1
PREFIXO
Tera
Giga
Mega
Kilo
Hecto
Deca
-
Deci
Centi
Mili
Micro
Nano
Pico
Femto
Atto
SÍMBOLO
T
G
M
k
h
da
-
d
c
m
n
p
f
a
POTÊNCIA
1012
109
106
103
102
101
100
10-1
10-2
10-3
10-6
10-9
10-12
10-15
10-18
DECIMAL
1.000.000.000.000,0
1.000.000.000,0
1.000.000,0
1.000,0
100,0
10,0
0
0,1
0,01
0,001
0,000001
0,000000001
0,000000000001
0,000000000000001
0,000000000000000001
Você identificou problemas com
algumas metodologias, os quais que
foram associados a utilização do novo
lote de solução salina (NaCl) 0,9%.
1) O que poderia ter acontecido no
preparo do reagente de modo a
torná-lo inadequado ao uso?
2) Proponha procedimento(s) para
que o fato não se repita
NaCl
0,9%
Proponha um “rótulo” para a solução preparada.
2
1 Mol ........ PM (gramas) ....... 1 Litro
NaCl PM = 23 (Na) + 35,5 (Cl) = 58,5
1 Mol ........ 58,5 g ....... 1000 mL (1L)
Solução 0,9 g% = 0,9 g/dL = 9g/L
X Mol ........ 9 g ....... 1000 mL (1L)
X = 0,1538 Mol/L ~ 0,154 mol/L
NaCl 0,154 mol/L ou 154 mmol/L
1 Mol ........ PM (gramas) ....... 1 Litro
reagentes
Sol. 1 mol/L
g/L
Solução 10% p/v
em CuSO4
CuSO4 anidro
CuSO4 .H2O
CuSO4 .5 H2O
160
178
250
10
9,4
6,4
1 Mol ........ PM (gramas) ....... 1 Litro
reagentes
Sol. 1 mol/L
g/L
Solução 10% p/v
em Na2HPO4
Na2HPO4 anidro
Na2HPO4 .7H2O
142
268,1
10
5,3
Cuidado com os nomes dos compostos químicos:
Qual o nome do fosfato acima?
Qual a relação de custo entre os saís de fosfato acima?
Soluções concentradas
ou
“Soluções stock”
Vantagens:
1. Maior estabilidade da solução;
2. Tempo de preparo da solução diluída menor;
3. Facilidade no preparo
Porque manter soluções
concentradas e diluí-las para uso ?
3
Dispondo de uma solução de NaOH 10 M,
preparar 250 mL de uma solução 0,02 M
C1.V1 = C2.V2
TEM QUER
C1 = NaOH 10 M
V1 = ?
V2 = volume final
250 mL
C2 = 0,02 M
10 M x V1 = 0,02 M x 250 mL
V1 = 0,5 mL
Custo e
pureza
GRAU DE PUREZA NOME USUAL
SUPERIOR SUPRAPUR,
Ultrapuro
ANALÍTICO p.a., AR, RA
FARMACÊUTICO DAB, USP, NF,
Farm.Bras.
QUIMICAMENTE
PURO
Puro, Puríssimo
COMERCIAL Industrial,
Purificado,
Prático, Técnico
Reagentes para aplicação específica:
ex: for molecular biology, for HPLC
4
Processo Sólidos
ionizadosdissolvidos
Orgânicos
dissolvidos
Gases
ionizadosdissolvidos
Particulados Bactérias Pirogênios
Endotoxinas
Destilação G-E G P E E E
Deionização E P E P P POsmose Reversa G G P E E E
Adsorção-Carbono P G-E P P P P
Filtração P P P E E P
Ultrafiltração P G P E E EOxidação UV P G-E P P G P
Legenda: E = excelente; G = Bom (good) e P = PobreRETIRADO DE:Americam Public Health Association Standard methods for the examination of water and wastwater., 18ed, Wa shington,
PRÉ-FILTROS
FILTROS
OSMOSE REVERSA
ULTRA-PURIFICAÇÃO
(Mili-Q, ELGA, Bernsted)
ULTRA-PURA
TIPO II (> 2 M/cm)
TIPO I (> 10 M/cm)
TIPO III (> 0,1 M/cm)
FILTRO
DESTILAÇÃO
DEIONIZAÇÃO
Resistência específica
(inverso da Condutividade)
Filtração
OSMOSE
Água
pura
Solução
salina
Membrana
semi-permeável
Pressão
Osmótica
OSMOSE REVERSA
Água
pura
Água
de alimentação
Membrana
semi-permeável
5
Osmose reversa
1 11
2
3
4 5 6
7
8
9
1 10
2
3
4 5 6
7
8
9
1 10
Especificações para Água Grau Reagente
TIPOS
Conteúdo microbiológico
pH
resistência específica
silicatos
partículas
matéria orgânica
I 10
N.A.
10
0,05
filtro 0,25 m
carvão ativo
II 103
N.A.
2
0,1
N.A.
N.A.
III N.A.
5-8
0,1
1,0
N.A.
N.A.
6
Usos e Estocagem da Água Grau Reagente
Tipo III: - Lavagem de vidraria
- Preparo de meios de cultura
- Histologia
Tipo II: - Ensaios laboratoriais gerais
Tipo I: - Determinação de traços de metais
- Dosagem de enzimas
- Dosagem de eletrólitos
Estocagem: não é estável, preparar o
necessário para uso
Água ultra-pura
1 cm
1 cm +
+ +
Fluxo de elétrons
Condutividade = microsiemens por centímetro = S/cm
Resistividade = megohm-centímetro = M-cm
É o recíproco da Condutividade
Forma mais conveniente de medição da
água pura
1
Condutividade
A 25ºC uma água totalmente pura apresenta:
Resistividade = 18,2 M -cm
Condutividade = 0,055 S/cm
=
7
A B C D-E F-2
F-1
F-3
A = fonte luminosa
B = seletor espectral
C = cubeta
D = detector - E = amplificador
F = registro 1 = analógico,
2 = digital,
3 = gráfico (informatizado)
Lei de Lambert: “ a proporção de energia radiante
absorvida por uma substância é independente da
intensidade da radiação incidente”
Lei de Beer: “ a absorção de energia radiante é
proporcional ao número total de moléculas que
absorvem no caminho da luz”
-log T = log It
Io = A = abc
I0 It
b
concentração
a
Transmitância (T) = It
I0
8
log I0
It = ABSORBÂNCIA (A)
It
I0 = 10-abc log
It
I0 = -abc log
I0
It = abc
It = I0 . 10-abc a
b
I 0 I t
c
Absorbância é diretamente proporcional à concentração.
Resumo:
I0 It It
I0 = T = 100% ou A = 0.000
AMOSTRA
I0 = 100% T It It
I0 = %T ou A da amostra
BRANCO Ajuste do equipamento
Leitura
reagente
Reagente + cromógeno
A luz incidente (I0) efetiva é aquela transmitida por
um “branco” ou “referência”
O “branco” deve ser idêntico à amostra em medição
exceto pela ausência da substância a ser medida.
Leitura do branco = I0 - outras perdas
Portanto: Intensidade absorvida = branco - It
Ajustar o equipamento em:
ZERO de ABSORBÂNCIA (ou 100% T)
Eliminar a “absorbância de fundo” ou
seja, aquela que não esta relacionada
ao que se deseja medir. CONCENTRAÇÃO
AB
SO
RB
ÂN
CIA
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0 1 2 3 4 5
9
SPECTROQUEST UV SPECTROPHOTOMETER
DU® 800 UV/Visible Spectrophotometer Biochrom WPA S800 Visible Spectrophotometer
1. CARACTERÍSTICA PRÓPRIA DO MÉTODO
2. “QUALIDADE” DO EQUIPAMENTO
3. MANUTENÇÃO DO EQUIPAMENTO
LINEARIDADE
Solução de Sulfato de níquel hexahidratado a 4 ou 5% p/v
em ácido clorídrico 1% v/v. Esta solução é muito estável (anos) em frasco âmbar bem
fechada.
Branco: HCL 1% v/v .
mL NiSO4.6H2O
4% p/v
mL HCl
1% v/v
% Absorbância (nm)
400 700
0,5 1,5 25
1 1 50
1,5 0,5 75
2 0 100
Interpretação:
1. Com linearidade: lâmpada e sistema de
detecção estão bons.
usar os resultados para controle ao longo do
tempo do equipamento.
2. Sem Linearidade:
a. trocar a lâmpada e testar novamente:
se linear OK
b. se não for linear pode ser o detetor
chamar assistência técnica.
10
Concentração (%)
Absorbânc
ia
0
0.2
0.4
0.6
0.8
0 25 50 75 100
Curva com NiSO4.6H2O 5g/dL em HCl 1% v/v
400 nm
700 nm
LINEARIDADE
Comprimento de onda (nm)Absor
bância
0.15
0.25
0.35
0.45
0.55
0.65
505 510 515 520 525 530
ÁCIDO
BÁSICO
CALIBRAÇÃO ISOSBÉSTICA
Vermelho de Fenol aquoso 7 mg/L: 514 5 nm
Ponto
isosbéstico
518 nm
N
C NH2
O
O
OH HO
O-P-O-P-O
O O
O OH
O
OH HO
N
N
N
N
NH2
Adenina
D-Ribose D-Ribose
Pirofosfato
Nicotinamida
-PO3H2
(NADP+)
Nicotinamida Adenina Dinucleotídeo (NAD+)
N
C NH2
O forma reduzida
(NADH)
340 = 0,315 0,05 . 1
= 6,3 L.mmol-1.cm-1
NADH 0,05 mmol/L
cubeta = 1 cm
ESPECTRO DE ABSORÇÃO DO NADH e NAD
comprimento de onda (nm)
Ab
so
rbân
cia
0,315
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
240 260 280 300 320 340 360 380 400
NADH reduzido
NAD oxidado
11
I0 It a
TURBIDIMETRIA
NEFELOMETRIA
0º
90º 45º Dispersão da
luz para frente
0º
d < 0.1
d
d >
Efeito do tamanho das partículas na dispersão da
luz incidente em uma solução homogênea
45º 90º
0º
0º
A) Pequena
B) Grande
C) Muito Grande
Tamanho da Partícula
Rayleigh
Rayleigh-Debye
Mie
KAPLAN, Lawrence A. e PESCE, Amadeo J. Clinical chemistry. Theory,
analysis, correlation. 3 ed. Mosby: St. Louis, 1996.
Detecção de pequeno sinal
(amplificável) em um
background escuro = alta
sensibilidade
equipamento: nefelômetro,
aplicação dedicada à esta
técnica. Detecção de uma pequena
redução em um grande sinal
= sensibilidade limitada
equipamento:
espectrofotômetro “comum”
(os atuais permitem boa
sensibilidade) Fim da apresentação
12
Capilar de aspiração
da amostra
FOTOMETRIA DE EMISSÃO DE CHAMA:
K+ = K+ sinal
Cs sinal Na+ =
Na+ sinal
Cs sinal
Chama
fonte de luz
K+ Na+
Cs
ar
combustível
dreno
= monocromador = fotodetector
Princípio da Fotometria de Emissão de Chama
Emissão de luz
Chama
elétrons
Na+ = 589 nm (3p - 3s)
K+ = 767 nm (4p - 4s)
Li+ = 671 nm (2p - 2s)
Cs
Aproximadamente apenas
1 - 5% dos átomos presentes
na chama são excitados
Evaporação
Na+ +
Na0
Na+
Na+
Na+
Na2O
Dissociação
+
ELÉTRON
Oxidação
Solução Vapor
ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORÇÃO ATÔMICA
lâmpada
chama
monocromador detector
Sistema de
leitura
amostra
nebulizador
C2H2
fenda
Princípio
13
ELETRODOS ÍON-SELETIVOS [ISE]
pH/mV
eletrodo de
referência
externo
eletrodo de
referência
interno
eletrodo íon
seletivo
amostra
membrana
Eletrodos de membrana íon seletivo
- Vidro
Na+ Silicone/óxido de sódio/óxido de alumínio:
71:11:18
Silicatos de alumínio e lítio
K+ Dissolução de valinomicina em um solvente
adequado
Valinomicina
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