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UNIVERSIDAD DE CHILE
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS Y TECNOLOGÍA FARMACEÚTICAS
CENTRO DE INVESTIGACIONES FARMACOLOGICAS Y TOXICOLOGICAS (IFT)
ESTUDIO DE LA BIODISPONIBILIDAD RELATIVA DE CLOPIDOGREL
(EXPANSIA®), FORMULACION ORAL DE LABORATORIO STEIN S.A. VERSUS LA
FORMULACION DE REFERENCIA DEL MERCADO, PLAVIX®.
STUDY OF THE RELATIVE BIOAVAILABILITY OF CLOPIDOGREL (EXPANSIA™)
ORAL FORMULATION OF STEIN LABORATORY S.A. VERSUS MARKET
REFERENCE, PLAVIX ™.
PATROCINANTE y CO-DIRECTOR
Prof. Hernán Chávez
DIRECTOR DE MEMORIA
Prof. Iván Saavedra S.
Facultad Ciencias Químicas y
Farmacéuticas. Universidad de Chile
Laboratorio de Farmacocinética y
Biodisponibilidad. Centro de
Investigaciones Farmacológicas y
Toxicológicas (IFT). Facultad de
Medicina. Universidad de Chile
Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico
Pablo Antonio Toledo Parada
SANTIAGO DE CHILE
2011
2
Al Mundo.
3
Agradecimientos
La presente Tesis es un esfuerzo en el cual, directa o indirectamente, participaron
varias personas leyendo, opinando, corrigiendo, teniéndome paciencia, dando ánimo,
acompañando en los momentos difíciles y en los momentos de felicidad.
Agradezco a la Dr. Iván Saavedra por haber confiado en mi persona, por la paciencia y
por la dirección de este trabajo. Al Dr. Luis Quiñones por los consejos, el apoyo y el
ánimo que me brindó.
Gracias también a mis queridos compañeros, que me apoyaron y me permitieron entrar
en su vida durante los largos años de convivencia dentro y fuera del salón de clase.
A mi madre por su apoyo y cariño incondicional
Gracias a todos.
4
INDICE GENERAL
Página
DEDICATORIA ...................................................................................................2
AGRADECIMIENTOS ........................................................................................3
INDICE GENERAL..............................................................................................4
INDICE DE TABLAS y FIGURAS.......................................................................6
RESUMEN...........................................................................................................7
SUMMARY...........................................................................................................8
I. INTRODUCCIÓN.............................................................................................10
Hipótesis.............................................................................................................15
Objetivos generales............................................................................................15
Objetivos especificos..........................................................................................15
II. VOLUNTARIOS, MATERIALES Y MÉTODOS...............................................16
Selección de Voluntarios.…………………………………………………………….16
Medicamentos en estudio, adquisición y manejo de los productos a ensayar…19
Metodología.…………………………………………………………………………...22
III. RESULTADOS.…………………………………………………………………….26
Adaptación de la metodología bioanalítica………………………………………….26
Validación de la metodología bioanalítica…………………………………………..27
Características antropométricas de los voluntarios. …….....................................35
Análisis físico-químico del producto test y el producto referencia………………..37
Exámenes clínicos y de laboratorio clínico………………………………………….37
Consentimiento informado.……………………………………………………………37
5
Dieta administrada a los voluntarios.………………………………………………...38
Análisis cromatográfico de las muestras plasmáticas.………………………….....38
Análisis Farmacocinético.……………………………………………………………..43
Análisis estadístico de las muestras.………………………………………………...46
Evaluación de Bioequivalencia.………………………………………………………47
Encuesta de reacciones Adversas.…………………………………………………..49
IV. DISCUSIÓN.…………………………………………………………………...…...49
V. CONCLUSION……………………………………………………………...…….…51
VI. REFERENCIAS...............................................................................................53
ANEXOS...............................................................................................................56
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura Nº 1 Fórmula química de Clopidogrel Pág. 10
Figura Nº 2 Curva de Calibración de acido carboxílico de clopidogrel Pág. 28
Figura Nº 3 Cromatogramas de separación y cuantificación de acido
carboxílico de clopidogrel y metilprimidona
Pág. 31
Figura Nº 4 Curvas promedio de concentración plasmática de ACC Pág. 42
6
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1 Validación Analítica: Determinación de linealidad. Pág. 28
Tabla 2 Validación Analítica: Determinación de precisión intradía. Pág. 29
Tabla 3 Validación Analítica: Determinación de precisión intradía. Pág. 29
Tabla 4 Validación Analítica: Determinación de precisión interdía. Pág. 30
Tabla 5 Validación Analítica: Determinación del porcentaje de
recuperación.
Pág. 32
Tabla 6 Estabilidad por ciclos de congelamiento y descongelamiento. Pág. 33
Tabla 7 Validación Analítica: Estabilidad de corta duración. Pág. 34
Tabla 8 Validación Analítica: Estabilidad de larga duración. Pág. 34
Tabla 9 Validación Analítica: Estabilidad de corta duración. Pág. 35
Tabla 10 Características Antropométricas de los voluntarios. Pág. 36
Tabla 11 Concentraciones plasmáticas (ηg/mL) vs el tiempo (h) en 24
voluntarios sanos para A y B
Pág. 39
y 40
Tabla 12 Concentraciones promedio de ACC (ηg/mL) Pág. 41
Tabla 13 Parámetros farmacocinéticas ABC 0→12, ABC 0→∞, Cmáx. Pág. 44
Tabla 14 Otros parámetros farmacocinéticos Pág. 45
Tabla 15 Análisis de varianza para los parámetros farmacocinéticos. Pág. 46
Tabla 16 Test de Bioequivalencia, referencia (A) vs prueba (B) Pág. 47
Tabla 17 Prueba de dos hipótesis de Schuirmann para los parámetros
farmacocinéticos.
Pág. 48
7
RESUMEN
Se determinó la biodisponibilidad relativa para establecer la bioequivalencia del
producto similar EXPANSIA® fabricado por laboratorio STEIN S.A, producto de prueba,
con PLAVIX® de Laboratorios SANOFI-AVENTIS S.A, producto de referencia; ambas
en comprimidos de 75 mg.
Para estos efectos se administró un solo comprimido de clopidogrel de cada una de
las formulaciones a 24 voluntarios(as) sanos(as), después de un ayuno de 12 horas, a
través de un diseño abierto, en dos periodos, randomizado, cruzado y de doble ciego,
dejando 8 días entre cada administración y, luego, se determinaron las concentraciones
plasmáticas del metabolito de la droga (ácido carboxílico de clopidogrel) por un método
de HPLC con detector UV-Vis.Para este efecto, la técnica fue validada en especificidad,
exactitud, precisión y linealidad y estabilidad.
Para evaluar la biodisponibilidad se calcularon a partir de las curvas de
concentraciones plasmáticas versus tiempo los siguientes parámetros farmacocinéticos:
área bajo la curva (ABC), concentración máxima (Cmáx), y vida media (t1/2).
Los resultados de los parámetros farmacocinéticos encontrados fueron: ABC0→∞
6.019,94 ± 1786,40 y 5.869,52 ± 1667,89 gxh/mL; ABC0→12 5.026,13 ± 1.207,37 y
4.850,25 ± 1.102,34 gxh/mL; Cmáx 2.315,34 ± 548,4 y 2.372,47 ± 493,15 g/mL, para
A y B, respectivamente.
De acuerdo a los resultados obtenidos se concluye que las formulaciones
farmacéuticas diseñadas para ambos productos no muestran diferencias
estadísticamente significativas en los parámetros farmacocinéticos obtenidos y, estos
8
se ubican en el rango de similitud de 80 a 125%, fijado por la FDA. Según los criterios
establecidos para este tipo de estudios y a la luz de los resultados, se concluye que
EXPANSIA®, comprimidos de 75 mg de Clopidogrel de Laboratorio Stein, B (test), es
un genérico bioequivalente e intercambiable con PLAVIX®, comprimidos de 75 mg de
Clopidogrel de Sanofi-Aventis, A (referencia).
9
SUMMARY
This study determined the relative bioavailability to demonstrate the
bioequivalence between the similar product EXPANSIA® of Laboratories STEIN Inc., test
product, and PLAVIX® of Laboratories SANOFI-AVENTIS Inc., reference product. A
double blind, crossover and randomizaded study which include 24 healthy volunteers,
which received one dose of 75 mg Clopidogrel was developed fot this purpose.
The main inactive clopidogrel metabolite plasmatic levels, was determinated by
HPLC technique. This technique was validated respect to its specificity, accuracy,
precision, linearity and stability. The pharmacokinetics parameters compared were: area
under the curve AUC, (plasmatic concentration vs time) and maximum concentrations
(Cmax).
The results of the pharmacokinetics parameters of samples A and B were: AUC0→∞
6.019,94 ± 1786,40 y 5.869,52 ± 1667,89 gxh/mL; AUC0→12 5.026,13 ± 1.207,37 y
4.850,25 ± 1.102,34 gxh/mL; Cmáx 2.315,34 ± 548,4 y 2.372,47 ± 493,15 g/mL,
respectively. Significant differences between the kinetic parameters values of both
products, p>0.05 were not observed. The confidence intervals for the rate B/A were:
AUC0→∞ 98.92 to 100.53%; AUC0→12 98.92 100.27% y Cmáx 98.98 101.79%.
The range recommended by FDA is 80 % to 125 % with a bioequivalence
probability of 100 %. All the kinetic parameters for the bioequivalence (Cmáx, AUC0→12,
AUC0→∞) were included in this range; therefore, EXPANSIA® 75 mg, (B test), is a generic
product bioequivalent and interchangeable with PLAVIX®, (A reference).
10
I. INTRODUCCIÓN
Clopidogrel (Figura 1) es un inhibidor de la agregación de plaquetas, las cuales tienen
una participación establecida en la fisiopatología de la enfermedad aterosclerótica y los
eventos trombóticos. Este fármaco inhibe selectivamente la unión del difosfato de
adenosina (ADP) al receptor plaquetario y la subsecuente activación del complejo
GPIIb-IIIa, con lo cual se inhibe la agregación plaquetaria1.
Figura 1
Estructura Química de Clopidogrel
Para producir la inhibición de la agregación plaquetaria es necesaria la
biotransformación del clopidogrel; el metabolito responsable de la actividad
farmacológica pertenece a una familia de ocho estereoisómeros con el siguiente
nombre químico: 2-(1-[1-(2-clorofenil)-2-metoxi-2-oxoetil]-4-sulfanil-3-piperidiniliden)
ácido acético5. La inhibición es dosis-dependiente y puede observarse a las 2 horas
después de la administración oral. En dosis de 75 mg/día produce inhibición sustancial
de la agregación plaquetaria inducida por ADP desde el primer día; la inhibición se
incrementa progresivamente y alcanza un nivel de estabilidad entre los días 3 y 7. En
el nivel estable, el porcentaje promedio de inhibición con la dosis de 75 mg/día, oscila
11
entre 40 y 60%. La agregación plaquetaria y el tiempo de sangrado retornan
gradualmente a los valores basales, de manera general, dentro de los 5 días
posteriores a la suspensión del tratamiento.
Clopidogrel se indica preferentemente en el Infarto del miocardio (IM) reciente,
evento vascular cerebral isquémico (EVCI) reciente, enfermedad arterial periférica
establecida. Está indicado en la prevención secundaria de eventos vasculares
isquémicos de origen aterotrombótico (IM, EVCI, enfermedad arterial periférica y
muerte secundaria a alguno de los eventos anteriores). También está indicado en la
reducción de eventos aterotrombóticos, en combinación con ácido acetilsalicílico
(AAS), en pacientes con síndrome coronario agudo (angina inestable o IM sin
elevación del segmento ST), con o sin revascularización cardíaca (cirugía, angioplastia,
con o sin aplicación de endoprótesis coronaria (STENT). Además está indicado como
terapia adyuvante en la prevención de trombosis subagudas posteriores a la colocación
de STENT, en combinación con ácido acetilsalicílico1.
La literatura consultada señala que clopidogrel se absorbe rápidamente
después de la administración oral; con dosis repetidas de 75 mg se alcanza la
concentración plasmática máxima después de una hora. El fármaco se metaboliza
principalmente a través de dos rutas metabólicas: una mediada por esterasas y que
conducen a la hidrólisis en su derivado carboxílico (85% de los metabolitos circulantes)
y otro mediado por los múltiples citocromos P4504, la sustancia de origen es inactiva y
alcanza una concentracion plasmática máxima promedio de 1000 ρg/mL luego de una
dosis de 75 mg. El clopidogrel y su principal metabolito se unen reversiblemente in vitro
a las proteínas plasmáticas (98 y 94%, respectivamente). La administración con
alimentos no modifica significativamente la biodisponibilidad. La cinética de los
12
principales metabolitos es lineal en el rango de dosis comprendido entre 50 y 150 mg
de clopidogrel. La absorción es por lo menos de 50% .La vida media del principal
metabolito circulante es de 8 horas después de administraciones única y repetidas. Se
excreta aproximadamente en un 50% por orina y 46% por heces en un intervalo de 120
horas después de la administración del fármaco. En pacientes geriátricos las
concentraciones plasmáticas de los principales metabolitos son significativamente más
elevadas en mayores de 75 años comparativamente con voluntarios jóvenes sanos; sin
embargo, esos niveles plasmáticos más elevados no han sido asociados con
diferencias en la agregación plaquetaria y el tiempo de sangrado. No es necesario
ajustar la dosis en pacientes de edad avanzada. En pacientes con insuficiencia renal
después de dosis repetidas de 75 mg/día los niveles séricos del principal metabolito se
observan más bajos en sujetos con insuficiencia renal grave (con depuración de
creatinina de 5 a 15 ml/min) comparados con sujetos sanos y con pacientes con
insuficiencia renal moderada (con depuración de creatinina de 30 a 60 mL/min). No
obstante la inhibición de la agregación plaquetaria inducida por ADP también es menor
(25%) que la observada en sujetos sanos, la prolongación del sangrado es similar a
aquella observada en sujetos sanos que recibieron 75 mg/día de Clopidogrel. No es
necesario ajustar la dosis en pacientes con insuficiencia renal 1,5.
Clopidogrel está contraindicado en pacientes con hipersensibilidad y en
aquellos pacientes con sangrado patológico activo, como por ejemplo úlcera péptica y
hemorragia intracraneal. Al igual que otros agentes antiagregantes plaquetarios, el
clopidogrel debe ser utilizado con precaución en pacientes con riesgo de sangrado de
origen traumático, quirúrgico u otras condiciones patológicas y debe ser usado con
precaución en pacientes con lesiones que tengan propensión al sangrado
13
(particularmente gastrointestinales o intraoculares). Se debe advertir al paciente que,
mientras se encuentre en tratamiento con clopidogrel, cualquier sangrado puede tener
mayor duración de la habitual. Han sido reportados raramente casos de púrpura
trombocitopénica trombótica (PTT) posterior al uso de clopidogrel, en algunos casos
después de una corta exposición. Se caracterizan por anemia hemolítica
microangiopática y trombocitopenia asociada con alteraciones neurológicas, fiebre o
disfunción renal. PTT es una condición que requiere tratamiento inmediato1,2
.
Respecto al efecto sobre el embarazo, en animales de laboratorio no se han
evidenciado efectos en fertilidad o daño fetal con dosis de clopidogrel de hasta 500
mg/kg/día (ratas) y hasta de 300 mg/kg/día (conejos), aun cuando en humanos no
existen estudios adecuados y bien controlados durante el embarazo. Clopidogrel y/o
sus metabolitos son excretados en la leche materna, al menos en animales de
experimentación. El fármaco no es genotóxico ni cancerígeno1.
Su seguridad ha sido evaluada en más de 11,300 pacientes, incluyendo a 7,000
pacientes tratados durante 1 año o más. En un amplio estudio clínico controlado
(CAPRIE) el clopidogrel 75 mg/día fue bien tolerado comparado con ácido
acetilsalicílico 325 mg/día. El riesgo de sangrado gastrointestinal se encuentra
potencialmente incrementado por el uso conjunto de Clopidogrel y AINES, por lo que
esta combinación farmacológica deberá ser administrada con precaución. Información
procedente de estudios realizados en microsomas de hepatocitos humanos indican que
el clopidogrel podría inhibir la actividad de una de las isoenzimas del citocromo P-450
(CYP 2C9). Esto podría llevar a niveles plasmáticos elevados de fármacos como
clopidogrel, tolbutamida, toracemida, tamoxifeno, fluvastatina y AINEs que son
metabolizados por la CYP 2C9.
14
Existen a los menos 3 razones que justifican la utilizacion de metabolitos, por
sobre la droga inalterada, en estudios de biodisponibilidad comparativa. Cuando el
fármaco inalterado no es el responsable de la actividad farmacológica, cuando la
cantidad de droga inalterada es indetectable por su baja concentracion, o bien cuando
los parametros farmacocinéticos de la droga inalterada presentan alta variabilidad
estadistica10
.
En atención a estas razones y considerando por sobre todo las bajas
concentraciones de clopidogrel en su forma inalterada, se utilizó el metabolito que
representa el 85 por ciento del total de metabolitos del clopidogrel.
De lo expuesto se deduce que clopidogrel es una droga cuyas formas
farmacéuticas sólidas provenientes de fuentes múltiples deben ser sometidas a
estudios de equivalencia terapéutica o de biodisponibilidad relativas a un estándar que
generalmente es el innovador del mercado farmacéutico mundial para asegurar que
tendrán la misma eficacia y seguridad y así poderse intercambiar sin causar
alteraciones en la concentración plasmática al estado de equilibrio atribuibles al
medicamento7,8,9
. La modalidad aceptada para demostrar la equivalencia terapéutica
son los estudios de Bioequivalencia y/o los estudios clínicos controlados. La
OPS/OMS, a través de “Multisource (generic) pharmaceutical products: Guidelines on
registration requirements to establish interchangeability”, WHO Tecnical Report Series,
Nº 863, 1996 (WHO-96), propone aspectos y criterios científico técnicos que deben ser
considerados en una norma de bioequivalencia9. Se entiende que cuando una
formulación es similar a otra, en cuanto a la velocidad con que entrega el principio
activo y la cantidad de droga que se absorbe a partir de ella, pueden considerarse
bioequivalentes e intercambiables.
15
HIPÓTESIS
Se postula que las formulaciones orales de Clopidogrel, el producto innovador
PLAVIX® y el producto similar EXPANSIA®, son bioequivalentes.
OBJETIVOS
Objetivo general. Determinar, en un diseño de doble ciego, cruzado y
randomizado la biodisponibilidad relativa de una formulación farmacéutica de
clopidogrel respecto del producto innovador.
Objetivos específicos
1. Validar una técnica HPLC para medir las concentraciones plasmáticas de ácido
carboxílico de clopidogrel, respecto a sensibilidad, especificidad, linealidad,
recuperación, límites de detección, cuantificación, exactitud, precisión,
reproducibilidad (intradías e interdías) y estabilidad.
2. Seleccionar 24 voluntarios sanos mediante exámenes clínicos y de laboratorio y
administrarles los productos en estudio.
3. Medir las concentraciones plasmáticas de clopidogrel en el plasma de los
voluntarios sanos y con sus resultados confeccionar curvas de concentraciones
plasmáticas versus tiempo.
4. Realizar el análisis farmacocinético de los resultados obtenidos de la determinación
de las concentraciones plasmáticas en el tiempo, después de una dosis oral para
cada voluntario.
16
5. Realizar el análisis estadístico de la comparación de los resultados de los
parámetros farmacocinéticos de ambos productos similares.
II. VOLUNTARIOS, MATERIALES Y MÉTODOS.
A. Selección de Voluntarios. El número de sujetos que participa en este tipo de
estudio debe ser definido mediante un método adecuado que permita garantizar la
confiabilidad de los resultados; este número no debe ser menor a 12 individuos, pero
normalmente es de 18 a 24 personas.
En la primera semana del estudio un grupo de adultos, hombres y mujeres,
sanos(as), con edades que fluctuaron entre los 18 y 55 años, con apellidos
hispanoamericanos, fueron citados a las dependencias del Centro de Investigación, en
ayunas. El Coordinador de la etapa clínica los instruyó acerca del propósito del estudio,
y se analizaron los posibles riesgos y beneficios de participar, aquellos voluntarios que
estuvieron de acuerdo con cada uno de los puntos señalados y aceptaron participar en
el estudio certificaron con su firma el consentimiento informado, documento aprobado
por el Comité de Ética de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile. Luego,
los sujetos se entrevistaron con un médico cirujano quien les realizó un examen
médico completo y una interrogación sobre su historia médica. La entrevista con el
médico incluyó los siguientes puntos:
- Identificación: nombre, edad, sexo.
17
- Examen físico general: presión sanguínea, pulso, ritmo respiratorio, medición de
altura y peso en ropa interior. Aspecto de la piel, cabeza, cuello, ojos, nariz,
oídos, boca, garganta, pecho, abdomen, espina dorsal y nódulos linfáticos.
- Anamnesis: enfermedades existentes y preexistentes, historia familiar de
patologías, historia quirúrgica y hábitos (tabaco, drogas, alcohol).
- Anamnesis farmacológica: medicación, RAM, alergia a medicamentos.
Posteriormente, a aquellas personas que cumplían con los criterios de selección
(inclusión y exclusión) se les extrajo una muestra de sangre y se les solicitó una
muestra de orina para análisis de Laboratorio Clínico. Los análisis que se realizaron
antes y después del estudio, comprendieron: hemograma y VHS, orina completa, VIH,
screening de drogas de abuso, glicemia, uremia, proteinemia, fosfatasas alcalinas,
bilirubinemia, tiempo de protrombina, transaminasas oxálica y pirúvica y creatinemia.
En el caso de las mujeres se les solicitó además, un test de embarazo. Los exámenes
de VIH y test de embarazo se realizaron con el consentimiento informado de los
voluntarios.
Finalmente el facultativo seleccionó de todos ellos a 24 voluntarios (as)
completamente sanos (as) a los cuales instruyó acerca del propósito y desarrollo del
estudio.
18
A.1. Criterios de selección de voluntarios para el estudio:
A.1.1. Criterios de Inclusión:
Grupo de hombres y mujeres sanos de edades entre 18 y 55 años con apellidos
hispanoamericanos e índice de masa corporal (IMC) entre 19 y 30.
No fumadores, no consumidores de drogas de abuso ni de alcohol.
Sin alergias a medicamentos.
Sin terapias concomitantes y no haber estado en tratamiento farmacológico a lo
menos dos meses antes del estudio.
Sin presencia en la historia clínica de enfermedades que hayan afectado la
absorción, distribución y eliminación de drogas desde el organismo.
Dar negativo en el análisis de drogas, VIH y/o test de embarazo.
Con resultados de los exámenes de laboratorio en rangos normales y declarados
aptos para el estudio por el médico después del examen físico, el que incluye, en
este caso particular, un valor de INR (razón del índice normalizado de tiempo de
protrombina) entre 1 y 1,25.
A.1.2. Criterios de Exclusión:
Historia clínica de hipersensibilidad a cualquier medicamento y en particular a
Clopidogrel.
Presencia en la historia clínica de problemas gastrointestinales, de hígado,
riñón, pulmón, hematológicos, neurológicos, psiquiátricos, endocrinos,
inmunológicos o dermatológicos significativos. Pacientes con sangrado
patológico activo, como por ejemplo úlcera péptica y hemorragia intracraneal.
19
Presencia en la historia clínica de enfermedades que hayan afectado la
absorción, distribución y eliminación de drogas desde el organismo.
Mantención de una terapia o bien adicción al alcohol, tabaco, marihuana u otras
drogas de abuso.
Haber tenido cualquier enfermedad de importancia en los 28 días previos al
estudio.
Haber usado en los 28 días previos al estudio drogas que modifiquen el sistema
metabólico de drogas (todos los barbitúricos, corticoesteroides, fenilhidantoínas,
etcétera).
Haber usado cualquier medicamento en los 7 días antes del estudio, incluyendo
medicamentos de venta directa o sin receta médica.
Haber participado en otro estudio similar en los 90 días previos al estudio
actual.
Dar positivo el análisis de drogas o VIH.
Presencia de historia de desmayos o miedo a la extracción de sangre.
B. Materiales: Medicamentos en estudio, adquisición y manejo de los productos
a ensayar
B.1. Medicamentos en estudio. Los medicamentos fueron comprimidos recubiertos
que contenían 75 mg de Clopidogrel (bisulfato).
Medicamento Test: El producto farmacéutico EXPANSIA®, comprimidos de 75 mg,
envasados en blister; fue fabricado por Laboratorios STEIN S.A. de Costa Rica con el
número de serie 006H8 y fecha de vencimiento Agosto de 2010.
20
Medicamento Referencia: El producto farmacéutico considerado como referencia,
PLAVIX®, comprimidos de 75 mg, envasados en blister; fue fabricado por Laboratorios
Sanofi Wintrop Industrie ldt., con el número de serie 2299 y fecha de vencimiento
Febrero de 2011.
B.2. Adquisición, obtención y manejo de los productos a ensayar
B.2.1. Adquisición de los productos a ensayar. El producto farmacéutico
EXPANSIA, comprimidos de Clopidogrel 75 mg, fue proporcionado por Laboratorio
STEIN de Costa Rica y el producto considerado como patrón de comparación,
PLAVIX® fue adquirido en el mercado farmacéutico de Costa Rica. Ambos productos
son comprimidos con 75 mg. de Clopidogrel.
B.2.2. Preparación de los medicamentos en estudio. Se solicitó a un profesional
Químico Farmacéutico ajeno a Laboratorios Stein y al Centro de Investigaciones
Farmacológicas y Toxicológicas (IFT) que, en confidencia, confeccionara el ciego,
colocando 24 comprimidos de cada producto en frascos de vidrio de color ámbar
previamente rotulados como “Producto A” y “Producto B” y anotara su correlación junto
a los datos de número de lote y fechas de expiración en un informe que fue entregado
en un sobre sellado a Laboratorios Stein. Los investigadores no conocieron la identidad
de los productos hasta el momento en que se realizó el análisis de equivalencia, ya
que en este procedimiento se debe conocer si el producto A o el producto B
corresponde al medicamento test o medicamento referencia.
21
B.2.3. Administración de los productos farmacéuticos. Los productos
farmacéuticos se administraron a través de un diseño experimental randomizado,
cruzado y ciego. El profesional a cargo de la realización del ciego, realizó la
randomización de los voluntarios seleccionados, asignándole un número al azar de 1 a
24 a cada voluntario, además incluyó la secuencia para la administración de los
medicamentos, creando en cada período dos bloques equilibrados con la secuencia AB
o BA. De esta manera, en la secuencia AB, el voluntario recibió el fármaco A en el
primer período y el fármaco B en el segundo período, y en la secuencia BA, el
voluntario recibió el fármaco B en el primer período y el fármaco A en el segundo
período.
Diseño de tratamientos
Grupos Periodo 1 Periodo 2
I (12 Vols.) A B
II (12 Vols.) B A
Entre los dos periodos hubo 8 días de separación (más de 5 vidas medias del
fármaco). Los voluntarios se cruzaron cambiando el producto de tratamiento tal como
se indica en el cuadro de diseño de tratamientos.
En cada sesión los voluntarios estuvieron en ayunas (de 12 horas) antes de la
administración del medicamento y el médico en presencia del sponsor le administró por
vía oral una dosis del medicamentos en estudio con 250 mL de agua. Se les pidió
expresamente a los voluntarios que no consumieran agua una hora antes y dos horas
después de la administración del medicamento.
22
C. Metodología
C.1. Cuidado de los voluntarios. Durante el estudio los voluntarios estuvieron en
contacto con los médicos del Laboratorio y en los días de tratamiento en que los
voluntarios se recluyeron en el centro de investigación, fueron atendidos por todo el
equipo profesional del Centro. El médico observó e interrogó constantemente durante
el día de tratamiento y después de él, a los voluntarios, de modo de captar y tratar
oportunamente las reacciones adversas potenciales.
La alimentación de los voluntarios, a saber desayuno, almuerzo, meriendas y
cena fue diseñada por la profesional Nutricionista que asesora al Centro, sobre la base
de lo aconsejado por el médico y la información farmacocinética del producto
estudiado. Al respecto, adicionalmente los voluntarios consumieron jugo de frutas tres
veces al día. El equipo biomédico participante supervisó a los voluntarios impidiendo el
consumo de alimentos antes de 2 horas después de la administración del
medicamento.
En cada uno de los procedimientos empleados, se respetaron rigurosamente las
normas de investigación de fármacos en seres humanos. Así para realizar este estudio
se solicitó la autorización de la Comisión de Bioética para Investigación en Seres
Humanos” de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile. (Anexo 2).
C.2. Recolección de muestras. Dos Enfermeras Universitarias, una para cada grupo
de 12 voluntarios instalaron a primera hora a cada voluntario una bránula ante braquial
(Beckton & Dickinson, 18 G) provista de llave de tres pasos estéril, la que mantuvieron
en forma permeable con heparina sódica diluida como anticoagulante durante el
23
tratamiento. Por esa bránula recolectaron las muestras de sangre en tubos de ensayo
de vidrio los cuales contenían 100 µL de heparina sódica al 30% como anticoagulante,
en los siguientes intervalos de tiempo en horas; a tiempo 0 (antes de administrar la
droga), y a: las 0,25; 0,5, 1; 1,5; 2; 2,5; 3; 4; 6; 8 y 12 hrs. El plasma se obtuvo
mediante agitación suave del tubo y centrifugación, se dividió en dos tubos eppendorf
(muestra y contra-muestra) y se almacenaron en freezer a – 30 ºC hasta el momento
de su análisis mediante Cromatografía.
El coordinador logístico llevó un registro computacional de toda modificación
de tiempos respecto al protocolo original durante el proceso de toma de muestras y
emitió un informe de ello, que junto al informe del jefe de muestras respecto de las
eventuales situaciones sucedidas durante el proceso (extracción de bajos volúmenes,
pérdida de la vía o de la muestra, etc.) se transformaron en documentos de respaldo
para evaluar desviaciones analíticas.
C.3. Técnica analítica: Método para la determinación del principio activo en
sangre. Se utilizó el método de Bahrami et al. (2008)12, de Cromatografía Líquida de
Alta Resolución, HPLC, con modificaciones, el cual se basa en la determinación del
metabolito inactivo de Clopidogrel (ácido carboxílico de Clopidogrel).
El método fue validado en el laboratorio como parte de este protocolo y definido
respecto a selectividad, sensibilidad, exactitud, precisión, recuperación, linealidad,
reproducibilidad (intradías e interdías)y estabilidad, siguiendo la guía FDA.
Para este efecto, a un 1 mL de muestra se agregaron 100 µL del estándar
interno (Metilprimidona 0,015 mg/mL), se agregaron 200 µL de ácido clorhídrico, los
tubos se agitaron por 10 segundos en vortex, se agregó 5 mL de solvente de
24
extracción (metilterbutiléter), luego se agitó durante 5 minutos en agitador mecánico y
se centrifugaron por 5 minutos a 3.500 rpm. Se tomó una alícuota de 3 mL de fase
orgánica y se transfirió a un tubo de vidrio de fondo cónico, se evaporó el solvente en
corriente de N2 a 40 °C, se reconstituyó el analito en 200 µLde fase móvil y se
trasvasijó a un vial de vidrio.
El sistema cromatográfico utilizado consistió en un equipo HPLC marca
Shimadzu LC10A - 10AVP, compuesto por un detector UV-VIS SPD-10AV VP, una
bomba isocrática LC10 AT VP, un módulo de control SCL-10AVP, un desgasificador
DGU-14A, un sistema de gradiente cuaternaria FCV-10AL VP, un auto inyector SIL-
10AD VP, un horno para columna CTO-10ASVP y un sistema organizador
computacional Class-VP. Las condiciones cromatográficas utilizadas fueron las
siguientes:
- Columna: Shimpack ODS 250 mm x 4,6 mm y tamaño de partículas de 5 μm
- Fase Móvil: mezcla de buffer fosfato 0,05M (pH=4,5) (75%); acetonitrilo (25%).
- Detección: 220 nm
- Flujo: 1,5 mL/min
- Volumen de inyección: 50 µL.
C.4. Análisis Farmacocinético. Los parámetros farmacocinéticos correspondientes a
concentración plasmática máxima (Cmáx.) y tiempo máximo (tmáx.) se obtuvieron por
inspección directa de las curvas de concentración plasmática en el tiempo.
Otros parámetros farmacocinéticos tales como la constante de constante de velocidad
de eliminación (Ke), área bajo la curva de concentraciones sanguíneas en el tiempo
ABC0 – t y ABC0 - tiempo de vida media (t½), fueron determinados a partir de los datos
25
obtenidos de las curvas de niveles sanguíneos de la droga en el tiempo pos
administración.
Para ello se utilizó el procedimiento Pkexamine del paquete estadístico STATA
10.0, el cual es independiente de los modelos compartimentales.
C.5. Análisis estadístico. Se utilizó el test de análisis de varianza (ANOVA) para
establecer las posibles diferencias entre los parámetros determinados para cada
producto farmacéutico en cada voluntario, estimándose una diferencia
estadísticamente significativa para valores de p ≤ 0,05. Se utilizarán las
recomendaciones de las Guías del FDA, tanto para el diseño del estudio como para el
análisis farmacocinético y estadístico. Como fuentes de variación se consideraron el
producto administrado, el período de administración y la secuencia. Como fuentes de
variación se consideraron el producto administrado, el período de administración, la
secuencia y el efecto residual. Además, se calcularon los intervalos de confianza (IC)
de 90% para la diferencia de las medias obtenidas con los productos A y B.
El análisis específico de bioequivalencia se realizó utilizando el procedimiento
“pkequiv” de STATA versión 10. Este procedimiento entrega el intervalo de confianza
(IC) para la diferencia de promedios, la razón de promedios, y los límites de
equivalencia usados por la FDA, cuyas regulaciones establecen que el intervalo de
confianza para la diferencia debe estar dentro de los limites contenidos dentro del
rango 0,80 a 1,25 para la razón (± 0,2231 en logaritmo natural). Se basa en la
bioequivalencia promedio con la metodología “two one-side test” (TOST).
26
C.6. Criterios de Bioequivalencia. Para establecer la bioequivalencia promedio de
fármacos que no poseen características farmacocinéticas y clínicas complejas, se
tomaron los valores del intervalo de confianza de 90%, estos valores deben estar
dentro de los límites de bioequivalencia de 80 % a 125 %, para la razón de las medias
del ABC y Cmáx del producto test (T) respecto del producto de referencia (R). Para
establecer la BE, los resultados del estudio deben ser aceptables para los parámetros
farmacocinéticos ABC y Cmáx.
III. RESULTADOS
A. Adaptación de la metodología analítica. Se realizó una adaptación de la técnica
de análisis cromatográfico de acuerdo a las condiciones presentes en el laboratorio. En
primer lugar se buscó un estándar interno que cumpliera con las características de
similitud estructural, rango de absorción y tiempo de retención semejante al de ACC,
en orden de reemplazar el estándar interno descrito originalmente por el método
(fenitoína). Una vez elegido el estándar interno (metilprimidona) se procedió a variar la
fase móvil de manera de obtener una mejor resolución de los analitos; la fase móvil
utilizada por Bahrami y colaboradores 2008, era una mezcla de NaH2PO4 y Na2HPO4
0,05 M a pH 5,7 y acetonitrilo (56:44 v/v), para obtener el objetivo planteado se varió
gradualmente la proporción de los componentes, hasta obtener una mezcla final de
NaH2PO4 y Na2HPO4 0,05 M a ph 4,5 y acetonitrilo (75:25 v/v).
27
B. Validación de la metodología bioanalítica.
B.1. Especificidad. Según la FDA no deben existir interferencias en las muestras
blanco de plasma a los tiempos de retención de los analitos. Esta prueba se realizó
demostrando que en los cromatogramas, a los tiempos de retención de los compuestos
de interés (ácido carboxílico de clopidogrel y metilprimidona) no existen interferencias
de las señales endógenas, para esto se utilizaron seis fuentes diferentes de plasma.
En el cromatograma experimental (Figura N° 2-A) se observa que no hay interferencias
tanto para ácido carboxílico de clopidogrel como para metilprimidona, esto se repitió en
las seis muestras diferentes de plasma.
B.2. Linealidad. La linealidad del método se obtuvo en un rango de concentración de
ácido carboxílico de clopidogrel de 38,32 a 3832,0 ηg/mL. Para establecer linealidad se
realizaron curvas de calibración que incluían 7 puntos (38,32; 76,64; 153,28; 229,92;
383,2; 766,4; 1532,8; 3832,0 ng/mL). En la Figura N° 2 se observa una de las curvas
experimentales de calibración utilizadas para la validación, el valor obtenido para el
coeficiente de correlación es > 0,98, y la FDA exige un coeficiente de correlación mayor
a 0,95.
28
Tabla 1. Validación Analítica: Determinación de linealidad.
Concentración de
ACC (ng/mL) Area de ACC Area de Metilprimidona Relación de areas
0 0 0 0,00000
38,32 3973 299321 0,01327
76,64 9960 264123 0,03771
153,28 10594 156048 0,06789
229,92 17237 213839 0,08061
383,2 27748 250446 0,11079
766,4 49878 234382 0,21281
1532,8 102342 249286 0,41054
3832 256775 254460 1,00910
Ecuación de la recta: y = 0,0003x + 0,0133; Regresión lineal: R2 = 0,9993
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 4500
Rela
ció
n d
e Á
rea
Concentración (ng/mL)
Linealidad - Curva de Calibración n°1
Figura N° 2. Curva de Calibración de ácido carboxílico de clopidogrel.
Eje X= Concentración de ácido carboxílico de clopidogrel. Eje Y= Relación de área:
Área de acido carboxílico de clopidogrel / Área de metilprimidona.
29
B.3. Exactitud. Se determinó la exactitud del método, realizando una cuantificación de
analito en plasma fortificado con Acido Carboxílico de Clopidogrel y Metilprimidona en
concentraciones conocidas, la relación de área obtenida se ingresó en la curva de
calibración de manera de obtener un valor para concentración. El valor obtenido se
comparó con el valor real de concentración. La medición se realizó en tres niveles de
concentración (bajo, medio, alto), cada nivel se repitió 6 veces. Los valores medio
estuvieron dentro de un rango superior e inferior de 15% respecto del valor real,
cumpliendo lo exigido por la FDA.
Tabla 2. Validación Analítica: Determinación de exactitud.
Conc. real
(ng/mL) n
RA
promedio Ecuación
Concentración
(ng/mL) (%)
153,28 6 0,062 y = 0,0003x + 0,0163 152,30 99,4
383,2 6 0,137 y = 0,0003x + 0,0164 401,27 104,7
1532,8 6 0,472 y = 0,0003x + 0,0165 1518,01 99,04
RA = Relación de Área = Área ácido carboxílico de clopidogrel /Área metilprimidona
n = número de repeticiones
B.4. Precisión. Se determinó la precisión del método, realizando una cuantificación de
analito en plasma fortificado con acido carboxílico de clopidogrel y metilprimidona en
concentraciones conocidas. Se realizó la medición en tres niveles de concentración
(bajo, medio, alto) y se realizaron ensayos intradía e interdía. Para los ensayos intradía
cada medición se repitió 5 veces y para los ensayos interdía se realizaron un total de
15 mediciones en 3 días distintos. Para determinar la precisión de la metodología se
calculó el promedio, la desviación estándar y el coeficiente de variación para cada
30
punto. Los valores obtenidos para CV mostraron una diferencia menor al 15% que es lo
exigido por la FDA.
Tabla 3. Validación Analítica: Determinación de precisión intradía.
Concentraci
ón
(ng/mL) n RA promedio S.D. C.V.
153,28 5 0,062 0,0046 7,49
383,2 5 0,137 0,011 8,24
1532,8 5 0,472 0,020 4,33
Tabla 4. Validación Analítica: Determinación de precisión interdía.
Concentraci
ón
(ng/mL) n RA promedio S.D. C.V.
153,28 5 0,061 0,006 9,79
383,2 5 0,118 0,017 14,27
1532,8 5 0,434 0,039 9,09
RA = Relación de Área = Área ácido carboxílico de clopidogrel /Área metilprimidona.
S.D. = Desviación estándar
CV. = Coeficiente de variación
n = número de repeticiones
31
Figura N° 3. Cromatogramas de separación y cuantificación de ácido carboxílico
de clopidogrel y metilprimidona.A) Plasma blanco; B) Plasma cero: plasma + estándar
interno; C) Plasma 153,28 ηg/mL ácido carboxílico de clopidogrel + estándar interno; D) Plasma
383,2 ηg/mL acido carboxílico de clopidogrel + estándar interno; E) Plasma 1532,8 ηg/mL acido
carboxílico de clopidogrel + estándar interno; F) Muestra correspondiente al voluntario N° 1.
Minutes
0 2 4 6 8 10
Volts
0,00
0,01
0,02
0,03
0,04
4,8
83
5,6
67
6,0
75
6,4
42
6,7
83
7,2
42
Minutes
0 2 4 6 8 10
Volts
0,00
0,01
0,02
0,03
0,04
5,5
42
5,8
00
6,1
83
6,6
17
7,1
08
Minutes
0 2 4 6 8 10
Volts
0,00
0,01
0,02
0,03
0,04
5,1
08
Ac C
arb
oxilic
o C
lop
ido
gre
l
5,6
42
5,9
00
6
,25
8
6,6
25
7,1
50
Me
tilp
rim
ido
na
7,8
17
8,2
25
8,5
58
9,6
33
10
,55
0
Minutes
0 2 4 6 8 10
Volts
0,00
0,01
0,02
0,03
5,1
25
Ac C
arb
oxilic
o C
lop
ido
gre
l
5,3
92
5,6
50
5,9
08
6,2
58
6,6
33
7,1
75
Me
tilp
rim
ido
na
7,8
42
8,2
42
8,8
75
9,2
58
9,7
33
10
,58
3
Minutes
0 2 4 6 8 10
Volts
0,00
0,01
0,02
0,03
5,1
25
Ac C
arb
oxilic
o C
lop
ido
gre
l
5,6
42
5,8
92
6,2
42
6,6
83
7,1
67
Me
tilp
rim
ido
na
7,8
33
8,2
17
8,8
75
9
,63
3
10
,55
8
Minutes
0 2 4 6 8 10
Volts
0,00
0,01
0,02
0,03
Ac C
arb
oxilic
o C
lopid
ogre
l
5,0
58
173539
5
,350
92
Metilp
rim
idona
7,0
83
301760
7
,450
312
A) B)
C) D)
E) F)
32
B.5. Limite de Detección y Cuantificación. El límite de detección corresponde a 3
veces la señal ruido de la muestra blanco. El límite de detección fue 22,9 ηg/mL.
El límite de cuantificación puede corresponder al menor punto del rango de
concentración utilizado para establecer la linealidad del método si la precisión del LOQ
es menor al 20% y la exactitud se encuentra dentro de un rango de ±20%. El LOQ fue
de 38,32 ηg/mL.
B.6. Recuperación. Se determinó la recuperación del proceso de extracción,
realizando una cuantificación de analito en plasma y solución stock, en
concentraciones conocidas. Las muestras de plasma se sometieron al proceso de
extracción descrito para el método. Se realizó la medición en tres niveles de
concentración (bajo, medio, alto), cada nivel se repitió 5 veces. Se comparó la relación
de área obtenida en la muestras de plasma respecto a las obtenidas en las muestras
soluciones stock. Los valores obtenidos para % de recuperación muestran un valor
promedio de 29%, menor al 100%, este valor es aceptado dado que la técnica en los
niveles ensayados es precisa y exacta.
Tabla 5. Validación Analítica: Determinación del porcentaje de recuperación.
Concentración
(ng/mL) RA promedio plasma
RA promedio solución
stock
Recuperación
(%)
153,8 0,062 0,18 34,04
383,2 0,137 0,49 27,85
1532,8 0,472 1,92 24,61
RA = Relación de Área = Área acido carboxílico de clopidogrel /Área metilprimidona
n = número de repeticiones
33
B.7. Estabilidad. Se determinó la estabilidad de las muestras en tres niveles de
concentración (153,28; 383,2 y 1532,8 g/mL); previo a los ensayos de estabilidad,
cada una de las muestras se analizó. Las muestras se consideran estables si el CV
entre la concentración inicial y final no es superior a un 15 %.
a) Estabilidad por ciclos de congelamiento y descongelamiento. Se determinó la
estabilidad de las muestras sometidas a ciclos de congelamiento/descongelamiento.
Las muestras se congelaron durante 24 horas a -30 ºC y luego se descongelaron por
un período de 12 horas a temperatura de 25 ºC. Los ciclos se repitieron tres veces. Las
muestras fueron estables luego de tres ciclos.
Tabla 6. Estabilidad por ciclos de congelamiento y descongelamiento.
Conc.
(ng/mL) Nº Ciclo Area ACC
Area
Metilprimidona RA Promedio Desv. Est CV (%)
0 16688 309317 0,054
1 16883 274326 0,062
153,28 2 24189 362166 0,067 0,064 0,0084 13,12
3 16075 217665 0,074
0 24445 251776 0,097
1 28311 284303 0,100
383,2 2 43083 401559 0,107 0,100 0,0054 5,45
3 16778 177008 0,095
0 125515 282553 0,444
1 135237 332742 0,406
1532,8 2 124733 341051 0,366 0,39 0,0461 11,85
3 48344 142501 0,339
34
b) Estabilidad de corta duración. Para determinar la estabilidad de las muestras
descongeladas, se mantuvieron a 25 ºC durante un período de 96 horas y luego se
analizaron, las muestras fueron estables.
Tabla 7. Validación Analítica: Estabilidad de corta duración.
Conc.
(ng/mL) Nº Ciclo Area ACC
Area
Metilprimidona RA Promedio Desv. Est CV (%)
153,28 0 16688 309317 0,054
96h 12486 269547 0,046 0,050 0,0054 10,76
383,2 0 24445 251776 0,097
96h 24389 247473 0,099 0,098 0,0010 1,06
1532,8 0 125515 282553 0,444
96h 126863 259684 0,489 0,466 0,0313 6,72
c) Estabilidad de larga duración. Las muestras se congelaron durante dos meses,
tiempo que transcurrió entre la primera sesión de obtención de muestras y el último
análisis de muestras, luego se descongelaron y se cuantificó la concentración de estas,
las muestras permanecieron estables.
Tabla 8. Validación Analítica: Estabilidad de larga duración.
Conc.
(ng/mL) Nº Ciclo Area ACC
Area
Metilprimidona RA Promedio Desv. Est CV (%)
153,28 0 16688 309317 0,0540
2 m 14605 247235 0,0591 0,057 0,0036 6,41
383,2 0 24445 251776 0,0971
2 m 25478 293995 0,0867 0,092 0,0074 8,03
1532,8 0 125515 282553 0,4442
2 m 127904 269766 0,4741 0,459 0,0212 4,61
* 2m = 2meses
35
d) Estabilidad post-preparación. De manera de determinar la estabilidad de las
muestras en el autosampler del equipo, se dejaron durante un tiempo de 12 horas en
este, las muestras permanecieron estables luego de este tiempo.
Tabla 9. Validación Analítica: Estabilidad de corta duración.
Conc.
(ng/mL) Nº Ciclo Area ACC
Area
Metilprimidona RA Promedio Desv. Est CV (%)
153,28 0 16688 309317 0,0540
12 h 7289 146936 0,0496 0,052 0,0031 5,93
383,2 0 24445 251776 0,0971
12 h 13249 148650 0,0891 0,093 0,0056 6,05
1532,8 0 125515 282553 0,4442
12 h 60732 161275 0,3766 0,410 0,0478 11,65
C. Características antropométricas de los voluntarios. La Tabla 10 muestra el
promedio, la desviación estándar y el coeficiente de variación para los parámetros de
edad, peso, altura y el índice de masa corporal (IMC) de los voluntarios.
36
Tabla 10. Características Antropométricas de los voluntarios.
Código
Random INICIALES Sexo
Edad
(años)
PESO
(kg)
TALLA
(cm) IMC
01 DVD M 18 71,5 175 23,34
02 VIA F 19 47,5 153 20,29
03 SNT M 24 89 185 26
04 MMS F 23 57,6 161 22,22
05 VAL F 24 77,5 169 27,13
06 AVL M 21 86,6 172 29,27
07 RSV M 25 71 170 24,57
08 CDA M 19 78 170 26,99
09 JMN F 18 57 156 23,42
10 MNP F 23 55,5 156 22,80
11 SCB M 24 64,6 170 22,35
12 CMZ M 19 76,2 175 24,98
13 KQY F 19 49 160 19,14
14 DAR F 22 57,5 153 24,56
15 BSV F 21 72 162 27,43
16 IRG F 37 62 155 25,81
17 RCD M 31 84,2 175 27,49
18 GSM M 31 73 173 24,39
19 DPF F 21 54,1 158 21,67
20 JGV M 27 80,9 169 28,32
21 LMV F 20 55,5 156 22,80
22 CVC F 21 61 165 22,40
23 EFF F 19 70 161 27,00
24 TFA F 42 75 168 26,57
PROMEDIO F/M 14/10 24 67,75 165,29 24,62
D.E. 6,09 11,99 8,52 2,63
C.V 37,10 143,91 72,73 6,92
37
D. Análisis físico-químico del producto test EXPANSIA®. Estos análisis fueron
realizados en el “Laboratorios Stein S.A”. El resultado de los análisis se muestra en el
Anexo 4. En este análisis se demostró que la formulación en estudio cumplía con las
especificaciones de la United States Pharmacopeia (USP), en cuanto a identidad,
uniformidad de contenido, valoración y test de disolución.
E. Exámenes clínicos y de laboratorio clínico. En el Anexo 5 se muestra a modo de
ejemplo un informe de laboratorio con los resultados clínicos de uno de los voluntarios
que fue seleccionado por el equipo médico para participar en este estudio. Los
resultados de los exámenes clínicos se adjuntan a la ficha clínica, la cual fue utilizada
exclusivamente por el médico del estudio (Anexo 6). Tanto los resultados de los
exámenes como la información registrada en la ficha son confidenciales. El conjunto de
antecedentes médicos fueron entregados, una vez finalizado el estudio al Director de
este proyecto, Dr. Q.F. Iván Saavedra.
F. Consentimiento informado. En el Anexo 2 se muestra la copia del consentimiento
informado entregada a cada uno de los voluntarios participantes en el estudio. Tanto
este documento como el proyecto fueron aprobados por la Comisión de Ética de
Investigación en Seres Humanos de la Facultad de Medicina de la Universidad de
Chile.
38
G. Dieta administrada a los voluntarios. La dieta fue controlada, estrictamente
estandarizada y especificada. Los alimentos administrados a cada voluntario fueron
determinados por una Nutricionista y aparecen en el Anexo 1.
H. Análisis cromatográfico de las muestras plasmáticas. Los 24 voluntarios
seleccionados para participar en el estudio, lo concluyeron satisfactoriamente. En la
Tabla Nº 11 se muestran los resultados analíticos de las concentraciones plasmáticas
de ACC por voluntario y producto, los puntos que figuran sin resultado corresponden a
muestras en las cuales se obtuvo un volumen de muestra insuficiente para el análisis.
Las concentraciones promedio de Acido carboxílico de clopidogrel y la desviación
estándar de ambos productos aparecen en la Tabla 12. A partir de estos valores se
construyeron las curvas promedio de concentraciones plasmáticas de ACC (A y B) vs
el tiempo transcurrido desde la administración del fármaco hasta las 12 horas; estos
resultados se muestran en la Figura N° 4.
39
Tabla 11. Concentraciones plasmáticas (ηg/mL) vs el tiempo (h) en 24 voluntarios sanos para A y B.
Producto A
tiempo (h) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0
0,25 109,8 158,6 2808,7 387,1 1248,7 73,2 299,0 345,8 217,7 145,7 294,0 0,0 0,0 604,6 2025,4 0,0 73,5 593,2 521,9 960,2 939,8 2372,9 1227,7 85,4
0,5 740,1 2082,9 2469,6 2910,0 2157,7 904,3 2051,5 717,2 1427,3 1155,3 - 296,0 2787,9 2299,8 1525,8 470,3 1145,0 2366,7 1713,2 2645,4 3603,8 1837,1 2141,6 2084,8
1,0 1822,9 2693,1 1136,2 2445,8 1127,5 1573,6 1806,5 1754,6 3396,7 2493,7 1820,7 1730,1 2181,6 1370,3 1074,9 2643,9 1429,4 1379,4 1953,2 1375,5 2426,5 1828,2 1535,7 1851,6
1,5 1382,0 2059,2 868,3 1743,1 730,3 1071,8 957,1 822,7 2335,4 1372,8 951,7 1444,9 904,9 836,5 686,6 1858,3 859,9 770,2 1442,5 781,7 1428,2 923,9 1008,1 1010,6
2,0 1087,0 1668,5 510,0 1109,2 694,5 782,8 679,9 553,8 1931,7 1123,1 672,3 916,4 800,1 686,1 615,5 1099,3 552,0 649,5 1255,8 668,8 1300,2 746,9 790,8 751,8
2,5 719,4 1116,3 418,7 938,2 575,7 509,9 566,1 451,9 761,8 774,9 532,4 729,0 603,6 548,4 608,3 873,7 412,5 434,8 899,7 419,2 917,6 669,6 565,3 553,2
3,0 579,4 721,0 377,1 660,3 397,5 500,5 377,9 389,1 597,2 452,9 458,4 573,9 383,1 279,5 482,1 505,8 357,7 344,9 522,4 514,0 617,0 409,0 444,6 446,7
4,0 416,4 466,5 268,1 438,4 269,8 420,3 330,3 363,5 305,4 314,6 321,0 359,1 165,2 152,0 377,6 257,5 - 241,3 386,3 335,5 369,2 211,1 239,0 218,2
6,0 292,8 351,5 192,8 371,0 196,9 281,9 229,4 293,2 275,5 179,2 219,1 228,2 126,4 114,2 124,2 145,6 242,4 255,6 196,1 191,3 226,4 178,1 113,0 -
8,0 244,0 306,4 137,8 326,0 157,1 252,5 179,0 219,4 - 150,5 186,9 149,0 106,5 67,3 114,5 100,2 115,1 116,7 140,4 130,5 223,0 107,1 76,3 141,4
12,0 141,3 212,3 94,6 236,5 116,9 176,4 137,7 140,5 88,9 95,8 110,5 105,9 42,5 0,0 69,2 50,7 88,5 69,2 99,6 71,5 128,9 94,4 26,8 67,7
40
Producto B
tiempo (h) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0
0,25 483,2 1093,7 726,8 617,3 300,0 152,4 351,8 122,7 56,5 163,5 231,5 1536,5 878,3 697,9 1574,4 179,9 641,6 752,6 835,3 550,4 140,6 655,9 154,7 77,0
0,5 2612,2 2122,2 2419,7 2847,8 2531,0 1698,1 2984,5 1491,0 806,4 2605,6 1510,4 2458,7 2787,9 2223,9 2624,3 1641,8 2635,8 2371,0 3719,8 1487,2 2156,7 1808,5 2286,0 1706,8
1,0 1666,1 2481,2 1250,8 2303,9 1945,0 1501,5 1583,4 1287,4 1795,9 - 2020,1 1316,6 1263,3 1608,6 1318,4 1829,3 1040,1 990,6 2070,6 2457,1 2470,1 1881,2 1440,0 1528,5
1,5 1002,8 2481,2 906,1 1264,3 1034,1 1187,9 913,3 567,4 1143,2 1152,7 1226,5 807,0 789,9 815,1 988,7 1488,1 549,8 773,2 1373,5 768,4 1264,8 1524,8 892,6 875,0
2,0 745,8 1702,1 646,8 713,8 859,3 794,2 736,6 381,9 975,9 909,2 759,5 571,0 569,1 611,3 800,6 789,8 432,5 520,2 1083,8 - 1260,2 742,5 673,7 522,0
2,5 714,3 1236,2 490,3 679,0 787,1 679,3 577,5 352,2 587,5 703,7 667,3 473,3 502,6 506,4 625,4 608,0 309,9 466,1 691,4 - 768,6 596,3 608,8 376,4
3,0 492,7 757,0 431,2 583,2 468,3 487,1 436,5 273,0 376,6 354,8 468,4 224,6 319,7 306,9 392,8 389,3 269,0 333,7 615,8 464,0 548,9 289,2 420,6 335,6
4,0 395,0 474,3 329,7 322,7 304,5 308,3 313,6 231,8 338,7 260,0 349,0 180,9 272,9 159,4 242,0 176,7 198,7 188,7 - 299,1 369,3 143,9 317,9 218,2
6,0 368,1 334,3 322,6 295,6 204,3 299,0 236,5 180,9 273,8 189,3 285,6 160,1 171,1 114,3 176,1 131,8 105,9 167,5 273,0 211,3 207,7 140,4 150,5 163,6
8,0 261,9 245,9 221,2 162,4 171,0 230,5 198,8 145,5 236,4 179,1 207,1 141,4 147,6 72,6 121,0 70,4 97,3 98,8 184,0 174,5 135,3 87,9 127,2 138,2
12,0 216,2 205,6 74,8 91,6 114,3 159,4 141,5 97,7 151,0 97,1 145,5 0,0 76,9 36,4 87,1 53,8 45,9 57,9 161,3 95,1 102,6 31,0 76,4 90,1
41
Tabla 12. Concentraciones promedio de ACC (ηg/mL)
Tiempo (h) Producto A Producto B
PROMEDIO D.E. PROMEDIO D.E.
0,0 0 0 0 0
0,5 645,5 781,6 540,6 429,8
1,0 1805,8 849,1 2230,7 626,6
1,5 1868,8 576,2 1697,8 449,9
2,0 1177,1 451,8 1074,6 397,8
2,5 901,9 359,3 774,0 286,3
4,0 650,0 192,2 609,0 187,9
6,0 474,7 108,9 418,3 124,6
8,0 314,2 86,5 278,1 83,2
12,0 218,5 71,3 215,1 74,3
42
A)
B)
Figura N° 4. Curvas promedio de concentración plasmática de ACC. Normal (A) y
logarítmica (B) versus tiempo.
43
I. Análisis Farmacocinético.
Los parámetros farmacocinéticos para establecer bioequivalencia son Cmáx, ABC0-12
y ABC0-∞. Así los parámetros obtenidos de cada voluntario para cada formulación,
fueron expresados en números naturales y logaritmo natural. Los resultados se
presentan como el promedio de los valores y su desviación estándar (Tabla 13).
Los parámetros farmacocinéticos correspondientes a concentración plasmática
máxima (Cmáx.) y tiempo máximo (tmáx.) se obtuvieron por inspección directa de las
curvas de concentración plasmática en el tiempo.
Otros parámetros farmacocinéticos tales como área bajo la curva de
concentraciones sanguíneas en el tiempo ABC0 – t y ABC0 - tiempo de vida media (t½)
fueron determinados a partir de los datos obtenidos de las curvas de niveles
sanguíneos de la droga en el tiempo post administración. Para ello se utilizó el
procedimiento Pkequiv del paquete estadístico STATA 10.0, el cual es independiente de
los modelos compartimentales.
Los resultados de los parámetros farmacocinéticos encontrados fueron: ABC0→∞
6.019,94 ± 1786,40 y 5.869,52 ± 1667,89 gxh/mL; ABC0→12 5.026,13 ± 1.207,37 y
4.850,25 ± 1.102,34 gxh/mL; Cmáx 2.315,34 ± 548,4 y 2.372,47 ± 493,15 g/mL, para
A y B, respectivamente.
44
Tabla 13. Parámetros farmacocinéticas ABC 0→12, ABC 0→∞, Cmáx.
A B A B A B
Vol. N°
Cmáx
(g/mL)
Cmáx
(g/mL)
ABC 0→12
(g h/mL)
ABC 0→12
(g h/mL)
ABC0→∞
(g h/mL)
ABC0→∞
(g h/mL)
Ln Ln Ln Ln Ln Ln
1 1822,86 7,50816 2612,2 7,86796 5411,52 8,59629 5969,58 8,69443 6.561,06 8,78891 8.487,57 9,04636
2 2693,12 7,89846 2481,2 7,81649 7804,01 8,96239 7990,8 8,98605 10.292,15 9,23914 10.607,43 9,26931
3 2808,67 7,94047 2419,7 7,79141 4654,1 8,44550 4945,05 8,50614 5.452,29 8,60379 5.256,65 8,56725
6 2909,98 7,97590 2847,8 7,95430 7586,26 8,93409 5670,45 8,64302 10.702,34 9,27822 6.137,41 8,72216
8 2157,68 7,67679 2531 7,83635 4405,58 8,39063 5206,35 8,55763 5.756,14 8,65802 6.388,87 8,76231
9 1573,60 7,36112 1698,1 7,43728 4972,14 8,51161 5075,76 8,53223 7.201,00 8,88197 6.618,11 8,79756
10 2051,50 7,62633 2984,5 8,00118 4849,32 8,48659 5122,16 8,54133 6.484,07 8,77710 6.789,56 8,82314
11 1754,57 7,46998 1491,0 7,30721 4458,04 8,40246 3378,27 8,12512 5.601,39 8,63077 4.338,01 8,37517
13 3396,66 8,13055 1796,0 7,49329 7428,2 8,91304 4915,81 8,50021 7.990,89 8,98606 6.395,36 8,76333
14 2493,74 7,82154 2605,6 7,86543 5155,18 8,54776 5674,76 8,64378 6.070,16 8,71114 6.532,53 8,78455
15 1820,73 7,50699 2020,1 7,61092 4400,66 8,38951 5238,77 8,56384 5.365,95 8,58783 6.548,04 8,78692
16 1730,13 7,45595 2458,7 7,80740 4525,34 8,41745 4166,19 8,33476 5.359,18 8,58657 5.953,62 8,69175
17 2787,88 7,93304 2787,9 7,93304 4361,86 8,38065 4429,78 8,39611 4.599,61 8,43373 5.027,77 8,52273
19 2299,82 7,74059 2223,9 7,70700 3447,63 8,14544 3703,14 8,21694 3.789,79 8,24006 3.892,56 8,26682
21 2025,40 7,61352 2624,3 7,87258 4311,89 8,36913 4731,85 8,46207 5.015,72 8,52033 5.490,29 8,61074
22 2643,89 7,88001 1829,3 7,51169 4715,78 8,45867 4089,87 8,31627 5.007,40 8,51867 4.449,16 8,40047
23 1429,44 7,26504 2635,8 7,87695 3679,27 8,21047 3411,36 8,13487 4.210,84 8,34542 3.738,36 8,22640
24 2366,71 7,76926 2371,0 7,77107 4159,33 8,33311 3699,77 8,21603 4.475,84 8,40645 4.024,80 8,30023
Prom. 2315,34 7,72 2372,47 7,75 5026,13 8,49822 4850,25 8,46390 6019,94 8,66637 5869,52 8,64237
DE. 548,49 0,23 493,15 0,21 1207,37 0,21774 1102,34 0,21527 1786,40 0,26724 1667,89 0,26607
45
Tabla 14. Otros parámetros farmacocinéticos. tmáx; t1/2; ke: constante de velocidad de eliminación; f: fármaco.
Fármaco A Fármaco B
Vol. N° Tmáx (h) T1/2 (h) ke (1/h) Vol. N° Tmáx (h) T1/2 (h) ke (1/h)
1 0,98 5,56 0,1247 1 0,57 8,39 0,0826
2 0,98 8,06 0,0860 2 1,50 9,13 0,0759
3 0,43 5,97 0,1160 3 0,55 2,81 0,2464
4 0,5 9,09 0,0763 4 0,57 3,70 0,1876
5 0,48 8,09 0,0857 5 0,57 7,14 0,0970
6 0,97 8,67 0,0800 6 0,57 6,78 0,1023
7 0,50 8,37 0,0828 7 0,57 8,17 0,0849
8 0,95 5,69 0,1218 8 0,58 6,83 0,1016
9 0,95 4,27 0,1625 9 1,00 6,73 0,1029
10 0,95 6,56 0,1056 10 0,58 5,92 0,1170
11 0,95 5,95 0,1164 11 1,00 6,37 0,1088
12 0,95 5,66 0,1224 12 0,57 11,22 0,0618
13 0,57 3,72 0,1862 13 0,52 5,27 0,1315
14 0,57 3,40 0,2041 14 0,52 3,66 0,1893
15 0,27 6,88 0,1007 15 0,50 6,23 0,1112
16 1,02 4,00 0,1731 16 0,98 4,99 0,1389
17 1,02 4,57 0,1516 17 0,48 4,74 0,1464
18 0,57 3,42 0,2025 18 0,48 4,04 0,1716
19 1,03 6,37 0,1088 19 0,48 8,61 0,0805
20 0,58 4,34 0,1598 20 0,97 5,13 0,1351
21 0,58 7,08 0,0979 21 0,97 6,23 0,1112
22 0,43 7,34 0,0944 22 0,97 2,74 0,2532
23 0,6 2,89 0,2396 23 0,50 6,07 0,1142
24 0,58 4,76 0,1457 24 0,48 6,91 0,1003
Promedio 0,73 5,86 0,1310 Promedio 0,69 6,16 0,1272
DE. 0,25 1,83 0,0450 DE. 0,26 2,06 0,0501
CV. % 34,05 31,13 34,37 CV. % 38,46 33,38 39,3638
46
J. Análisis estadístico de las muestras. Para comparar ambos tratamientos en un
diseño cruzado y tal como sugiere la FDA, se realizo un Análisis Varianza (ANOVA),
que considera la secuencia y el periodo. En la Tabla 15, se muestra el resultado final
del análisis aplicado a los datos del estudio. Dicho análisis se realizó introduciendo en
el programa estadístico STATA V10 (pkcross), las variables: voluntario, secuencia,
período, y parámetro farmacocinético, y se analizaron, donde la variable dependiente
fue el parámetro farmacocinético (ABC, Cmáx y tmáx) y los efectos principales fueron las
variables secuencia, período y tratamiento.
Se puede observar evidencia de variabilidad interindividual y efecto secuencia
para ABC0-12 y ABC 0-∞, respectivamente. No se observó diferencia para Cmax. A nivel
intraindividual no se observaron diferencias significativas ni para efecto tratamiento y
periodo, en ninguno de los parámetros.
Tabla 15. Análisis de varianza para los parámetros farmacocinéticos.
Fuente de Variación LN Cmax (p-value)
LN ABC 0-12 ( p-value)
LN ABC 0-i ( p-value)
Interindividual
Efecto Secuencia
Error interindividual
0.5424 0.3877
0.0315 0.0002
0.0026 0.0006 Intraindividual
Efecto Tratamiento
Efecto Periodo
0.6433 0.9375
0.3136 0.9151
0.5620 0.9168
47
K. Evaluación de Bioequivalencia. La Tabla 16 muestra los intervalos de confianza
al 90% para Cmáx, ABC0-12, ABC0-∞ y tmáx.
Se puede observar que los parámetros logarítmicamente transformados Cmax,
ABC 0-12 y ABC 0-i en un 100% son bioequivalentes con el test clásico de los
intervalos, es decir con una probabilidad de un 100% están dentro de los rangos
establecidos por la FDA para establecer bioequivalencia.
Tabla 16. Test de Bioequivalencia, referencia (A) vs prueba (B)
INTERVALOS DE BIOEQUIVALENCIA CLÁSICOS
N=24
Límites de
Test Límites
Probabilidad
Equivalencia Bioequivalencia (%)
LnCmax
Diferencia -1.544 1.544 -0.079 0.138
Razón 80% 125% 98,977% 101,793% 100%
LnABC 0-12
Diferencia -1.700 1.700 -0.091 0.023
Razón 80% 125% 98,924% 100,269% 100%
LnABC 0-i
Diferencia -1.733 1.733 -0.094 0.046
Razón 80% 125% 98,915% 100,531% 100%
48
La Tabla 17 muestra el análisis estadístico utilizando el método de Schuirmann.
Este método indica los valores inferiores y superiores para la hipótesis nula. Los
resultados muestran Además que el Two one side test (Test de Schuirmann) fue
estadísticamente significativo para todos los parámetros (p<0.001), cumpliendo los
requerimientos para bioequivalencia.
Tabla 17. Prueba de dos hipótesis de Schuirmann para los parámetros
farmacocinéticos.
SCHUIRMANN'S TEST
Two One Side Test p-value
LnCmax
Límite superior -23.916 <0.001
Límite inferior 24.855 <0.001
LnABC 0-12
Límite superior -52.103 <0.001
Límite inferior 50.040 <0.001
LnABC 0-i
Límite superior -43.102 <0.001
Límite inferior 41.924 <0.001
Ambas metodologías cumplen con los requisitos de la FDA de EEUU para probar
bioequivalencia, cuyas regulaciones establecen que para ABC0-12, ABC0-∞ y Cmáx los
intervalos de confianza deben estar dentro de los límites de 80 % a 125 % para la
razón test/referencia y además de lo anterior la hipótesis nula planteada se debe
rechazar.
49
L. Encuesta de reacciones Adversas. La encuesta fue realizada por el Médico y
estuvo orientada a detectar los efectos adversos. Se presentó un episodio adverso
relacionado con el sistema gastrointestinal (deposiciones disgregadas no liquidas). Se
presentó un caso de lipotimia post extracción sanguínea. Todas estas reacciones
adversas fueron leves y tratadas no farmacológicamente con reposo y observación
(Anexo 3).
IV. DISCUSION
Para realizar un estudio clínico de biodisponibilidad relativa y establecer
bioequivalencia entre productos farmacéuticos provenientes de diferentes fuentes de
fabricación, es necesario contar con un buen equipo multidisciplinario, acceso a
voluntarios sanos, a Comité de Ética y tener un laboratorio analítico de excelencia con
métodos de análisis validados; el presente estudio contó con esas condiciones.
La magnitud de la absorción de un principio activo contenido en una forma
farmacéutica se ve reflejada en el valor de los parámetros de área bajo la curva de
concentraciones plasmáticas respecto al tiempo post administración (ABC). En el
presente estudio, se analizó el ABC entre cero y 12 horas (0 a t) y entre cero y tiempo
infinito (0 a ∞); a saber, (ABC0→t) y (ABC0→∞). Dicho en otras palabras, a ese tiempo
se tienen mediciones confiables de la biodisponibilidad de la droga. El parámetro que
mejor refleja la velocidad de absorción es la constante de absorción Ke; sin embargo,
es útil también la Cmáx y el Tmáx.
Los valores de velocidad de eliminación (Kel) promedios encontrados de 0,131
± 0,045 y 0,127 ± 0,050 µg/hr, para A y B, respectivamente y los tiempos de vida
media de eliminación (t1/2β) obtenidos de 5,86 + 1,83 y 6,16 + 2,06 hr, para A y B,
respectivamente demuestran gran similitud entre ambos productos.
50
Ambas formulaciones presentaron un comportamiento farmacocinético
bastante similar. Los resultados de los parámetros de bioequivalencia así lo
demuestran: ABC0→∞ 6.019,94 ± 1786,40 y 5.869,52 ± 1667,89 gxh/mL; ABC0→12
5.026,13 ± 1.207,37 y 4.850,25 ± 1.102,34 gxh/mL; Cmáx 2.315,34 ± 548,4 y 2.372,47
± 493,15 g/mL, para A y B, respectivamente.
También se demuestra esta similitud en el intervalo de confianza al 90 % para
la relación B/A LN transformado fue ABC0→∞ 98,92 a 100,53%; ABC0→12 98,92 a
100,27% y Cmáx 98,98 a 101,79%.
El valor promedio de Tmáx, es decir, tiempo en que se alcanza la concentración
máxima, aunque no constituye un parámetro farmacocinético que se utilice para
establecer bioequivalencia, es un parámetro importante de evaluar. En este estudio los
valores obtenidos fueron de 0,73 + 0,25 y 0,69 + 0,26 en números corrientes para A y
B demostrando una pequeña diferencia. En conclusión, el comportamiento
farmacocinético (biodisponibilidad) de ambas formulaciones es muy similar.
El test de Bioequivalencia mostró que todos los intervalos de confianza al 90%
de los parámetros farmacocinéticos que se utilizan para establecer bioequivalencia
(Cmax, ABC 0→t y ABC 0→∞) se encuentran dentro de los rangos del 80 al 125% (0,8 a
1,25) y el test de hipótesis “two one-side” (TOST) basado en Schuirman, concluye que
ambas formulaciones son bioequivalentes.
51
V. CONCLUSION
1. Se realizó sin mayores dificultades, un estudio de BD/BE de clopidogrel entre
dos formulaciones farmacéuticas en voluntarios sanos, siguiendo las
recomendaciones de la FDA y del Comité de Ética para estudios en humanos
de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile
2. El estudio fue completado en forma satisfactoria por 24 voluntarios (as) sanos
(as).
3. Se dispuso de una metodología analítica sensible, reproducible, precisa y
exacta, técnica validada en el laboratorio, que concuerda con los
requerimientos bioanalíticos de la FDA para este tipo de estudios.
4. Los promedios de los parámetros farmacocinéticos obtenidos para ambas
formulaciones; a saber: Cmax, ABC0
12 y ABC0
∞, no mostraron diferencias
estadísticamente significativas.
5. En términos de cantidad de droga absorbida y velocidad de absorción, el
principio activo se absorbe por el organismo a velocidad y magnitud similar
desde ambas formulaciones.
6. Los resultados de los parámetros farmacocinéticos concuerdan con aquellos
descritos en la literatura científica.
52
7. De acuerdo a estos resultados obtenidos se concluye que las formulaciones
farmacéuticas diseñadas para ambos productos no muestran diferencias
estadísticamente significativas en los parámetros farmacocinéticos obtenidos de
las curvas de concentración en el tiempo y, estos se ubican en el rango de
similitud de 80 a 125%, fijado por la FDA. Según los criterios establecidos para
este tipo de estudios y a la luz de los resultados, se concluye que EXPANSIA®,
comprimidos de 75 mg de Clopidogrel de Laboratorio Stein, B (test), es un
genérico bioequivalente e intercambiable con PLAVIX®, comprimidos de 75 mg
de Clopidogrel de Sanofi-Aventis A (referencia).
53
VI. REFERENCIAS
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Pharmacokinetics Biopharm, 15: 657 – 80. 1987.
56
ANEXOS Anexo 1: Dieta proporcionada a los voluntarios durante el estudio.
Anexo 2: Aprobación ética de la comisión de bioética de la Facultad de Medicina de la
Universidad de Chile y Consentimiento Informado.
Anexo 3: Informe de reacciones adversas
Anexo 4: Informe del análisis físico-químico del producto EXPANSIA®.
Anexo 5: Exámenes realizados a uno de los voluntarios.
Anexo 6: Ficha clínica de estudio de Biodisponibilidad relativa de clopidogrel.