No se debe confundir la abreviatura De50, a la que nos hemos
referido, con lasabreviaturas DL50y CL50.La abreviatura DL50(dosis
letal media) indica la dosis mnima de un txico capazde causar la
muerte del 50% de la poblacin examinada, en un periodo de
tiempodeterminado, que usualmente es de 24 horas.La abreviacin
CL50(concentracin letal media) indica la concentracin mnimacapaz de
causar la muerte de la mitad de la poblacin expuesta a la inhalacin
deuna sustancia txica gaseosa o voltil, durante untiempo
determinado.La DL50se expresa en miligramos de sustancia txica o de
veneno por kilogramode peso corporal del animal examinado (dato del
que debe quedar constancia). LaCL50se expresa en mililitros de
sustancia txica gaseosa por kilogramo de pesocorporal del animal
examinado (dato delque debe quedar constancia), expuesto
alcompuesto por inhalacin durante un periodo de tiempo
especificado. La gama devalores de los parmetros DL50y CL50es muy
ampliaPreparacin de la Solucin madre.En la preparacin de la Solucin
Madre (veneno diluido en solucin salina), paracada prueba se utiliz
la frmula estndar de 1mg de veneno por 1ml de solucinsalina. Ante
la dificultad de preparar cantidades pequeas, se prepar siempreuna
cantidad de 10 ml de solucin madre de cada tipo de veneno.4
Preparacin de la solucin madre de las pruebas 11 y 12(Mezcla
detodos los venenos antes probados).Las pruebas 11 y 12, destinadas
a determinar la De50de la mezcla de los cincovenenos antes
probados, se program como prueba para reconfirmar la condicinde
POLIVALENTE del Suero Antiofdico Anticoral de Probiol,condicin ya
probadapor el hecho de haber neutralizado adecuadamente cada uno de
los venenos enlas anteriores pruebas individuales.Para la
preparacin de la solucin madre de esta prueba se plante si
podrautilizarse una mezcla de cantidades iguales del sobrante de
las soluciones madreindividuales preparadas para cada una de las
pruebas anteriores o si por elcontrario se deberan mezclar
cantidades iguales de los diferentes venenos, enestado seco
liofilizado y disolver dichamezcla en solucin salina normal.Reunido
el equipo de investigadores y asesores, se planteo y discuti el
asunto yse concluy que tcnicamente no debe existir ninguna
diferencia en la solucinmadre de venenos mezclados resultante, bien
sea que se use unmtodo o el otro;an as, se decidi utilizar la
segunda opcin, para garantizar la frescura de lasolucin y para
verificar que las cantidades de veneno a mezclar fueranexactamente
iguales. Se conserv la proporcin de 1mg de veneno por 1 ml
desolucin salina, pero ante la dificultad de pesar cantidades muy
pequeas deveneno con una exactitud 100% confiable, se opt por
preparar una cantidadgrande de solucin (25 ml) de modo que se
usaran 25 mg de veneno, es decir 5mg de cada tipo de veneno. La
frmula de la solucin madre de venenosmezclados que se utiliz para
las pruebas 11 y 12 es la siguiente:Veneno deMicrurus
miparitus:5mgVeneno deMicrurus dumerilii:5mgVeneno deMicrurus
surinamensis:5mgVeneno deMicrurus spyches medemi:5 mgVeneno
deMicrurus spixii obscurus:5 mgSolucinSalinaNormal:25mlTabla
3.Frmula de la solucin madre pruebas 11 y 12.2.4.5 Frmula de cada
experimento.La formula para cada experimento se prepar en el
momento previo a lainoculacin y no antes, y se hizo de acuerdo a
las proporciones establecidas yprogramadas de antemano para cada
nivel segn el formato de Protocolodiseado para cada prueba (Ver
formato de Protocolo). De cada frmula se
Determinacin de la Dosis Efectiva Media delSuero Antiofdico
Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.Centro de Investigacin y
Asesora Ofidiolgica Ophidia. Informe finalde Investigacin.24prepar
un volumen de 4,5 ml, de manera que se pudiera inocular 0,75 ml a
cadauno de los seisratones de cada nivel y noquedaran
sobrantes.2.4.6 Incubacin de lafrmula.Una vez preparada cada una de
las 12 frmulas de cada prueba, ests fueronincubadas a 37C durante30
minutosen una incubadora estndarpara laboratorioclnico o
bacteriologa (Marca Clinic Lab Supplies modelo TermoLab
4,5defabricacin canadiense).2.4.7 Inoculacin.Una vez preparada e
incubada la frmula para cada experimento, se procedi a lainoculacin
de 0,75 ml de dicha formula a seis ratones por va intraperitoneal y
encada experimento o nivel se hizo de la misma manera; como se dijo
antes, decada formula se prepar un volumen de 4,5 ml, de manera que
se inocularan losseis ratones de cada nivel y no quedaran
sobrantes. La inoculacin se efectu conjeringas tipo insulina de 1
ml, jeringas de aguja fija no removible; se utiliz unajeringa por
cada ratny tras lainoculacin fueron debidamente desechadas.2.4.8
Observacin y lectura.Una vez inoculados los ratones de cada
experimento o nivel, fueron dejados enuna caja de acero inoxidable
con sustrato de cascarilla de arroz, tal y como se losmantiene
normalmente en el bioterio, con alimento y agua disponibles a
voluntad.Cada caja fue debidamente marcada e identificada y dejada
en reposo atemperatura y humedad ambiente, con luz baja e indirecta
y protegida decorrientes de aire, tal y como son normalmente
mantenidas. Se anotcuidadosamente la hora de cada inoculacin y se
realiz la lectura de la prueba alas 24 horas exactas, haciendo el
recuento de ratones vivos y muertos, datos quese consignaron en las
planillas correspondientes.2.4.9 Disposicin final.Todos los
frascos, pipetas y jeringas que se utilizaron durante las pruebas,
ascomo las bolsas vacas de solucin salina, los guantes y tapabocas
desechables,fueron empacados en bolsas rojas para desechos
biomdicos debidamenteetiquetadas y marcadas. Todas las agujas y
jeringas de aguja fija no removiblefueron depositadasen
unrecipiente tipoguardin diseado especialmente parala disposicin o
desecho de elementos cortopunzantes de uso mdico; esterecipiente,
debidamente etiquetado y marcado, fue sellado segn las
instruccionesdel fabricante. Todos estos desechos fueron recogidos
por personal especializadoen la recoleccin de desechos txicos,
biolgicos y biomdicos de la empresamunicipal de aseo, que se
encarga de la incineracin y disposicin tcnica de estaclase de
basuras. Con respecto a la disposicin final de los ratones
utilizados enlas pruebas, vase el numeral2.3.5.5 de este mismo
documento.Determinacin de la Dosis Efectiva Media delSuero
Antiofdico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.Centro de
Investigacin y Asesora Ofidiolgica Ophidia. Informe finalde
Investigacin.253.Resultados y hallazgos.Los resultados y hallazgos
de cada una de las pruebas se consignaron en lasrespectivas tablas
o formatos de Protocoloque se relacionan a continuacin.Informacin
general.Tipo de pruebas realizadas:Dosis Efectiva Media
(De50).Nmero de pruebas realizadas:12 pruebas, 76 experimentos.Tipo
de antiveneno probado:Suero Antiofdico Antielapdico Anticoral de
Laboratorios ProbiolLtda.Tipo de toxinas aneutralizar:Venenos de
serpientes del gneroMicrurus spp.Mtodo utilizado:De50segn Mtodo
Costa Rica, validado por el Instituto de Investigacionesbiolgicas
Clodomiro Picado de San Jos de Costa Rica. Aprobado OMS(WHO).Modelo
biolgico utilizado:Ratones de laboratorio de laespecieMus musculus,
de raza albina suiza.Responsable y Coordinador general de la
realizacin de las pruebas:Hctor Charry Restrepo.Director Cientfico
del Centro de Investigacin y Asesora Ofidiolgica Ophidia.Pruebas
ejecutadas por:Equipo de Investigadores y colaboradores de
Ophidia.
