workshop calidad de la producción y granos con …workshop calidad de la producción y granos con valor agregado ¿Existe un diagnóstico sobre micotoxinas en soja en Argentina? 28

workshop calidad de la producción y granos con valor

agregado

¿Existe un diagnóstico sobre micotoxinas en soja en Argentina?

28 de junio 2006Rosario – Santa fe

Ana Pacin

Fundación de Investigaciones Científicas Teresa Benedicta de la Cruz

Comisión de Investigaciones Científicas de la Provincia de Buenos Aires

Centro de Investigación en Micotoxinas Universidad Nacional de Luján

[email protected]

mailto:[email protected]

MICOTOXINAS

+

-

HONGOS

+

-

MATRIZ ALIMENTICIA

MEDIO AMBIENTE

MICOTOXINAS

Frecuencias relativas de aislamiento de mohos en soja en la Provincia de Buenos Aires en 1999

Rosa T. Boca; Ana M. Pacin; Héctor H. L. González; Silvia L. Resnik; César G. López. SOJA Y MICOTOXINAS FLORA FÚNGICA-VARIEDADES-PRÁCTICAS AGRONÓMICAS

Frecuencia y Densidad Relativa

0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50

Fusarium semitectumFusarium culmorum

Fusarium acuminatumAspergillus niger

Penicillium funiculosumFusarium heterosporum

Aspergillus flavusFusarium graminearum

Fusarium croockwellensePenicillium citrinum

Altermaria AlternataFr % DR %

Mohos asociados con variedades de soja en un ensayo a campo en Argentina en 1999Rosa T. Boca; Ana M. Pacin; Héctor H. L. González; Silvia L. Resnik; César G. López. SOJA Y MICOTOXINAS FLORA FÚNGICA-

VARIEDADES-PRÁCTICAS AGRONÓMICAS

EspeciesFr %

DR % Posibles toxinas que pueden sintetizar las especies halladas en 1999

Alternaria Alternata 48,08 5,97

Ácido tenuazónico, alternariol, monometil ester, alter toxinas

Penicillium citrinum 32,69 4,73 Citrinina

Fusarium graminearum 11,54 1,41

Deoxinivalenol, nivalenol, zearalenona, butenólido, fusarina

C, 3 y 15 acetil DON, di acetil DON

Fusarium croockwellense 11,54 0,79 Zearalenona, tricotecenos tipo B, fusarina C

Aspergillus flavus 9,62 0,84 Aflatoxina B1, ácido ciclopiazónico

Penicillium funiculosum 3,85 0,23 Patulina

Fusarium heterosporum 3,85 0,23 Toxina T-2, HT-2, T-2 tetraol

Fusarium semitectum 1,92 0,06 Zearalenona, bauvericina

Fusarium culmorum 1,92 2,31 Zearalenona, tricotecenos tipo B, fusarina C, butenólido

Fusarium acuminatum 1,92 0,17 Butenólido, tricotecenos tipo A

Aspergillus niger 1,92 0,06 Malforminas, ocratoxina A

Ocurrencia a campo

• 2004, 39 muestras, 3 contaminadas por DON (promedio de las positivas 43.3 µg/kg)

• 2005, 95 muestras, 2 contaminadas por DON debajo del límite de cuantificación (7 µg/kg)

• 2006, 4 muestra

Ocurrencia silo bolsa • 2003, 23 muestras

– 8.70% DON; – 8.70% ZEA, – 17.39% OCRA, – 13.04% Fumonisinas B1 B2

• 2006, 7 pellets; 3 harinas (2, FB1)

2003, 23 muestras

0

100

200

300

400

500

600

700

800

900

1000

µg/kg

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23

muestras soja

ZEA y DON en silo bolsa 2003

DON ZEA

2003, 23 muestras

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

µg/kg

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23

muestras soja

OCRA en silo bolsa 2003

2003, 23 muestras

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

µg/kg

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23

muestras soja

Fumonisinas B1 B2 en silo bolsa 2003

2003, 23 muestras

DON ZEA OCRA FB1 FB2

0 0 0 93 90

0 0 0 13 0

100 812 0,8 0 0

150 902 0,7 0 0

0 0 0 44 12

0 0 0,05 0 0

0 0 0,3 0 0

DON

ZEA

OCRA

Fumonisinas

1-Deoxinivalenol (DON) - Zearalenona (ZEA) TLC Romer Method # MY8402s, Version 94.2 Límite de detección: Deoxinivalenol TLC 25 µg/kg; Zearalenona TLC 25 µg/kg2-Deoxinivalenol (DON) - Toxina T2 GC 2001 Version 94.2 + Croteau y col., 1994.Límite de detección DON 7 µg/kg; Toxina T-2 6 µg/kg3-Ocratoxina A Ochraprep IFU 19.03.01Límite de detección 0.01 µg/kg4-Zearalenona AOAC Official Method 985.18, 1988. Límite de detección 4.7 µg/kg5-Fumonisinas. AOAC Official Method 995.15, 1995. Límite de detección FB1 10 µg/kg; FB2 18 µg/kg

Aflatoxinas Totales µg/kg

Año 2000 Totales Negativas 1 a 20 µg/kg 21 a 50 > de 50

Pellet de Soja 110 90,90% 7,40% 1,70%

Poroto de Soja 125 94,40% 3,68% 1,92%

Año 2001 Totales Negativas 1 a 20 21 a 50 > de 50

Pellet de Soja 218 90,90% 4,50% 0,50% 0,10%

Poroto de Soja 86 87,30% 9,80% 2,64% 0,26%


Pellet de Soja 323 90,90% 7,90% 1,20%

Expeller de Soja 57 97,10% 2,50% 0,40%

Soja desactivada 250 89,20% 6,00% 3,20% 1,60%

Soja extrusada 79 81,00% 19,00%


Pellet de Soja 963 94,70% 4,50% 0,80%

Expeller de Soja 245 93,20% 4,50% 2,30%

Soja desactivada 808 88,00% 9,70% 2,30%

Soja extrusada 234 91,75% 6,70% 1,55%


Pellet de Soja 1162 95,00% 5,00%

Expeller de Soja 256 96,00% 2,70% 1,30%


Soja extrusada 295 94,00% 4,70% 1,30%

Jorge Venturino, Claudia Posanzini, Biofarma SA, 2005

Toxina T-2 µg/kg

Año 2000 Totales Negativas 1 a 100 101 a 250 251 a 500

Pellet de Soja 110 85,50% 5,56% 7,50% 1,45%

Poroto de Soja 125 68,80% 11,52% 13,60% 6,08%


Pellet de Soja 218 86,20% 9,80% 3,10% 0,90%

Poroto de Soja 86 65,10% 14,65% 15,93% 4,32%


Pellet de Soja 323 51,00% 16,50% 26,80% 5,70%

Expeller de Soja 57 73,30% 10,30% 13,80% 2,60%


Soja extrusada 79 50,70% 21,50% 27,80%


Pellet de Soja 963 73,40% 2,00% 2,10% 4,50%

Expeller de Soja 245 73,70% 6,80% 17,50% 2,00%


Soja extrusada 234 87,10% 10,50% 2,40%


Pellet de Soja 1162 83,40% 11,00% 3,80% 1,80%

Expeller de Soja 256 85,60% 10,90% 3,30% 0,20%


Soja extrusada 295 79,30% 10,70% 5,60% 4,40%


Zearalenona µg/kg


Pellet de Soja 110 78,00% 9,30% 11,30% 1,40%

Poroto de Soja 125 74,40% 20,16% 2,72% 2,72%


Pellet de Soja 218 55,00% 13,30% 26,60% 5,10%

Poroto de Soja 86 67,40% 21,63% 6,05% 4,92%


Pellet de Soja 323 71,30% 4,00% 17,90% 6,80%

Expeller de Soja 57 91,20% 2,90% 5,60% 0,30%


Soja extrusada 79 91,05% 3,85% 5,10%


Pellet de Soja 963 69,55% 1,85% 22,80% 5,80%

Expeller de Soja 245 98,95% 0,00% 1,05% 0,00%


Soja extrusada 234 85,00% 10,30% 4,70%


Pellet de Soja 1162 91,40% 4,20% 1,60% 2,80%

Expeller de Soja 256 92,60% 4,70% 2,70%


Soja extrusada 295 83,90% 5,90% 10,20%


ELISA- 6105 muestras (2000-2004)

3334

211

1952

529

Pellet de Soja

Poroto de Soja

Soja desactivada

Soja extrusada

Distribución de la contaminación según matriz

Porcentaje de contaminación por Aflatoxinas Totales

7,13%

8,57% 9,15%

6,41%

Pellet de SojaPoroto de SojaSoja desactivadaSoja extrusada


Porcentaje de contaminación por Toxina T-2

26,30%

37,01%

17,88%

18,81%

Pellet de Soja

Poroto de Soja

Soja desactivada

Soja extrusada


Porcentaje de contaminación por Zearalenona

15,04%

62,65%

10,00%

12,31%

Pellet de Soja

Poroto de Soja

Soja desactivada

Soja extrusada

AOAC – ELISA 40 muestras de soja del sur Santa Fe

Simultaneous determination of aflatoxins, Zearalenone, deoxynivalenol and T-2 Toxin in Argentinian soybean C.E. López, L.C. Bulacio, S.L. Amigot, M.S. Biasoll, A.G. Luque, S.S. Ramadán, L.L. Ramos, M. Sortino, M.E. Tosello, C.L. FulgueiraMycoglobe, Carlos Paz, Córdoba, Marzo 2006

µ/kg

Toxina Rango Media % positivas

Toxina T-2 76,3 a 284,7 175,2 90,0

Zearalenona 42,5 a 166,3 99,7 77,5

Deoxinivalenol 2,60 a 1190 513,7 60,0

Aflatoxinas 3,3 a 7,4 4,4 17,5

Simultaneous determination of aflatoxins, Zearalenone, deoxynivalenol and T-2 Toxin in Argentinian soybean C.E. López, L.C. Bulacio, S.L. Amigot, M.S. Biasoll, A.G. Luque, S.S. Ramadán, L.L. Ramos, M. Sortino, M.E. Tosello, C.L. FulgueiraMycoglobe, Carlos Paz, Córdoba, Marzo 2006

Porcentaje de contaminación - ELISA

90,0

77,5

60,0

17,5

Toxina T-2

Zearalenona

Deoxinivalenol

Aflatoxinas

ANPCYT INTA PICTO 2002 Nº 08-12949,CARACTERIZACION DEL GERMOPLASMA ARGENTINO DE SOJA DE ALTA

CALIDAD NUTRICIONAL A TRAVES DE NUEVAS TECNOLOGIASAgradezco especialmente al licenciado Manuel Zelaya


CALIDAD NUTRICIONAL A TRAVES DE NUEVAS TECNOLOGIAS

Aislamiento e identificación de la frecuencia y la densidad de la flora fúngica campaña 2003-2004

Variedades de soja

Diferentes localidades

ANPCYT INTA PICTO 2002 Nº 08-12949,CARACTERIZACION DEL GERMOPLASMA ARGENTINO DE SOJA DE

ALTA CALIDAD NUTRICIONAL A TRAVES DE NUEVAS TECNOLOGIAS

348 nuestras

32 cultivares (6 criaderos)

12 localidades (9 provincias)


CALIDAD NUTRICIONAL A TRAVES DE NUEVAS TECNOLOGIAS

Provincia Localidad Contaminación %Formosa Reconquista 81,3Santa Fe Rafaela 76,8Córdoba Tres Pozos 65Córdoba Manfredi 58,8Chaco Las Breñas 39,2Entre Ríos Concepción del Uruguay 35,6Buenos Aires Belloq 33,4La Pampa General Pico 28,6Tucumán Banda Río Sali 27,8Misiones Cerro Azul 24,1Buenos Aires Barrow 21,5Buenos Aires Balcarce 14,2

ANPCYT INTA PICTO 2002 Nº 08-12949,CARACTERIZACION DEL GERMOPLASMA ARGENTINO DE SOJA DE ALTA CALIDAD NUTRICIONAL A

TRAVES DE NUEVAS TECNOLOGIAS

Ocho cultivares

0102030405060708090

100

Balcarce Barrow Bellocq C delUruguay

Gral. Pico Manfredi Rafaela TresPozos

Tucumán

A3901A4303A5409AW2886AW4500DM3100DM4600DM4800

Hay cultivares y localidades

con mayor porcentaje de contaminación



Grado madurez III IV y V

0102030405060708090

100

Balcarce Barrow Bellocq C. delUruguay

Gral. Pico Manfredi Rafaela Tres Pozos Tucumán

IIIIIIIIIIVIVIVIVV

Grados IV y V, y localidades

mayor porcentaje de contaminación

ANPCYT INTA PICTO 2002 Nº 08-12949,CARACTERIZACION DEL GERMOPLASMA ARGENTINO DE SOJA DE ALTA CALIDAD NUTRICIONAL A TRAVES DE NUEVAS

TECNOLOGIAS

Porcentaje de contaminación Manfredi

0

20

40

60

80

100

A5409 A6411 A3901 A8000

1-2 diciembre30-diciembre

Fecha de siembra, en la misma localidad

y para los mismos cultivares

Cultivares con diferentes fechas de siembra

La información sobre la contaminación por flora fúngica se expresa según González HHL y col. 1995

Frecuencia

Fr = número de muestras con una especie X 100número total de muestras

Densidad relativa

Dr = número de aislamientos de una especie X 100número total de aislamientos



Frecuencia flora toxicogénica

174,12%

88,79%

83,90%21,55%

11,20%

4,02%

FusariumAlternaria AspergillusPenicilliumTrichoderma Otros géneros*



Densidad relativa flora toxicogénica

49,85%

23,40%

18,03%

7,09%

1,02%

0,61%

Otros géneros*FusariumAlternaria AspergillusPenicilliumTrichoderma



Fr % DR % Fr % DR %

Fusarium 88,79 23,65 Alternaria alternata 83,91 18,21

F. acuminatum 0,29 0,02 Aspergillus 21,55 7,16

F. avenaceum 0,86 0,05 A. flavus 10,92 4,66

F. equiseti 43,68 11,14 A. niger 4,6 0,21

F. graminearum 3,74 0,27 A. ochraceus 0,57 0,07

F. heterosporum 1,44 0,1 A. parasiticus 3,45 2,01

F. oxysporum 1,44 0,57 A. wentii 0,29 0,03

F. poae 0,86 0,17 A. tamarii 0,29 0,01

F. proliferatum 0,29 0,01 A. versicolor 0,29 0,02

F. sambucinum 0,86 0,65 Penicillium 11,21 1,04

F. semitectum 33,62 10,48 P. Chrysogenum 0,57 0,02

F. subglutinans 0,29 0,01 P. citrinum 2,87 0,29

F. verticillioides 0,57 0,02 P. Funiculosum 2,01 0,41



Frecuencia Fusarium

43,68

33,62

3,74

F. equiseti F.semitectum F. graminearum F.oxysporum F.sambucinumF.heterosporum F. acuminatum F. avenaceum F.proliferatum F.verticillioidesF.poae F.subglutinans



Densidad relativa Fusarium

11,14

10,48

0,27

F. equiseti F. semitectum F. graminearum F.oxysporumF. sambucinum F. heterosporum F. acuminatum F. avenaceumF. proliferatum F. verticillioides F. poae F. subglutinans

ANPCYT INTA PICTO 2002 Nº 08-12949,CARACTERIZACION DEL GERMOPLASMA ARGENTINO DE SOJA DE ALTA CALIDAD NUTRICIONAL A TRAVES DE NUEVAS TECNOLOGIAS

TRICOTECENOS son 12, 13 epoxi-tricote 9 eno. Grupo A (sin carbonilo en el C8): Toxina T-2, HT-2, mono-acetoxiscirpenol, diacetoxiscirpenol, tricodermin, scirpentriolGrupo B (con carbonilo en C8): nivalenol, fusarenona X, deoxinivalenol, monoacetatoDON, tricotecin

Especies Micotoxinas

F. graminearumdeoxinivalenol, nivalenol, zearalenona, acetil DON, di acetil DON, fusarin C, fusarenona X, di acetil nivalenol

F. avenaceum moniliformina, fusarin C

F. culmorum deoxinivalenol, zearalenona, nivalenol, fusarin C, moniliformina

F. poaenivalenol, diacetoxiscirpenol, fusarin C, fusarenona X, T-2; HT-2, neosolaniol, fusarin C

F. equiseti diacetoxiscirpenol, zearalenona, nivalenol, di acetil nivalenol, fusarenona X

F. sporotrichioidestoxina T-2, HT-2, neosolaniol, diacetoxiscirpenol, moniliformina, butenolido, fusarin C

F. acuminatum toxina-T2, HT-2, diacetoxiscirpenol, moniliformina, neosolaniol, butenolido

F. subglutinans zearalenona

F. verticillioides fumonisinas, fusarin C, moniliformina

F. oxysporum moniliformina

F. heterosporum Toxina T-2, HT-2, T2 tetraol

F. semitectum bauvericina, diacetoxiscirpenol

Flora fúngica toxicogénica aislada en semilla de soja1999 (Rosa T. Boca; Ana M. Pacin; Héctor H. L. González; Silvia L. Resnik; César G. López. Soja y Micotoxinas Flora

Fúngica-Variedades-Prácticas Agronómicas ) 2002 (Leticia Elvira Broggi, Héctor Horacio Lucas González, Silvia Liliana Resnik y Ana Pacin Alternaria Alternata prevalence in cereals grains and soybean seeds from Entre Rios

Argentina ) y 2003-2004 (Manuel J Zelaya , Hector HL Gonzalez , Silvia L Resnik , Maria J Martinez Contaminnant mycoflora of soybean RR harvested in different production areas in Argentina ANPCYT INTA PICTO 2002 Nº 08-12949 )

Flora fúngica en soja

0 20 40 60 80 100

Altermaria Alternata

Fusarium semitectum

Aspergillus flavus

Aspergillus niger

Fusarium graminearum

Penicillium citrinum

Penicillium funiculosum

Fusarium heterosporum

Fusarium acuminatum

Fr % 2003/04Fr % 2002Fr % 1999

MICOTOXINAS

MICOTOXINAS

Fecha de siembra

Región

Grado madurez

Condiciones ambientales

Cultivares

¿?

Para analizar micotoxinasen soja

1. Origen de la muestra2. Muestra representativa3. Método validado4. Datos del método

a. Recuperaciónb. Límite de detecciónc. Límite de cuantificación

Para mejorar la identificacióny cuantificación de

micotoxinas en soja

Estudios colaborativos en matrices alimenticias

Para diagnosticar y prevenir micotoxinas en soja

1. Identificar flora fúngica2. Evaluar capacidad toxicogénica3. Estudiar la distribución de la

contaminación por micotoxinas4. Identificación de variedades

resistentes

Para diagnosticar y prevenir micotoxinas en soja

1. Evaluar los sistemas de almacenamiento

2. Estimar la persistencia de micotoxinas o sus metabolitos en las matrices alimenticias elaboradas

…y en Argentina

Intervenir, no solo ser depositarios de la legislación

elaborada

Estimar la exposición de la población

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