpa; Infección secundaria causada
por microorganismos que no están presentes en la infección primaria, pero son
introducidos durante el tratamiento, entre citas o una vez terminado el tratamiento
endodóncico y desencadenaran una infección si estos resisten y la infección persistente
causada por microorganismos que resistieron a una infección primaria o secundaria, y
que resistieron de alguna manera a los procesos antimicrobianos que se dan dentro del
conducto e incluso pudieron resistir a la escasez de nutrientes en los conductos tratados.
7
Las persistentes y secundarias son generalmente indistinguibles a nivel clínico. (Cohen,
2011)
Al existir una vía de acceso microbiano en la pieza dentaria, estas bacterias, virus y
hongos se propagan hacia la zona apical y periapical en conjunto con sus productos y
subproductos nocivos, considerando como uno de ellos a la pared celular de las
bacterias compuesta por lipopolisacáridos (LPS), estas ocasionan una serie de efectos
lesivos al organismo como potencializar una reacción inflamatoria, causar dolor e
incluso la adhesión de forma irreversible de LPS al tejido mineralizado como hueso y
cemento apical que podría desencadenar a una infección crónica (Leonardo, 2005).
Los procesos inmunocompetentes del hospedador iniciarán una serie de mecanismos
de defensa (Cohen, 2011) que consisten en la acción de células inflamatorias, como
leucocitos polimorfonucleares, linfocitos, citoquinas etc. Para Nair (1997) a pesar de
estas defensas, el cuerpo no puede eliminar los microorganismos que residen en el
conducto radicular, y por lo tanto el proceso inflamatorio no se detiene totalmente. La
interacción entre la infección del conducto radicular y de los mecanismos de defensa del
hospedador eventualmente causan la destrucción de los tejidos periapicales y la
formación de la periodontitis apical persistente. ( Waltimo, Sen, Meurman, Orstavik, &
Haapasalo, 2003)
La periodontitis apical persistente o crónica es un proceso inflamatorio alrededor del
ápice de la raíz del diente, es principalmente secuela de una infección primaria o
secundaria. El tipo de flora microbiana en el diente con periodontitis apical persistente
tiene características muy diferentes que una infección primaria. Estas infecciones se
caracterizan por microorganismos Gram positivos predominantemente, con una
distribución equitativa de anaerobios facultativos y obligados entre los que sobresalen
Enterococcus faecalis y Candida albicans (Figdor & Sundqvist, 2007). Estas
infecciones persistentes son la principal causa del fracaso del tratamiento endodóncico,
ya que los microorganismos detectados logran acceder a los conductos por
contaminación durante el tratamiento y son resistentes a los procedimientos terapéuticos
(Cohen, 2011).
8
En la periodontitis apical persistente se puede identificar radiográficamente una
imagen radiolúcida que es una resorción ósea apical. Clínicamente estos casos pueden
presentarse tanto asintomáticos como sintomáticos. (Pinheiro, Gomes, & Ferraz, 2003)
determinaron que de 60 casos con periodontitis apical persistente, sólo 5 refirieron dolor
agudo. El resto no presentó dolor espontáneo, sin embargo, 20 de estos refirió historia
de dolor. Otro factor evaluado fue el dolor a la percusión, en el que 20 casos
respondieron positivamente. Del total de dientes estudiados, 5 presentaron trayecto
fistuloso. Otro signo valorado fue la presencia de restauración coronaria definitiva. De
los 60 dientes evaluados, 37 presentaron restauraciones permanentes de las cuales 22
estaban defectuosas y 15 aceptables. En la periodontitis apical persistente se pueden ver
afectado estructura radicular, ligamento periodontal, hueso cortical y hueso esponjoso.
(Aguilar Heredia, 2004)
2.2 Fracasos Endodóncicos
Una de las razones de los fracasos endodóncicos puede estar relacionada con la
permanencia, proliferación y migración de la microbiota desde el interior de los
conductos radiculares hacia los tejidos periapicales, es que podría estar acompañado de
una desinfección químico-mecánica insuficiente que conserva una capa residual
infectada como reservorio de microorganismos. (Canalda C. , 2006)
En infecciones endodóncicas persistentes está presente una microflora importante
como bacterias: Enterococcus faecalis, faecium; bacilos coliformes facultativos, Gram
negativos; además hongos principalmente Candida albicans. Es probable que esta
microflora estuviera presente desde el principio del tratamiento y lograron
predominancia luego, posiblemente debido a una fase químico - mecánica deficiente.
(Cuesta, 2012)
Negroni (2009) afirma que a nivel del periápice de dientes que han fracasado al
tratamiento endodóncico, y que radiográficamente presentan alteraciones apicales,
existe una gran tendencia a que Enterococcus faecalis y Candida albicans, considerados
microorganismos extraradiculares, estén presentes en estas lesiones tanto en cultivos
puros e incluso acompañados de otras bacterias.
9
(Sunde, Olsen, Debelian, & Tronstad, 2002) analizó 36 dientes con periodontitis
apical donde su microbiota apical fue estudiada. Después del cultivo, se revelaron un
total de 67 especies microbianas. Especies Gram-positivas conformaban el 79,5% de la
flora microbiana. Microorganismos facultativos, tales como Enterococcus,
Staphylococcus, Enterobacter, Stenotrophomonas, Sphingomonas, Pseudomonas,
Bacillus, y especies de Candida que se recuperaron en 27 lesiones, es decir en el 75%
de los casos.
Al igual que (Peciuliene, Reynaud, Balciuniene, & Haapasalo, 2001) realizaron una
investigación en donde el objetivo fue determinar la presencia de levaduras y bacterias
entéricas en piezas con periodontitis apical persistente. Las bacterias estuvieron
presentes en 33 de los 40 dientes con periodontitis apical persistente. Las levaduras
fueron aisladas en seis dientes, tres de ellos junto a E. faecalis. Bacilos entéricos
(Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Proteus mirabilis) estuvieron también
presentes.
Las infecciones periapicales persistentes es decir aquellas que contienen
microorganismos que han resistido a procedimientos endodóncicos dan lugar a
enfermedad crónica. Según Siqueira y Rôças (2011) manifiestan que esta microflora
que consiste en bacterias, virus y hongos, podrían intervenir en el fracaso del
tratamiento siempre que puedan soportar períodos de escasez de nutrientes para luego
volver a proliferar, además que sean resistentes a procesos propios del tratamiento que
alteren la ecología microbiana, al mismo tiempo que obtengan una carga bacteriana
importante para ocasionar el daño en el hospedador y tengan un acceso ilimitado a los
tejidos periradiculares así como sus capacidades de virulencia (Cohen, 2011).
Molander et. al (1998) analizaron la situación microbiana intrarradicular de 100
procesos de periodontitis apical persistente. Los especímenes fueron sometidos a
tratamiento de conducto con un antecedente de cuatro años postoperatorios
aproximadamente. Como resultado se obtuvo bacterias presentes en los conductos de 68
de 100 casos analizados, revelando 117 especies. En la mayor parte de los conductos
fueron encontradas de 1 a 2 especies, con mayor influencia de anaerobios facultativos
10
Gram positivos. La bacteria detectada que predominó fue Enterococcus spp, en 32
piezas dentales. Además se encontraron en cantidades significativas especies como
Escherichia coli, Lactobacillus spp, Fusobacterium spp, Streptococcus spp,
Staphylococcus spp, Prevotella spp y Candida albicans. De este modo se sostiene que
las bacterias anaerobias facultativas y ciertas especies aerobias facultativas como
Candida albicans son menos susceptibles al tratamiento endodóncico, por consiguiente,
es de esperarse su persistencia en conductos radiculares posterior a un proceso
endodóncico incorrecto (Molander, Reit, Dahlén, & Kvist, 1998).
2.3 Endodoncia y Candida albicans
La participación de Candida albicans y Enterococcus faecalis en las infecciones del
canal radicular e infecciones periapicales, toman un rol importante (Kovac,
Slobodnikova, & Kotulova, 2013).
De acuerdo con Grossman (1952), hasta el 17% de los conductos radiculares
infectados pueden contener especies de Candida. Se estima que Candida albicans es la
especie de hongos que generalmente se ha aislado en conductos radiculares con
infección, se ha considerado además ser un microorganismo dentinofílico, es decir que
tiene gran afinidad invasiva a la dentina con diferentes formas de crecimiento (José F
Siqueira & Sen, 2004). Además es capaz de utilizar la dentina como recurso de
nutrición por largos períodos ( Waltimo et al., 2003).
En estudios realizados por (Sen, Sentina, Safavi, Kamran, & Spangberg, 1997) en
premolares humanos los cuales fueron infectados con C. albicans durante 10 días y las
superficies de tejido duro se examinaron con un microscopio electrónico de barrido. Las
hifas penetraron fácilmente en las grietas, siguieron las crestas de las cavidades y
emigraron en los túbulos dentinarios. Estos hallazgos demuestran que los tejidos
dentales duros pueden ser invadidas por C. albicans y por lo tanto pueden presentar
potencialmente un depósito para la difusión de infecciones por Cándida. Las
manifestaciones inflamatorias que se dan alrededor del ápice de la raíz son una
respuesta a varios factores de virulencia de C. albicans que son capaces de infectar el
complejo dentina-pulpa, incluyendo túbulos dentinarios, con lo que demuestra un
importante papel patogénico de este organismo en la periodontitis apical persistente
(Waltimo, Sen, Meurman, Orstavik, & Haapasalo, 2003).
11
Fig. N˚1 Fig. N˚2
Figura N°. 1. Micrografía electrónica de barrido de C. albicans en blastosporas en la superficie del conducto radicular in vitro. La barra indica10 micras.
Figura N°. 2. Micrografía electrónica de barrido de C. albicans hifas penetrantes un túbulo dentinal. La barra indica 2 micras.
Fuente: ( Waltimo et al., 2003)
De acuerdo con Siqueira & Sen (2004) este tipo de levaduras se han encontrado en
ocasiones en las infecciones primarias del conducto radicular, pero ocurren con más
frecuencia en los conductos radiculares de los dientes obturados que han fracasado al
tratamiento endodóncico.
Waltimo y cols. (1997) realizaron un significativo estudio sobre la presencia de
levaduras en 967 muestras de endodoncias con infecciones persistentes, es decir que no
respondieron favorablemente al tratamiento estándar. Cuarenta y ocho hongos de
diferentes especies fueron aislados de 47 muestras, que es el 7% del total de las
muestras con cultivo positivo. De todas las muestras de hongos el 80% pertenecían al
género Candida albicans siendo la especie más común. Candida glabrata se encontró
junto con C. albicans en una muestra. Además se aislaron especies como C.
guilliermondii, C. inconspicua y Candida geotrichum. Las levaduras fueron encontradas
en cultivos puros en seis muestras y junto con bacterias en 41 muestras. Esto nos indica
que las levaduras tienen un papel importante en los casos de periodontitis apical
persistente al tratamiento convencional (Waltimo, Sirén, Torkko, Olsen, & Haapasalo,
1997).
12
En los tratamientos de endodoncia ( Waltimo, Orstavik, Siren, & Haapasalo, 1999)
comprueban la resistencia al Hidróxido de calcio, que es un medicamento intraconducto
muy importante. Lo que puede explicar su aislamiento frecuente de las infecciones del
conducto radicular persistentes. Del mismo modo, la capacidad de las levaduras para
sobrevivir en condiciones ecológicas duras y en alta alcalinidad es probablemente un
factor importante que explica su presencia en las infecciones del conducto radicular
persistentes después de la terapia de conducto radicular convencional.
Peciuliene y cols. (2001) aislaron 40 piezas con periodontitis apical crónica, se
encontró una importante microbiota en 33 de los 40 dientes, se aislaron levaduras en
seis dientes, tres de ellos junto con E. faecalis.
En la Universidad de Cartagena, Colombia en 2012 se realizó un estudio
descriptivo in vivo, en el que el grupo de estudio fueron pacientes con diagnóstico de
periodontitis apical persistente. Se seleccionó una muestra de 34 conductos, del total de
las muestras cultivadas, 26 (76.5%) fueron negativas para la presencia de hongos, las 8
muestras restantes exhibieron ser positivas, lo que corresponde al 23.5 %. En el análisis
de la especie, los resultados fueron positivos para Candida albicans en un 17.7 % y un
5.9% fueron Candida tropicalis (Perez , Pupo, & Diaz, 2012).
(Kovac et al., 2013) examinaron la prevalencia de Enterococcus faecalis y Candida
albicans en casos de infecciones periapicales persistentes. De 32 muestras analizadas el
12,5% de Enterococcus faecalis, y 9,4% de Candida albicans. Además fue aislada C.
albicans en un niño de nueve años con periodontitis apical persistente. El mismo que
llama la atención sobre la probabilidad de que incluso a una edad tan joven, este
microorganismo puede ser un agente etiológico potencial en infecciones endodóncicas.
13
Tabla No. 1
Hallazgos bacteriológicos en las raíces de dientes obturados con lesiones
periapicales persistentes
Estudio
Especies por
conducto radicular
con bacterias
Candida sp*
Enterococcus sp*
Streptococcus sp*
Actinomyces sp*
Möller 1.6 3 29 16 ND Molander et al 1.7 4 47 20 3 Sundqvist et
al. 1.3 8 38 25 13
Hancock et al. 1.7 3 32 21 27 Peciuliene et
al. 1.6 18 64 - -
Cheung y Ho 2,6 (1,8 ‡) 17 ND 50 ND Pinheiro et al. 2.1 (1.8 ‡) 4 55 33 20 Siqueira y Rôças
4.1 9 77 23 5
* Prevalencia por ciento, en los canales con los microorganismos. † Identificación por PCR. Todos los otros estudios del cultivo. ‡ Excluyendo los conductos radiculares mal obturados. ND No detectado
Fuente: (Figdor & Sundqvist, 2007).
Existe una diversidad de especies aisladas de dientes con enfermedad periapical persistente,
pero hay una aceptación en la mayoría de los estudios que hay una alta prevalencia de
enterococos y streptococcos entre otras especies microbianas, en las que figura la presencia de
levaduras de Candida albicans, considerado un microorganismo complejo de eliminarlo.
14
2.4 Levaduras
2.4.1 Generalidades
Las levaduras son microorganismos eucarióticos, aerobios, no fotosintéticos,
inmóviles pueden ser unicelulares (levaduras) o multicelulares que son los hongos
filamentosos (hifas) y las setas que son los hongos macroscópicos. Las levaduras se
alimentan por absorción, se reproducen por gemación, tienen un diámetro de 3 a 30 µm.
las cuales se pueden ver fácilmente en el microscopio óptico (Prats, 2006). Grupo al
cual pertenece la levadura de Candida albicans.
Desde una visión médico-odontológico se puede considerar que la especie más
perjudicial del reino Fungi es Candida albicans, por su capacidad de crecer,
multiplicarse y principalmente por su capacidad de adhesión, a pesar de que
últimamente se han considerado otras especies nocivas como C. Tropicalis, C Krusei,
C. Glabrata,C. Parapsilosisy otras Candida no Albicans (Negroni, 2009).
2.4.2 Levadura Candida albicans
2.4.2.3 Definición
La Candida albicans es comensal de las mucosas del ser humano, que produce
infección generalmente localizada en piel, las uñas, las mucosas, incluyendo la cavidad
oral y a nivel gastrointestinal, pero también puede ser sistémica y comprometer
estructuras profundas y órganos internos (Reyes & Arenas, 2007).
La pared de la célula fúngica es una estructura rígida compuesta principalmente por
carbohidratos, polisacáridos, glicoproteínas y lípidos; los cuales contribuyen a la
adhesión a las células huésped (Estrela, 2005). Para la nutrición, los organismos
fúngicos son dependientes de compuestos de nitrógeno y de carbono, que son
absorbidos a través la pared celular. ( Waltimo et al., 2003)
15
2.4.2.4 Historia
Langenbeck, en el año de 1.839 descubrió el microorganismo causante del Muguet
(Candida albicas), observándolas a manera de placas al aislar de un paciente con aftas
(Sosa, 2001). En 1842 clasificado por Gruby como Sporotrichumy, fue Robin quien
confirmó esta observación denominándola Oidiumalbicans. En 1875, Haussmann
demuestra que el organismo causal de las lesiones orales y vaginales era el mismo. Es
así que en el año 1923 Burkhout la designó como Candida albicans; terminología que
se utiliza en la actualidad. Y en 1940 cobra importancia como infección oportunista.
(Reyes & Arenas, 2007)
2.4.2.5 Reproducción
Las levaduras son organismos unicelulares, eucariotas que se multiplican por un
proceso de división celular mitótico, denominado Gemación, que implica el
crecimiento de nuevo material celular de un sitio particular en la superficie de la
levadura. (Webb, Thomas, Willcox, Harty, & Knox, 1998)
Según (Sosa, 2001) C. albicans es una levadura prolongada semejante a hifas o
pseudohifas, son Gram positivas. Son organismos aerobios, capaces de formar
pseudofilamentos y desarrollar clamidosporas. Es capaz de originar hifas verdaderas
que crecen por alargamiento apical y forman tabiques en ángulos rectos con poros
revestidos de membrana. Las hifas tan solo se producen en el momento de la invasión a
los tejidos. Las pseudohifas están formadas por brotes que se elongan y continúan
conectadas, siendo estas más anchas que las hifas verdaderas.
Se pueden reproducir fácilmente en medios de cultivo artificiales en un lapso de 24
a 48 horas a una temperatura de 25 a 37 ˚C, incluso en condiciones de anaerobiosis
aunque el crecimiento es disminuido. Es un microorganismo acidófilo y acidogénico.
(Negroni, 2009)
16
2.4.2.6. Taxonomía
Candida albicans corresponde al Reino Fungi o Mycetae.
Se coloca en los Deuteromicetos dentro de la familia Cryptococcaceae.(Negroni, 2009)
2.4.3. Relación Hospedador – Huésped.
Estos microorganismos son normalmente eliminados por los mecanismos defensivos
del hospedador. Ya que el desarrollo de una infección fúngica depende de: los factores
de virulencia del hongo, mecanismos defensivos del hospedador y la dosis o cantidad
del inóculo fúngico. En general, los hongos causan enfermedades en hospedadores
inmunodeprimidos, aunque también pueden producir infección en personas
inmunocompetentes (Liébana Ureña, 2002). Además el hospedador posee capacidades
de defensa o protección frente a procesos patógenos.
2.4.3.1. Mecanismos defensivos
El ser humano inmunocompetente presenta una serie de mecanismos defensivos
muy eficaces en el combate de la infección.
A. Mecanismos defensivos inespecíficos: Implica la integridad de la piel
y las mucosas, la actividad defensora de mucosas y secreciones,
asimismo de la microbiota habitual. Su importancia se comprueba en
pacientes que presentan alteraciones inmunológicas ya que son muy
sensibles a infecciones por hongos como personas con quemaduras
graves, ulceraciones, portadores de prótesis dentales defectuosas,
pacientes con tratamientos prolongados de antibióticos de amplio
espectro. Estos factores influyen el momento combatir contra una
posible infección de C. albicans (Liébana Ureña, 2002)
B. Mecanismos defensivos específicos La inmunidad del huésped
cumple un rol importante frente a estas infecciones. Los hongos son
capaces de evadir los mecanismos defensivos del hospedador
17
generalmente cuando se encuentra inmunodeprimido y sus tejidos son
atacados mediante sus factores de virulencia. La respuesta protectora se
produce como consecuencia de una activación de los linfocitos TH1
que liberan citocinas que activan a macrófagos, neutrófilos, y linfocitos
T citotóxicos, aumentando su capacidad fungicida. (Liébana Ureña,
2002). Ya que de otra manera podría manifestarse con la presencia de
IgG, IgA, IgM y factores del complemento. (Papone, 2006; Silva-
Herzog, Garcia, Rodriguez, & Maria, 2011)
2.4.4. Factores de virulencia de Candida albicans.
La microbiota del género Candida, se establece en las superficies mucosas humanas
durante el nacimiento o poco después del mismo, formando parte de la microflora bucal
normal, por lo tanto, puede existir el riesgo de infecciones endógenas (Aguilar Heredia,
2004)
C. albicans coloniza de forma asintomática superficies epiteliales. Aunque tanto la
mucosa vaginal y oral normalmente está presente C. albicans, en esta última mucosa es
colonizada a tasas más altas (hasta 65% de los individuos sanos normales) (Steele,
Leigh, Swoboda, Ozenci, & Fidel, 2001).
Candida albicans y Enterococos comúnmente están asociados en las infecciones de
periodontitis apical persistente, considerándose como patógenos oportunistas. Uno de
sus comportamientos comunes es que salen de su hábitat normal en la cavidad oral y se
establecen también en el canal radicular, ya que este ofrece el ambiente ideal a los
nuevos microorganismos para su colonización como cambios de Ph, disminución de la
competencia bacteriana. Este hongo a más que sobrevivir en el conducto radicular
generalmente obturado, posee una serie de factores que determinan la transición de un
inofensivo a un implacable patógeno en el hospedador como la formación de hifas,
tigmotropismo, secreción de proteasas, adhesión, etc. (Sweet, 1997)
18
2.4.5. Fases de infección de Candida albicans
Candida albicans ha demostrado que posee propiedades de virulencia en el proceso
infeccioso utilizando a la dentina como fuente de nutrición. Las fases implicadas en la
patogénesis son:
2.4.5. 1. Adhesión y colonización:
Una adhesina es una biomolécula que origina la adherencia de la levadura de C.
albicans en las células del hospedador. La capa fibrilar externa de la pared celular de
esta levadura se compone de una manoproteína, dicha capa también ha sido descrita
como una capa o cápsula mucosa que es desprendida durante la infección (Calderonel,
1991), y está compuesta de alrededor 85% de carbohidratos, principalmente manosa,
que es un monosacárido cuya síntesis aumenta en medios que poseen altas
concentraciones de sacarosa o galactosa a 37° C; que se acoplan a las proteínas de la
matriz extracelular de las células del huésped, como fibronectina, fibrinógeno, laminina
y colágeno tipo I y IV. (Castrillón, Palma, & Padilla, 2005; Pardi, 2002)
La penetración de las hifas en los tejidos se mejora por tigmotropismo que es la
capacidad q poseen las hifas de crecimiento por sensibilidad de contacto, invadiendo
uniones intracelulares o roturas microscópicas en superficies, lo que facilita la
penetración en los túbulos dentinarios. (Pardi, 2002; T.M.T. Waltimo et al., 2003)
Existen factores externos que también contribuyen a la adherencia de las levaduras,
como el pH del medio, la hidrofobicidad de la superficie de la pared celular ya que así
se adhieren mejor a los tejidos, y además presentan una mayor resistencia a la
fagocitosis que las células con superficie hidrofílica. (Vigueras, 2007)
2.4.5. 2. Formación de Biopelículas
C. albicans puede utilizar la dentina como fuente de nutrición. Esta afinidad de
invasión dentinaria ha distinguido a C. albicans como un microorganismo dentinofílico,
por ser capaz de unirse al colágeno tipo I y IV y de coagregarse con varias bacterias
orales. (Silva-Herzog et al., 2011).
19
La formación de biopelículas de C. albicans se caracteriza por la adhesión inicial de
las levaduras, posteriormente se desarrollará la germinación y formación de
microcolonias, filamentación, desarrollo de una monocapa, propagación y finalmente
su maduración. (Castrillón, et al. 2005)
2.4.5. 3. Morfogénesis
La especie Candida albicans es polimórfica, debido a que se hallan a manera de
levadura (blastosporas) así como en filamentos (pseudohifa o hifa). La morfogénesis se
define como la transformación entre las levaduras (unicelulares) a pseudohifa o hifa
que es la forma de crecimiento filamentoso del microorganismo, de manera reversible.
La transición de la forma unicelular de levadura al crecimiento filamentoso es
primordial para la virulencia de Candida albicans. (Castrillón et al., 2005).
2.4.5. 4. Producción de enzimas hidrolíticas.
El género Candida produce toxinas asesinas, anafilatoxinas, proteasas, fosfolipasas,
lipasas, hidrolasas extracelulares y nitrosaminas (Liébana Ureña, 2002)
Los factores de virulencia en Candida albicans están regulados por genes que se
manifiestan en un número determinado y en un momento determinado y que establecen
la virulencia: gen de la hexosamida (HEDA), genes de proteinasa aspárticas (SAP1,
SAP2, SAP3, SAP4), genes para favorecer la adhesión (INT1) y gen para desarrollar
tubos germinales.(Papone, 2006)
2.4.6. Resistencia de Candida albicans
La resistencia microbiana sucede cuando la eficacia de una sustancia química o un
fármaco presenta una respuesta deficiente o nula en contra de un microorganismo
causante de la enfermedad en el paciente (Liébana Ureña, 2002)
La resistencia de los hongos frente a los antifúngicos es un concepto amplio que
puede clasificarse en resistencia microbiológica y resistencia clínica.
20
La resistencia microbiológica se puede subdividir en:
a) Resistencia innata o intrínseca: Es aquella que al no estar relacionada con la
exposición al antifúngico, se presenta en todas las cepas de una misma especie
de un hongo (Mellado, Cuenca-Estrella, & Luis Rodríguez-Tudela, 2002).
b) Resistencia primaria: Es aquella que se presenta en una especie de cepas
usualmente sensibles a un antifúngico y de forma espontánea resultan cepas
resistentes, sin haber tenido un contacto previo con el antifúngico (Mellado et
al., 2002).
c) Resistencia adquirida o secundaria. La resistencia adquirida o secundaria se da
tras un contacto, que habitualmente es un largo período de tiempo con el
fármaco. Se puede presentar por una prescripción inadecuada del medicamento,
dosis irregular, o medicamentos caducados. (Liébana Ureña, 2002).
La resistencia clínica se la define como el crecimiento o falta de inhibición de un
microorganismo en la infección, a pesar de que estén presentes concentraciones
terapéuticas del antifúngico. Este tipo de resistencia se presenta principalmente en
pacientes inmunodeprimidos y que hayan recibido algunos tratamientos antifúngicos, en
portadores de válvulas, catéteres, etc. y en enfermos que se administren ciertos
medicamentos debido a interacciones de estos entre sí o con otros compuestos.
(Mellado et al., 2002)
En cuanto a la medicación intracanal (T. Waltimo, Sirén, Ørstavik, & Haapasalo,
1999) atribuyeron en su estudio una alta resistencia de C. albicans frenta al Hidróxido
de Calcio. En comparación con Enterococcus faecalis, que mostró ser sensible a este.
En su estudio se demostró que Candida spp. es resistente al hidróxido de calcio, lo que
puede explicar el aislamiento de levaduras de los casos de periodontitis apical
persistente.
21
2.4.7. Candida albicans Dentinofílica
La estructura y composición de la matriz de dentina y de los túbulos dentinarios son
factores clave en el proceso de invasión de los microorganismos, debido a que la
dentina es porosa, dura, contiene tejido conectivo mineralizado y fibras colágenas tipo
I, así como otros tipos de colágeno como III, IV, V y VI, proteoglicanos, entre otros.
(Silva-Herzog et al., 2011).
C. albicans es capaz de aprovechar la dentina como un recurso de nutrición. Este
poder de invasión dentinario ha distinguido a C. albicans como un microorganismo
dentinofílico por que tiene la capacidad de acoplarse al colágeno tipo I y IV, el mismo
que sirve como sustrato de adhesión y también para coagregarse con otras bacterias
orales. Además el túbulo dentinario contiene un fluido que es suero con proteínas, como
albumina, IgG y otras proteínas de la sangre como fibrinógeno, que actúan como fuente
de nutrición y adhesión para los microorganismos dentro del túbulo dentinario (Silva-
Herzog et al., 2011)
Lo que se complementa al tigmotropismo que posee C. albicans, para orientar al
hongo a desarrollarse por contacto a nivel de la estructura dentinaria. (Liébana Ureña,
2002)
2.4.8. Barrillo Dentinario y Candida albicans.
El Barrillo dentinario o Smear layer fue descrito inicialmente por Mc Comb y Smith
(1975) como resultado intrínseco de la instrumentación de los conductos radiculares. La
misma que posee dos fases, una inorgánica dada por bridas, virutas o limaduras de
dentina que ha sido instrumentada y restos de sustancias químicas que fueron utilizadas;
y la fase orgánica conformada por restos celulares y microorganismos. (De Lima
Machado, 2009)
(Şen, Kamran, Safavi, & Spångberg, 1997) realizaron un estudio en premolares
humanos que fueron infectados con C. albicans por 10 días, posteriormente las
superficies de tejido dentinario fueron examinadas con un microscopio electrónico de
barrido. Tanto esmalte y dentina, en presencia y ausencia de la capa de barrillo, fueron
colonizados fácilmente por este microorganismo. Las hifas penetraron grietas, siguieron
22
las crestas de cavidades y emigraron hacia los túbulos dentinarios. Estos hallazgos
indican que los tejidos duros dentales pueden ser invadidos por C. albicans y por lo
tanto pueden presentar potencialmente un reservorio para la difusión de las infecciones
por Candida.
Los mismos investigadores (B.H. Sen, Safavi, & Spangberg, 1997) demostraron la
colonización de C. albicans en la dentina con o sin la capa de barrillo. Cuando estaba
presente la capa de barrillo, demostraron la presencia de una biopelícula espesa con
diferentes formas de crecimiento que cubría todas las paredes. En ausencia de la capa de
barrillo dentinario hubo una red formada por ramificaciones de pseudohifas en las
paredes dentinales, pero la formación de biopelículas densas no era evidente. Se
propuso que, por la capacidad de crecimiento por contacto (tigmotropismo), la invasión
a la dentina por C. albicans es casi inevitable. Las puntas de las pseudohifas siempre
tienden a penetrar en los túbulos dentinarios. Pero se planteó que la presencia de la capa
de barrillo demostró ser un sustrato más adecuado para el crecimiento activo y
acoplamiento de C. albicans.
(Turk, Ates, & Sen, 2008) observaron el patrón de colonización de C. albicans sobre
dentina radicular tratada y no tratada. Los especímenes fueron divididos en: Grupo 1,
en el que los restos pulpares se retiraron sin instrumentación e irrigación. En el Grupo 2
las paredes de los canales radiculares fueron instrumentadas con fresas Gates-Glidden y
tratadas con la solución de EDTA 15% y la solución de NaOCl 2,5%. Finalmente,
todos los dientes se lavaron con agua destilada. En cada muestra se inoculó C.albicans.
Tras el período de incubación, las muestras se fijaron, se deshidrataron, y se procesaron
para microscopía electrónica de barrido. Como resultado se obtuvo que C. albicans
estuvo presente en las superficies del conducto radicular de todos los especímenes, a
pesar de que el patrón de colonización era diferente. En el grupo no tratado, el patrón
de crecimiento principal era una masa densa de células de levadura que forman capas de
biofilm mientras que las estructuras de hifas no eran comunes. Por otro lado,
pseudohifas invadieron todas las superficies del conducto radicular en el Grupo 2 y las
células de levadura se observaron ocasionalmente. En conclusión los procesos de
tratamiento sobre la dentina del conducto radicular tienen una gran influencia en el tipo
de colonización de C. albicans. Este hecho debe ser considerado en la planificación y la
evaluación in vitro de Candida, en cuanto a la adhesión y / o estudios de penetración.
23
Figura N°. 3. Biofilm- levaduras corresponde al grupo no tratado
Figura N°. 4. Hifas y Pseudohifas en dentina tratada propio al Grupo Nº 2 Fuente: Oral surgery, oral medicine, oral pathology, oral radiology, and endodontics Juornal (Turk et al.,
2008)
2.5 Irrigación en Endodoncia
2.5.1 Historia
El químico Henry Drysdale y el cirujano Alexis Carrel, en la época de la primera
guerra mundial popularizaron el uso del hipoclorito de sodio con 0.5% de cloro como
desinfectante (Villa, 2012)
Posteriormente, Dakin en 1915 comenzó a usar aceites clorados como el Eucaliptol
y el aceite parafinado combinados en partes iguales. El hipoclorito de sodio al 0,5% era
usado en el tratamiento de heridas, y le denominaron solución de Dakin, ya que en la
actualidad es unos de los irrigantes principales en concentraciones de 2,5%; 5,25%
incluso 6% (Leonardo, 2005). Hasta el año de 1940, el agua destilada era un irrigante
endodóncico también muy utilizado, además se usaron ácidos como el ácido clorhídrico
en concentraciones de 30% y ácido sulfúrico 50% sin considerar los peligros que estos
agentes ocasionan a los tejidos periradiculares. (Medina Arguello, 2001)
24
En 1954, fue utilizada por primera vez la Clorhexidina en la antisepsia de campos
operatorios y en la desinfección de conductos radiculares ya que estaba dotada de una
gran actividad antimicrobiana, hoy en día es un importante irrigante endodoncico al 2%
de concentración (De Lima Machado, 2009).
Ostby en 1957, en el mismo año introdujo el uso de sustancias quelantes como el
ácido etilendiaminotetraacético en forma de sal disódica, con capacidad de formar
compuestos no iónicos y solubles con un gran número de iones de calcio. Además en
1970 Kotulo y Bordacova, demostraron que el EDTA al 10% reducía considerablemente
la población bacteriana del canal radicular en 10 min (Villa, 2012). Con el pasar del
tiempo fueron introducidos en el mercado soluciones combinadas con EDTA como
SmearClear y MD Cleanser MetaBbiomed Co., pues los quelantes se han considerado
fundamentales en endodoncia.
2.5.2. Importancia de la Irrigación.
La irrigación en el campo de la endodoncia se define como la intruducción de una o
más soluciones en la cámara pulpar y conductos radiculares antes, durante y después de
la preparación biomecánica para reducir la población microbiana (Miliani, Lobo, &
Morales, 2012).
La preparación biomecánica convencional se realiza con instrumentación y una
irrigación óptima capaz de eliminar detritos, así como la disolución de tejido vital o
necrótico y restos de dentina infectada y no infectada, sobre todo en aquellas áreas que
la instrumentación no puede alcanzar como son conductos accesorios, invaginaciones y
grietas (Serrato y cols , 2011). De tal manera, los propósitos de la irrigación para Ingle
IJ. (2004) son la disolución tisular, acción antibacteriana y lubricación.
Según (Soares & Goldberg, 2002), la preparación química del conducto radicular
consiste en el empleo de soluciones irrigantes, productos que beneficien la preparación
de conductos atrésicos; así como de fármacos que contribuyan con la desinfección o
inactivación de agentes patógenos en el sistema de conductos radiculares.
25
Peters y cols. en el 2001 comprobaron que la instrumentación mecánica deja
aproximadamente 35% y 40% de las paredes del conducto radicular con una
preparación incompleta, ya que los túbulos dentinarios se limpian con irrigación, de lo
contrario estas áreas pueden albergar detritus, bacterias organizadas en biofilms así
como sus productos de desecho, los cuales pueden impedir una buena adaptación del
material de obturación y desencadenar en un fracaso endodóncico .(Vera, García, &
Silva, 2012)
(Ercan, Ozekinci, Atakul, & Gül, 2004), determinan la actividad antibacteriana de
clorhexidina 2% y de hipoclorito de sodio 5.25% utilizándolas como irrigantes
endodóncicos en dientes con necrosis pulpar y con patología periapical. Se utilizaron 30
raíces de incisivos y premolares de 20 pacientes. En el momento de la preparación
biomecánica, se utilizaron las dos soluciones irrigantes para cada diente, los mismos
que se dividieron aleatoriamente en dos grupos. Las muestras obtenidas fueron
sometidas a un procesamiento microbiológico, incluyendo incubación anaerobia en
Agar Tripticasa deSoja en el lapso de 5 a 7 días. Después de contar las UFC (unidades
formadoras de colonias) en las placas, llegamos a la conclusión de que tanto la
clorhexidina y el hipoclorito de sodio fueron significativamente eficaces para reducir la
contaminación microbiana en los dientes con pulpa necrótica, patologías periapicales, o
ambos, y se podrían utilizar con gran éxito como soluciones de irrigación para erradicar
la contaminación microbiana.
(Soares et al., 2010) determinó la eficacia antimicrobiana de un sistema de irrigación
durante la preparación quimio-mecánica. Durante 21 días, canales radiculares de
dientes humanos extraídos fueron infectados con Enterococcus faecalis , luego los
especímenes se irrigaron con solución salina (grupo de control); con NaOCl 5,25%
seguido de un enjuague final con EDTA al 17% (grupo de irrigación convencional), y el
último grupo con el uso alternado de NaOCl y EDTA .Y se determinó que la irrigación
de NaOCl y EDTA parece ser una herramienta de irrigación en endodoncia
prometedora, porque promueve la eliminación de biofilms de E. faecalis de los
canales radiculares durante todo el período experimental.
26
2.5.3. Requisitos de un Irrigante Endodóncico.
Los propósitos de la irrigación son químico-mecánicos como: impedir la
acumulación de escombros, lubricar el canal radicular, disolver materia orgánica e
inorgánica y prevenir la formación de la capa de barrillo dentinario durante la
instrumentación o disolverla una vez formada; finalmente sus propósitos biológicos:
tener una alta eficacia contra microorganismos aerobios y anaerobios, inactivar toxinas
y endotoxinas bacterianas, poseer biocompatibilidad con los tejidos periapicales y ser
incapaz de producir una reacción alérgica. (Cohen, 2011) (Basrani & Haapasalo, 2012)
Asimismo debe disponer de bajo potencial para causar una reacción alérgica o
anafiláctica. Baja tención superficial. Considerando que el irrigante no debe tener
propiedades tóxicas o cáusticas para los tejidos periodontales (Castelo, 2012).
Entre los objetivos más importantes de las soluciones irrigadoras, se puede señalar:
controlar posibles infecciones, disolver o eliminar restos orgánicos como pulpares e
inorgánicos como el barrillo dentinario, además de tener una acción altamente
desinfectante con la microbiota endodoncica. Aparte de que facilite la instrumentación
de los conductos con acciones lubricantes. (Estrela, 2005)( Villa, 2012)
Además es de gran importancia su acción prolongada o también llamada
sustantividad que asegura la desinfección. Asimismo se debe tomar en cuenta otros
factores como Facilidad de aplicación y almacenamiento, tiempo de vida adecuado,
costo moderado, acción rápida y sostenida.(Miliani et al., 2012)
2.5.4. Sistemas utilizados en la irrigación
2.5.4. 1. Irrigación Pasiva
La técnica de irrigación convencional considerada la más utilizada, también llamada
irrigación pasiva, consiste en depositar el irrigante a través de una jeringa con agujas de
varios calibres, introduciendo y retirando fácilmente la aguja en el conducto radicular.
Algunos factores que favorecen esta técnica de irrigación son: mayor proximidad de la
aguja con el tercio apical de la raíz, mayor volumen del irrigante y agujas de menor
calibre, las cuales pueden penetrar más profundamente en el conducto radicular lo que,
27
a la vez, puede volverse desfavorable, porque se incrementa el riesgo de extruir el
irrigante hacia los tejidos periradiculares. Es por esta razón que se recomendable
depositar el irrigante de manera lenta acompañada de un movimiento continuo de
adentro hacia afuera de la raíz (Vera et al., 2012).
2.5.4. 2. Irrigación activada por máquinas
Hoy en día existen diferentes medios para mejorar la limpieza de los conductos
radiculares mediante oscilación o vibración de la solución irrigante a través de técnicas
mecánicas como irrigación continua, energía sónica a baja frecuencia, energía
ultrasónica de manera sincronizada a la instrumentación, además de mecanismos de
presión alternante como sistema EndoVac de presión negativa o sistemas con cánula
abierta a lo largo de su extremo (Gu et al., 2009).
Los dispositivos ultrasónicos se introdujeron en Endodoncia por Richman (1957).
Limas activadas con ultrasonido, tienen la posibilidad de acondicionar mecánicamente
los conductos radiculares. Pues se ha indicado que las limas activadas por ultrasonido
son idóneas para complementar la irrigación y desinfección del conducto, por medio de
la transmisión de energía acústica a través de alambre liso o una lima oscilante a una
solución de irrigación en el conducto radicular. La energía es transmitida a través de
ondas de ultrasonido capaces de inducir la transmisión acústica e irrigación
acompañada de cierto potencial de cavitación. (Basrani, 2014)
El sistema EndoActivator de DENTSPLY, Tulsa Dental Specialities, de modo
seguro, consiste en una punta de polímero no cortante acondicionada para una pieza de
mano. En forma rápida y eficaz, oscila a las soluciones de irrigación mientras dure el
proceso de preparación radicular. (Basrani, 2014)
El EndoVac fue diseñado para superar los peligros de infiltración del irrigante más
allá del orificio apical mediante la creación de una presión negativa apical en la
longitud de trabajo. El componente clave del sistema EndoVac es una microcánula con
un diámetro de 0,32 mm, un extremo esféricamente sellado utilizado para la orientación,
y la cantidad de 12 microagujeros radialmente dispuestos, los microagujeros son
apropiados para 2 funciones: suministrar irrigantes endodónticos directamente y
abundantemente en los últimos 0,2 mm de longitud de trabajo, y para servir como un
28
sistema de micro filtración para prevenir la obstrucción de la microcánula. (Schoeffel,
2007)
El irrigador de Seguridad (Safety Irrigator) es un mecanismo de irrigación y
evacuación que facilita la irrigación a través de una aguja fina que posee una apertura
lateral con presión positiva a la parte apical del conducto radicular y evacua el irrigante
a través de una gran aguja en el orificio del conducto radicular (Basrani, 2014).
Todos estos sistemas han sido creados para obtener mejores resultados en el proceso
de limpieza y conformación del canal radicular, además de la reducción de la carga
microbiana con la ayuda de la activación de la sustancia irrigante.
2.5.5. Irrigantes comúnmente utilizados en endodoncia.
Se ha propuesto varias soluciones irrigadoras a utilizarse durante el tratamiento
endodóncico. Entre las soluciones más importantes utilizadas con frecuencia están:
Compuestos Halogenados: Representados por el Hipoclorito de Sodio, que varía
según sus concentraciones: 0.5%, 1%, 2.5%, 4-6% (Estrela, 2005). Posee un amplio
espectro antibacteriano además es capaz de eliminar virus, bacterias y hongos (Castelo,
2012).
Soluciones químicamente inactivas, Es decir que no poseen acción antimicrobiana o
quelante, como la solución salina isotónica, agua destilada estéril y soluciones
anestésicas.(Fruttero, 2004)
Clorhexidina: En endodoncia al 2% ha demostrado un buen efecto sobre especies
microbianas aerobias y anaerobias en el interior de los conductos radiculares, ya que su
actividad antimicrobiana prolongada característica denominada Sustantividad, además
que es bien tolerada por el tejido conectivo periapical, es decir que es biocompatible
(Canalda C. , 2006). Por esta razón es que la Clorhexidina 2% ha sido utilizada en este
estudio como control o registro positivo.
29
2.6 Clorhexidina en Endodoncia
Se introdujo en odontología por Davies y cols. en 1954 en la antisepsia de campos
operatorios y en la desinfección de conductos radiculares. Es una base fuerte que se
presenta en diferentes concentraciones y a manera de digluconato, gluconato o acetato
de clorhexidina. La sal de digluconato de clorhexidina es soluble en agua y es una
sustancia ligeramente detergente.
2.6.1 Mecanismo de acción
Es una solución desinfectacte que posee amplio espectro contra bacterias Gram
positivas y Gram negativas, además de su capacidad de adsorción en los tejidos dentales
y de las mucosas, es decir el poder de adherirse o ser atraída por las superficies sólidas.
La gran afinidad de la clorhexidina por las bacterias, probablemente sea consecuencia
de una interacción electrostática entra las moléculas de la misma, con carga positiva, y
la pared celular bacteriana cargados negativamente. Esta interacción permite la
penetración de la clorhexidina al citoplasma del microorganismo, provocando su
muerte. En altas concentraciones como a 2% es bactericida, ya que causa la
precipitación del contenido citoplásmico de los microorganismos; a una concentración
inferior como 0.2% es una sustancia bacteriostática (Leonardo, 2005).
Posee acción prolongada y gradual hasta 48 horas, dicha propiedad es denominada
Sustantividad. Se presenta en diferentes concentraciones, la más utilizada en endodoncia
es al 2%. Es altamente soluble en agua y ligeramente detergente.
Estudios metabolicos demostraron grados muy bajos de toxicidad es decir que es
biocompatible con tejidos orales. (Cohen, 2011) (De Lima Machado, 2009)
Jeansonne en 1994 y White en 1997 compararon la actividad antimicrobiana de la
clorhexidina 2% y del hipoclorito de sodio 5,25% y determinaron que además de ser
menos tóxica, la clorhexidina tiene una acción equivalente a la del hipoclorito de sodio
5,25%. Del mismo modo (Gomes, 2001) realizó un estudio similar en que probó que la
30
clorhexidina y el hipoclorito de sodio son capaces de eliminar cepas de Enterococcus
faecalis en menos de 30 segundos. (Leonardo, 2005)
En un estudio in vitro realizado por (Ferguson, Hatton, & Gillespie, 2002) para
determinar la susceptibilidad de las levaduras de Candida albicans frente a diferentes
irrigantes y medicamentos. Se determinó la concentración mínima inhibitoria (MIC) de
hipoclorito de sodio, peróxido de hidrógeno, digluconato de clorhexidina, e hidróxido
de calcio acuoso que se requiere para matar al inóculo de C. albicans. Los resultados
mostraron que hipoclorito de sodio y digluconato de clorhexidina eran agentes
antimicóticos eficaces.
(Ruff, McClanahan, & Babel, 2006) en su investigacion compararon la eficacia
antifúngica de NaOCl 6%, CHX 2%, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) 17%, y
MTAD Biopure con Candida albicans in vitro. Cuarenta y ocho dientes fueron
inoculados con Candida albicans (ATCC 60193) y se incubaron durante 72 horas.
Posteriormente cada grupo se irrigó con 1 ml de NaOCl 6%, 0,2 ml de CHX2%, 1 ml
de EDTA al 17%, y 5 ml de MTAD Biopure. Muestras de los dientes experimentales se
sembraron en Sabouraud 4% y las unidades formadoras de colonias (UFC) se contaron
como una medida de la actividad antifúngica. Los resultados mostraron que el 6%
NaOCl y 2% CHX fueron igualmente eficaces y estadísticamente significativamente
superior a Biopure MTAD y 17% de EDTA en la actividad antifúngica.
Es por eso que la clorhexidina 2% es una opción de irrigación bastante interesante,
especialmente en conductos contaminados cuando el paciente posee sensibilidad al
hipoclorito de sodio. (Leonardo, 2005)
2. 7. Quelantes
Son sustancias que sustraen iones de calcio de la dentina con lo que la reblandecen
permitiendo la eliminación de la materia inorgánica y favorecen la limpieza de las
paredes y su instrumentación (Canalda C. , 2006). El término quelar deriva del griego
“Klele” que significa garra, así como palabra quelípodo, pata de ciertas especies de
crustáceos terminadas en garra o pinza, como la del cangrejo que sirve para utilizar sus
alimentos. (Leonardo, 2005)
31
Los más importantes son el ácido etilendiaminotetracético EDTA al 15-17% y el
ácido cítrico al 10% (Villa, 2012). Aunque el hipoclorito de sodio parezca ser el
irrigante ideal para usar deforma única, es incapaz de disolver las partículas de calcio de
la dentina y evitar la formación de barrillo dentinario durante la instrumentación.
Además, con frecuencia se encuentran calcificaciones que dificultan la preparación del
sistema de conductos, para lo que es ideal el uso de quelantes como EDTA.(Castelo,
2012).
2.7.1. Historia
Propuesto por Ferdinand Munz en 1935, quien obtuvo un compuesto quelante a
partir de etilendiamina y ácido tricloroacético. (Cohen, 2011)
Ostby, en 1957, utilizo el ácido etilenodiaminotetracético en endodoncia en forma de
sal disódica, con alta capacidad para formar compuestos no iónicos, solubles y con gran
número de iones de calcio. El mismo investigador con juntamente con Fehr en 1962,
determinaron que la capacidad de desmineralización del EDTA es directamente
proporcional a tiempo de exposición. (Leonardo, 2005)
2.7.2. Clasificación de Quelantes
- Ácido cítrico: Todas las concentraciones de ácido cítrico muestran buenos
efectos antibacterianos y capacidad de quelación o eliminación de la capa de
desechos, pero uno de los principales problemas de esta solución es su bajo pH,
lo que lo hace más ácido y biológicamente menos aceptable, comparado con el
EDTA tiene un pH neutro. (Fruttero, 2004)
- Ácido Etilendiaminotetracético (EDTA): Es una sustancia fluida, incolora e
hidrosoluble, capaz de quelar y descartar la proporción mineralizada del barrillo
dentinario.
- EDTAC (EDTA y cetrimida): Hill, en 1959, introdujo esta asociación con este
detergente catiónico para aumentar el poder bactericida. (Leonardo, 2005)
32
- RC-Prep (EDTA, Peroxido de Urea y Carbowax neutralizado con hipoclorito de
sodio al 5%): Fue propuesto por Stewart y cols en 1969, con el fin de promover
su acción quelante y lubricante para que sustancias como el cloro y el oxígeno
pudiesen penetrar en los túbulos dentinarios, que conjuntamente con el
hipoclorito de sodio provoca una acción efervescente la cual se piensa
contribuye a desalojar por flotación los residuos de la dentina (John Ide Ingle,
2004) (De Lima Machado, 2009)
- Endo PTC (Peróxido de urea, Tween 80 (detergente aniónico) y Carbowax,
neutralizado con la solución de Dakin) Paiva y Antoniazzi en 1975,
introdujeron esta solución ya que al entrar en contacto con el hipoclorito
promueve una acción efervescente con el fin de potencializar la instrumentación
(Leonardo, 2005) (De Lima Machado, 2009)
- MTAD (Tetraciclina isomérica, ácido cítrico al 4,5% y detergente - Tween 80)
se comercializa como Biopure MTAD Dentsply Tulsa Dental, se considera que
es capaz de eliminar el barrillo dentinario y desinfectar los conductos
radiculares. (Cohen, 2011)
- Glyde File Prep: (EDTA como vehículo en gel y peróxido de urea) producido
por Dentsply/Maillefer, es un auxiliar de instrumentación y se usa
alternadamente con hipoclorito de sodio (Leonardo, 2005)
- Smear Clear: Está compuesto por agentes antimicrobianos y humectantes a
base de cloruro de cetilperidino, y EDTA 17%. (Leonardo, 2005)
- MD Cleanser: Es una nueva solución quelante, líquida, incolora, de la casa
Meta Biomed Corea Ltd., que ha sido introducida al mercado, está compuesta
por: EDTA 17%, agua 69.6% y amoniaco 13.4 %. (Anexos N.1) Esta
solución ha sido puesta a prueba en esta investigación.
33
2.7.3 Ácido Etilendiaminotetracético (EDTA)
Es una sustancia fluida, incolora e hidrosoluble, capaz de quelar y descartar la
proporción mineralizada del barrillo dentinario. Es un ácido poliaminocarboxílico y su
fórmula es [CH2N (CH2CO2H)2]2. (Cohen, 2011)
2.7.3.1 Mecanismo de Acción
Al utilizar EDTA en el proceso de limpieza y conformación de los conductos
radiculares, se crea un complejo de calcio estable con el barrillo dentinario, con lo que
se evita el bloqueo apical y a la difusión de sustancias desinfectantes (Cohen, 2011).
Esta sustancia presenta en la extremidad de sus moléculas radicales libres que se unen a
los iones metálicos del complejo molecular que es la dentina, acoplándose de esta
manera a los iones de calcio, es así se da una desintegración denominada quelación.
Para Weine, 1997 los agentes quelantes se desenvuelven únicamente sobre los
tejidos calcificados y afectando mínimamente al tejido periapical. Sustituyen los iones
de calcio, que conforman la dentina, por iones de sodio, que se combinan con la dentina
formando sales más solubles. Es así que se proporciona el reblandecimiento de las
paredes del conducto, facilitando su ensanchamiento (Fruttero, 2004). El Ph óptimo
para la descalcificación dentinaria debe ser próximo al neutro, es decir 7,5, se la utiliza
en concentraciones de 10-17% (Leonardo, 2005).
Este proceso de quelación que posee el EDTA tiene capacidad autolimitante (De
Lima Machado, 2009), es decir que una vez que todas sus moléculas se unieran a los
iones de calcio su actividad quelante ya no se ejerce. De acuerdo con Cantatore (1996)
el tiempo de trabajo necesario para la remoción completa del barrillo dentinario es de 2
a 3 minutos en cada irrigación (Leonardo, 2005).
Como lo determinaron (Prado, Gusman, Gomes, & Simão, 2011) que la capa de
barrillo se adhiere a la superficie de la dentina, así ocluyen los túbulos
dentinarios, debido a que esta capa que desfavorece la penetración de soluciones de
irrigación y obturaciones del conducto radicular, que debe ser eliminada. El propósito
34
de este estudio fue comparar la eficacia de ácido fosfórico 37%, EDTA 17% y ácido
cítrico 10% en la eliminación de la capa de barrillo. Ninguna de las sustancias
analizadas en este estudio fue eficaz para eliminar el barrillo dentinario en 30
segundos. Pero se determinó que en un período de 3 minutos todas las sustancias
trabajaron bien en la superfices radiculares.
Patterson en 1965, observó clínicamente, en 200 pacientes sometidos a terapia
endodóncica con EDTA al 10%, demostrando que dicha sustancia no produjo ningún
efecto nocivo postoperatorio. Igualmente varios estudios realizados por Leonardo M R
et al. 1984 corroboran el comportamiento biológico del EDTA en los que resultaron
ilesos los tejidos periapicales. (Leonardo, 2005)
Los quelantes como el ácido etilendiaminotetracético (EDTA) son componentes
químicos auxiliares en el proceso de la conformación de los conductos radiculares, en
ocasiones de los conductos radiculares estrechos, como es usual en los molares, que
suelen presentar serias dificultades. Con el propósito de facilitar la preparación es
recomendable el uso de un quelante. (Polanco Rojas, 2004)
(Mancini, Armellin, Casaglia, Cerroni, & Cianconi, 2009) analizaron la eficacia de
MTAD Biopure (Dentsply Tulsa, Tulsa), EDTA 17% y ácido cítrico 42% en cuanto a la
eliminación de la capa de barrillo y grado de erosión en el tercio apical de los canales de
radiculares. Un total de 96 dientes humanos unirradiculares extraídos fueron
distribuidos aleatoriamente en cuatro grupos y preparados mediante instrumentos
rotatorios. Cada canal fue irrigado con una de las siguientes soluciones: MTAD
Biopure, EDTA 17%, ácido cítrico 42%, y NaOCl 5,25% (control). A continuación,
todas las muestras fueron irrigadas con NaOCl al 5,25%.La evaluación fue por
microscopía electrónica de barrido y mostró diferencias significativas entre los
irrigantes de prueba en la eliminación de la capa de barrillo. Y se derminó que la
eficacia de MTAD Biopure y EDTA 17% en la eliminación de la capa de barrillo fue
significativamente mayor que NaOCl 5,25% (control).
En el estudio de (Khedmat & Shokouhinejad, 2008) fue comparar la eficacia de
SmearClear, EDTA al 17% y ácido cítrico al 10% en la eliminación de la capa de
35
frotis. Cuarenta y ocho dientes humanos unirradiculares extraídos fueron divididos al
azar en cuatro grupos incluido el control, se prepararon utilizando instrumentos
rotatorios: Mtwo. Cada canal fue posteriormente irrigado con una de las siguientes
soluciones: NaOCl 5,25% (control), SmearClear, EDTA 17% y ácido cítrico 10%. Los
resultados se analizaron a través de microscopia electrónica,y mostraron que no hubo
diferencias significativas en la eficacia de los tres agentes quelantes en todos los niveles
de los canales de la raíz. Los mejores resultados mostraron SmearClear y EDTA
17%. Sin embargo, la eficacia del ácido cítrico fue significativamente menor en el tercio
apical en comparación con los tercios coronales y medias de los canales.
En la investigación de (González-López, Camejo-Aguilar, Sanchez-Sanchez, &
Bolaños-Carmona, 2006) al medir la capacidad de desmineralización de ácido cítrico
10%, 20% y EDTA 17%, después de tres períodos de tiempo y para determinar si se
ha modificado mediante la adición de clorhexidina 1%. A los 3, 10, y 15 minutos de
inmersión, la concentración de iones de Calcio se midió por espectrofometría de
absorción atómica. La adición CHX 1% no modificó la capacidad de desmineralización
de estas soluciones. En los primeros tres minutos, se obtuvo significativamente más
iones de calcio cuando se utilizó EDTA 17% en comparación con las otras soluciones.
2.7.3.2. EDTA en el control de Barrillo Dentinario y Reducción de
Actividad microbiana.
Además de su habilidad de limpieza, los quelantes pueden desarticular biofilms
adheridos a las paredes del conducto radicular, esto puede explicar porque el EDTA
como irrigante intra-conducto tiene una capacidad superior de reducción de la
microbiota en comparación con la solución salina, a pesar del hecho de que sus
propiedades antisépticas son limitadas. (Vera et al., 2012)
Se ha determinado que el EDTA extrae proteínas de la superficie bacteriana al
combinarse con los iones metálicos de la cubierta celular, provocando así la muerte
bacteriana. (Cohen, 2011)
36
Es así que Patterson (1963) estudió la acción de este ácido y determinó que una
solución de EDTA al 10% produjo una zona de inhibición microbiana. Kotula &
Badacova (1970) en su estudio in vitro comprobaron que el EDTA al 10% en 30
minutos reduce considerablemente la población bacteriana del conducto. (Leonardo,
2005)
Drake y cols. (1994) compararon si el barrillo dentinario permitía la colonización de
microorganismos. Empleando 26 caninos humanos extraídos, luego de que se
contaminaron con Streptococcus anginosus, determinaron que el grupo en donde se
conservó el barrillo dentinario permaneció la contaminación, que el grupo donde había
sido removido.Al comparar la inhibición del crecimiento bacteriano se demostró que el
efecto del EDTA era más fuerte que ácido cítrico y el NaOCl al 0.5%, pero más débil
que el NaOCl al 2,5% y el de la CHX al 0.2 %.
(Yoshida, Shibata, Shinohara, Gomyo, & Sekine, 1995) también establecen en su
estudio acerca del efecto de la eliminación de la capa de barrillo mediante la solución de
EDTA 15% como irrigante del conducto radicular, se analizó en 189 dientes infectados
unirradiculares. Cuando se utilizó la solución de EDTA al 15%, no hubo bacterias
encontradas en 93 de 129 raíces en la fase de toma de muestras. Y en 75% de las
muestras se encontraron bacterias en los canales radiculares cuando se utilizó solución
salina como una irrigante. Estos resultados sugieren que la solución de EDTA 15% es
más eficaz que la solución salina como un irrigante endodóncico.
(Guillen, 2008) al evaluar in vitro el grado de susceptibilidad de Candida albicans
con diferentes irrigantes usados en endodoncia: Hipoclorito de sodio al 2.5%,
Hipoclorito de sodio al 5.25%, Gluconato de Clorhexidina 2.0%, EDTA al 17%
determinó que de entre todas las sustancias estudiadas el EDTA al 17%, se comporta
como el mejor antimicótico, pues presenta estadísticamente la media más alta de zonas
de inhibición bacteriana.
En el estudio de (Chávez de Paz et al., 2010) a través de microscopía focal se
analizó el efecto de los agentes antimicrobianos en biofilms de Enterococcus
faecalis, Lactobacillus paracasei, Streptococcus anginosus y Streptococcus
37
gordonii aisladas a partir de canales de la raíz con infecciones persistentes. Las
biopelículas fueron expuestas durante 5 minutos a: clorhexidina (2,5%), EDTA17 %, y
a hipoclorito de sodio (1%). Y se obtuvo como resultado que el NaOCl (1%) afectó la
integridad de la membrana de todos los organismos y elimina la mayoría de las células
del biofilm, la exposición a EDTA 17 % afectó la integridad de la membrana en todos
los organismos, pero todavía existía la presencia de unos pocas células
de E. faecalis, L. paracasei y S. anginosus. La Clorhexidina (2,5%) tuvo un efecto leve
sobre la integridad de la membrana de E. faecalis y eliminó sólo 50% del biofilm. Por lo
tanto el EDTA resulto ser mejor antibacteriano que la Clorhexidina 2%.
2.7.3.3. Ventajas del uso de EDTA
Según Goldberg & Abramovich, en 1977, ultimaron que con este agente se obtiene
los siguientes beneficios:
- Ayuda a limpiar y desinfectar, ya que elimina el barrillo dentinario y por lo tanto
los microorganismos involucrados.
- Promueve la acción de la medicación intracanal debido al ensanchamiento del
canal, túbulos dentinarios y permeabilidad de la dentina.
- Mejora la adhesión del material obturador porque condiciona la pared de la
dentina. (Villa, 2012)
En un estudio comparativo realizado por (Bramante & Betti, 2000) se analizó la
instrumentación de canales mesiovestibulares de los molares superiores con limas
manuales Ni-Ti con “Step Back” con y sin EDTA, aclarando que los conductos
irrigados con EDTA optimizaban la eficacia de las limas para mantener la forma
original de los conductos curvos.
2.7.3.4. Indicaciones del EDTA
El barrillo dentinario disminuye la permeabilidad dentinaria y perjudica la
adaptación del material obturador en las paredes radiculares, además que actúa como
38
reservorio de los microorganismos presentes en dicha capa, perjudicando también la
acción de la medicación intraconducto entre sesiones.
Por lo tanto (Soares & Goldberg, 2002) recomiendan utilizar 5 ml. de EDTA una
vez preparado el conducto, la solución debe permanecer inundada de 3 a 5 minutos,
tiempo suficiente para la remoción de barrillo dentinario, finalmente el conducto podrá
irrigarse con hipoclorito de sodio y secarse con conos de papel.
También está indicado para conformación de conductos atrésicos. Con la ayuda de
una jeringa o pinza, llevar la solución al canal radicular; en conductos atrésicos la
solución quedará en la cámara, con la ayuda de un instrumento endodóncico introducir
la solución en los conductos. Una vez que la solución este dentro del conducto, esperar
de 2 a 3 minutos. Transcurrido este tiempo iniciar la conformación del conducto, de ser
necesario repetir su aplicación.
2.7.4 MD Cleanser Meta Biomed Co.
Actualmente existen nuevas combinaciones con EDTA que han sido introducidas
en el mercado, con el fin de cumplir las expectativas de un irrigante como es el caso de
MD Cleanser de Meta Biomed Co. Que por ser un producto comercialmente reciente
no existe una escaza citación en la literatura.
2.7.4.1. Composición
Es una nueva solución quelante, líquida, incolora, de la casa Meta Biomed Corea
Ltd., que ha sido introducida al mercado con una fórmula modificada, según el
certificado de análisis adjunta en Anexos, está compuesta por:
- EDTA 17%
- Agua 69.6%
- Amoniaco 13.4 %
39
2.7.4.1. Mecanismo de acción
Al estar compuesto por EDTA 17% permite la eliminación de sustancias inorgánicas
por la quelación que es un fenómeno fisicoquímico en el cual ciertos iones metálicos
son secuestrados de la dentina en este caso sin constituir una unión química con la
sustancia quelante, pero sí una combinación. (Leonardo, 2005), facilitando la
instrumentación y suavizando la dentina de la pared del canal
Produce paredes dentinales más limpias después de la remoción del barro dentinario,
posee efectos antibacterianos y eliminación de la capa de desechos, y sugirieron que
éste podría ser usado como una solución irrigante para los conductos alternándolo con el
hipoclorito de sodio (González Pérez, Liñán Fernández, Villagómez, & Ortiz, 2009).
Su uso esta indicado para:
- Eliminar la presencia de calcificaciones en el conducto radicular
- En canales muy estrechos en piezas posteriores
- Para la remoción de materia orgánica y bacterias en el canal radicular
- Remoción de la capa de barrillo dentinario.
Esta recomendado para la preparacion biomecánica de los conductos, inyectando
unas gotas de la solucion en el conducto mientras se instrumenta hasta alcanzar la
apertura y forma necesaria del canal radicular. Ademas para la eliminacion del barrillo
dentinario mediante la irrigacion con MD Cleanser, seguido de un enjuague con una
solucion de NaOCl, aspirar el exceso de fluido y secar el conducto.
Su manejo debe ser con cautela y discrecion para evitar una perforacion, la
extrucion del liquido hacia el ápex, para de esta manera usarlo correctamente.(Anexos
N ˚1.)
Durante la preparación biomecánica del conducto radicular se han utilizado varias
sustancias químicas para la remoción de barrillo dentinario. En el estudio de (González ,
Liñán,Villagómez, & Ortiz, 2009) se emplearon sesenta y cinco dientes extraídos con
conductos amplios y rectos. El grupo control se irrigó con NaOCl al 5.25%. A los
40
grupos restantes se les irrigó con acondicionador (1) EDTA al 17%; acondicionador (2)
MD Cleanser Co. (3) SmearClear: EDTA al 17% con surfactante y como irrigación final
NaOCl al 5.25% y se observaron en el microscopio electrónico de barrido. Los
resultados mostraron que el acondicionador (2) que logró eliminar el barrillo dentinario
casi en su totalidad y en donde se utilizaron los acondicionadores (1) y (3) los resultados
revelaron una eliminación parcial del barrillo dentinario. Estas diferencias encontradas
fueron estadísticamente significativas en el grupo del acondicionador (2) MD Cleanser
Co. En él se mostraba los mejores resultados de remoción de barrillo dentinario.
Figura N°. 5. Microfotografías del grupo control y experimentales.
Muestran la presencia de barrillo dentinario. A. grupo control muestra gran cantidad de lodo dentinario, no se observan los túbulos. B. grupo del acondicionador (1) se observan las entradas de los túbulos dentinarios con debris y pequeñas zonas de barrillo dentinario. C. grupo del acondicionador (2), los túbulos no presentan barrillo dentinario, que incluso se observan los canalículos que los intercomunican. D. grupo del acondicionador (3) aun y cuando se observa la entrada de los túbulos dentinarios existe el debris obstruyéndolos y lodo en las paredes del conducto.
Fuente : Revista odontológica Mexicana (González Pérez et al., 2009)
41
CAPÍTULO III
3. METODOLOGÍA
3.1 Diseño de estudio
Estudio experimental comparativo, descriptivo y de laboratorio in vitro para evaluar
el efecto antimicrobiano de dos soluciones irrigantes empleadas en endodoncia: EDTA
(Ácido etilendiaminotetraacético) con una concentración 17%, comercialmente
disponibles (EDTA Eufar y MD Cleanser), contra una cepa de Candida albicans
ATCC 10231. Como control del ensayo se utilizará Clorhexidina 2% y agua destilada
estéril. La eficacia antimicrobiana de estas sustancias irrigantes se establecerá con la
medida del diámetro de los halos de inhibición del crecimiento de la cepa mencionada.
3.2 Criterios de Inclusión
- Cepa pura de Candida albicans ATCC 10231
- Soluciones quelantes a base de Ácido Etilendiaminotetraacético (EDTA) al 17%.
- Soluciones quelantes sin alteraciones, sin manipulación previa y con fecha de
caducidad vigente.
3.3 Criterios de exclusión
- Cepas que se encontraron contaminadas al momento del cultivo.
- Soluciones quelantes que al momento de la apertura se evidencia en mal estado y
con fecha de caducidad vencida.
3.4 Variables
3.4.1 Dependientes
- Candida albicans: es un hongo oportunista del ser humano, que produce
infección generalmente localizada en piel, las uñas, las mucosas, incluyendo la
42
cavidad oral y a nivel gastrointestinal, que en adición a esto está presente en
infecciones periapicales persistentes. (Reyes & Arenas, 2007)
- Halos de Inhibición: es una zona de inhibición de color semitrasparente
alrededor de un disco de medicamento en un antibiograma en el cual no se da
crecimiento bacteriano en una placa de agar inoculada con el germen.
(Galiano,2010)
3.4.2 Independientes
- Quelantes: son soluciones encargadas de actuar sobre la dentina secuestrando
sus iones de calcio, haciendo más fácil su desintegración principalmente la
preparación de los conductos, especialmente zonas atrésicas. (Leonardo, 2005)
43
3.4.3 Operacionalización de las Variables
Variables Concepto Dimensión Indicador Escala Dependientes Candida albicans
Es un hongo oportunista del ser humano, que produce infección generalmente localizada en piel, las uñas, las mucosas, incluyendo la cavidad oral y a nivel gastrointestinal
Está presente en infecciones periapicales persistentes, es decir en dientes que fracasaron al tratamiento endodóncico. Una característica de esta especie la constituye su habilidad para subsistir a condiciones adversas, considerándose un microorganismo difícil de eliminar
Este Está presente en infecciones periapicales persistentes, es decir en dientes que fracasaron al tratamiento endodóncico. Una característica de esta especie la constituye su habilidad para subsistir a condiciones adversas, considerándose un microorganismo difícil de eliminar
Nominal o cuantitativa a través de halos de inhibición.
Halos de inhibición
Es un halo semitransparente que va a formarse alrededor de los discos en el antibiograma.
Control positivo Control Negativo Disco impregnados de las soluciones quelantes a evaluar.
El tamaño de los halos de inhibición expresando en mm indican el grado antimicótico de cada sellador endodóntico
Independientes Quelantes.
Son soluciones encargadas de actuar sobre la dentina, haciendo más fácil su desintegración y principalmente la preparación de los conductos, especialmente
Está presente en infecciones periapicales persistentes, es decir en dientes que fracasaron al tratamiento endodóncico. Una característica de esta especie la constituye su habilidad para subsistir a condiciones adversas, considerándose un microorganismo difícil de eliminar.
El halo de inhibición que demuestra la presencia de microorganismos.
44
3.5 Metodología
De acuerdo a lo establecido en el Manual de Bioseguridad en Laboratorios
Microbiológicos y Biomédicos (BMBL) del Centro de control de enfermedades (CDC),
el protocolo de la investigación, se consideró la aplicación de los procedimientos
microbiológicos estándar en la ejecución de los análisis microbiológicos.
Para la evaluación del efecto antimicrobiano de las sustancias irrigantes se aplicó las
recomendaciones de la EUCAST (European Committee on antimicrobial susceptibility
testing), con el método de difusión con disco. Para ello se preparó medio de cultivo
Mueller Hinton en placa circular de 90mm, con un espesor de 4mm ± 0.5mm y un pH a
25°C de 7,39.
3.5.1 Evaluación de Susceptibilidad de Candida albicans a Soluciones quelantes
utilizadas en endodoncia.
3.5.1.1 Materiales
- 20 Cajas Petri
- Caja de hisopos
- Tubos de ensayo
- 80 Discos de papel filtro
- Pinzas de acero inoxidable
- Mechero a gas
- Asa metálica
- Calibrador
- Autoclave
3.5.1.2. Sustancias
- Solución de EDTA al 17% (Ácido etilendiaminotetracético) de Eufar.
- Solución de MD Cleanser de Meta Biomed Ltd.
- Gluconoato de Clorhexidina al 2% (Lira S.A.)
45
- Agua Destilada estéril.
- Mueller Hinton agar
- Sabouraud agar
3.5.3. Muestra
Microorganismo: Candida albicans ATCC 10231
Figura N°. 6. Candida albicans ATCC 10231 Elaborado por: La Autora
3.5.3.1 Irrigantes Analizados
Grupos de Estudio Número de Ensayos
Grupo 1: Solución MD
Cleanser
Solución MD Cleanser
17% (MetaBiomed Co.)
20
Grupo 2: Solución de
EDTA 17%
Solución de EDTA 17%
(Eufar)
20
Grupo 3: CHX 2% Control
Positivo
Clorexidina 2% (Lira
S.A.)
20
Grupo 4: (H2O) Control
Negativo
Agua Destilada estéril 20
Elaborado por: La Autora
46
Figura N°. 7. Solución de MD Cleanser de Meta Biomed Co. Elaborado por: La Autora
Figura N°. 8. Solución de EDTA 17% (Ácido etilendiaminotetracético) Eufar. Elaborado por: La Autora
47
Control Positivo
Figura N°. 9. Clorhexidina 2% (Lira S.A.) Elaborado por: La Autora
3.5.4. Procedimiento.
3.5.4. 1 Preparación del medio de cultivo inicial.
El medio de cultivo Agar Sabouraud se preparó siguiendo las recomendaciones del
fabricante, 65 gramos del medio de deshidratado fueron suspendidos en un litro de agua
destilada. Se dio lugar a la solubilización completa en una plancha caliente con
agitación a 200rpm. Luego se esterilizó el medio de cultivo en autoclave a 121°C
durante 15 minutos. Se permite que el medio de cultivo alcance temperatura corporal y
se añade el antibiótico Gentamicina ajustando la concentración de 50mg/mL
recomenda. Se mezcla y se vierte en las placas de Petri de 90mm que previamente
fueron esterilizadas bajo las mismas condiciones de autoclave.
48
Figura N°. 10. Agar Sabouraud deshidratado; proceso de suspensión o mezcla en agua destilada.
Elaborado por: La Autora
Figura N°. 11. Preparación del medio Sabouraud Agar Elaborado por: La Autora
49
Figura N°. 12. Almacenamiento de las cajas petri con Sabouraud de Agar Elaborado por: La Autora
El medio de cultivo se deja enfriar y se almacena a temperatura de refrigeración
hasta su uso. Antes de sembrar, las placas de medio de cultivo tienen que alcanzar
temperatura ambiente.
3.5.4.2 Siembra de C. albicans en Agar Sabouraud
La cepa de Candida albicans ATCC 10231 se sembró con la técnica de estría por
agotamiento con un asa microbiológica. Se incubó por 48 horas a una temperatuta de
37°C.
50
(a) (b)
(c) (d)
Figura N°. 13. Procedimiento de siembra de la cepa Candida albicans ATCC 10231 en Sabouraud Agar.
Elaborado por: La Autora
51
Figura N°. 14. Candida albicans ATCC 10231 en Sabouraud Agar luego de
su incubación. Elaborado por: La Autora
3.5.4. 3. Preparación de los discos de papel filtro
Se preparó discos de papel filtro de 6mm de diámetro estériles que fueron
impregnados con las soluciones irrigantes de prueba (EDTA 17% solución EUFAR y
EDTA 17% solución MDCLEASER) así como también los controles (Clorexidina 2% y
Agua destilada estéril). Aproximadamente un volumen de 20uL de cada sustancia es
absorbido en cada disco.
Tratamiento 1.-Solución EDTA MD Cleanser
Tratamiento 2.- Solución de EDTA EUFAR 17%
Tratamiento 3.- Solución de Clorexidina 2% como control positivo
Tratamiento 4.- Agua destilada estéril como control negativo
52
(a) Tubos Eppendorf, Micropipetas y las sustancias a analizar
(b) 20 discos de papel filtro en cada ……tubo Eppendorf
(c) Micropipeta con20 uL de cada (d) sustancia se deposita en cada tubo Eppendorf
(e) Agua destilada estéril como
control negativo
53
3.5.4. 4. Evaluación del efecto antimicrobiano por difusión con disco
3.5.4. 4.1 Preparación de medios de cultivo con Agar MuellerHinton
Inicialmente el medio de cultivo fue MuellerHinton el cual se preparó siguiendo las
recomendaciones del fabricante, 38 gramos del medio de deshidratado fueron
suspendidos en un litro de agua destilada. Se dio lugar a la solubilización completa en
una plancha caliente con agitación a 200rpm. Luego se esterilizó el medio de cultivo en
autoclave a 121°C durante 15 minutos. Una vez estéril, una alícuota de 5mL del medio
es tomada para la valoración del PH del medio que debe estar entre 7,3 y 7,4 a 25°C.
Una vez ajustado el pH, se permite que el medio de cultivo alcance temperatura
corporal. Se mezcla y se vierte en las placas de Petri de 90mm que previamente fueron
esterilizadas bajo las mismas condiciones de autoclave, con la ayuda de una bomba
peristáltica de alta precisión para garantizar la homogeneidad del volumen de
dispensado y por lo tanto el espesor del medio sólido en la placa que debe ser de 4mm
±0.5mm.
(a) (b)
Figura N°. 15. Preparación de MuellerHinton Agar. Elaborado por: La Autora
54
Figura N°. 16. Valoración de PH del medio de cultivo MuellerHinton Agar. Elaborado por: La Autora
Figura N°. 17. Bomba peristáltica distribuye precisamente el volumen de MuellerHinton Agar en cada caja petri.
Elaborado por: La Autora
55
(a) (b)
Figura N°. 18. (a) y (b) Distribución del Agar en 20 cajas Petri. Elaborado por: La Autora
Una vez que el medio de cultivo se solidifica, las cajas petri fueron almacenadas a
una temperatura de 2 a 8°C en bolsas de polipropileno herméticamente selladas. Para el
experimento, las placas del medio de cultivo se ambientaron, antes de ser inoculadas.
Figura N°. 19. Almacenamiento de medios de cultivo.
Elaborado por: La Autora
56
3.5.4.4.2 Preparación del inoculo de C. albicans mediante la escala de Mc.
Farland
El inóculo se realizó con una solución de Candida albicans previamente ajustada y
comparable a la turbidez de 0.5 de la escala de Mc. Farland. La turbidez fue comparada
visualmente con una suspensión estándar de turbidez preparada previamente con la
mezcla de 0.5mL de cloruro de bario al 1% con 9.5ml ácido sulfúrico al 1%. Esta
mezcla da lugar a la precipitación en sal de sulfato de bario y genera turbidez y que
puede ser medida en un espectofotómetro con absorbancia de 0.08 y 0.13 a 625nm.
(a) (b)
Figura N°. 20. Preparación de la elución del microorganismo (a), en agua destilada estéril (b). Elaborado por: La Autora
57
Figura N°. 21. Elución de microorganismo comparada con escala Mc Farland.
Elaborado por: La Autora
3.5.4.4.3. Preparación de cajas Petri.
Figura N°. 22. Rotulación de cajas Petri. Elaborado por: La Autora
Rotulación en la que se indica donde se ubican los papeles filtro de cada
sustancia:Clorehexidina C(+) ,C(-) Agua destilada ,E1 MD Cleanser, y E2 EDTA 17%.
58
3.5.4.4.4. Inoculacion de C. albicans en Agar Muller Hinton.
El inóculo consistió en un hisopado en la superficie completa de los medios de
cultivo de Agar Muller Hinton previamente almacenados.
(a) (b)
(c)
Figura N°. 23. Preparación del Inoculo con la elución de Candida albicans
por difusión en Agar (a), (b) y (c).
59
3.5.4.4.5. Colocación de papeles filtro en cada cultivo
Con la ayuda de una pinza de acero inoxidable flameada estéril, Se procedió a
colocar los discos impregnados con las soluciones de prueba y controles preparados
previamente, en los lugares rotulados según correspondan en cada inóculo, que
inmediatamente se incubaron a 35°C por 48 horas.
(a) (b)
Figura N°. 24. Pinza de acero estéril (a) se colocó los discos de papel filtro preparados previamente en las cajas Petri con Muller Hinton .
Figura N°. 25. Incubación de inóculos por 48 horas a 35 ˚C.
60
3.5.4.4.6. Medición de halos de inhibición
Transcurrido el tiempo de incubación, se procedió a medir los halos, alrededor de los
discos en donde se generó un halo, con la ayuda de un calibrador medimos el diámetro y
se reportó a nuestra base de datos.
Figura N°. 26. Medios de cultivo con antibiogramas después de 48 h de
incubación, listos para el análisis.
(a) (b)
61
(c) (d)
Figura N°. 27. Medición de halos de inhibición con calibrador de : E1 MD Cleanser (a), E2 EDTA17% Eufar (b), C+ Clorhexidina 2% (c ) y C- Agua
destilada estéril.
62
CAPITULO IV
4. RESULTADOS
4.1 Recolección de datos
El análisis de datos se realizó sobre una base de 20 repeticiones (n=20); con las
siguientes observaciones.
La unidad experimental fue una caja petri de 90mm de diámetro con agar Mueller
Hinton, la cual se inoculó por hisopado sobre superficie completa con una elución de C.
albicans ATCC 10231. La concentración de la elución se estableción por comparación a
una turbidez correspondiente a 0.5 en la escala de Mc. Farland (1.0-2.0 x 108
UFC/mL)*. Sobre la superficie del medio inoculado, se colocó discos de papel filtro
que previamente hab{ian sido sumergidos en las osluciones de cada tratamiento.
Tratamiento 1.- Solución EDTA MD Cleanser
Tratamiento 2.- solución de EDTA EUFAR 17%
Tratamiento 3.- Solución de Clorexidina 2% como control positivo
Tratamiento 4.- Agua destilada estéril como control negativo
Cuatro de 20 repeticiones fueron descartadas por problemas técnicos que se
evidenciaron en el crecimiento de los microorganismos sobre la superficie de la caja
(contaminación).
63
Tabla No. 2
Recolección de datos por cada muestra.
Solución
Muestra
MD Cleanser
17% Meta
Biomed
EDTA 17
%Eufar
Clorhexidina
2% (Lira
S.A.)
Agua
destilada
estéril
1 20 12 20 6
2 24 15 20 6
3 22 15 20 6
4 22 16 20 6
5 22 16 20 6
6 25 15 20 6
7 21 15 20 6
8 20 16 20 6
9 24 15 16 6
10 26 16 20 6
11 23 16 20 6
12 25 17 22 6
13 24 15 17 6
14 21 15 17 6
15 25 16 20 6
16 24 17 15 6
17 25 27 20 6
18 24 15 20 6
19 30 21 30 6
20 25 29 20 6
Elaborado por: La Autora
Datos en mm. De los halos de inhibición con cada sustancia frente al cultivo la cepa
deCandida albicans.
64
4.2 Análisis de resultados
Para la obtención de resultados se consideró como unidad experimental una caja
petri de 90mm de diámetro con agar MuellerHinton, la cual se inoculó por hisopado
sobre superficie completa con una elución de C. albicansATCC 10231. La
concentración de la elución se estableción por comparación a una turbidez
correspondiente a 0.5 en la escala de Mc. Farland (1.0-2.0 x 108 UFC/mL)*. Sobre la
superficie del medio inoculado, se colocó discos de papel filtro que previamente habían
sido sumergidos en las soluciones de cada tratamiento, de acuerdo a la siguiente
nomenclatura:
Tratamiento 1.- Solución EDTA MD Cleanser
Tratamiento 2.- solución de EDTA EUFAR 17%
Tratamiento 3.- Solución de Clorhexidina 2% como control positivo
Tratamiento 4.- Agua destilada estéril como control negativo
Cuatro de 20 repeticiones fueron descartadas por problemas técnicos que se
evidenciaron en el crecimiento de los microorganismos sobre la superficie de la caja
(contaminación).
Los resultados fueron suministrados por la encargada del laboratorio microbiológico
Safem Lab. y se encuentran organizados en una tabla que puede observarse en el
anexo… gracias al cual se estimaron los estadísticos descriptivos e inferenciales en
función de los objetivos propuestos.
Con los datos así obtenidos se diseñó una base de datos en el paquete estadístico
SPSS en su versión 22.
65
Tabla No. 3
Estadísticos descriptivos de la variable de respuesta (diámetro de inhibición del crecimiento de C. albicans ATCC 10231 alrededor del disco con la solución antifúngica de prueba). GRUPO Mínimo Mediana Máximo Desviación
estándar
MD Cleanser 17% MetaBiomed
20 24 26 2 6
EDTA 17% Eufar 12 15 17 1 6 CLorhexidina 2% (Lira S.A.)
15 20 22 2 6
Control 6 6 6 0 6
Elaborado por: La Autora
Se observa el valor mínimo, mediano, máximo y la desviación estándar para cada
uno de los cuatro grupos, el valor máximo fue de 26mm y se lo obtuvo en el grupo de
probetas en las que se empleó MD Cleanser 17 % MetaBiomed y el menor valor fue
obtenido en el control negativo y correspondió a un halo de 6mm, equivalente al valor
del disco.
Gráfico No. 1.
Diagrama de caja y bigotes para la variable de respuesta (diámetro de inhibición del crecimiento de C. albicans ATCC 10231 alrededor del disco con la solución antifúngica de prueba)
Elaborado por: La Autora
66
En este diagrama se observa la alta dispersión especialmente para los grupos 1 y 2,
en el grupo 3se presentó gran homogeneidad salvo ciertos casos que pueden registrarse
como marcas en la figura. Se observa además que el mayor valor mediano fue de 24mm
y correspondió al grupo que se empleó MD Cleanser 17 % MetaBiomed, seguido por el
valor de 20mm del grupo de Clorhexidina al 2%, luego el de 15 mm obtenido al
emplear EDTA 17%, y el control negativo que reportó en todos los casos un valor de
6mm
Tabla No. 4
Valor medio para la variable de respuesta (diámetro de inhibición del crecimiento
de C. albicans ATCC 10231 alrededor del disco con la solución antifúngica de
prueba)
GRUPO HALO
Mm
MD Cleanser 17% MetaBiomed 23,3
EDTA 17% Eufar 15,4
Clorhexidina 2% (Control Positivo) 19,2
Control Negativo 6,0
Elaborado por: La Autora
El valor medio del halo de inhibición para cada grupo se presenta en la tabla 2,
siendo el valor mayor para el grupo 1: MD Cleanser 17 % MetaBiomed.
67
Gráfico No. 2.
Valor medio para la variable de respuesta (diámetro de inhibición del crecimiento
de C. albicans ATCC 10231 alrededor del disco con la solución antifúngica de
prueba)
Elaborado por: La Autora
En este diagrama se observa que el mayor valor medio fue de 23,3 mm y
correspondió al grupo que se empleó MD Cleanser 17 % MetaBiomed, seguido por el
valor de 19,2 mm del grupo de Clorhexidina al 2%, luego el de 15,4 mm obtenido al
emplear EDTA 17%, y el control negativo con una media de 6mm.
Se demostró que las solución 1 (EDTA MD Cleanser) tiene un efecto antifúngico
más efectivo que el de la Clorhexidina 2%; mientras que la Solución 2 (EDTA EUFAR
17%), a pesar de que tiene un efecto antifúngico, este es menor que el que se observó
con la clorhexidina.
0,0
5,0
10,0
15,0
20,0
25,0
MD Cleanser17 %
MetaBiomed
EDTA 17%Eufar
Clorhexidina2% (Lira S.A.)
Control
23,3
15,4
19,2
6,0
68
Tabla No. 5
Prueba de comparaciones de Tukey.
(I) GRUPO Diferencia de
medias (I-J)
Significancia
MD Cleanser 17%
MetaBiomed
EDTA 17% Eufar 7,875 ,000
Clorhexidina 2%
(Lira S.A.)
4,06250* ,000
Control 17,25000* ,000
EDTA 17% Eufar Clorhexidina 2%
(Lira S.A.)
-3,81250* ,000
Control ,000
Clorhexidina 2%
(Lira S.A.)
Control ,000
Elaborado por: La Autora
Luego de realizar la prueba ANOVA, se determinó una significancia p =0, con lo
que se concluyó que los valores medios de los cuatro grupos son diferentes, indicativo
de su diferente eficacia.
Al realizar el test de TUKEY, se determinó que entre todos los pares de
comparación se presentó diferencia significativa. Se concluye que el de mayor eficacia
es MD Cleanser 17 % MetaBiomed, el grupo en que se empleó Clorhexidina 2% (Lira
S.A.), no es tan eficaz como el primero y que EDTA 17 %Eufar ni siquiera es tan bueno
como la Clorhexidina 2% (Lira S.A.).
69
Adicionalmente y en función del diámetro se realizó la valoración cualitativa,
determinando que cuando el diámetro es mayor a 19mm es sumamente sensible, si es
mayor a 14 es sensible intermedio, si es mayor a 9 mm es sensible al límite y menor a
este valor su sensibilidad es nula (Túquerres, 2014), los resultados se aprecian en la
tabla 5 y gráfica 4.
Tabla No. 6
Resultados cualitativos de la sensibilidad por grupo Total
Nula Sensibilidad al límite
Sensibilidad intermedia
Sumamente sensible
GRUPO MD Cleanser 17% MetaBiomed
Recuento 0 0 0 16 16 % dentro de GRUPO
0,0% 0,0% 0,0% 100,0% 100,0%
EDTA17% Eufar
Recuento 0 1 15 0 16 % dentro de GRUPO
0,0% 6,3% 93,8% 0,0% 100,0%
Clorhexidina 2% (Lira S.A.)
Recuento 0 0 4 12 16 % dentro de GRUPO
0,0% 0,0% 25,0% 75,0% 100,0%
Control Recuento 16 0 0 0 16 % dentro de GRUPO
100,0% 0,0% 0,0% 0,0% 100,0%
Total Recuento 16 1 19 28 64 % dentro
de GRUPO
25,0% 1,6% 29,7% 43,8% 100,0%
Elaborado por: La Autora
70
Gráfico No. 3.
Resultados cualitativos de la sensibilidad por grupo
Elaborado por: La Autora
Al realizar el análisis cualitativo se determinó que el nivel de sensibilidad dependió
de la solución empleada, dado que la prueba chi estimó una significancia p = 0, siendo
de sensibilidad alta el 100% de las probetas del grupo control positivo, en tanto que el
75% de la muestras tratadas con Clorhexidina al 2% presentaron también el nivel de
sumamente sensible, y el grupo en el que se empleó EDTA 17% apenas en un 93,8%
quedó en el nivel de sensibilidad intermedia.
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
Nula Sensibilidad allímite
Sensibilidadintermedia
Sumamentesensible
100,0%
6,3%
93,8%
25,0%
75,0%
100,0%
MD Cleanser 17 % MetaBiomed EDTA 17 %Eufar
Clorhexidina 2% (Lira S.A.) Control
71
4.3 Discusión
En este estudio in vitro se analizó la efectividad antimicótica de soluciones quelantes
utilizadas en endodoncia. Se demostró que la solución MD Cleanser MetaBiomed Co.
tiene un efecto antifúngico más efectivo que la Clorhexidina 2% y EDTA 17%. Con un
valor medio de halos de inhibición de: 23,3 mm. correspondiente al grupo de MD
Cleanser 17 % MetaBiomed Co., 19,2 mm. el grupo de Clorhexidina 2%, y 15,4 mm.
obtenidos al emplear EDTA 17%.
Investigaciones acerca del comportamiento antimicótico son escasas, sin embargo
Weine F, 1997, menciona que el EDTA tiene un pequeño efecto antibacterial sobre
ciertas especies como Streptococcus alfa-hemolíticos y Staphylococcus aureus y tiene
un alto efecto antimicótico. Además (Cohen, 2011) ha estipulado que el EDTA tiene la
capacidad de extraer proteínas de la superficie bacteriana al combinarse con los iones
metálicos de la cubierta celular, provocando así la muerte bacteriana. Kotula y
Bordacova en 1970, al igual que Patterson en 1963, comprobaron in vivo que el EDTA
10% reduce de modo notable la población bacteriana del conducto radicular en 30
minutos (Leonardo, 2005). Lo que se pudo constatar en esta investigación.
Adicional a esto (Sen et al., 2000) demostraron las propiedades antifúngicas de
varios irrigantes de desinfección en endodoncia como: NaOCl 5% y 2,5%; EDTA 17%;
Clorhexidina 0,2%; Cetrexidin (CHX 0,2% y cetrimida 0,2%); Savrolin (CHX 1,5% y
cetrimida 15 %); Heksoral (1% hexetidina); Zefiran (cloruro de benzalconio 1%);
Biokadin (povidona yodada 10%); y dos fármacos antimicóticos como: Mikostatin
(nistatina 0,5 mg/ml); Ketoral (ketoconazol 0,5 mg/ml). La susceptibilidad de C.
albicans se determinó con pruebas de difusión en agar y discos de papel filtro de 6 mm.
Las zonas de inhibición fueron registradas y los resultados fueron analizados
estadísticamente mediante 2 vías de la varianza. Ellos encontraron que el EDTA 17%
mostró la actividad antifúngica más alta, mientras que la povidona yodada 10% tenía la
capacidad más débil. La clorhexidina en concentraciones de 0,2% mostró una acción
inferior en comparación con soluciones de NaOCl 2,5% y EDTA 17%. Llegaron a la
conclusión que el EDTA 17 % posee gran actividad antifúngica, lo que también se
muestra en este estudio pues las soluciones quelantes a base de EDTA 17% también
poseen acción antimocótica, tomando en cuenta que se realizó el mismo procedimiento
de análisis in vitro con prueba de difusión en agar.
72
A su vez (Ates, Akdeniz, & Sen, 2005) evaluaron los efectos antifúngicos de
agentes quelantes: Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), ácido etilenglicol
tetraacético (EGTA), fluoruro de sodio (NaF), tetrafluoruro de titanio (TiF4), que
compararon con agentes antifúngicos convencionales: Nistatina, y Ketoconazol sobre
Candida albicans. Todas las muestras indicaron patrones de susceptibilidad a C.
albicans similares; EDTA tuvo la mayor actividad antifúngica y fungicida, seguido por
TiF4, EGTA y NaF fueron los agentes más débiles contra C. albicans entre todas las
soluciones de ensayo. Se determinó que el EDTA 17% puede ser recomendado como
una solución de irrigación alternativa, especialmente en las infecciones radiculares
persistentes donde existe C. albicans. Dato que coincide con el presente trabajo en el
que EDTA 17% si posee actividad antimicótica, pese a que MD Cleanser, quelante a
base de EDTA 17%, alcanzó mejores resultados antimicóticos.
De la misma manera (Guillen, 2008) en su estudio de diferentes irrigantes usados en
la terapia endodóncica, demostró la capacidad antimicótica de Clorhexidina 2% y
EDTA 17% al primer minuto de exposición con la levadura, eliminándola
completamente, mientras que las soluciones de NaOCl tanto 2,5% y 5,25% no redujeron
completamente las colonias de Candida albicans en el mismo tiempo. Resultados que
coinciden en esta investigación a favor de EDTA 17% y Clorhexidina 2% ya que se
realizó con similar metodología.
Es necesario mencionar que la prueba de difusión en agar es generalmente un
método aceptado para probar actividades antimicrobianas de los desinfectantes de
endodoncia y soluciones de irrigación. Sin embargo, existen algunos factores que
condicionan el medio tales como el pH del sustrato, período de incubación, toxicidad,
sensibilidad, y la capacidad de difusión del fármaco, etc. pueden tener un impacto en la
actividad antimicrobiana de los materiales de prueba en las placas. Además, la
interacción de los desinfectantes con algunos de los componentes del medio como
saliva, o el sinergismo bacteriano también pueden influir en los resultados, ya que en
estudios In vivo el microorganismo a estudiarse puede ser menos susceptible que en
condiciones ambientales. (Sen et al., 2000)
Sin embargo (J F Siqueira, Batista, Fraga, & de Uzeda, 1998) determinaron que la
inhibición del crecimiento microbiano de las soluciones podrían clasificarse de la más
fuerte a la más débil de la siguiente manera: NaOCl 4%; NaOCl 2,5%;
73
Clorhexidina 2%; Clorhexidina 0,2%, EDTA 17%; ácido cítrico; y NaOCl 0,5%.
Estableciendo que no hay un suficiente efecto antimicrobiano del EDTA; resultado
opuesto a lo obtenido en este trabajo, ya que estos muestran la mayor inhibición
micótica con las sustancias a base de EDTA 17%, como MD Cleanser MetaBiomed Co.
compuesta también por Amoniaco.
De acuerdo a (Ruff et al., 2006) en donde la intención de su estudio fue comparar la
eficacia antifúngica de NaOCl 6%, CHX 2%, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)
17% y Biopure MTAD como irrigante sobre Candida albicans in vitro. Cuarenta y ocho
dientes uniradiculares fueron inoculados con Candida albicans (ATCC 60193) y se
incubaron durante 72 horas. Se dividió en cuatro grupos que fueron lavados con cada
sustancia respectivamente, las muestras de los dientes experimentales se sembraron en
Sabouraud 4%, finalmente como medida de actividad antifúngica se contaron las
unidades formadoras de colonias (UFC). Y se mostró que NaOCl 6%, CHX 2% fueron
igualmente eficaces y estadísticamente superiores a Biopure MTAD y a EDTA 17%, lo
que no se relaciona con la investigación realizada, posiblemente esto se debe a la
diferencia en la metodología, ya que en el presente estudio se utilizó inóculos de una
cepa pura de C. albicans ATCC 10231 en Agar MullerHinton sobre los cuales la
actividad antimicótica se determinó mediante halos de inhibición con discos de papel
filtro embebidos de cada sustancia quelante, en el que MD Cleanser Meta Biomed Co.,
sustancia a base de EDTA 17%, obtuvo mejores resultados que la CHX 2%.
De igual manera (Chandra, Miglani, Srinivasan, & Indira, 2010) analizaron in vitro
la eficacia de NaOCl 5,25%; CHX 2% y EDTA 17%, como un irrigante final con y sin
la inclusión de un agente antifúngico (clotrimazol 1%) sobre Candida albicans. Sesenta
y cinco piezas uniradiculares fueron inoculadas con una suspensión de C. albicans. Las
muestras experimentales fueron divididas en seis grupos: NaOCl 5,25%, CHX 2%,
EDTA 17%, NaOCl 5,25%+clotrimazol 1%, CHX 2%+clotrimazol 1% y EDTA
17%+clotrimazol 1%. Los resultados mostraron que NaOCl 5,25% y CHX 2%
presentó mayor eficacia antifúngica en comparación con EDTA 17%. Sin importar la
inclusión de clotrimazol 1% determinaron que la actividad antifúngica de EDTA 17%
fue significativamente menor que NaOCl 5,25% y CHX 2%. Estos efectos discrepan
con este estudio, pues se demostró que tanto la CHX 2% y EDTA 17% poseen actividad
antifúngica semejante, es decir sin una cuantiosa diferencia estadística. Por tanto los
mejores resultados presentó MD Cleanser Meta Biomed Co., sustancia a base de EDTA
74
17% con Amoniaco 13%. Esta diferencia con el presente estudio se puede atribuir a la
diferencia metodológica, al igual el estudio señalado anteriormente.
Por lo demás (González Pérez et al., 2009) realizaron una investigación acerca de la
capacidad quelante de tres acondicionadores dentinarios, en el que utilizaron sesenta y
cinco dientes extraídos. Se prepararon y dividieron en tres grupos experimentales
aleatoriamente de 20 conductos cada uno y el control positivo de 5 conductos que no
recibió acondicionador sólo NaOCl 5,25% determinado como grupo 1. A los otros
grupos se les irrigó con acondicionador a base de EDTA al 17%: el grupo 2 recibió
irrigación final con (A) REDTA que contiene EDTA al 17%. El grupo 3 recibió
irrigación final con (B) MD Cleanser contiene EDTA al 17% y Amoníaco. El Grupo 4
recibió irrigación final con (C) SmearClear, que contiene EDTA al 17% y un
surfactante. Todos los grupos se irrigaron con 3 mL de cada solución acondicionadora
correspondiente por 1 minuto, y como irrigación final NaOCl 5,25%. Se pudo constatar
a través de microscopía electrónica de barrido que el acondicionador (B) MD Cleanser
MetaBiomed Co. logró eliminar el barrillo dentinario en su totalidad y en las muestras
que se utilizaron los quelantes (A) y (C) los resultados revelaron una eliminación
incompleta del barrillo. Se demuestra así que MD Cleanser MetaBiomed Co. posee un
gran poder de remoción de barrillo dentinario, que se complementa con la capacidad
antimicótica que se pudo demostrar en este estudio in vitro, al superar tanto a la
Clorhexidina 2% y al EDTA 17% .
Se consideró a la Clorhexidina 2% como control positivo debido a que su actividad
antimicrobiana comprende un amplio espectro incluyendo a las especies más agresivas
en procesos infecciosos a nivel pulpar como el Enterococcus feacalis y Candida
albicans. Contra estos microorganismos la concentración debe ser preferentemente al
2% (Balandrano, 2007). Sin mencionar que posee una cualidad importante como es la
sustantividad, su acción prolongada y gradual en niveles terapéuticos. (Leonardo, 2005)
Adicional a esto, Delany (1982) indicó que los conductos tratados con clorhexidina son
menos susceptibles a la reinfección. (De Lima Machado, 2009). Es así que en el
presente estudio se logró confirmar que posee actividad antimicótica, siendo mayor que
EDTA 17%.
Además (Lasala, 1992) establece que el agua destilada es considerada una solución
químicamente inactiva, es decir que no causan ningún efecto microbiano inhibitorio, por
75
esta razón se utilizó en este estudio como control negativo, actuando como se supuso,
sin afectar de ninguna manera al inóculo de Candida albicans.
Corroborando con las investigaciones antes descritas sobre de la capacidad
antimicótica del EDTA, en este estudio se analizó la actividad antimicótica de MD
Cleanser MetaBiomed Co., que es una solución a base de EDTA 17 %, cabe mencionar
que este producto es nuevo en el mercado y los resultados obtenidos fueron mayores
que el EDTA 17%, superando de manera extraordinaria al control positivo que fue
Clorhexidina 2%. Probablemente porque en su composición existe 13,4% de Amoníaco.
Pues se sabe que el amoníaco es un compuesto formado por tres átomos de
Hidrógeno y uno de Nitrógeno, es un gas incoloro, soluble en agua. Es utilizado en
varios campos como en la fabricación de productos farmacéuticos, en la industria, en la
desinfección si su concentración es menor a 15% y en la agricultura se usa para
controlar el crecimiento de hongos en plantas cítricas durante su almacenamiento.
(Perdomo y cols. 2010).
En este estudio se demostró que en la composición de MD Cleanser 17 %
MetaBiomed Co. está 13,4% Amoniaco lo que aumenta su actividad antimicótica, a
diferencia de las demás sustancias analizadas, este quelante podría considerarse una
buena opción a emplearse en los protocolos endodóncicos por su gran poder inhibitorio
de C. albicans.
76
CAPÍTULO V
5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
5.1 CONCLUSIONES
- Se comprobó mediante halos de inhibición que MD Cleanser (Metabiomed
Co.) obtuvo un mejor desempeño antimicótico que el EDTA 17% (Ácido
etilendiaminotetraacético); de tal manera que supero al control positivo
Clorhexidina al 2%.
- Se demostró que EDTA 17% (Ácido etilendiaminotetraacético) posee
efectividad antimicótica frente a colonias de Candida albicans.
- Se determinó un alto potencial antimicótico de de MD Cleanser
(Metabiomed Co) sobre Candida albicans
- Se concluyó que las sustancias quelantes, como las que se utilizó en esta
investigación tienen una importante capacidad antimicótica incluso mejor
que la Clorhexidina al 2%.
77
5.2 RECOMENDACIONES
- Se recomienda el uso de MD Clenser MetaBiomed como agente quelante
en los protocolos de irrigación de endodoncia, pues es a base de EDTA
17% y posee un excelente efecto antimicótico lo que contribuye a la
desinfección de los canales radiculares.
- En futuros estudios calcular el tiempo suficiente en el que cada sustancia
llega a inhibir cepas de Candida albicans en su totalidad. Además
probar la capacidad antibacteriana con diferentes especies presentes en la
infección de conductos radiculares.
- Es aconsejable que en posteriores investigaciones se analice la eficacia
quelante y el potencial de eliminación de barillo dentinario en
tratamientos endodóncicos con MD Cleanser MetaBiomed.
78
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ANEXOS
Anexo No. 1
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Anexo No. 2
