植 物 组 织 培 养 实 验植 物 组 织 培 养 实 验
之一: 培 养 基 配 制
一、实验目的一、实验目的 掌握培养基的配制方法,为烟草组织培养准备好培养基二、实验内容二、实验内容
配制: MS + NAA 0.1mg/L + 6-BA 1.0mg/L
三、实验步骤三、实验步骤 (一)母液配制 (参照 MS 培养基配方)
大量元素—— N 、 P 、 K 、 Ca 、 Mg 、 S 微量元素—— I 、 B 、 Mn 、 Zn 、 Mo 、 Cu 、 Co 铁盐—— Fe 有机化合物——肌醇 、烟酸、盐酸吡哆醇 、盐酸硫胺素、甘氨酸 植物生长调节剂—— NAA 、 6-BA
(二)每 L 用量及配制方法1 、先在搪瓷量杯中加入约 700ml 蒸馏水,依次加入下列组
份并搅拌溶解: 大量元素 10X 100ml CaCl2 100X 10ml
微量元素 100X 10ml 铁盐 100X 10ml
肌醇 100X 10ml 烟酸 0.5mg /ml 1ml
盐酸吡哆醇 0.5mg /ml 1ml 盐酸硫胺素 0.1mg /ml 1ml
甘氨酸 2.0mg /ml 1ml
NAA 0.1mg /ml 1ml 6-BA 1.0mg /ml 1ml
蔗糖 30.0g
(要求每个大实验台上的 8 名同学共配 500ml ,注意用量减半)
2 、定容到 1000ml 。3 、测 pH 并调到 5.8 。4 、加琼脂 7.0g ,加热熔化 ( 煮沸 2 次 ) ,
补充蒸馏水至 1000ml 刻度液面。5 、分装到试管。每人共分装 2 管,每管
培养基液面高度 2-3cm 。拧盖密封。6 、高压蒸汽灭菌。 121 15-20 min ℃ 。
本灭菌锅从进到出 2 hr 。7 、冷却凝固, 4 - 10 ℃下贮存,为下次
备用。
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之二: 烟草组织培养
一、实验目的一、实验目的 掌握无菌操作方法和烟草组织培养中的快繁技术
二、实验内容二、实验内容 烟草叶片愈伤组织的转接与培养
三、实验原理三、实验原理 全能性 激素调控
四、实验步骤四、实验步骤 1 、本无菌室的设计及仪器使用介绍 2 、本实验的几种灭菌法介绍 3 、本实验所用的培养基: MS + NAA 0.1mg/L + 6-BA 1.0mg/L 4 、外植体:从烟草种子经无菌培养获得的烟草叶片愈伤组织
5 、进入无菌室和操作前的准备。冼手、鞋套、酒精棉花擦手和桌面。
6 、取材和接种。在超净台上按无菌操作法从培养皿中钳取 1 块带叶片的愈伤组织到置于台面上的已预先灭菌的滤纸上,用解剖刀切分成约 0.5cm 见方的小块,用镊子放入琼脂固体培养基上的中部。每人接种 1 管。软木塞封口,加盖。
7 、培养。置培养架上 26 4000 lux ℃ 日光灯下培养。用记号笔在试管玻壁上方写上名字和日期。拍照。培养时间 2 周。 2 周后将试管带走。挂或置于有光的寝室窗台上继续培养观察。
五、结果和讨论五、结果和讨论 每周观察培养物的生长发育和污染状况,拍照和文字记录。与其他组的结果对比。 来培养室的观察时间选在每周二到周四(白天有人)。
六、报告提交 六、报告提交
起始对照