Bioassay-Guided Isolasi dan Antioksidan Evaluasi
Senyawa flavonoid dari Aerial Bagian dari Lippia nodiflora L
Penelitian ini dirancang untuk mengidentifikasi DPPH ( 2 2 - difenil - 1 - pikrilhidrazil ) konstituen pemulungan radikal bebas dari ekstrak metanol L nodiflora menggunakan fraksinasi Fraksi etil asetat bioassay - dipandu ( EAF ) mengungkapkan antioksidan yang kuat dibandingkan dengan fraksi lain melalui in vitro DPPH radikal - pemulungan assay Fraksinasi berulang aktif EAF oleh kromatografi kolom silika gel menghasilkan senyawa dengan potensi antioksidan yang kuat Senyawa bioaktif yang terisolasi adalah ditentukan sebagai 2 - ( 3 4 - dimethoxyphenyl ) - 5 - hidroksi -7-metoksi-4H-chromen - 4 -one ( 5 - hydroxy ndash 3rsquo 4rsquo 7 - trimethoxyflavone ) oleh membandingkan data spektral ( UV IR 1H NMR 13C NMR dan MS ) dengan literatur reports Senyawa diisolasi menunjukkan sebuah aktivitas antioksidan yang sangat baik melalui semua tes antioksidan dan juga secara signifikan menghambat peroksidasi lipid pada konsentrasi 50 mg mL Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa ekstrak dari L nodiflora atau phytocompound turunan dapat digunakan berpotensi sebagai sumber bioaktif antioksidan alami dengan menyumbangkan efek kesehatan yang menguntungkan
1 Pendahuluan
Reaktif Oksigen Spesies ( ROS ) terus dibentuk sebagai produk sampingan dari metabolisme dalam organisme aerobik dan juga diproduksi pada paparan asap tembakau ozon radiasi pelarut organik dan polutan lingkungan lainnya ROS memainkan peran penting dalam berbagai proses fisiologis termasuk produksi energi fagositosis seluler transduksi sinyal proliferasi sel diferensiasi dan apoptosis Di sisi lain semakin banyak bukti highlights bahwa kelebihan produksi ROS dapat menyebabkan kerusakan oksidatif semua biomolekul ( lipid karbohidrat protein enzim DNA dan RNA ) dan bertindak sebagai mediator dari berbagai gangguan misalnya peradangan arthritis diabetes arteriosklerosis kanker genotoxicity dan gangguan neurologis seperti penyakit Alzheimer Antioksidan sangat penting untuk mencegah reaksi degeneratif yang diproduksi oleh radikal bebas dan spesies oksigen reaktif yang telah berkaitan dengan banyak penyakit dan kerusakan makanan dan pembusukan Namun keamanan dari beberapa sintetis antioksidan digunakan dalam industri makanan telah dipertanyakan karena studi terbaru mengakui bahwa mereka mungkin karsinogenik Oleh karena itu ada minat yang muncul dalam alam antioksidan yang dapat membantu untuk mencegah kerusakan oksidatif Tanaman dan produk tanaman merupakan sumber megah dari fitokimia dan telah ditemukan untuk menyimpan array kegiatan biologis termasuk potensi antioksidan Tanaman mensintesis senyawa antioksidan kebanyakan flavonoid dan polifenol yang telah dilaporkan untuk melindungi tubuh manusia dari berbagai penyakit dengan menetralisir ROS Baru-baru ini senyawa fenolik telah menerima peningkatan signifikansi antara berbagai phytochemical karena lebar mereka distribusi di kerajaan tumbuhan dan biologis mereka kegiatan yaitu anti kanker antiatherogenic antiinflamasi kegiatan antimikroba dan antioksidan
Antioksidan dapat digunakan sebagai makanan suplemen makanan atau sebagai obat oleh manusia Beberapa penelitian telah mengungkapkan bahwa peningkatan asupan antioksidan alami seperti sebagai flavonoid dan senyawa fenolik lain hampir hadir pada tanaman menunjukkan efek protektif potensial terhadap banyak penyakit degeneratif Lippia nodiflora Linn ( Verbenaceae ) biasa disebut Poduthalai di Tamil adalah ramuan abadi merayap dan lokal melimpah di daerah basah dan beberapa sifat obat diberikan ke tanaman ini dalam sistem tradisional obat-obatan Infus daun dan
tangkai tender diberikan kepada anak-anak menderita gangguan pencernaan dan perempuan setelah melahirkan Chutney terbuat dari daun dan buah-buahan sering diambil untuk meringankan iritasi tumpukan internal Banyak sifat farmakologi L Nodiflora termasuk anti - inflamasi antipiretik antitusif antidiabetes dan efek antimelanogenesis telah dilaporkan Relevansi ethnopharmacological L Nodiflora untuk penyakit kulit dan kosmetik rakyat seperti jerawat inas luka bakar dan kulit juga telah mengungkapkan konstituen fitokimia L nodiflora seperti flavonoid glikosida flavon alkaloid minyak atsiri resin kinol dan steroid telah sebelumnya dilaporkan Oleh karena itu phytochemical ini dianggap bertanggung jawab atas sifat farmakologi ini tanaman
Meskipun ada bukti antioksidan aktivitas ekstrak metanol L nodiflora utama konstituen antioksidan hadir dalam bagian udara memiliki tidak diteliti secara luas Oleh karena itu penelitian ini dilakukan untuk mengisolasi senyawa aktif yang bertanggung jawab untuk properti antioksidan ekstrak metanol Lippia nodiflora L melalui bioassay - dipandu fraksinasi menggunakan dalam vitro assay DPPH
2 Bahan dan Metode
21 Umum
Spektrum resonansi magnetik nuklir direkam pada BRUKER Avance 400MHz (Swiss) NMR instrumen beroperasi pada 400MHz untuk 1H dan 100MHz untuk 13C inti di roomtemperature dan dirujuk ke residual sinyal pelarut Pergeseran kimia dan kopling konstanta ( 119869 ) nilai-nilai yang dilaporkan dalam ppm dan Hz masing-masing Analisis HPLC dilakukan dengan menggunakan kolom C - 18 ( 250 times 46 mm 5 μ ) dalam LC - 8A alat kromatografi Shimadzu ( Shimadzu
Singapura) Fase Themobile terdiri ofmethanol -
05 asam fosfat dalam air ( 60 40 v v ) dan aliran
Tingkat diadakan konstan pada 1 mL menit Puncak terdeteksi
pada 280 nm menggunakan variabel detektor panjang gelombang UV Silica gel
60 F254 pelat ( 20 times 20 cm 02mmthick E - Merck Jerman )
digunakan untuk kromatografi lapis tipis ( TLC ) analisis
Spektrum ultraviolet dicatat menggunakan Varian Cary
500 spektrofotometer memindai λmax ( log ε ) di nm sedangkan
Spektrum FTIR diperoleh dengan menggunakan Nicolet 380 ( Thermo
Ilmiah USA ) Kelompok fungsional diidentifikasi menggunakan
kalium bromida ( KBr ) dan dipindai di kisaran 4000 -
400 cm - 1 Sampel dilarutkan dalam metanol dan massa ESI
spectrawere obtainedwith aThermo Ilmiah ExactiveMass
Spektrometer ( Thermo Fisher Scientific USA )
Reagen seperti 2 - deoksi - D - ribosa terbutilasi hidroksil
toluena ( BHT ) 2 2 - difenil - 1 - pikrilhidrazil ( DPPH )
phenazine methosulphate ( PMS ) nitroblue tetrazolium
( NBT ) natrium nitroprusside dan Griess reagen yang
diperoleh dari ( Sigma Kimia St Louis MO USA ) 2 4
6 - Tripyridyl - S - triazina ( TPTZ ) asam thiobarbituric ( TBA )
asam trikloroasetat ( TCA ) etilena asam diaminetetraacetic
( EDTA ) klorida ( FeCl3 ) hidrogen peroksida ( H2O2 )
dan nikotinamida adenin dinukleotida tereduksi ( NADH )
diperoleh dari M s ( Sisco Penelitian laboratorium
Mumbai India ) Pelarut HPLC dan reagen yang digunakan
untuk ekstraksi dan silika gel ( 0075-015 mm ) untuk kolom
kromatografi diperoleh dari M s ( Sisco Penelitian
laboratorium Mumbai India ) Semua bahan kimia lainnya dan
reagen yang digunakan dalam penelitian ini adalah kelas analitis
22 Bahan tanaman Bahan-bahan tanaman segar yang dikumpulkan
antara Agustus dan September 2011 dari Karaikudi
Kabupaten Sivagangai tanaman Tamil NaduThe adalah taksonomi
diidentifikasi dan dikonfirmasi oleh Dr GVS Murthy Joint
Direktur Botanical Survey of India Tamil Nadu Agricultural
Kampus Universitas Coimbatore ( BSISRC5232012-
13Tech-19 ) Sebuah spesimen voucher tanaman L nodiflora
( DBI - HP Spesimen - 1 ) disiapkan dan disimpan di
Biologi Molekuler Lab Departemen Bioinformatika Alagappa
Universitas Karaikudi Tamil Nadu
23 Ekstraksi Fraksinasi dan Isolasi Antioksidan
Compound Bagian udara ( batang daun dan bunga ) yang
dicuci dengan air keran warna - kering dan mengurangi untuk fine
bubuk Bagian udara bubuk L nodiflora ( 15 kg )
diekstraksi dengan metanol 90 ( 45 L times 2 ) di ruang
suhu Campuran disaring melalui Whatman
Nomor l kertas saring dan pelarut dari gabungan
ekstrak terkonsentrasi menggunakan vacuum rotary evaporator
( Superfit India ) pada 60 ∘ C untuk membeli 647 g metanol mentah
ekstrak ( 431 ) Pelarut dipilih berdasarkan hasil nya
dari ekstraksi awal dan penapisan fitokimia
studi Ekstrak dilarutkan dalam 500ml air hangat
dan bagian berair yang dihasilkan dipartisi dengan etil
asetat ( EtOAc ) ( 4 times 200 mL ) menggunakan corong pisah untuk
mampu fraksi etil asetat ( EAF ) dan bagian berair
Fasa berair kemudian berturut-turut dipartisi dengan
n - butanol ( 3 times 200 mL ) sehingga mendapatkan n - butanol larut
fraksi ( BF ) dan fraksi air ( WF ) Semua fraksi
dikumpulkan secara terpisah dan mengurangi menggunakan rotary vacuum
evaporator untuk menghilangkan pelarut dan resultan berair
ekstrak diliofilisasi dalam vakum Sampel kemudian
diuji untuk properti antioksidan dengan menggunakan 2 2 - difenil - 1 -
pikrilhidrazil ( DPPH ) assay ∙
The DPPH aktif EAF ( 172 g ) dimuat sebagai kering∙
bubur silika gel untuk kromatografi kolom ( 45 times 35 cm )
dan dielusi dengan petroleum eter EtOAc gradien elusi
( 100 0-0 100 ) dalam rangka peningkatan polaritas Sebanyak
92 fraksi 100ml masing-masing dikumpulkan dan dianalisis oleh
TLC ( Silica gel F254 pelat 20 times 20cm Merck Jerman )
Analisis KLT dilakukan dengan menggunakan etil asetat kloroform
asam format ( 50401 ) sebagai fase gerak dan
band dipisahkan divisualisasikan menggunakan uap yodium dan
vanillin - asam sulfat reagen Fraksi ini dikumpulkan
untuk membeli tujuh fraksi utama (P A 1-13 Fr B 14-35
Fr C 36-48 Fr D 49-60 Fr E 61-70 Fr F 71-80 dan
Fr G 81-92 ) berdasarkan analisis TLC Fraksi ini adalah
diuji untuk bioaktivitas menggunakan DPPH assay spektrofotometri
Untuk pemurnian lebih lanjut yang sangat aktif Fr B ( 28 g)
dimuat pada kolom silika gel dielusi dengan petroleum eter -
EtOAc gradien dan isi etil asetat dari themixture
meningkat dalam serangkaian langkah 5 Tidak aktif dan kurang
fraksi terbukti aktif dibuang Akhirnya aktif Fr
B2 dielusi dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 ) menghasilkan
117mg senyawa Kemurnian senyawa hasil isolasi adalah
establishedbyHPLCandits structurewas dikonfirmasikan melalui
interpretasi data spektral ( UV FT - IR 1H
13C NMR dan MS ) dan selanjutnya diuji untuk antioksidan
efek
24 Aktivitas antioksidan
241 DPPH Radical Scavenging Assay The DPPH radikal
kegiatan pemulungan ekstrak metanol EAF BF dan WF
diuji menurut Yamaguchi et al [ 27 ] Secara singkat 02mL
dari solusi sampel konsentrasi yang berbeda ditambahkan
untuk 1mL 01mm larutan DPPH baru disiapkan itu
campuran reaksi yang dikocok dengan kuat dan absorbansi pada
517 nm ditentukan setelah 20 menit pada suhu kamar
Sampel kontrol disiapkan mengandung volume yang sama
tanpa senyawa uji atau referensi antioksidan sementara
DMSO digunakan sebagai kosong Referensi antioksidan BHT
digunakan sebagai kontrol positif dalam semua tes itu
aktivitas radikal diukur sebagai penurunan
absorbansi DPPH dan dihitung sebagai berikut ∙
Efek pembilasan ( ) = [
Control 119860 - sampel 119860kontrol 119860] times 100 ( 1 )
di mana kontrol 119860 adalah absorbansi kontrol dan sampel 119860 adalah
absorbansi ekstrak atau fraksi atau standar
242 Superoksida Radikal - Scavenging Assay superoksida The
efek radikal - pemulungan ditentukan dengan metode
Nishikimi et al [ 28 ] Campuran reaksi dengan NBT ( 1 mM )
dalam buffer fosfat ( 01 M pH 74 ) NADH ( 1 mM ) dengan atau
tanpa sampel dan PMS ( 01mm ) diinkubasi pada ruang
Suhu selama 5 menit dan absorbansi tercatat sebesar
560 nm Persentase penghambatan dihitung terhadap
kontrol tanpa sampel Kemampuan pemulungan adalah
dihitung dengan menggunakan persamaan seperti yang dijelaskan untuk uji DPPH
243 Hydroxyl Radical Scavenging Assay Kapasitas
ekstrak dan senyawa untuk mengurangi radikal hidroksil - dimediasi
peroksidasi dilakukan dengan metode Hinneburg
et al [ 29 ] Secara singkat 05ml 56mm 2 - deoksi - D - ribosa di
KH2PO4 - NaOH penyangga ( 50mm pH 74 ) 02mL 100 M
FeCl3 dan 104mm EDTA ( 1 1 v v ) larutan yang ditambahkan ke
01ml konsentrasi yang berbeda dari sampel uji diikuti oleh
100 uL 10mMH2O2 dan 01ml dari 10mm BHT berair
Campuran reaksi yang dikocok dengan kuat dan diinkubasi
pada 50 ∘ C selama 30 menit Selanjutnya 1mL 28 TCA dan 1mL
dari 10 TBA ditambahkan ke masing-masing tabung reaksi yang berisi
campuran dan sampel dicampur dengan baik lagi dan direbus dalam
Mandi air pada 50 ∘ C untuk 30minThe absorbansi larutan adalah
baca pada 532 nm Hidroksil Kemampuan radikal adalah
dihitung dengan menggunakan rumus seperti yang dijelaskan forDPPHassay dan
nilai-nilai disajikan sebagai sarana analisis rangkap tiga
244 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
Uji FRAP ditentukan dengan metode Benzie dan
Regangan [ 30 ] dengan sedikit modifikasi Hal ini tergantung pada
kemampuan sampel untuk mengurangi tripyridyltriazine besi
( Fe ( III ) - TPTZ ) kompleks untuk tripyridyltriazine besi ( Fe ( II ) -
TPTZ ) pada pH rendah Fe ( II ) - TPTZ memiliki warna biru intensif
yang dapat dibaca pada 593nm Solusi saham terdiri
300mm buffer asetat ( pH 36 ) 10mm 2 4 6 tripyridyl
S triazina ( TPTZ ) di 40mm HCl dan 20mm besi
solusi klorida Solusi pekerjaan baru disiapkan
dengan mencampurkan 25 mL buffer asetat 25ml dari TPTZ dan
25ml dari FeCl3 sdot 6H2O dan suhu dipertahankan
37 ∘ C sebelum digunakan The berbagai konsentrasi ekstrak
senyawa dan BHT ( 10-50 mg mL ) diizinkan untuk bereaksi
dengan 2ml larutan FRAP selama 30 menit dalam gelap
kondisi Absorbansi tercatat sebesar 593 nm itu
Hasil disajikan dalam μMFe ( II ) g dan diperkirakan
menggunakan berair FeSO4 sdot 7H2O ( 20 - 100μM ) sebagai standar untuk
kalibrasi
245NitricOxide Radical ScavengingAssay pada fisiologis
pH oksida nitrat yang dihasilkan dari natrium nitroprusside di
larutan berinteraksi dengan oksigen untuk menghasilkan nitrit
ion whichwere diukur dengan theGriess reaksi [ 31 ] Secara singkat
3ml dari reactionmixture mengandung 10mMsodiumnitroprusside
dan sampel uji ( 10-50 mg mL ) fosfat
penyangga diinkubasi selama 150min pada 25 ∘ C Setelah inkubasi
05ml dari campuran reaksi dicampur dengan 1 mL dari
pereaksi asam sulfanilat ( 033 dalam 20 asam asetat glasial ) dan
didiamkan selama 5 menit untuk diazotisasi lengkap kemudian
1mL dari naftil etilen diamin dihidroklorida ( 01
w v ) ditambahkan dan campuran didiamkan selama
30 menit pada 25 ∘ C Sebuah kromofor berwarna merah muda yang dihasilkan
dan absorbansi diukur secara spektrofotometri
pada 540 nm terhadap sampel kosong The oksida nitrat radikal
aktivitas scavenging ekstrak dan senyawa dilaporkan
sebagai penghambatan dan dihitung dengan menggunakan rumus sebagai
dijelaskan untuk uji DPPH
246 Lipid Peroksidasi Assay Peroksidasi lipid ( PUT )
assay dilakukan menurut protokol yang dijelaskan oleh
Damien et al [ 32 ] tomeasure lipid peroksida yang terbentuk dengan menggunakan
homogenates kuning telur sebagai media yang kaya lipid Secara singkat 05ml dari
homogenate telur ( 10 v v disusun 115 b v KCl ) adalah
ditambahkan ke 01ml masing-masing sampel uji ( 10-50 mg mL ) diambil
dalam tabung reaksi dan disusun sampai dengan 1mL dengan ganda suling
air Setelah itu 005mL dari FeSO4 ( 007M ) ditambahkan ke
menginduksi peroksidasi lipid dan campuran diinkubasi selama
30 menit pada roomtemperatureThen 15mL asam 35Macetic
( pH disesuaikan menjadi 35 ) ditambahkan diikuti oleh 15mL dari TBA
( 006M ) sodium dodesil sulfat ( 004M ) Hasil dari paket tersebut
Campuran adalah vortex dan dipanaskan pada 95 ∘ C untuk 1hrAfter pendinginan
5 mL dari butanol ditambahkan ke masing-masing tabung dan disentrifugasi pada
3000 rpm selama 10 menit Absorbansi dari atas organik
lapisan diukur pada 532 nm dan prosedur di atas adalah diikuti untuk kontrol dengan menggunakan 01ml SDS bukan
sampel uji Penghambatan Persentase dihitung
sesuai dengan rumus berikut
Persentase penghambatan peroksidasi lipid = (1 - 119864 119862) times 100 (2)
mana 119864 adalah absorbansi sampel uji dan 119862 adalah absorbansi kontrol sepenuhnya teroksidasi
25 Analisis Statistik Percobaan dilakukan di
rangkap tiga dan data dinyatakan sebagai berarti plusmn standar deviasi
(SD) Semua analisa statistik dilakukan dengan menggunakan grafik
pad prisma (versi 50 Graph Pad software Inc San Diego
CA USA) The IC50 mewakili nilai konsentrasi
sampel uji yang menyebabkan penghambatan 50 Nilai 119875 lt005
dianggap signifikan
3 Hasil dan Diskusi
31 Isolasi dan Penentuan Struktur dari Antioksidan
Compound Ekstrak metanol dan potensi antioksidan
fraksi L nodiflora awalnya disaring oleh
uji DPPH spektrofotometri dan hasilnya ditampilkan
pada Tabel 1 The DPPH assay mengungkapkan bahwa metanol
ekstrak memiliki efek pemulungan signifikan dengan meningkatnya
konsentrasi di kisaran 10-50 mg mL Selain itu
efek scavenging ekstrak ofmethanol secara signifikan mirip
dengan yang BHT standar Pada 50 mg mL ekstrak metanol
dan BHT dipamerkan 7935 dan 8642 inhibisi dan
Nilai IC50 ( konsentrasi dengan aktivitas scavenging
50 ) adalah 24 dan 19 mg mL hasil yang diperoleh respectivelyThe
di sini lebih rendah dari aktivitas pemulungan dilaporkan
ekstrak metanol L nodiflora ( 1203 mg mL ) [ 33 ] antara
fraksi yang DPPH secara signifikan memulung oleh etil∙
fraksi asetat ( EAF ) dengan cara yang tergantung dosis dengan
nilai IC50 dari 26 mg mL diikuti oleh WF dan BF dengan
Nilai-nilai IC50 dari 66 dan 83 mg mL ( Tabel 1 ) Oleh karena itu EAF
menjadi sasaran berulang bioassay - dipandu fraksinasi pada
kromatografi kolom silika gel menggunakan petroleum eter
EtOAc gradien sistem elusi Pemurnian lebih lanjut
fraksi aktif yang diperoleh dari kromatografi kolom silika gel
akhirnya menghasilkan senyawa antioksidan bioaktif dari
dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 v v ) campuran itu
Prosedur ekstraksi untuk isolasi senyawa aktif
yang skematis ditunjukkan pada Gambar 1 Gambar 2 ( a) menunjukkan
Profil HPLC dari kandungan kimia hadir dalam 90
ekstrak metanol L nodiflora The HPLC Kromatogram
senyawa murni terkena kehadiran puncak dengan
waktu retensi 72 menit dielusi isocratically dengan ponsel
fase metanol - 05 asam fosfat dalam air ( 60 40
v v ) ( Gambar 2 ( b ) )
Senyawa tersebut diperoleh sebagai pucat putih amorf
bubuk (hasil 117mg 068 ) Puncak FTIR ditentukan
obligasi yang relevan dengan alkohol O - H peregangan ( 3267 - cm 1 )
= C - H peregangan ( 3010 cm - 1 ) - C - H peregangan ( 2975 cm - 1 )
- C = O peregangan ( 1605 - cm 1 ) - C = peregangan C ( 1506 cm - 1 )
Tabel 1 Aktivitas radikal DPPH dari ekstrak kasar dan
fraksi udara bagian Lippia nodiflora L
Contoh DPPH ( IC50 ) ( mg mL )
CME 2466 plusmn 11
EAF 2606 plusmn 095
BF 8362 plusmn 045
WF 6639 plusmn 052
BHTa 1912 plusmn 057
aBHT Standard antioksidan Data direpresentasikan sebagai berarti plusmn SD ( 119899 = 3 )
- C - H membungkuk ( 1154 - cm 1 ) C - O peregangan ( 1315 - cm 1 )
= C - H membungkuk ( 1030 - cm 1 ) dan O - H membungkuk ( 993 cm - 1 )
1H ( CDCl3 400MHz ) δ ( ppm ) 391 ( 3H 119904 4 1015840 - OMe )
389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )
664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =
63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H
H6 1015840 ) 13C NMR ( CDCl3 100MHz ) δ ( ppm ) 17161 ( C - 4 )
14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682
( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )
15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -
10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka
S1 dan S2 dari Informasi Tambahan tersedia secara online
di httpdxdoiorg1011552014549836 ) senyawa
menunjukkan berat molekul 329 ( ESI - MS 119898 119911 351084 [ M
+ Na ] + ) dengan rumus unsur C18H16O6 ( Gambar 3 )
Dari interpretasi ini spektral senyawa terisolasi
telah ditandai sebagai 2 - ( 3 4 - dimethoxyphenyl ) -5 -
hidroksi - 7 - metoksi - 4H - chromen - 4 -one ( 5 - hydroxy - 3 1015840 4 1015840
7 - trimethoxyflavone ) ( Gambar 4 ) yang setuju dengan data
dilaporkan [ 34 ]
32 Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Metanol dan Terisolasi
Senyawa dari Fraksi Etil Asetat ( EAF ) Flavonoid a kelompok utama dari polifenol dianggap aktif prinsip pada tanaman diversemedicinal dan telah dilaporkan untuk memiliki berbagai sifat farmakologi yang paling penting flavonoid activityof biologis ismainlydue untuk mereka antioksidan properti dengan bertindak sebagai pemulung radikal hidrogen donor zat pereduksi dan inhibitor peroksidasi Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa farmakologis yang efek L nodiflora seperti antioksidan diuretik antiradang dan kegiatan antimikroba diakui karena adanya fenol dan senyawa flavonoid Dalam penelitian ini senyawa hasil isolasi adalah diidentifikasi sebagai flavone dan kegiatan antioksidan diperiksa dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model
321 DPPH Radical Scavenging Effect
Zat yang dianggap antioksidan ketika mereka mampu mengurangi DPPH radikal stabil ( ungu ) ke nonradical membentuk DPPH - H ( kuning ) dan dengan demikian mereka bertindak sebagai radikal pemulung karena kemampuan hidrogen menyumbangkan mereka [ 37 ]
Hasil kegiatan pemulungan DPPH dari semua sampel uji disajikan pada Gambar 5 ( a) Aktivitas scavenging ekstrak metanol senyawa dan BHT meningkat dengan peningkatan konsentrasi sampel ( 10-50 mg mL ) itu(GAMBAR)
Ekstrak metanol mentah
(647 g)
Resuspend dengan air hangat
Ekstraksi dengan etil asetat
fase cair
(367 g)
Fraksi etil asetat
(EAF 172 g)
Ekstraksi dengan n-butanol
Kromatografi kolom (CC)
Pet eter-EtOAc (100 0 ~ 0 100)
Fraksi n-Butanol
(BF 153 g)
fraksi air
(WF 186 g)
Fr A Fr B Fr C Fr D Fr E Fr F Fr G
CC pada silika gel
Fr B1 Fr B2 Fr Fr B3 B4 Fr B5
(25 75)
senyawa
(117mg)
(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)
pada silika gel
(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)
(1-13)
Petether-EtOAc
Bubuk udara bagian L Nodiflora
(GAMBAR)
highestDPPHscavenging aktivitas untuk ekstrak senyawa dan
BHT ditemukan menjadi 7935 7266 dan 8609 masing-masing
pada 50 mg mL Perlu dicatat bahwa scavenging
aktivitas compoundwas ditemukan dekat dengan ekstrak
Nilai-nilai IC50 aktivitas scavenging pada DPPH radikal
ekstrak dan BHT diberikan dalam Tabel 1 sedangkan untuk senyawa
ditemukan menjadi 27 mg mL Dari data yang diperoleh tersebut
ekstrak dan senyawa dianggap sebagai efektif
inhibitor radikal bebas serta antioksidan primer
yang dapat membatasi kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi di
tubuh
322 Superoksida Radical Scavenging Effect Pembentukan
spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil hidrogen
peroksida dan singlet oksigen dalam sistem hidup terutama
karena partisipasi radikal anion superoksida baik
secara langsung atau secara luas melalui enzim atau perkembangan logam katalis
[ 38 ] Oleh karena itu diantisipasi untuk mengevaluasi
Kapasitas interceptive relatif ekstrak dan senyawa
untuk mengais-ngais yang superoksida radikal Dari data yang disajikan
pada Gambar 5 ( b ) tercatat bahwa ekstrak senyawa
dan BHT menunjukkan aktivitas radikal tertinggi
( 7107 -8464 ) pada 50 mg mL dan aktivitas pemulungan
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sampel itu
kemampuan senyawa pembilasan pada radikal superoksida
ditemukan moderat dibandingkan dengan ekstrak metanol
Namun kegiatan pemulungan ekstrak ( 8309 ) yang
ditemukan sangat dekat dengan yang BHT ( 8464 ) yang merupakan
dianggap sebagai scavenger radikal superoksida yang kuat itu
Nilai IC50 dari ekstrak tumbuhan senyawa dan BHT ditemukan
menjadi 32 38 dan 26 mg mL masing-masing
323 Hydroxyl Radical Scavenging Effect Radikal hidroksil
spesies oksigen reaktif sangat dikenal kompeten
untuk menyerang dan merusak hampir setiap molekul dalam sel-sel hidup
[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid
Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari
membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging
ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil
Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -
trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara
L nodiflora
penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa
menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada
Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk
ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan
7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora
( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa
( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat
mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50
dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa
mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙
sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena
Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙
324 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas
digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam
polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya
terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka
dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen
atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan
dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
tangkai tender diberikan kepada anak-anak menderita gangguan pencernaan dan perempuan setelah melahirkan Chutney terbuat dari daun dan buah-buahan sering diambil untuk meringankan iritasi tumpukan internal Banyak sifat farmakologi L Nodiflora termasuk anti - inflamasi antipiretik antitusif antidiabetes dan efek antimelanogenesis telah dilaporkan Relevansi ethnopharmacological L Nodiflora untuk penyakit kulit dan kosmetik rakyat seperti jerawat inas luka bakar dan kulit juga telah mengungkapkan konstituen fitokimia L nodiflora seperti flavonoid glikosida flavon alkaloid minyak atsiri resin kinol dan steroid telah sebelumnya dilaporkan Oleh karena itu phytochemical ini dianggap bertanggung jawab atas sifat farmakologi ini tanaman
Meskipun ada bukti antioksidan aktivitas ekstrak metanol L nodiflora utama konstituen antioksidan hadir dalam bagian udara memiliki tidak diteliti secara luas Oleh karena itu penelitian ini dilakukan untuk mengisolasi senyawa aktif yang bertanggung jawab untuk properti antioksidan ekstrak metanol Lippia nodiflora L melalui bioassay - dipandu fraksinasi menggunakan dalam vitro assay DPPH
2 Bahan dan Metode
21 Umum
Spektrum resonansi magnetik nuklir direkam pada BRUKER Avance 400MHz (Swiss) NMR instrumen beroperasi pada 400MHz untuk 1H dan 100MHz untuk 13C inti di roomtemperature dan dirujuk ke residual sinyal pelarut Pergeseran kimia dan kopling konstanta ( 119869 ) nilai-nilai yang dilaporkan dalam ppm dan Hz masing-masing Analisis HPLC dilakukan dengan menggunakan kolom C - 18 ( 250 times 46 mm 5 μ ) dalam LC - 8A alat kromatografi Shimadzu ( Shimadzu
Singapura) Fase Themobile terdiri ofmethanol -
05 asam fosfat dalam air ( 60 40 v v ) dan aliran
Tingkat diadakan konstan pada 1 mL menit Puncak terdeteksi
pada 280 nm menggunakan variabel detektor panjang gelombang UV Silica gel
60 F254 pelat ( 20 times 20 cm 02mmthick E - Merck Jerman )
digunakan untuk kromatografi lapis tipis ( TLC ) analisis
Spektrum ultraviolet dicatat menggunakan Varian Cary
500 spektrofotometer memindai λmax ( log ε ) di nm sedangkan
Spektrum FTIR diperoleh dengan menggunakan Nicolet 380 ( Thermo
Ilmiah USA ) Kelompok fungsional diidentifikasi menggunakan
kalium bromida ( KBr ) dan dipindai di kisaran 4000 -
400 cm - 1 Sampel dilarutkan dalam metanol dan massa ESI
spectrawere obtainedwith aThermo Ilmiah ExactiveMass
Spektrometer ( Thermo Fisher Scientific USA )
Reagen seperti 2 - deoksi - D - ribosa terbutilasi hidroksil
toluena ( BHT ) 2 2 - difenil - 1 - pikrilhidrazil ( DPPH )
phenazine methosulphate ( PMS ) nitroblue tetrazolium
( NBT ) natrium nitroprusside dan Griess reagen yang
diperoleh dari ( Sigma Kimia St Louis MO USA ) 2 4
6 - Tripyridyl - S - triazina ( TPTZ ) asam thiobarbituric ( TBA )
asam trikloroasetat ( TCA ) etilena asam diaminetetraacetic
( EDTA ) klorida ( FeCl3 ) hidrogen peroksida ( H2O2 )
dan nikotinamida adenin dinukleotida tereduksi ( NADH )
diperoleh dari M s ( Sisco Penelitian laboratorium
Mumbai India ) Pelarut HPLC dan reagen yang digunakan
untuk ekstraksi dan silika gel ( 0075-015 mm ) untuk kolom
kromatografi diperoleh dari M s ( Sisco Penelitian
laboratorium Mumbai India ) Semua bahan kimia lainnya dan
reagen yang digunakan dalam penelitian ini adalah kelas analitis
22 Bahan tanaman Bahan-bahan tanaman segar yang dikumpulkan
antara Agustus dan September 2011 dari Karaikudi
Kabupaten Sivagangai tanaman Tamil NaduThe adalah taksonomi
diidentifikasi dan dikonfirmasi oleh Dr GVS Murthy Joint
Direktur Botanical Survey of India Tamil Nadu Agricultural
Kampus Universitas Coimbatore ( BSISRC5232012-
13Tech-19 ) Sebuah spesimen voucher tanaman L nodiflora
( DBI - HP Spesimen - 1 ) disiapkan dan disimpan di
Biologi Molekuler Lab Departemen Bioinformatika Alagappa
Universitas Karaikudi Tamil Nadu
23 Ekstraksi Fraksinasi dan Isolasi Antioksidan
Compound Bagian udara ( batang daun dan bunga ) yang
dicuci dengan air keran warna - kering dan mengurangi untuk fine
bubuk Bagian udara bubuk L nodiflora ( 15 kg )
diekstraksi dengan metanol 90 ( 45 L times 2 ) di ruang
suhu Campuran disaring melalui Whatman
Nomor l kertas saring dan pelarut dari gabungan
ekstrak terkonsentrasi menggunakan vacuum rotary evaporator
( Superfit India ) pada 60 ∘ C untuk membeli 647 g metanol mentah
ekstrak ( 431 ) Pelarut dipilih berdasarkan hasil nya
dari ekstraksi awal dan penapisan fitokimia
studi Ekstrak dilarutkan dalam 500ml air hangat
dan bagian berair yang dihasilkan dipartisi dengan etil
asetat ( EtOAc ) ( 4 times 200 mL ) menggunakan corong pisah untuk
mampu fraksi etil asetat ( EAF ) dan bagian berair
Fasa berair kemudian berturut-turut dipartisi dengan
n - butanol ( 3 times 200 mL ) sehingga mendapatkan n - butanol larut
fraksi ( BF ) dan fraksi air ( WF ) Semua fraksi
dikumpulkan secara terpisah dan mengurangi menggunakan rotary vacuum
evaporator untuk menghilangkan pelarut dan resultan berair
ekstrak diliofilisasi dalam vakum Sampel kemudian
diuji untuk properti antioksidan dengan menggunakan 2 2 - difenil - 1 -
pikrilhidrazil ( DPPH ) assay ∙
The DPPH aktif EAF ( 172 g ) dimuat sebagai kering∙
bubur silika gel untuk kromatografi kolom ( 45 times 35 cm )
dan dielusi dengan petroleum eter EtOAc gradien elusi
( 100 0-0 100 ) dalam rangka peningkatan polaritas Sebanyak
92 fraksi 100ml masing-masing dikumpulkan dan dianalisis oleh
TLC ( Silica gel F254 pelat 20 times 20cm Merck Jerman )
Analisis KLT dilakukan dengan menggunakan etil asetat kloroform
asam format ( 50401 ) sebagai fase gerak dan
band dipisahkan divisualisasikan menggunakan uap yodium dan
vanillin - asam sulfat reagen Fraksi ini dikumpulkan
untuk membeli tujuh fraksi utama (P A 1-13 Fr B 14-35
Fr C 36-48 Fr D 49-60 Fr E 61-70 Fr F 71-80 dan
Fr G 81-92 ) berdasarkan analisis TLC Fraksi ini adalah
diuji untuk bioaktivitas menggunakan DPPH assay spektrofotometri
Untuk pemurnian lebih lanjut yang sangat aktif Fr B ( 28 g)
dimuat pada kolom silika gel dielusi dengan petroleum eter -
EtOAc gradien dan isi etil asetat dari themixture
meningkat dalam serangkaian langkah 5 Tidak aktif dan kurang
fraksi terbukti aktif dibuang Akhirnya aktif Fr
B2 dielusi dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 ) menghasilkan
117mg senyawa Kemurnian senyawa hasil isolasi adalah
establishedbyHPLCandits structurewas dikonfirmasikan melalui
interpretasi data spektral ( UV FT - IR 1H
13C NMR dan MS ) dan selanjutnya diuji untuk antioksidan
efek
24 Aktivitas antioksidan
241 DPPH Radical Scavenging Assay The DPPH radikal
kegiatan pemulungan ekstrak metanol EAF BF dan WF
diuji menurut Yamaguchi et al [ 27 ] Secara singkat 02mL
dari solusi sampel konsentrasi yang berbeda ditambahkan
untuk 1mL 01mm larutan DPPH baru disiapkan itu
campuran reaksi yang dikocok dengan kuat dan absorbansi pada
517 nm ditentukan setelah 20 menit pada suhu kamar
Sampel kontrol disiapkan mengandung volume yang sama
tanpa senyawa uji atau referensi antioksidan sementara
DMSO digunakan sebagai kosong Referensi antioksidan BHT
digunakan sebagai kontrol positif dalam semua tes itu
aktivitas radikal diukur sebagai penurunan
absorbansi DPPH dan dihitung sebagai berikut ∙
Efek pembilasan ( ) = [
Control 119860 - sampel 119860kontrol 119860] times 100 ( 1 )
di mana kontrol 119860 adalah absorbansi kontrol dan sampel 119860 adalah
absorbansi ekstrak atau fraksi atau standar
242 Superoksida Radikal - Scavenging Assay superoksida The
efek radikal - pemulungan ditentukan dengan metode
Nishikimi et al [ 28 ] Campuran reaksi dengan NBT ( 1 mM )
dalam buffer fosfat ( 01 M pH 74 ) NADH ( 1 mM ) dengan atau
tanpa sampel dan PMS ( 01mm ) diinkubasi pada ruang
Suhu selama 5 menit dan absorbansi tercatat sebesar
560 nm Persentase penghambatan dihitung terhadap
kontrol tanpa sampel Kemampuan pemulungan adalah
dihitung dengan menggunakan persamaan seperti yang dijelaskan untuk uji DPPH
243 Hydroxyl Radical Scavenging Assay Kapasitas
ekstrak dan senyawa untuk mengurangi radikal hidroksil - dimediasi
peroksidasi dilakukan dengan metode Hinneburg
et al [ 29 ] Secara singkat 05ml 56mm 2 - deoksi - D - ribosa di
KH2PO4 - NaOH penyangga ( 50mm pH 74 ) 02mL 100 M
FeCl3 dan 104mm EDTA ( 1 1 v v ) larutan yang ditambahkan ke
01ml konsentrasi yang berbeda dari sampel uji diikuti oleh
100 uL 10mMH2O2 dan 01ml dari 10mm BHT berair
Campuran reaksi yang dikocok dengan kuat dan diinkubasi
pada 50 ∘ C selama 30 menit Selanjutnya 1mL 28 TCA dan 1mL
dari 10 TBA ditambahkan ke masing-masing tabung reaksi yang berisi
campuran dan sampel dicampur dengan baik lagi dan direbus dalam
Mandi air pada 50 ∘ C untuk 30minThe absorbansi larutan adalah
baca pada 532 nm Hidroksil Kemampuan radikal adalah
dihitung dengan menggunakan rumus seperti yang dijelaskan forDPPHassay dan
nilai-nilai disajikan sebagai sarana analisis rangkap tiga
244 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
Uji FRAP ditentukan dengan metode Benzie dan
Regangan [ 30 ] dengan sedikit modifikasi Hal ini tergantung pada
kemampuan sampel untuk mengurangi tripyridyltriazine besi
( Fe ( III ) - TPTZ ) kompleks untuk tripyridyltriazine besi ( Fe ( II ) -
TPTZ ) pada pH rendah Fe ( II ) - TPTZ memiliki warna biru intensif
yang dapat dibaca pada 593nm Solusi saham terdiri
300mm buffer asetat ( pH 36 ) 10mm 2 4 6 tripyridyl
S triazina ( TPTZ ) di 40mm HCl dan 20mm besi
solusi klorida Solusi pekerjaan baru disiapkan
dengan mencampurkan 25 mL buffer asetat 25ml dari TPTZ dan
25ml dari FeCl3 sdot 6H2O dan suhu dipertahankan
37 ∘ C sebelum digunakan The berbagai konsentrasi ekstrak
senyawa dan BHT ( 10-50 mg mL ) diizinkan untuk bereaksi
dengan 2ml larutan FRAP selama 30 menit dalam gelap
kondisi Absorbansi tercatat sebesar 593 nm itu
Hasil disajikan dalam μMFe ( II ) g dan diperkirakan
menggunakan berair FeSO4 sdot 7H2O ( 20 - 100μM ) sebagai standar untuk
kalibrasi
245NitricOxide Radical ScavengingAssay pada fisiologis
pH oksida nitrat yang dihasilkan dari natrium nitroprusside di
larutan berinteraksi dengan oksigen untuk menghasilkan nitrit
ion whichwere diukur dengan theGriess reaksi [ 31 ] Secara singkat
3ml dari reactionmixture mengandung 10mMsodiumnitroprusside
dan sampel uji ( 10-50 mg mL ) fosfat
penyangga diinkubasi selama 150min pada 25 ∘ C Setelah inkubasi
05ml dari campuran reaksi dicampur dengan 1 mL dari
pereaksi asam sulfanilat ( 033 dalam 20 asam asetat glasial ) dan
didiamkan selama 5 menit untuk diazotisasi lengkap kemudian
1mL dari naftil etilen diamin dihidroklorida ( 01
w v ) ditambahkan dan campuran didiamkan selama
30 menit pada 25 ∘ C Sebuah kromofor berwarna merah muda yang dihasilkan
dan absorbansi diukur secara spektrofotometri
pada 540 nm terhadap sampel kosong The oksida nitrat radikal
aktivitas scavenging ekstrak dan senyawa dilaporkan
sebagai penghambatan dan dihitung dengan menggunakan rumus sebagai
dijelaskan untuk uji DPPH
246 Lipid Peroksidasi Assay Peroksidasi lipid ( PUT )
assay dilakukan menurut protokol yang dijelaskan oleh
Damien et al [ 32 ] tomeasure lipid peroksida yang terbentuk dengan menggunakan
homogenates kuning telur sebagai media yang kaya lipid Secara singkat 05ml dari
homogenate telur ( 10 v v disusun 115 b v KCl ) adalah
ditambahkan ke 01ml masing-masing sampel uji ( 10-50 mg mL ) diambil
dalam tabung reaksi dan disusun sampai dengan 1mL dengan ganda suling
air Setelah itu 005mL dari FeSO4 ( 007M ) ditambahkan ke
menginduksi peroksidasi lipid dan campuran diinkubasi selama
30 menit pada roomtemperatureThen 15mL asam 35Macetic
( pH disesuaikan menjadi 35 ) ditambahkan diikuti oleh 15mL dari TBA
( 006M ) sodium dodesil sulfat ( 004M ) Hasil dari paket tersebut
Campuran adalah vortex dan dipanaskan pada 95 ∘ C untuk 1hrAfter pendinginan
5 mL dari butanol ditambahkan ke masing-masing tabung dan disentrifugasi pada
3000 rpm selama 10 menit Absorbansi dari atas organik
lapisan diukur pada 532 nm dan prosedur di atas adalah diikuti untuk kontrol dengan menggunakan 01ml SDS bukan
sampel uji Penghambatan Persentase dihitung
sesuai dengan rumus berikut
Persentase penghambatan peroksidasi lipid = (1 - 119864 119862) times 100 (2)
mana 119864 adalah absorbansi sampel uji dan 119862 adalah absorbansi kontrol sepenuhnya teroksidasi
25 Analisis Statistik Percobaan dilakukan di
rangkap tiga dan data dinyatakan sebagai berarti plusmn standar deviasi
(SD) Semua analisa statistik dilakukan dengan menggunakan grafik
pad prisma (versi 50 Graph Pad software Inc San Diego
CA USA) The IC50 mewakili nilai konsentrasi
sampel uji yang menyebabkan penghambatan 50 Nilai 119875 lt005
dianggap signifikan
3 Hasil dan Diskusi
31 Isolasi dan Penentuan Struktur dari Antioksidan
Compound Ekstrak metanol dan potensi antioksidan
fraksi L nodiflora awalnya disaring oleh
uji DPPH spektrofotometri dan hasilnya ditampilkan
pada Tabel 1 The DPPH assay mengungkapkan bahwa metanol
ekstrak memiliki efek pemulungan signifikan dengan meningkatnya
konsentrasi di kisaran 10-50 mg mL Selain itu
efek scavenging ekstrak ofmethanol secara signifikan mirip
dengan yang BHT standar Pada 50 mg mL ekstrak metanol
dan BHT dipamerkan 7935 dan 8642 inhibisi dan
Nilai IC50 ( konsentrasi dengan aktivitas scavenging
50 ) adalah 24 dan 19 mg mL hasil yang diperoleh respectivelyThe
di sini lebih rendah dari aktivitas pemulungan dilaporkan
ekstrak metanol L nodiflora ( 1203 mg mL ) [ 33 ] antara
fraksi yang DPPH secara signifikan memulung oleh etil∙
fraksi asetat ( EAF ) dengan cara yang tergantung dosis dengan
nilai IC50 dari 26 mg mL diikuti oleh WF dan BF dengan
Nilai-nilai IC50 dari 66 dan 83 mg mL ( Tabel 1 ) Oleh karena itu EAF
menjadi sasaran berulang bioassay - dipandu fraksinasi pada
kromatografi kolom silika gel menggunakan petroleum eter
EtOAc gradien sistem elusi Pemurnian lebih lanjut
fraksi aktif yang diperoleh dari kromatografi kolom silika gel
akhirnya menghasilkan senyawa antioksidan bioaktif dari
dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 v v ) campuran itu
Prosedur ekstraksi untuk isolasi senyawa aktif
yang skematis ditunjukkan pada Gambar 1 Gambar 2 ( a) menunjukkan
Profil HPLC dari kandungan kimia hadir dalam 90
ekstrak metanol L nodiflora The HPLC Kromatogram
senyawa murni terkena kehadiran puncak dengan
waktu retensi 72 menit dielusi isocratically dengan ponsel
fase metanol - 05 asam fosfat dalam air ( 60 40
v v ) ( Gambar 2 ( b ) )
Senyawa tersebut diperoleh sebagai pucat putih amorf
bubuk (hasil 117mg 068 ) Puncak FTIR ditentukan
obligasi yang relevan dengan alkohol O - H peregangan ( 3267 - cm 1 )
= C - H peregangan ( 3010 cm - 1 ) - C - H peregangan ( 2975 cm - 1 )
- C = O peregangan ( 1605 - cm 1 ) - C = peregangan C ( 1506 cm - 1 )
Tabel 1 Aktivitas radikal DPPH dari ekstrak kasar dan
fraksi udara bagian Lippia nodiflora L
Contoh DPPH ( IC50 ) ( mg mL )
CME 2466 plusmn 11
EAF 2606 plusmn 095
BF 8362 plusmn 045
WF 6639 plusmn 052
BHTa 1912 plusmn 057
aBHT Standard antioksidan Data direpresentasikan sebagai berarti plusmn SD ( 119899 = 3 )
- C - H membungkuk ( 1154 - cm 1 ) C - O peregangan ( 1315 - cm 1 )
= C - H membungkuk ( 1030 - cm 1 ) dan O - H membungkuk ( 993 cm - 1 )
1H ( CDCl3 400MHz ) δ ( ppm ) 391 ( 3H 119904 4 1015840 - OMe )
389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )
664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =
63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H
H6 1015840 ) 13C NMR ( CDCl3 100MHz ) δ ( ppm ) 17161 ( C - 4 )
14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682
( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )
15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -
10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka
S1 dan S2 dari Informasi Tambahan tersedia secara online
di httpdxdoiorg1011552014549836 ) senyawa
menunjukkan berat molekul 329 ( ESI - MS 119898 119911 351084 [ M
+ Na ] + ) dengan rumus unsur C18H16O6 ( Gambar 3 )
Dari interpretasi ini spektral senyawa terisolasi
telah ditandai sebagai 2 - ( 3 4 - dimethoxyphenyl ) -5 -
hidroksi - 7 - metoksi - 4H - chromen - 4 -one ( 5 - hydroxy - 3 1015840 4 1015840
7 - trimethoxyflavone ) ( Gambar 4 ) yang setuju dengan data
dilaporkan [ 34 ]
32 Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Metanol dan Terisolasi
Senyawa dari Fraksi Etil Asetat ( EAF ) Flavonoid a kelompok utama dari polifenol dianggap aktif prinsip pada tanaman diversemedicinal dan telah dilaporkan untuk memiliki berbagai sifat farmakologi yang paling penting flavonoid activityof biologis ismainlydue untuk mereka antioksidan properti dengan bertindak sebagai pemulung radikal hidrogen donor zat pereduksi dan inhibitor peroksidasi Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa farmakologis yang efek L nodiflora seperti antioksidan diuretik antiradang dan kegiatan antimikroba diakui karena adanya fenol dan senyawa flavonoid Dalam penelitian ini senyawa hasil isolasi adalah diidentifikasi sebagai flavone dan kegiatan antioksidan diperiksa dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model
321 DPPH Radical Scavenging Effect
Zat yang dianggap antioksidan ketika mereka mampu mengurangi DPPH radikal stabil ( ungu ) ke nonradical membentuk DPPH - H ( kuning ) dan dengan demikian mereka bertindak sebagai radikal pemulung karena kemampuan hidrogen menyumbangkan mereka [ 37 ]
Hasil kegiatan pemulungan DPPH dari semua sampel uji disajikan pada Gambar 5 ( a) Aktivitas scavenging ekstrak metanol senyawa dan BHT meningkat dengan peningkatan konsentrasi sampel ( 10-50 mg mL ) itu(GAMBAR)
Ekstrak metanol mentah
(647 g)
Resuspend dengan air hangat
Ekstraksi dengan etil asetat
fase cair
(367 g)
Fraksi etil asetat
(EAF 172 g)
Ekstraksi dengan n-butanol
Kromatografi kolom (CC)
Pet eter-EtOAc (100 0 ~ 0 100)
Fraksi n-Butanol
(BF 153 g)
fraksi air
(WF 186 g)
Fr A Fr B Fr C Fr D Fr E Fr F Fr G
CC pada silika gel
Fr B1 Fr B2 Fr Fr B3 B4 Fr B5
(25 75)
senyawa
(117mg)
(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)
pada silika gel
(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)
(1-13)
Petether-EtOAc
Bubuk udara bagian L Nodiflora
(GAMBAR)
highestDPPHscavenging aktivitas untuk ekstrak senyawa dan
BHT ditemukan menjadi 7935 7266 dan 8609 masing-masing
pada 50 mg mL Perlu dicatat bahwa scavenging
aktivitas compoundwas ditemukan dekat dengan ekstrak
Nilai-nilai IC50 aktivitas scavenging pada DPPH radikal
ekstrak dan BHT diberikan dalam Tabel 1 sedangkan untuk senyawa
ditemukan menjadi 27 mg mL Dari data yang diperoleh tersebut
ekstrak dan senyawa dianggap sebagai efektif
inhibitor radikal bebas serta antioksidan primer
yang dapat membatasi kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi di
tubuh
322 Superoksida Radical Scavenging Effect Pembentukan
spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil hidrogen
peroksida dan singlet oksigen dalam sistem hidup terutama
karena partisipasi radikal anion superoksida baik
secara langsung atau secara luas melalui enzim atau perkembangan logam katalis
[ 38 ] Oleh karena itu diantisipasi untuk mengevaluasi
Kapasitas interceptive relatif ekstrak dan senyawa
untuk mengais-ngais yang superoksida radikal Dari data yang disajikan
pada Gambar 5 ( b ) tercatat bahwa ekstrak senyawa
dan BHT menunjukkan aktivitas radikal tertinggi
( 7107 -8464 ) pada 50 mg mL dan aktivitas pemulungan
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sampel itu
kemampuan senyawa pembilasan pada radikal superoksida
ditemukan moderat dibandingkan dengan ekstrak metanol
Namun kegiatan pemulungan ekstrak ( 8309 ) yang
ditemukan sangat dekat dengan yang BHT ( 8464 ) yang merupakan
dianggap sebagai scavenger radikal superoksida yang kuat itu
Nilai IC50 dari ekstrak tumbuhan senyawa dan BHT ditemukan
menjadi 32 38 dan 26 mg mL masing-masing
323 Hydroxyl Radical Scavenging Effect Radikal hidroksil
spesies oksigen reaktif sangat dikenal kompeten
untuk menyerang dan merusak hampir setiap molekul dalam sel-sel hidup
[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid
Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari
membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging
ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil
Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -
trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara
L nodiflora
penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa
menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada
Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk
ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan
7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora
( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa
( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat
mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50
dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa
mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙
sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena
Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙
324 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas
digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam
polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya
terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka
dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen
atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan
dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
Spektrometer ( Thermo Fisher Scientific USA )
Reagen seperti 2 - deoksi - D - ribosa terbutilasi hidroksil
toluena ( BHT ) 2 2 - difenil - 1 - pikrilhidrazil ( DPPH )
phenazine methosulphate ( PMS ) nitroblue tetrazolium
( NBT ) natrium nitroprusside dan Griess reagen yang
diperoleh dari ( Sigma Kimia St Louis MO USA ) 2 4
6 - Tripyridyl - S - triazina ( TPTZ ) asam thiobarbituric ( TBA )
asam trikloroasetat ( TCA ) etilena asam diaminetetraacetic
( EDTA ) klorida ( FeCl3 ) hidrogen peroksida ( H2O2 )
dan nikotinamida adenin dinukleotida tereduksi ( NADH )
diperoleh dari M s ( Sisco Penelitian laboratorium
Mumbai India ) Pelarut HPLC dan reagen yang digunakan
untuk ekstraksi dan silika gel ( 0075-015 mm ) untuk kolom
kromatografi diperoleh dari M s ( Sisco Penelitian
laboratorium Mumbai India ) Semua bahan kimia lainnya dan
reagen yang digunakan dalam penelitian ini adalah kelas analitis
22 Bahan tanaman Bahan-bahan tanaman segar yang dikumpulkan
antara Agustus dan September 2011 dari Karaikudi
Kabupaten Sivagangai tanaman Tamil NaduThe adalah taksonomi
diidentifikasi dan dikonfirmasi oleh Dr GVS Murthy Joint
Direktur Botanical Survey of India Tamil Nadu Agricultural
Kampus Universitas Coimbatore ( BSISRC5232012-
13Tech-19 ) Sebuah spesimen voucher tanaman L nodiflora
( DBI - HP Spesimen - 1 ) disiapkan dan disimpan di
Biologi Molekuler Lab Departemen Bioinformatika Alagappa
Universitas Karaikudi Tamil Nadu
23 Ekstraksi Fraksinasi dan Isolasi Antioksidan
Compound Bagian udara ( batang daun dan bunga ) yang
dicuci dengan air keran warna - kering dan mengurangi untuk fine
bubuk Bagian udara bubuk L nodiflora ( 15 kg )
diekstraksi dengan metanol 90 ( 45 L times 2 ) di ruang
suhu Campuran disaring melalui Whatman
Nomor l kertas saring dan pelarut dari gabungan
ekstrak terkonsentrasi menggunakan vacuum rotary evaporator
( Superfit India ) pada 60 ∘ C untuk membeli 647 g metanol mentah
ekstrak ( 431 ) Pelarut dipilih berdasarkan hasil nya
dari ekstraksi awal dan penapisan fitokimia
studi Ekstrak dilarutkan dalam 500ml air hangat
dan bagian berair yang dihasilkan dipartisi dengan etil
asetat ( EtOAc ) ( 4 times 200 mL ) menggunakan corong pisah untuk
mampu fraksi etil asetat ( EAF ) dan bagian berair
Fasa berair kemudian berturut-turut dipartisi dengan
n - butanol ( 3 times 200 mL ) sehingga mendapatkan n - butanol larut
fraksi ( BF ) dan fraksi air ( WF ) Semua fraksi
dikumpulkan secara terpisah dan mengurangi menggunakan rotary vacuum
evaporator untuk menghilangkan pelarut dan resultan berair
ekstrak diliofilisasi dalam vakum Sampel kemudian
diuji untuk properti antioksidan dengan menggunakan 2 2 - difenil - 1 -
pikrilhidrazil ( DPPH ) assay ∙
The DPPH aktif EAF ( 172 g ) dimuat sebagai kering∙
bubur silika gel untuk kromatografi kolom ( 45 times 35 cm )
dan dielusi dengan petroleum eter EtOAc gradien elusi
( 100 0-0 100 ) dalam rangka peningkatan polaritas Sebanyak
92 fraksi 100ml masing-masing dikumpulkan dan dianalisis oleh
TLC ( Silica gel F254 pelat 20 times 20cm Merck Jerman )
Analisis KLT dilakukan dengan menggunakan etil asetat kloroform
asam format ( 50401 ) sebagai fase gerak dan
band dipisahkan divisualisasikan menggunakan uap yodium dan
vanillin - asam sulfat reagen Fraksi ini dikumpulkan
untuk membeli tujuh fraksi utama (P A 1-13 Fr B 14-35
Fr C 36-48 Fr D 49-60 Fr E 61-70 Fr F 71-80 dan
Fr G 81-92 ) berdasarkan analisis TLC Fraksi ini adalah
diuji untuk bioaktivitas menggunakan DPPH assay spektrofotometri
Untuk pemurnian lebih lanjut yang sangat aktif Fr B ( 28 g)
dimuat pada kolom silika gel dielusi dengan petroleum eter -
EtOAc gradien dan isi etil asetat dari themixture
meningkat dalam serangkaian langkah 5 Tidak aktif dan kurang
fraksi terbukti aktif dibuang Akhirnya aktif Fr
B2 dielusi dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 ) menghasilkan
117mg senyawa Kemurnian senyawa hasil isolasi adalah
establishedbyHPLCandits structurewas dikonfirmasikan melalui
interpretasi data spektral ( UV FT - IR 1H
13C NMR dan MS ) dan selanjutnya diuji untuk antioksidan
efek
24 Aktivitas antioksidan
241 DPPH Radical Scavenging Assay The DPPH radikal
kegiatan pemulungan ekstrak metanol EAF BF dan WF
diuji menurut Yamaguchi et al [ 27 ] Secara singkat 02mL
dari solusi sampel konsentrasi yang berbeda ditambahkan
untuk 1mL 01mm larutan DPPH baru disiapkan itu
campuran reaksi yang dikocok dengan kuat dan absorbansi pada
517 nm ditentukan setelah 20 menit pada suhu kamar
Sampel kontrol disiapkan mengandung volume yang sama
tanpa senyawa uji atau referensi antioksidan sementara
DMSO digunakan sebagai kosong Referensi antioksidan BHT
digunakan sebagai kontrol positif dalam semua tes itu
aktivitas radikal diukur sebagai penurunan
absorbansi DPPH dan dihitung sebagai berikut ∙
Efek pembilasan ( ) = [
Control 119860 - sampel 119860kontrol 119860] times 100 ( 1 )
di mana kontrol 119860 adalah absorbansi kontrol dan sampel 119860 adalah
absorbansi ekstrak atau fraksi atau standar
242 Superoksida Radikal - Scavenging Assay superoksida The
efek radikal - pemulungan ditentukan dengan metode
Nishikimi et al [ 28 ] Campuran reaksi dengan NBT ( 1 mM )
dalam buffer fosfat ( 01 M pH 74 ) NADH ( 1 mM ) dengan atau
tanpa sampel dan PMS ( 01mm ) diinkubasi pada ruang
Suhu selama 5 menit dan absorbansi tercatat sebesar
560 nm Persentase penghambatan dihitung terhadap
kontrol tanpa sampel Kemampuan pemulungan adalah
dihitung dengan menggunakan persamaan seperti yang dijelaskan untuk uji DPPH
243 Hydroxyl Radical Scavenging Assay Kapasitas
ekstrak dan senyawa untuk mengurangi radikal hidroksil - dimediasi
peroksidasi dilakukan dengan metode Hinneburg
et al [ 29 ] Secara singkat 05ml 56mm 2 - deoksi - D - ribosa di
KH2PO4 - NaOH penyangga ( 50mm pH 74 ) 02mL 100 M
FeCl3 dan 104mm EDTA ( 1 1 v v ) larutan yang ditambahkan ke
01ml konsentrasi yang berbeda dari sampel uji diikuti oleh
100 uL 10mMH2O2 dan 01ml dari 10mm BHT berair
Campuran reaksi yang dikocok dengan kuat dan diinkubasi
pada 50 ∘ C selama 30 menit Selanjutnya 1mL 28 TCA dan 1mL
dari 10 TBA ditambahkan ke masing-masing tabung reaksi yang berisi
campuran dan sampel dicampur dengan baik lagi dan direbus dalam
Mandi air pada 50 ∘ C untuk 30minThe absorbansi larutan adalah
baca pada 532 nm Hidroksil Kemampuan radikal adalah
dihitung dengan menggunakan rumus seperti yang dijelaskan forDPPHassay dan
nilai-nilai disajikan sebagai sarana analisis rangkap tiga
244 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
Uji FRAP ditentukan dengan metode Benzie dan
Regangan [ 30 ] dengan sedikit modifikasi Hal ini tergantung pada
kemampuan sampel untuk mengurangi tripyridyltriazine besi
( Fe ( III ) - TPTZ ) kompleks untuk tripyridyltriazine besi ( Fe ( II ) -
TPTZ ) pada pH rendah Fe ( II ) - TPTZ memiliki warna biru intensif
yang dapat dibaca pada 593nm Solusi saham terdiri
300mm buffer asetat ( pH 36 ) 10mm 2 4 6 tripyridyl
S triazina ( TPTZ ) di 40mm HCl dan 20mm besi
solusi klorida Solusi pekerjaan baru disiapkan
dengan mencampurkan 25 mL buffer asetat 25ml dari TPTZ dan
25ml dari FeCl3 sdot 6H2O dan suhu dipertahankan
37 ∘ C sebelum digunakan The berbagai konsentrasi ekstrak
senyawa dan BHT ( 10-50 mg mL ) diizinkan untuk bereaksi
dengan 2ml larutan FRAP selama 30 menit dalam gelap
kondisi Absorbansi tercatat sebesar 593 nm itu
Hasil disajikan dalam μMFe ( II ) g dan diperkirakan
menggunakan berair FeSO4 sdot 7H2O ( 20 - 100μM ) sebagai standar untuk
kalibrasi
245NitricOxide Radical ScavengingAssay pada fisiologis
pH oksida nitrat yang dihasilkan dari natrium nitroprusside di
larutan berinteraksi dengan oksigen untuk menghasilkan nitrit
ion whichwere diukur dengan theGriess reaksi [ 31 ] Secara singkat
3ml dari reactionmixture mengandung 10mMsodiumnitroprusside
dan sampel uji ( 10-50 mg mL ) fosfat
penyangga diinkubasi selama 150min pada 25 ∘ C Setelah inkubasi
05ml dari campuran reaksi dicampur dengan 1 mL dari
pereaksi asam sulfanilat ( 033 dalam 20 asam asetat glasial ) dan
didiamkan selama 5 menit untuk diazotisasi lengkap kemudian
1mL dari naftil etilen diamin dihidroklorida ( 01
w v ) ditambahkan dan campuran didiamkan selama
30 menit pada 25 ∘ C Sebuah kromofor berwarna merah muda yang dihasilkan
dan absorbansi diukur secara spektrofotometri
pada 540 nm terhadap sampel kosong The oksida nitrat radikal
aktivitas scavenging ekstrak dan senyawa dilaporkan
sebagai penghambatan dan dihitung dengan menggunakan rumus sebagai
dijelaskan untuk uji DPPH
246 Lipid Peroksidasi Assay Peroksidasi lipid ( PUT )
assay dilakukan menurut protokol yang dijelaskan oleh
Damien et al [ 32 ] tomeasure lipid peroksida yang terbentuk dengan menggunakan
homogenates kuning telur sebagai media yang kaya lipid Secara singkat 05ml dari
homogenate telur ( 10 v v disusun 115 b v KCl ) adalah
ditambahkan ke 01ml masing-masing sampel uji ( 10-50 mg mL ) diambil
dalam tabung reaksi dan disusun sampai dengan 1mL dengan ganda suling
air Setelah itu 005mL dari FeSO4 ( 007M ) ditambahkan ke
menginduksi peroksidasi lipid dan campuran diinkubasi selama
30 menit pada roomtemperatureThen 15mL asam 35Macetic
( pH disesuaikan menjadi 35 ) ditambahkan diikuti oleh 15mL dari TBA
( 006M ) sodium dodesil sulfat ( 004M ) Hasil dari paket tersebut
Campuran adalah vortex dan dipanaskan pada 95 ∘ C untuk 1hrAfter pendinginan
5 mL dari butanol ditambahkan ke masing-masing tabung dan disentrifugasi pada
3000 rpm selama 10 menit Absorbansi dari atas organik
lapisan diukur pada 532 nm dan prosedur di atas adalah diikuti untuk kontrol dengan menggunakan 01ml SDS bukan
sampel uji Penghambatan Persentase dihitung
sesuai dengan rumus berikut
Persentase penghambatan peroksidasi lipid = (1 - 119864 119862) times 100 (2)
mana 119864 adalah absorbansi sampel uji dan 119862 adalah absorbansi kontrol sepenuhnya teroksidasi
25 Analisis Statistik Percobaan dilakukan di
rangkap tiga dan data dinyatakan sebagai berarti plusmn standar deviasi
(SD) Semua analisa statistik dilakukan dengan menggunakan grafik
pad prisma (versi 50 Graph Pad software Inc San Diego
CA USA) The IC50 mewakili nilai konsentrasi
sampel uji yang menyebabkan penghambatan 50 Nilai 119875 lt005
dianggap signifikan
3 Hasil dan Diskusi
31 Isolasi dan Penentuan Struktur dari Antioksidan
Compound Ekstrak metanol dan potensi antioksidan
fraksi L nodiflora awalnya disaring oleh
uji DPPH spektrofotometri dan hasilnya ditampilkan
pada Tabel 1 The DPPH assay mengungkapkan bahwa metanol
ekstrak memiliki efek pemulungan signifikan dengan meningkatnya
konsentrasi di kisaran 10-50 mg mL Selain itu
efek scavenging ekstrak ofmethanol secara signifikan mirip
dengan yang BHT standar Pada 50 mg mL ekstrak metanol
dan BHT dipamerkan 7935 dan 8642 inhibisi dan
Nilai IC50 ( konsentrasi dengan aktivitas scavenging
50 ) adalah 24 dan 19 mg mL hasil yang diperoleh respectivelyThe
di sini lebih rendah dari aktivitas pemulungan dilaporkan
ekstrak metanol L nodiflora ( 1203 mg mL ) [ 33 ] antara
fraksi yang DPPH secara signifikan memulung oleh etil∙
fraksi asetat ( EAF ) dengan cara yang tergantung dosis dengan
nilai IC50 dari 26 mg mL diikuti oleh WF dan BF dengan
Nilai-nilai IC50 dari 66 dan 83 mg mL ( Tabel 1 ) Oleh karena itu EAF
menjadi sasaran berulang bioassay - dipandu fraksinasi pada
kromatografi kolom silika gel menggunakan petroleum eter
EtOAc gradien sistem elusi Pemurnian lebih lanjut
fraksi aktif yang diperoleh dari kromatografi kolom silika gel
akhirnya menghasilkan senyawa antioksidan bioaktif dari
dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 v v ) campuran itu
Prosedur ekstraksi untuk isolasi senyawa aktif
yang skematis ditunjukkan pada Gambar 1 Gambar 2 ( a) menunjukkan
Profil HPLC dari kandungan kimia hadir dalam 90
ekstrak metanol L nodiflora The HPLC Kromatogram
senyawa murni terkena kehadiran puncak dengan
waktu retensi 72 menit dielusi isocratically dengan ponsel
fase metanol - 05 asam fosfat dalam air ( 60 40
v v ) ( Gambar 2 ( b ) )
Senyawa tersebut diperoleh sebagai pucat putih amorf
bubuk (hasil 117mg 068 ) Puncak FTIR ditentukan
obligasi yang relevan dengan alkohol O - H peregangan ( 3267 - cm 1 )
= C - H peregangan ( 3010 cm - 1 ) - C - H peregangan ( 2975 cm - 1 )
- C = O peregangan ( 1605 - cm 1 ) - C = peregangan C ( 1506 cm - 1 )
Tabel 1 Aktivitas radikal DPPH dari ekstrak kasar dan
fraksi udara bagian Lippia nodiflora L
Contoh DPPH ( IC50 ) ( mg mL )
CME 2466 plusmn 11
EAF 2606 plusmn 095
BF 8362 plusmn 045
WF 6639 plusmn 052
BHTa 1912 plusmn 057
aBHT Standard antioksidan Data direpresentasikan sebagai berarti plusmn SD ( 119899 = 3 )
- C - H membungkuk ( 1154 - cm 1 ) C - O peregangan ( 1315 - cm 1 )
= C - H membungkuk ( 1030 - cm 1 ) dan O - H membungkuk ( 993 cm - 1 )
1H ( CDCl3 400MHz ) δ ( ppm ) 391 ( 3H 119904 4 1015840 - OMe )
389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )
664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =
63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H
H6 1015840 ) 13C NMR ( CDCl3 100MHz ) δ ( ppm ) 17161 ( C - 4 )
14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682
( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )
15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -
10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka
S1 dan S2 dari Informasi Tambahan tersedia secara online
di httpdxdoiorg1011552014549836 ) senyawa
menunjukkan berat molekul 329 ( ESI - MS 119898 119911 351084 [ M
+ Na ] + ) dengan rumus unsur C18H16O6 ( Gambar 3 )
Dari interpretasi ini spektral senyawa terisolasi
telah ditandai sebagai 2 - ( 3 4 - dimethoxyphenyl ) -5 -
hidroksi - 7 - metoksi - 4H - chromen - 4 -one ( 5 - hydroxy - 3 1015840 4 1015840
7 - trimethoxyflavone ) ( Gambar 4 ) yang setuju dengan data
dilaporkan [ 34 ]
32 Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Metanol dan Terisolasi
Senyawa dari Fraksi Etil Asetat ( EAF ) Flavonoid a kelompok utama dari polifenol dianggap aktif prinsip pada tanaman diversemedicinal dan telah dilaporkan untuk memiliki berbagai sifat farmakologi yang paling penting flavonoid activityof biologis ismainlydue untuk mereka antioksidan properti dengan bertindak sebagai pemulung radikal hidrogen donor zat pereduksi dan inhibitor peroksidasi Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa farmakologis yang efek L nodiflora seperti antioksidan diuretik antiradang dan kegiatan antimikroba diakui karena adanya fenol dan senyawa flavonoid Dalam penelitian ini senyawa hasil isolasi adalah diidentifikasi sebagai flavone dan kegiatan antioksidan diperiksa dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model
321 DPPH Radical Scavenging Effect
Zat yang dianggap antioksidan ketika mereka mampu mengurangi DPPH radikal stabil ( ungu ) ke nonradical membentuk DPPH - H ( kuning ) dan dengan demikian mereka bertindak sebagai radikal pemulung karena kemampuan hidrogen menyumbangkan mereka [ 37 ]
Hasil kegiatan pemulungan DPPH dari semua sampel uji disajikan pada Gambar 5 ( a) Aktivitas scavenging ekstrak metanol senyawa dan BHT meningkat dengan peningkatan konsentrasi sampel ( 10-50 mg mL ) itu(GAMBAR)
Ekstrak metanol mentah
(647 g)
Resuspend dengan air hangat
Ekstraksi dengan etil asetat
fase cair
(367 g)
Fraksi etil asetat
(EAF 172 g)
Ekstraksi dengan n-butanol
Kromatografi kolom (CC)
Pet eter-EtOAc (100 0 ~ 0 100)
Fraksi n-Butanol
(BF 153 g)
fraksi air
(WF 186 g)
Fr A Fr B Fr C Fr D Fr E Fr F Fr G
CC pada silika gel
Fr B1 Fr B2 Fr Fr B3 B4 Fr B5
(25 75)
senyawa
(117mg)
(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)
pada silika gel
(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)
(1-13)
Petether-EtOAc
Bubuk udara bagian L Nodiflora
(GAMBAR)
highestDPPHscavenging aktivitas untuk ekstrak senyawa dan
BHT ditemukan menjadi 7935 7266 dan 8609 masing-masing
pada 50 mg mL Perlu dicatat bahwa scavenging
aktivitas compoundwas ditemukan dekat dengan ekstrak
Nilai-nilai IC50 aktivitas scavenging pada DPPH radikal
ekstrak dan BHT diberikan dalam Tabel 1 sedangkan untuk senyawa
ditemukan menjadi 27 mg mL Dari data yang diperoleh tersebut
ekstrak dan senyawa dianggap sebagai efektif
inhibitor radikal bebas serta antioksidan primer
yang dapat membatasi kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi di
tubuh
322 Superoksida Radical Scavenging Effect Pembentukan
spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil hidrogen
peroksida dan singlet oksigen dalam sistem hidup terutama
karena partisipasi radikal anion superoksida baik
secara langsung atau secara luas melalui enzim atau perkembangan logam katalis
[ 38 ] Oleh karena itu diantisipasi untuk mengevaluasi
Kapasitas interceptive relatif ekstrak dan senyawa
untuk mengais-ngais yang superoksida radikal Dari data yang disajikan
pada Gambar 5 ( b ) tercatat bahwa ekstrak senyawa
dan BHT menunjukkan aktivitas radikal tertinggi
( 7107 -8464 ) pada 50 mg mL dan aktivitas pemulungan
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sampel itu
kemampuan senyawa pembilasan pada radikal superoksida
ditemukan moderat dibandingkan dengan ekstrak metanol
Namun kegiatan pemulungan ekstrak ( 8309 ) yang
ditemukan sangat dekat dengan yang BHT ( 8464 ) yang merupakan
dianggap sebagai scavenger radikal superoksida yang kuat itu
Nilai IC50 dari ekstrak tumbuhan senyawa dan BHT ditemukan
menjadi 32 38 dan 26 mg mL masing-masing
323 Hydroxyl Radical Scavenging Effect Radikal hidroksil
spesies oksigen reaktif sangat dikenal kompeten
untuk menyerang dan merusak hampir setiap molekul dalam sel-sel hidup
[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid
Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari
membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging
ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil
Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -
trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara
L nodiflora
penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa
menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada
Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk
ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan
7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora
( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa
( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat
mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50
dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa
mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙
sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena
Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙
324 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas
digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam
polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya
terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka
dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen
atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan
dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
Compound Bagian udara ( batang daun dan bunga ) yang
dicuci dengan air keran warna - kering dan mengurangi untuk fine
bubuk Bagian udara bubuk L nodiflora ( 15 kg )
diekstraksi dengan metanol 90 ( 45 L times 2 ) di ruang
suhu Campuran disaring melalui Whatman
Nomor l kertas saring dan pelarut dari gabungan
ekstrak terkonsentrasi menggunakan vacuum rotary evaporator
( Superfit India ) pada 60 ∘ C untuk membeli 647 g metanol mentah
ekstrak ( 431 ) Pelarut dipilih berdasarkan hasil nya
dari ekstraksi awal dan penapisan fitokimia
studi Ekstrak dilarutkan dalam 500ml air hangat
dan bagian berair yang dihasilkan dipartisi dengan etil
asetat ( EtOAc ) ( 4 times 200 mL ) menggunakan corong pisah untuk
mampu fraksi etil asetat ( EAF ) dan bagian berair
Fasa berair kemudian berturut-turut dipartisi dengan
n - butanol ( 3 times 200 mL ) sehingga mendapatkan n - butanol larut
fraksi ( BF ) dan fraksi air ( WF ) Semua fraksi
dikumpulkan secara terpisah dan mengurangi menggunakan rotary vacuum
evaporator untuk menghilangkan pelarut dan resultan berair
ekstrak diliofilisasi dalam vakum Sampel kemudian
diuji untuk properti antioksidan dengan menggunakan 2 2 - difenil - 1 -
pikrilhidrazil ( DPPH ) assay ∙
The DPPH aktif EAF ( 172 g ) dimuat sebagai kering∙
bubur silika gel untuk kromatografi kolom ( 45 times 35 cm )
dan dielusi dengan petroleum eter EtOAc gradien elusi
( 100 0-0 100 ) dalam rangka peningkatan polaritas Sebanyak
92 fraksi 100ml masing-masing dikumpulkan dan dianalisis oleh
TLC ( Silica gel F254 pelat 20 times 20cm Merck Jerman )
Analisis KLT dilakukan dengan menggunakan etil asetat kloroform
asam format ( 50401 ) sebagai fase gerak dan
band dipisahkan divisualisasikan menggunakan uap yodium dan
vanillin - asam sulfat reagen Fraksi ini dikumpulkan
untuk membeli tujuh fraksi utama (P A 1-13 Fr B 14-35
Fr C 36-48 Fr D 49-60 Fr E 61-70 Fr F 71-80 dan
Fr G 81-92 ) berdasarkan analisis TLC Fraksi ini adalah
diuji untuk bioaktivitas menggunakan DPPH assay spektrofotometri
Untuk pemurnian lebih lanjut yang sangat aktif Fr B ( 28 g)
dimuat pada kolom silika gel dielusi dengan petroleum eter -
EtOAc gradien dan isi etil asetat dari themixture
meningkat dalam serangkaian langkah 5 Tidak aktif dan kurang
fraksi terbukti aktif dibuang Akhirnya aktif Fr
B2 dielusi dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 ) menghasilkan
117mg senyawa Kemurnian senyawa hasil isolasi adalah
establishedbyHPLCandits structurewas dikonfirmasikan melalui
interpretasi data spektral ( UV FT - IR 1H
13C NMR dan MS ) dan selanjutnya diuji untuk antioksidan
efek
24 Aktivitas antioksidan
241 DPPH Radical Scavenging Assay The DPPH radikal
kegiatan pemulungan ekstrak metanol EAF BF dan WF
diuji menurut Yamaguchi et al [ 27 ] Secara singkat 02mL
dari solusi sampel konsentrasi yang berbeda ditambahkan
untuk 1mL 01mm larutan DPPH baru disiapkan itu
campuran reaksi yang dikocok dengan kuat dan absorbansi pada
517 nm ditentukan setelah 20 menit pada suhu kamar
Sampel kontrol disiapkan mengandung volume yang sama
tanpa senyawa uji atau referensi antioksidan sementara
DMSO digunakan sebagai kosong Referensi antioksidan BHT
digunakan sebagai kontrol positif dalam semua tes itu
aktivitas radikal diukur sebagai penurunan
absorbansi DPPH dan dihitung sebagai berikut ∙
Efek pembilasan ( ) = [
Control 119860 - sampel 119860kontrol 119860] times 100 ( 1 )
di mana kontrol 119860 adalah absorbansi kontrol dan sampel 119860 adalah
absorbansi ekstrak atau fraksi atau standar
242 Superoksida Radikal - Scavenging Assay superoksida The
efek radikal - pemulungan ditentukan dengan metode
Nishikimi et al [ 28 ] Campuran reaksi dengan NBT ( 1 mM )
dalam buffer fosfat ( 01 M pH 74 ) NADH ( 1 mM ) dengan atau
tanpa sampel dan PMS ( 01mm ) diinkubasi pada ruang
Suhu selama 5 menit dan absorbansi tercatat sebesar
560 nm Persentase penghambatan dihitung terhadap
kontrol tanpa sampel Kemampuan pemulungan adalah
dihitung dengan menggunakan persamaan seperti yang dijelaskan untuk uji DPPH
243 Hydroxyl Radical Scavenging Assay Kapasitas
ekstrak dan senyawa untuk mengurangi radikal hidroksil - dimediasi
peroksidasi dilakukan dengan metode Hinneburg
et al [ 29 ] Secara singkat 05ml 56mm 2 - deoksi - D - ribosa di
KH2PO4 - NaOH penyangga ( 50mm pH 74 ) 02mL 100 M
FeCl3 dan 104mm EDTA ( 1 1 v v ) larutan yang ditambahkan ke
01ml konsentrasi yang berbeda dari sampel uji diikuti oleh
100 uL 10mMH2O2 dan 01ml dari 10mm BHT berair
Campuran reaksi yang dikocok dengan kuat dan diinkubasi
pada 50 ∘ C selama 30 menit Selanjutnya 1mL 28 TCA dan 1mL
dari 10 TBA ditambahkan ke masing-masing tabung reaksi yang berisi
campuran dan sampel dicampur dengan baik lagi dan direbus dalam
Mandi air pada 50 ∘ C untuk 30minThe absorbansi larutan adalah
baca pada 532 nm Hidroksil Kemampuan radikal adalah
dihitung dengan menggunakan rumus seperti yang dijelaskan forDPPHassay dan
nilai-nilai disajikan sebagai sarana analisis rangkap tiga
244 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
Uji FRAP ditentukan dengan metode Benzie dan
Regangan [ 30 ] dengan sedikit modifikasi Hal ini tergantung pada
kemampuan sampel untuk mengurangi tripyridyltriazine besi
( Fe ( III ) - TPTZ ) kompleks untuk tripyridyltriazine besi ( Fe ( II ) -
TPTZ ) pada pH rendah Fe ( II ) - TPTZ memiliki warna biru intensif
yang dapat dibaca pada 593nm Solusi saham terdiri
300mm buffer asetat ( pH 36 ) 10mm 2 4 6 tripyridyl
S triazina ( TPTZ ) di 40mm HCl dan 20mm besi
solusi klorida Solusi pekerjaan baru disiapkan
dengan mencampurkan 25 mL buffer asetat 25ml dari TPTZ dan
25ml dari FeCl3 sdot 6H2O dan suhu dipertahankan
37 ∘ C sebelum digunakan The berbagai konsentrasi ekstrak
senyawa dan BHT ( 10-50 mg mL ) diizinkan untuk bereaksi
dengan 2ml larutan FRAP selama 30 menit dalam gelap
kondisi Absorbansi tercatat sebesar 593 nm itu
Hasil disajikan dalam μMFe ( II ) g dan diperkirakan
menggunakan berair FeSO4 sdot 7H2O ( 20 - 100μM ) sebagai standar untuk
kalibrasi
245NitricOxide Radical ScavengingAssay pada fisiologis
pH oksida nitrat yang dihasilkan dari natrium nitroprusside di
larutan berinteraksi dengan oksigen untuk menghasilkan nitrit
ion whichwere diukur dengan theGriess reaksi [ 31 ] Secara singkat
3ml dari reactionmixture mengandung 10mMsodiumnitroprusside
dan sampel uji ( 10-50 mg mL ) fosfat
penyangga diinkubasi selama 150min pada 25 ∘ C Setelah inkubasi
05ml dari campuran reaksi dicampur dengan 1 mL dari
pereaksi asam sulfanilat ( 033 dalam 20 asam asetat glasial ) dan
didiamkan selama 5 menit untuk diazotisasi lengkap kemudian
1mL dari naftil etilen diamin dihidroklorida ( 01
w v ) ditambahkan dan campuran didiamkan selama
30 menit pada 25 ∘ C Sebuah kromofor berwarna merah muda yang dihasilkan
dan absorbansi diukur secara spektrofotometri
pada 540 nm terhadap sampel kosong The oksida nitrat radikal
aktivitas scavenging ekstrak dan senyawa dilaporkan
sebagai penghambatan dan dihitung dengan menggunakan rumus sebagai
dijelaskan untuk uji DPPH
246 Lipid Peroksidasi Assay Peroksidasi lipid ( PUT )
assay dilakukan menurut protokol yang dijelaskan oleh
Damien et al [ 32 ] tomeasure lipid peroksida yang terbentuk dengan menggunakan
homogenates kuning telur sebagai media yang kaya lipid Secara singkat 05ml dari
homogenate telur ( 10 v v disusun 115 b v KCl ) adalah
ditambahkan ke 01ml masing-masing sampel uji ( 10-50 mg mL ) diambil
dalam tabung reaksi dan disusun sampai dengan 1mL dengan ganda suling
air Setelah itu 005mL dari FeSO4 ( 007M ) ditambahkan ke
menginduksi peroksidasi lipid dan campuran diinkubasi selama
30 menit pada roomtemperatureThen 15mL asam 35Macetic
( pH disesuaikan menjadi 35 ) ditambahkan diikuti oleh 15mL dari TBA
( 006M ) sodium dodesil sulfat ( 004M ) Hasil dari paket tersebut
Campuran adalah vortex dan dipanaskan pada 95 ∘ C untuk 1hrAfter pendinginan
5 mL dari butanol ditambahkan ke masing-masing tabung dan disentrifugasi pada
3000 rpm selama 10 menit Absorbansi dari atas organik
lapisan diukur pada 532 nm dan prosedur di atas adalah diikuti untuk kontrol dengan menggunakan 01ml SDS bukan
sampel uji Penghambatan Persentase dihitung
sesuai dengan rumus berikut
Persentase penghambatan peroksidasi lipid = (1 - 119864 119862) times 100 (2)
mana 119864 adalah absorbansi sampel uji dan 119862 adalah absorbansi kontrol sepenuhnya teroksidasi
25 Analisis Statistik Percobaan dilakukan di
rangkap tiga dan data dinyatakan sebagai berarti plusmn standar deviasi
(SD) Semua analisa statistik dilakukan dengan menggunakan grafik
pad prisma (versi 50 Graph Pad software Inc San Diego
CA USA) The IC50 mewakili nilai konsentrasi
sampel uji yang menyebabkan penghambatan 50 Nilai 119875 lt005
dianggap signifikan
3 Hasil dan Diskusi
31 Isolasi dan Penentuan Struktur dari Antioksidan
Compound Ekstrak metanol dan potensi antioksidan
fraksi L nodiflora awalnya disaring oleh
uji DPPH spektrofotometri dan hasilnya ditampilkan
pada Tabel 1 The DPPH assay mengungkapkan bahwa metanol
ekstrak memiliki efek pemulungan signifikan dengan meningkatnya
konsentrasi di kisaran 10-50 mg mL Selain itu
efek scavenging ekstrak ofmethanol secara signifikan mirip
dengan yang BHT standar Pada 50 mg mL ekstrak metanol
dan BHT dipamerkan 7935 dan 8642 inhibisi dan
Nilai IC50 ( konsentrasi dengan aktivitas scavenging
50 ) adalah 24 dan 19 mg mL hasil yang diperoleh respectivelyThe
di sini lebih rendah dari aktivitas pemulungan dilaporkan
ekstrak metanol L nodiflora ( 1203 mg mL ) [ 33 ] antara
fraksi yang DPPH secara signifikan memulung oleh etil∙
fraksi asetat ( EAF ) dengan cara yang tergantung dosis dengan
nilai IC50 dari 26 mg mL diikuti oleh WF dan BF dengan
Nilai-nilai IC50 dari 66 dan 83 mg mL ( Tabel 1 ) Oleh karena itu EAF
menjadi sasaran berulang bioassay - dipandu fraksinasi pada
kromatografi kolom silika gel menggunakan petroleum eter
EtOAc gradien sistem elusi Pemurnian lebih lanjut
fraksi aktif yang diperoleh dari kromatografi kolom silika gel
akhirnya menghasilkan senyawa antioksidan bioaktif dari
dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 v v ) campuran itu
Prosedur ekstraksi untuk isolasi senyawa aktif
yang skematis ditunjukkan pada Gambar 1 Gambar 2 ( a) menunjukkan
Profil HPLC dari kandungan kimia hadir dalam 90
ekstrak metanol L nodiflora The HPLC Kromatogram
senyawa murni terkena kehadiran puncak dengan
waktu retensi 72 menit dielusi isocratically dengan ponsel
fase metanol - 05 asam fosfat dalam air ( 60 40
v v ) ( Gambar 2 ( b ) )
Senyawa tersebut diperoleh sebagai pucat putih amorf
bubuk (hasil 117mg 068 ) Puncak FTIR ditentukan
obligasi yang relevan dengan alkohol O - H peregangan ( 3267 - cm 1 )
= C - H peregangan ( 3010 cm - 1 ) - C - H peregangan ( 2975 cm - 1 )
- C = O peregangan ( 1605 - cm 1 ) - C = peregangan C ( 1506 cm - 1 )
Tabel 1 Aktivitas radikal DPPH dari ekstrak kasar dan
fraksi udara bagian Lippia nodiflora L
Contoh DPPH ( IC50 ) ( mg mL )
CME 2466 plusmn 11
EAF 2606 plusmn 095
BF 8362 plusmn 045
WF 6639 plusmn 052
BHTa 1912 plusmn 057
aBHT Standard antioksidan Data direpresentasikan sebagai berarti plusmn SD ( 119899 = 3 )
- C - H membungkuk ( 1154 - cm 1 ) C - O peregangan ( 1315 - cm 1 )
= C - H membungkuk ( 1030 - cm 1 ) dan O - H membungkuk ( 993 cm - 1 )
1H ( CDCl3 400MHz ) δ ( ppm ) 391 ( 3H 119904 4 1015840 - OMe )
389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )
664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =
63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H
H6 1015840 ) 13C NMR ( CDCl3 100MHz ) δ ( ppm ) 17161 ( C - 4 )
14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682
( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )
15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -
10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka
S1 dan S2 dari Informasi Tambahan tersedia secara online
di httpdxdoiorg1011552014549836 ) senyawa
menunjukkan berat molekul 329 ( ESI - MS 119898 119911 351084 [ M
+ Na ] + ) dengan rumus unsur C18H16O6 ( Gambar 3 )
Dari interpretasi ini spektral senyawa terisolasi
telah ditandai sebagai 2 - ( 3 4 - dimethoxyphenyl ) -5 -
hidroksi - 7 - metoksi - 4H - chromen - 4 -one ( 5 - hydroxy - 3 1015840 4 1015840
7 - trimethoxyflavone ) ( Gambar 4 ) yang setuju dengan data
dilaporkan [ 34 ]
32 Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Metanol dan Terisolasi
Senyawa dari Fraksi Etil Asetat ( EAF ) Flavonoid a kelompok utama dari polifenol dianggap aktif prinsip pada tanaman diversemedicinal dan telah dilaporkan untuk memiliki berbagai sifat farmakologi yang paling penting flavonoid activityof biologis ismainlydue untuk mereka antioksidan properti dengan bertindak sebagai pemulung radikal hidrogen donor zat pereduksi dan inhibitor peroksidasi Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa farmakologis yang efek L nodiflora seperti antioksidan diuretik antiradang dan kegiatan antimikroba diakui karena adanya fenol dan senyawa flavonoid Dalam penelitian ini senyawa hasil isolasi adalah diidentifikasi sebagai flavone dan kegiatan antioksidan diperiksa dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model
321 DPPH Radical Scavenging Effect
Zat yang dianggap antioksidan ketika mereka mampu mengurangi DPPH radikal stabil ( ungu ) ke nonradical membentuk DPPH - H ( kuning ) dan dengan demikian mereka bertindak sebagai radikal pemulung karena kemampuan hidrogen menyumbangkan mereka [ 37 ]
Hasil kegiatan pemulungan DPPH dari semua sampel uji disajikan pada Gambar 5 ( a) Aktivitas scavenging ekstrak metanol senyawa dan BHT meningkat dengan peningkatan konsentrasi sampel ( 10-50 mg mL ) itu(GAMBAR)
Ekstrak metanol mentah
(647 g)
Resuspend dengan air hangat
Ekstraksi dengan etil asetat
fase cair
(367 g)
Fraksi etil asetat
(EAF 172 g)
Ekstraksi dengan n-butanol
Kromatografi kolom (CC)
Pet eter-EtOAc (100 0 ~ 0 100)
Fraksi n-Butanol
(BF 153 g)
fraksi air
(WF 186 g)
Fr A Fr B Fr C Fr D Fr E Fr F Fr G
CC pada silika gel
Fr B1 Fr B2 Fr Fr B3 B4 Fr B5
(25 75)
senyawa
(117mg)
(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)
pada silika gel
(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)
(1-13)
Petether-EtOAc
Bubuk udara bagian L Nodiflora
(GAMBAR)
highestDPPHscavenging aktivitas untuk ekstrak senyawa dan
BHT ditemukan menjadi 7935 7266 dan 8609 masing-masing
pada 50 mg mL Perlu dicatat bahwa scavenging
aktivitas compoundwas ditemukan dekat dengan ekstrak
Nilai-nilai IC50 aktivitas scavenging pada DPPH radikal
ekstrak dan BHT diberikan dalam Tabel 1 sedangkan untuk senyawa
ditemukan menjadi 27 mg mL Dari data yang diperoleh tersebut
ekstrak dan senyawa dianggap sebagai efektif
inhibitor radikal bebas serta antioksidan primer
yang dapat membatasi kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi di
tubuh
322 Superoksida Radical Scavenging Effect Pembentukan
spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil hidrogen
peroksida dan singlet oksigen dalam sistem hidup terutama
karena partisipasi radikal anion superoksida baik
secara langsung atau secara luas melalui enzim atau perkembangan logam katalis
[ 38 ] Oleh karena itu diantisipasi untuk mengevaluasi
Kapasitas interceptive relatif ekstrak dan senyawa
untuk mengais-ngais yang superoksida radikal Dari data yang disajikan
pada Gambar 5 ( b ) tercatat bahwa ekstrak senyawa
dan BHT menunjukkan aktivitas radikal tertinggi
( 7107 -8464 ) pada 50 mg mL dan aktivitas pemulungan
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sampel itu
kemampuan senyawa pembilasan pada radikal superoksida
ditemukan moderat dibandingkan dengan ekstrak metanol
Namun kegiatan pemulungan ekstrak ( 8309 ) yang
ditemukan sangat dekat dengan yang BHT ( 8464 ) yang merupakan
dianggap sebagai scavenger radikal superoksida yang kuat itu
Nilai IC50 dari ekstrak tumbuhan senyawa dan BHT ditemukan
menjadi 32 38 dan 26 mg mL masing-masing
323 Hydroxyl Radical Scavenging Effect Radikal hidroksil
spesies oksigen reaktif sangat dikenal kompeten
untuk menyerang dan merusak hampir setiap molekul dalam sel-sel hidup
[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid
Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari
membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging
ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil
Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -
trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara
L nodiflora
penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa
menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada
Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk
ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan
7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora
( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa
( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat
mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50
dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa
mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙
sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena
Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙
324 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas
digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam
polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya
terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka
dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen
atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan
dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
TLC ( Silica gel F254 pelat 20 times 20cm Merck Jerman )
Analisis KLT dilakukan dengan menggunakan etil asetat kloroform
asam format ( 50401 ) sebagai fase gerak dan
band dipisahkan divisualisasikan menggunakan uap yodium dan
vanillin - asam sulfat reagen Fraksi ini dikumpulkan
untuk membeli tujuh fraksi utama (P A 1-13 Fr B 14-35
Fr C 36-48 Fr D 49-60 Fr E 61-70 Fr F 71-80 dan
Fr G 81-92 ) berdasarkan analisis TLC Fraksi ini adalah
diuji untuk bioaktivitas menggunakan DPPH assay spektrofotometri
Untuk pemurnian lebih lanjut yang sangat aktif Fr B ( 28 g)
dimuat pada kolom silika gel dielusi dengan petroleum eter -
EtOAc gradien dan isi etil asetat dari themixture
meningkat dalam serangkaian langkah 5 Tidak aktif dan kurang
fraksi terbukti aktif dibuang Akhirnya aktif Fr
B2 dielusi dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 ) menghasilkan
117mg senyawa Kemurnian senyawa hasil isolasi adalah
establishedbyHPLCandits structurewas dikonfirmasikan melalui
interpretasi data spektral ( UV FT - IR 1H
13C NMR dan MS ) dan selanjutnya diuji untuk antioksidan
efek
24 Aktivitas antioksidan
241 DPPH Radical Scavenging Assay The DPPH radikal
kegiatan pemulungan ekstrak metanol EAF BF dan WF
diuji menurut Yamaguchi et al [ 27 ] Secara singkat 02mL
dari solusi sampel konsentrasi yang berbeda ditambahkan
untuk 1mL 01mm larutan DPPH baru disiapkan itu
campuran reaksi yang dikocok dengan kuat dan absorbansi pada
517 nm ditentukan setelah 20 menit pada suhu kamar
Sampel kontrol disiapkan mengandung volume yang sama
tanpa senyawa uji atau referensi antioksidan sementara
DMSO digunakan sebagai kosong Referensi antioksidan BHT
digunakan sebagai kontrol positif dalam semua tes itu
aktivitas radikal diukur sebagai penurunan
absorbansi DPPH dan dihitung sebagai berikut ∙
Efek pembilasan ( ) = [
Control 119860 - sampel 119860kontrol 119860] times 100 ( 1 )
di mana kontrol 119860 adalah absorbansi kontrol dan sampel 119860 adalah
absorbansi ekstrak atau fraksi atau standar
242 Superoksida Radikal - Scavenging Assay superoksida The
efek radikal - pemulungan ditentukan dengan metode
Nishikimi et al [ 28 ] Campuran reaksi dengan NBT ( 1 mM )
dalam buffer fosfat ( 01 M pH 74 ) NADH ( 1 mM ) dengan atau
tanpa sampel dan PMS ( 01mm ) diinkubasi pada ruang
Suhu selama 5 menit dan absorbansi tercatat sebesar
560 nm Persentase penghambatan dihitung terhadap
kontrol tanpa sampel Kemampuan pemulungan adalah
dihitung dengan menggunakan persamaan seperti yang dijelaskan untuk uji DPPH
243 Hydroxyl Radical Scavenging Assay Kapasitas
ekstrak dan senyawa untuk mengurangi radikal hidroksil - dimediasi
peroksidasi dilakukan dengan metode Hinneburg
et al [ 29 ] Secara singkat 05ml 56mm 2 - deoksi - D - ribosa di
KH2PO4 - NaOH penyangga ( 50mm pH 74 ) 02mL 100 M
FeCl3 dan 104mm EDTA ( 1 1 v v ) larutan yang ditambahkan ke
01ml konsentrasi yang berbeda dari sampel uji diikuti oleh
100 uL 10mMH2O2 dan 01ml dari 10mm BHT berair
Campuran reaksi yang dikocok dengan kuat dan diinkubasi
pada 50 ∘ C selama 30 menit Selanjutnya 1mL 28 TCA dan 1mL
dari 10 TBA ditambahkan ke masing-masing tabung reaksi yang berisi
campuran dan sampel dicampur dengan baik lagi dan direbus dalam
Mandi air pada 50 ∘ C untuk 30minThe absorbansi larutan adalah
baca pada 532 nm Hidroksil Kemampuan radikal adalah
dihitung dengan menggunakan rumus seperti yang dijelaskan forDPPHassay dan
nilai-nilai disajikan sebagai sarana analisis rangkap tiga
244 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
Uji FRAP ditentukan dengan metode Benzie dan
Regangan [ 30 ] dengan sedikit modifikasi Hal ini tergantung pada
kemampuan sampel untuk mengurangi tripyridyltriazine besi
( Fe ( III ) - TPTZ ) kompleks untuk tripyridyltriazine besi ( Fe ( II ) -
TPTZ ) pada pH rendah Fe ( II ) - TPTZ memiliki warna biru intensif
yang dapat dibaca pada 593nm Solusi saham terdiri
300mm buffer asetat ( pH 36 ) 10mm 2 4 6 tripyridyl
S triazina ( TPTZ ) di 40mm HCl dan 20mm besi
solusi klorida Solusi pekerjaan baru disiapkan
dengan mencampurkan 25 mL buffer asetat 25ml dari TPTZ dan
25ml dari FeCl3 sdot 6H2O dan suhu dipertahankan
37 ∘ C sebelum digunakan The berbagai konsentrasi ekstrak
senyawa dan BHT ( 10-50 mg mL ) diizinkan untuk bereaksi
dengan 2ml larutan FRAP selama 30 menit dalam gelap
kondisi Absorbansi tercatat sebesar 593 nm itu
Hasil disajikan dalam μMFe ( II ) g dan diperkirakan
menggunakan berair FeSO4 sdot 7H2O ( 20 - 100μM ) sebagai standar untuk
kalibrasi
245NitricOxide Radical ScavengingAssay pada fisiologis
pH oksida nitrat yang dihasilkan dari natrium nitroprusside di
larutan berinteraksi dengan oksigen untuk menghasilkan nitrit
ion whichwere diukur dengan theGriess reaksi [ 31 ] Secara singkat
3ml dari reactionmixture mengandung 10mMsodiumnitroprusside
dan sampel uji ( 10-50 mg mL ) fosfat
penyangga diinkubasi selama 150min pada 25 ∘ C Setelah inkubasi
05ml dari campuran reaksi dicampur dengan 1 mL dari
pereaksi asam sulfanilat ( 033 dalam 20 asam asetat glasial ) dan
didiamkan selama 5 menit untuk diazotisasi lengkap kemudian
1mL dari naftil etilen diamin dihidroklorida ( 01
w v ) ditambahkan dan campuran didiamkan selama
30 menit pada 25 ∘ C Sebuah kromofor berwarna merah muda yang dihasilkan
dan absorbansi diukur secara spektrofotometri
pada 540 nm terhadap sampel kosong The oksida nitrat radikal
aktivitas scavenging ekstrak dan senyawa dilaporkan
sebagai penghambatan dan dihitung dengan menggunakan rumus sebagai
dijelaskan untuk uji DPPH
246 Lipid Peroksidasi Assay Peroksidasi lipid ( PUT )
assay dilakukan menurut protokol yang dijelaskan oleh
Damien et al [ 32 ] tomeasure lipid peroksida yang terbentuk dengan menggunakan
homogenates kuning telur sebagai media yang kaya lipid Secara singkat 05ml dari
homogenate telur ( 10 v v disusun 115 b v KCl ) adalah
ditambahkan ke 01ml masing-masing sampel uji ( 10-50 mg mL ) diambil
dalam tabung reaksi dan disusun sampai dengan 1mL dengan ganda suling
air Setelah itu 005mL dari FeSO4 ( 007M ) ditambahkan ke
menginduksi peroksidasi lipid dan campuran diinkubasi selama
30 menit pada roomtemperatureThen 15mL asam 35Macetic
( pH disesuaikan menjadi 35 ) ditambahkan diikuti oleh 15mL dari TBA
( 006M ) sodium dodesil sulfat ( 004M ) Hasil dari paket tersebut
Campuran adalah vortex dan dipanaskan pada 95 ∘ C untuk 1hrAfter pendinginan
5 mL dari butanol ditambahkan ke masing-masing tabung dan disentrifugasi pada
3000 rpm selama 10 menit Absorbansi dari atas organik
lapisan diukur pada 532 nm dan prosedur di atas adalah diikuti untuk kontrol dengan menggunakan 01ml SDS bukan
sampel uji Penghambatan Persentase dihitung
sesuai dengan rumus berikut
Persentase penghambatan peroksidasi lipid = (1 - 119864 119862) times 100 (2)
mana 119864 adalah absorbansi sampel uji dan 119862 adalah absorbansi kontrol sepenuhnya teroksidasi
25 Analisis Statistik Percobaan dilakukan di
rangkap tiga dan data dinyatakan sebagai berarti plusmn standar deviasi
(SD) Semua analisa statistik dilakukan dengan menggunakan grafik
pad prisma (versi 50 Graph Pad software Inc San Diego
CA USA) The IC50 mewakili nilai konsentrasi
sampel uji yang menyebabkan penghambatan 50 Nilai 119875 lt005
dianggap signifikan
3 Hasil dan Diskusi
31 Isolasi dan Penentuan Struktur dari Antioksidan
Compound Ekstrak metanol dan potensi antioksidan
fraksi L nodiflora awalnya disaring oleh
uji DPPH spektrofotometri dan hasilnya ditampilkan
pada Tabel 1 The DPPH assay mengungkapkan bahwa metanol
ekstrak memiliki efek pemulungan signifikan dengan meningkatnya
konsentrasi di kisaran 10-50 mg mL Selain itu
efek scavenging ekstrak ofmethanol secara signifikan mirip
dengan yang BHT standar Pada 50 mg mL ekstrak metanol
dan BHT dipamerkan 7935 dan 8642 inhibisi dan
Nilai IC50 ( konsentrasi dengan aktivitas scavenging
50 ) adalah 24 dan 19 mg mL hasil yang diperoleh respectivelyThe
di sini lebih rendah dari aktivitas pemulungan dilaporkan
ekstrak metanol L nodiflora ( 1203 mg mL ) [ 33 ] antara
fraksi yang DPPH secara signifikan memulung oleh etil∙
fraksi asetat ( EAF ) dengan cara yang tergantung dosis dengan
nilai IC50 dari 26 mg mL diikuti oleh WF dan BF dengan
Nilai-nilai IC50 dari 66 dan 83 mg mL ( Tabel 1 ) Oleh karena itu EAF
menjadi sasaran berulang bioassay - dipandu fraksinasi pada
kromatografi kolom silika gel menggunakan petroleum eter
EtOAc gradien sistem elusi Pemurnian lebih lanjut
fraksi aktif yang diperoleh dari kromatografi kolom silika gel
akhirnya menghasilkan senyawa antioksidan bioaktif dari
dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 v v ) campuran itu
Prosedur ekstraksi untuk isolasi senyawa aktif
yang skematis ditunjukkan pada Gambar 1 Gambar 2 ( a) menunjukkan
Profil HPLC dari kandungan kimia hadir dalam 90
ekstrak metanol L nodiflora The HPLC Kromatogram
senyawa murni terkena kehadiran puncak dengan
waktu retensi 72 menit dielusi isocratically dengan ponsel
fase metanol - 05 asam fosfat dalam air ( 60 40
v v ) ( Gambar 2 ( b ) )
Senyawa tersebut diperoleh sebagai pucat putih amorf
bubuk (hasil 117mg 068 ) Puncak FTIR ditentukan
obligasi yang relevan dengan alkohol O - H peregangan ( 3267 - cm 1 )
= C - H peregangan ( 3010 cm - 1 ) - C - H peregangan ( 2975 cm - 1 )
- C = O peregangan ( 1605 - cm 1 ) - C = peregangan C ( 1506 cm - 1 )
Tabel 1 Aktivitas radikal DPPH dari ekstrak kasar dan
fraksi udara bagian Lippia nodiflora L
Contoh DPPH ( IC50 ) ( mg mL )
CME 2466 plusmn 11
EAF 2606 plusmn 095
BF 8362 plusmn 045
WF 6639 plusmn 052
BHTa 1912 plusmn 057
aBHT Standard antioksidan Data direpresentasikan sebagai berarti plusmn SD ( 119899 = 3 )
- C - H membungkuk ( 1154 - cm 1 ) C - O peregangan ( 1315 - cm 1 )
= C - H membungkuk ( 1030 - cm 1 ) dan O - H membungkuk ( 993 cm - 1 )
1H ( CDCl3 400MHz ) δ ( ppm ) 391 ( 3H 119904 4 1015840 - OMe )
389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )
664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =
63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H
H6 1015840 ) 13C NMR ( CDCl3 100MHz ) δ ( ppm ) 17161 ( C - 4 )
14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682
( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )
15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -
10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka
S1 dan S2 dari Informasi Tambahan tersedia secara online
di httpdxdoiorg1011552014549836 ) senyawa
menunjukkan berat molekul 329 ( ESI - MS 119898 119911 351084 [ M
+ Na ] + ) dengan rumus unsur C18H16O6 ( Gambar 3 )
Dari interpretasi ini spektral senyawa terisolasi
telah ditandai sebagai 2 - ( 3 4 - dimethoxyphenyl ) -5 -
hidroksi - 7 - metoksi - 4H - chromen - 4 -one ( 5 - hydroxy - 3 1015840 4 1015840
7 - trimethoxyflavone ) ( Gambar 4 ) yang setuju dengan data
dilaporkan [ 34 ]
32 Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Metanol dan Terisolasi
Senyawa dari Fraksi Etil Asetat ( EAF ) Flavonoid a kelompok utama dari polifenol dianggap aktif prinsip pada tanaman diversemedicinal dan telah dilaporkan untuk memiliki berbagai sifat farmakologi yang paling penting flavonoid activityof biologis ismainlydue untuk mereka antioksidan properti dengan bertindak sebagai pemulung radikal hidrogen donor zat pereduksi dan inhibitor peroksidasi Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa farmakologis yang efek L nodiflora seperti antioksidan diuretik antiradang dan kegiatan antimikroba diakui karena adanya fenol dan senyawa flavonoid Dalam penelitian ini senyawa hasil isolasi adalah diidentifikasi sebagai flavone dan kegiatan antioksidan diperiksa dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model
321 DPPH Radical Scavenging Effect
Zat yang dianggap antioksidan ketika mereka mampu mengurangi DPPH radikal stabil ( ungu ) ke nonradical membentuk DPPH - H ( kuning ) dan dengan demikian mereka bertindak sebagai radikal pemulung karena kemampuan hidrogen menyumbangkan mereka [ 37 ]
Hasil kegiatan pemulungan DPPH dari semua sampel uji disajikan pada Gambar 5 ( a) Aktivitas scavenging ekstrak metanol senyawa dan BHT meningkat dengan peningkatan konsentrasi sampel ( 10-50 mg mL ) itu(GAMBAR)
Ekstrak metanol mentah
(647 g)
Resuspend dengan air hangat
Ekstraksi dengan etil asetat
fase cair
(367 g)
Fraksi etil asetat
(EAF 172 g)
Ekstraksi dengan n-butanol
Kromatografi kolom (CC)
Pet eter-EtOAc (100 0 ~ 0 100)
Fraksi n-Butanol
(BF 153 g)
fraksi air
(WF 186 g)
Fr A Fr B Fr C Fr D Fr E Fr F Fr G
CC pada silika gel
Fr B1 Fr B2 Fr Fr B3 B4 Fr B5
(25 75)
senyawa
(117mg)
(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)
pada silika gel
(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)
(1-13)
Petether-EtOAc
Bubuk udara bagian L Nodiflora
(GAMBAR)
highestDPPHscavenging aktivitas untuk ekstrak senyawa dan
BHT ditemukan menjadi 7935 7266 dan 8609 masing-masing
pada 50 mg mL Perlu dicatat bahwa scavenging
aktivitas compoundwas ditemukan dekat dengan ekstrak
Nilai-nilai IC50 aktivitas scavenging pada DPPH radikal
ekstrak dan BHT diberikan dalam Tabel 1 sedangkan untuk senyawa
ditemukan menjadi 27 mg mL Dari data yang diperoleh tersebut
ekstrak dan senyawa dianggap sebagai efektif
inhibitor radikal bebas serta antioksidan primer
yang dapat membatasi kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi di
tubuh
322 Superoksida Radical Scavenging Effect Pembentukan
spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil hidrogen
peroksida dan singlet oksigen dalam sistem hidup terutama
karena partisipasi radikal anion superoksida baik
secara langsung atau secara luas melalui enzim atau perkembangan logam katalis
[ 38 ] Oleh karena itu diantisipasi untuk mengevaluasi
Kapasitas interceptive relatif ekstrak dan senyawa
untuk mengais-ngais yang superoksida radikal Dari data yang disajikan
pada Gambar 5 ( b ) tercatat bahwa ekstrak senyawa
dan BHT menunjukkan aktivitas radikal tertinggi
( 7107 -8464 ) pada 50 mg mL dan aktivitas pemulungan
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sampel itu
kemampuan senyawa pembilasan pada radikal superoksida
ditemukan moderat dibandingkan dengan ekstrak metanol
Namun kegiatan pemulungan ekstrak ( 8309 ) yang
ditemukan sangat dekat dengan yang BHT ( 8464 ) yang merupakan
dianggap sebagai scavenger radikal superoksida yang kuat itu
Nilai IC50 dari ekstrak tumbuhan senyawa dan BHT ditemukan
menjadi 32 38 dan 26 mg mL masing-masing
323 Hydroxyl Radical Scavenging Effect Radikal hidroksil
spesies oksigen reaktif sangat dikenal kompeten
untuk menyerang dan merusak hampir setiap molekul dalam sel-sel hidup
[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid
Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari
membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging
ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil
Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -
trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara
L nodiflora
penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa
menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada
Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk
ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan
7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora
( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa
( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat
mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50
dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa
mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙
sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena
Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙
324 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas
digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam
polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya
terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka
dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen
atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan
dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
517 nm ditentukan setelah 20 menit pada suhu kamar
Sampel kontrol disiapkan mengandung volume yang sama
tanpa senyawa uji atau referensi antioksidan sementara
DMSO digunakan sebagai kosong Referensi antioksidan BHT
digunakan sebagai kontrol positif dalam semua tes itu
aktivitas radikal diukur sebagai penurunan
absorbansi DPPH dan dihitung sebagai berikut ∙
Efek pembilasan ( ) = [
Control 119860 - sampel 119860kontrol 119860] times 100 ( 1 )
di mana kontrol 119860 adalah absorbansi kontrol dan sampel 119860 adalah
absorbansi ekstrak atau fraksi atau standar
242 Superoksida Radikal - Scavenging Assay superoksida The
efek radikal - pemulungan ditentukan dengan metode
Nishikimi et al [ 28 ] Campuran reaksi dengan NBT ( 1 mM )
dalam buffer fosfat ( 01 M pH 74 ) NADH ( 1 mM ) dengan atau
tanpa sampel dan PMS ( 01mm ) diinkubasi pada ruang
Suhu selama 5 menit dan absorbansi tercatat sebesar
560 nm Persentase penghambatan dihitung terhadap
kontrol tanpa sampel Kemampuan pemulungan adalah
dihitung dengan menggunakan persamaan seperti yang dijelaskan untuk uji DPPH
243 Hydroxyl Radical Scavenging Assay Kapasitas
ekstrak dan senyawa untuk mengurangi radikal hidroksil - dimediasi
peroksidasi dilakukan dengan metode Hinneburg
et al [ 29 ] Secara singkat 05ml 56mm 2 - deoksi - D - ribosa di
KH2PO4 - NaOH penyangga ( 50mm pH 74 ) 02mL 100 M
FeCl3 dan 104mm EDTA ( 1 1 v v ) larutan yang ditambahkan ke
01ml konsentrasi yang berbeda dari sampel uji diikuti oleh
100 uL 10mMH2O2 dan 01ml dari 10mm BHT berair
Campuran reaksi yang dikocok dengan kuat dan diinkubasi
pada 50 ∘ C selama 30 menit Selanjutnya 1mL 28 TCA dan 1mL
dari 10 TBA ditambahkan ke masing-masing tabung reaksi yang berisi
campuran dan sampel dicampur dengan baik lagi dan direbus dalam
Mandi air pada 50 ∘ C untuk 30minThe absorbansi larutan adalah
baca pada 532 nm Hidroksil Kemampuan radikal adalah
dihitung dengan menggunakan rumus seperti yang dijelaskan forDPPHassay dan
nilai-nilai disajikan sebagai sarana analisis rangkap tiga
244 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
Uji FRAP ditentukan dengan metode Benzie dan
Regangan [ 30 ] dengan sedikit modifikasi Hal ini tergantung pada
kemampuan sampel untuk mengurangi tripyridyltriazine besi
( Fe ( III ) - TPTZ ) kompleks untuk tripyridyltriazine besi ( Fe ( II ) -
TPTZ ) pada pH rendah Fe ( II ) - TPTZ memiliki warna biru intensif
yang dapat dibaca pada 593nm Solusi saham terdiri
300mm buffer asetat ( pH 36 ) 10mm 2 4 6 tripyridyl
S triazina ( TPTZ ) di 40mm HCl dan 20mm besi
solusi klorida Solusi pekerjaan baru disiapkan
dengan mencampurkan 25 mL buffer asetat 25ml dari TPTZ dan
25ml dari FeCl3 sdot 6H2O dan suhu dipertahankan
37 ∘ C sebelum digunakan The berbagai konsentrasi ekstrak
senyawa dan BHT ( 10-50 mg mL ) diizinkan untuk bereaksi
dengan 2ml larutan FRAP selama 30 menit dalam gelap
kondisi Absorbansi tercatat sebesar 593 nm itu
Hasil disajikan dalam μMFe ( II ) g dan diperkirakan
menggunakan berair FeSO4 sdot 7H2O ( 20 - 100μM ) sebagai standar untuk
kalibrasi
245NitricOxide Radical ScavengingAssay pada fisiologis
pH oksida nitrat yang dihasilkan dari natrium nitroprusside di
larutan berinteraksi dengan oksigen untuk menghasilkan nitrit
ion whichwere diukur dengan theGriess reaksi [ 31 ] Secara singkat
3ml dari reactionmixture mengandung 10mMsodiumnitroprusside
dan sampel uji ( 10-50 mg mL ) fosfat
penyangga diinkubasi selama 150min pada 25 ∘ C Setelah inkubasi
05ml dari campuran reaksi dicampur dengan 1 mL dari
pereaksi asam sulfanilat ( 033 dalam 20 asam asetat glasial ) dan
didiamkan selama 5 menit untuk diazotisasi lengkap kemudian
1mL dari naftil etilen diamin dihidroklorida ( 01
w v ) ditambahkan dan campuran didiamkan selama
30 menit pada 25 ∘ C Sebuah kromofor berwarna merah muda yang dihasilkan
dan absorbansi diukur secara spektrofotometri
pada 540 nm terhadap sampel kosong The oksida nitrat radikal
aktivitas scavenging ekstrak dan senyawa dilaporkan
sebagai penghambatan dan dihitung dengan menggunakan rumus sebagai
dijelaskan untuk uji DPPH
246 Lipid Peroksidasi Assay Peroksidasi lipid ( PUT )
assay dilakukan menurut protokol yang dijelaskan oleh
Damien et al [ 32 ] tomeasure lipid peroksida yang terbentuk dengan menggunakan
homogenates kuning telur sebagai media yang kaya lipid Secara singkat 05ml dari
homogenate telur ( 10 v v disusun 115 b v KCl ) adalah
ditambahkan ke 01ml masing-masing sampel uji ( 10-50 mg mL ) diambil
dalam tabung reaksi dan disusun sampai dengan 1mL dengan ganda suling
air Setelah itu 005mL dari FeSO4 ( 007M ) ditambahkan ke
menginduksi peroksidasi lipid dan campuran diinkubasi selama
30 menit pada roomtemperatureThen 15mL asam 35Macetic
( pH disesuaikan menjadi 35 ) ditambahkan diikuti oleh 15mL dari TBA
( 006M ) sodium dodesil sulfat ( 004M ) Hasil dari paket tersebut
Campuran adalah vortex dan dipanaskan pada 95 ∘ C untuk 1hrAfter pendinginan
5 mL dari butanol ditambahkan ke masing-masing tabung dan disentrifugasi pada
3000 rpm selama 10 menit Absorbansi dari atas organik
lapisan diukur pada 532 nm dan prosedur di atas adalah diikuti untuk kontrol dengan menggunakan 01ml SDS bukan
sampel uji Penghambatan Persentase dihitung
sesuai dengan rumus berikut
Persentase penghambatan peroksidasi lipid = (1 - 119864 119862) times 100 (2)
mana 119864 adalah absorbansi sampel uji dan 119862 adalah absorbansi kontrol sepenuhnya teroksidasi
25 Analisis Statistik Percobaan dilakukan di
rangkap tiga dan data dinyatakan sebagai berarti plusmn standar deviasi
(SD) Semua analisa statistik dilakukan dengan menggunakan grafik
pad prisma (versi 50 Graph Pad software Inc San Diego
CA USA) The IC50 mewakili nilai konsentrasi
sampel uji yang menyebabkan penghambatan 50 Nilai 119875 lt005
dianggap signifikan
3 Hasil dan Diskusi
31 Isolasi dan Penentuan Struktur dari Antioksidan
Compound Ekstrak metanol dan potensi antioksidan
fraksi L nodiflora awalnya disaring oleh
uji DPPH spektrofotometri dan hasilnya ditampilkan
pada Tabel 1 The DPPH assay mengungkapkan bahwa metanol
ekstrak memiliki efek pemulungan signifikan dengan meningkatnya
konsentrasi di kisaran 10-50 mg mL Selain itu
efek scavenging ekstrak ofmethanol secara signifikan mirip
dengan yang BHT standar Pada 50 mg mL ekstrak metanol
dan BHT dipamerkan 7935 dan 8642 inhibisi dan
Nilai IC50 ( konsentrasi dengan aktivitas scavenging
50 ) adalah 24 dan 19 mg mL hasil yang diperoleh respectivelyThe
di sini lebih rendah dari aktivitas pemulungan dilaporkan
ekstrak metanol L nodiflora ( 1203 mg mL ) [ 33 ] antara
fraksi yang DPPH secara signifikan memulung oleh etil∙
fraksi asetat ( EAF ) dengan cara yang tergantung dosis dengan
nilai IC50 dari 26 mg mL diikuti oleh WF dan BF dengan
Nilai-nilai IC50 dari 66 dan 83 mg mL ( Tabel 1 ) Oleh karena itu EAF
menjadi sasaran berulang bioassay - dipandu fraksinasi pada
kromatografi kolom silika gel menggunakan petroleum eter
EtOAc gradien sistem elusi Pemurnian lebih lanjut
fraksi aktif yang diperoleh dari kromatografi kolom silika gel
akhirnya menghasilkan senyawa antioksidan bioaktif dari
dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 v v ) campuran itu
Prosedur ekstraksi untuk isolasi senyawa aktif
yang skematis ditunjukkan pada Gambar 1 Gambar 2 ( a) menunjukkan
Profil HPLC dari kandungan kimia hadir dalam 90
ekstrak metanol L nodiflora The HPLC Kromatogram
senyawa murni terkena kehadiran puncak dengan
waktu retensi 72 menit dielusi isocratically dengan ponsel
fase metanol - 05 asam fosfat dalam air ( 60 40
v v ) ( Gambar 2 ( b ) )
Senyawa tersebut diperoleh sebagai pucat putih amorf
bubuk (hasil 117mg 068 ) Puncak FTIR ditentukan
obligasi yang relevan dengan alkohol O - H peregangan ( 3267 - cm 1 )
= C - H peregangan ( 3010 cm - 1 ) - C - H peregangan ( 2975 cm - 1 )
- C = O peregangan ( 1605 - cm 1 ) - C = peregangan C ( 1506 cm - 1 )
Tabel 1 Aktivitas radikal DPPH dari ekstrak kasar dan
fraksi udara bagian Lippia nodiflora L
Contoh DPPH ( IC50 ) ( mg mL )
CME 2466 plusmn 11
EAF 2606 plusmn 095
BF 8362 plusmn 045
WF 6639 plusmn 052
BHTa 1912 plusmn 057
aBHT Standard antioksidan Data direpresentasikan sebagai berarti plusmn SD ( 119899 = 3 )
- C - H membungkuk ( 1154 - cm 1 ) C - O peregangan ( 1315 - cm 1 )
= C - H membungkuk ( 1030 - cm 1 ) dan O - H membungkuk ( 993 cm - 1 )
1H ( CDCl3 400MHz ) δ ( ppm ) 391 ( 3H 119904 4 1015840 - OMe )
389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )
664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =
63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H
H6 1015840 ) 13C NMR ( CDCl3 100MHz ) δ ( ppm ) 17161 ( C - 4 )
14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682
( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )
15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -
10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka
S1 dan S2 dari Informasi Tambahan tersedia secara online
di httpdxdoiorg1011552014549836 ) senyawa
menunjukkan berat molekul 329 ( ESI - MS 119898 119911 351084 [ M
+ Na ] + ) dengan rumus unsur C18H16O6 ( Gambar 3 )
Dari interpretasi ini spektral senyawa terisolasi
telah ditandai sebagai 2 - ( 3 4 - dimethoxyphenyl ) -5 -
hidroksi - 7 - metoksi - 4H - chromen - 4 -one ( 5 - hydroxy - 3 1015840 4 1015840
7 - trimethoxyflavone ) ( Gambar 4 ) yang setuju dengan data
dilaporkan [ 34 ]
32 Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Metanol dan Terisolasi
Senyawa dari Fraksi Etil Asetat ( EAF ) Flavonoid a kelompok utama dari polifenol dianggap aktif prinsip pada tanaman diversemedicinal dan telah dilaporkan untuk memiliki berbagai sifat farmakologi yang paling penting flavonoid activityof biologis ismainlydue untuk mereka antioksidan properti dengan bertindak sebagai pemulung radikal hidrogen donor zat pereduksi dan inhibitor peroksidasi Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa farmakologis yang efek L nodiflora seperti antioksidan diuretik antiradang dan kegiatan antimikroba diakui karena adanya fenol dan senyawa flavonoid Dalam penelitian ini senyawa hasil isolasi adalah diidentifikasi sebagai flavone dan kegiatan antioksidan diperiksa dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model
321 DPPH Radical Scavenging Effect
Zat yang dianggap antioksidan ketika mereka mampu mengurangi DPPH radikal stabil ( ungu ) ke nonradical membentuk DPPH - H ( kuning ) dan dengan demikian mereka bertindak sebagai radikal pemulung karena kemampuan hidrogen menyumbangkan mereka [ 37 ]
Hasil kegiatan pemulungan DPPH dari semua sampel uji disajikan pada Gambar 5 ( a) Aktivitas scavenging ekstrak metanol senyawa dan BHT meningkat dengan peningkatan konsentrasi sampel ( 10-50 mg mL ) itu(GAMBAR)
Ekstrak metanol mentah
(647 g)
Resuspend dengan air hangat
Ekstraksi dengan etil asetat
fase cair
(367 g)
Fraksi etil asetat
(EAF 172 g)
Ekstraksi dengan n-butanol
Kromatografi kolom (CC)
Pet eter-EtOAc (100 0 ~ 0 100)
Fraksi n-Butanol
(BF 153 g)
fraksi air
(WF 186 g)
Fr A Fr B Fr C Fr D Fr E Fr F Fr G
CC pada silika gel
Fr B1 Fr B2 Fr Fr B3 B4 Fr B5
(25 75)
senyawa
(117mg)
(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)
pada silika gel
(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)
(1-13)
Petether-EtOAc
Bubuk udara bagian L Nodiflora
(GAMBAR)
highestDPPHscavenging aktivitas untuk ekstrak senyawa dan
BHT ditemukan menjadi 7935 7266 dan 8609 masing-masing
pada 50 mg mL Perlu dicatat bahwa scavenging
aktivitas compoundwas ditemukan dekat dengan ekstrak
Nilai-nilai IC50 aktivitas scavenging pada DPPH radikal
ekstrak dan BHT diberikan dalam Tabel 1 sedangkan untuk senyawa
ditemukan menjadi 27 mg mL Dari data yang diperoleh tersebut
ekstrak dan senyawa dianggap sebagai efektif
inhibitor radikal bebas serta antioksidan primer
yang dapat membatasi kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi di
tubuh
322 Superoksida Radical Scavenging Effect Pembentukan
spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil hidrogen
peroksida dan singlet oksigen dalam sistem hidup terutama
karena partisipasi radikal anion superoksida baik
secara langsung atau secara luas melalui enzim atau perkembangan logam katalis
[ 38 ] Oleh karena itu diantisipasi untuk mengevaluasi
Kapasitas interceptive relatif ekstrak dan senyawa
untuk mengais-ngais yang superoksida radikal Dari data yang disajikan
pada Gambar 5 ( b ) tercatat bahwa ekstrak senyawa
dan BHT menunjukkan aktivitas radikal tertinggi
( 7107 -8464 ) pada 50 mg mL dan aktivitas pemulungan
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sampel itu
kemampuan senyawa pembilasan pada radikal superoksida
ditemukan moderat dibandingkan dengan ekstrak metanol
Namun kegiatan pemulungan ekstrak ( 8309 ) yang
ditemukan sangat dekat dengan yang BHT ( 8464 ) yang merupakan
dianggap sebagai scavenger radikal superoksida yang kuat itu
Nilai IC50 dari ekstrak tumbuhan senyawa dan BHT ditemukan
menjadi 32 38 dan 26 mg mL masing-masing
323 Hydroxyl Radical Scavenging Effect Radikal hidroksil
spesies oksigen reaktif sangat dikenal kompeten
untuk menyerang dan merusak hampir setiap molekul dalam sel-sel hidup
[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid
Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari
membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging
ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil
Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -
trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara
L nodiflora
penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa
menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada
Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk
ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan
7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora
( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa
( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat
mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50
dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa
mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙
sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena
Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙
324 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas
digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam
polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya
terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka
dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen
atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan
dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
FeCl3 dan 104mm EDTA ( 1 1 v v ) larutan yang ditambahkan ke
01ml konsentrasi yang berbeda dari sampel uji diikuti oleh
100 uL 10mMH2O2 dan 01ml dari 10mm BHT berair
Campuran reaksi yang dikocok dengan kuat dan diinkubasi
pada 50 ∘ C selama 30 menit Selanjutnya 1mL 28 TCA dan 1mL
dari 10 TBA ditambahkan ke masing-masing tabung reaksi yang berisi
campuran dan sampel dicampur dengan baik lagi dan direbus dalam
Mandi air pada 50 ∘ C untuk 30minThe absorbansi larutan adalah
baca pada 532 nm Hidroksil Kemampuan radikal adalah
dihitung dengan menggunakan rumus seperti yang dijelaskan forDPPHassay dan
nilai-nilai disajikan sebagai sarana analisis rangkap tiga
244 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
Uji FRAP ditentukan dengan metode Benzie dan
Regangan [ 30 ] dengan sedikit modifikasi Hal ini tergantung pada
kemampuan sampel untuk mengurangi tripyridyltriazine besi
( Fe ( III ) - TPTZ ) kompleks untuk tripyridyltriazine besi ( Fe ( II ) -
TPTZ ) pada pH rendah Fe ( II ) - TPTZ memiliki warna biru intensif
yang dapat dibaca pada 593nm Solusi saham terdiri
300mm buffer asetat ( pH 36 ) 10mm 2 4 6 tripyridyl
S triazina ( TPTZ ) di 40mm HCl dan 20mm besi
solusi klorida Solusi pekerjaan baru disiapkan
dengan mencampurkan 25 mL buffer asetat 25ml dari TPTZ dan
25ml dari FeCl3 sdot 6H2O dan suhu dipertahankan
37 ∘ C sebelum digunakan The berbagai konsentrasi ekstrak
senyawa dan BHT ( 10-50 mg mL ) diizinkan untuk bereaksi
dengan 2ml larutan FRAP selama 30 menit dalam gelap
kondisi Absorbansi tercatat sebesar 593 nm itu
Hasil disajikan dalam μMFe ( II ) g dan diperkirakan
menggunakan berair FeSO4 sdot 7H2O ( 20 - 100μM ) sebagai standar untuk
kalibrasi
245NitricOxide Radical ScavengingAssay pada fisiologis
pH oksida nitrat yang dihasilkan dari natrium nitroprusside di
larutan berinteraksi dengan oksigen untuk menghasilkan nitrit
ion whichwere diukur dengan theGriess reaksi [ 31 ] Secara singkat
3ml dari reactionmixture mengandung 10mMsodiumnitroprusside
dan sampel uji ( 10-50 mg mL ) fosfat
penyangga diinkubasi selama 150min pada 25 ∘ C Setelah inkubasi
05ml dari campuran reaksi dicampur dengan 1 mL dari
pereaksi asam sulfanilat ( 033 dalam 20 asam asetat glasial ) dan
didiamkan selama 5 menit untuk diazotisasi lengkap kemudian
1mL dari naftil etilen diamin dihidroklorida ( 01
w v ) ditambahkan dan campuran didiamkan selama
30 menit pada 25 ∘ C Sebuah kromofor berwarna merah muda yang dihasilkan
dan absorbansi diukur secara spektrofotometri
pada 540 nm terhadap sampel kosong The oksida nitrat radikal
aktivitas scavenging ekstrak dan senyawa dilaporkan
sebagai penghambatan dan dihitung dengan menggunakan rumus sebagai
dijelaskan untuk uji DPPH
246 Lipid Peroksidasi Assay Peroksidasi lipid ( PUT )
assay dilakukan menurut protokol yang dijelaskan oleh
Damien et al [ 32 ] tomeasure lipid peroksida yang terbentuk dengan menggunakan
homogenates kuning telur sebagai media yang kaya lipid Secara singkat 05ml dari
homogenate telur ( 10 v v disusun 115 b v KCl ) adalah
ditambahkan ke 01ml masing-masing sampel uji ( 10-50 mg mL ) diambil
dalam tabung reaksi dan disusun sampai dengan 1mL dengan ganda suling
air Setelah itu 005mL dari FeSO4 ( 007M ) ditambahkan ke
menginduksi peroksidasi lipid dan campuran diinkubasi selama
30 menit pada roomtemperatureThen 15mL asam 35Macetic
( pH disesuaikan menjadi 35 ) ditambahkan diikuti oleh 15mL dari TBA
( 006M ) sodium dodesil sulfat ( 004M ) Hasil dari paket tersebut
Campuran adalah vortex dan dipanaskan pada 95 ∘ C untuk 1hrAfter pendinginan
5 mL dari butanol ditambahkan ke masing-masing tabung dan disentrifugasi pada
3000 rpm selama 10 menit Absorbansi dari atas organik
lapisan diukur pada 532 nm dan prosedur di atas adalah diikuti untuk kontrol dengan menggunakan 01ml SDS bukan
sampel uji Penghambatan Persentase dihitung
sesuai dengan rumus berikut
Persentase penghambatan peroksidasi lipid = (1 - 119864 119862) times 100 (2)
mana 119864 adalah absorbansi sampel uji dan 119862 adalah absorbansi kontrol sepenuhnya teroksidasi
25 Analisis Statistik Percobaan dilakukan di
rangkap tiga dan data dinyatakan sebagai berarti plusmn standar deviasi
(SD) Semua analisa statistik dilakukan dengan menggunakan grafik
pad prisma (versi 50 Graph Pad software Inc San Diego
CA USA) The IC50 mewakili nilai konsentrasi
sampel uji yang menyebabkan penghambatan 50 Nilai 119875 lt005
dianggap signifikan
3 Hasil dan Diskusi
31 Isolasi dan Penentuan Struktur dari Antioksidan
Compound Ekstrak metanol dan potensi antioksidan
fraksi L nodiflora awalnya disaring oleh
uji DPPH spektrofotometri dan hasilnya ditampilkan
pada Tabel 1 The DPPH assay mengungkapkan bahwa metanol
ekstrak memiliki efek pemulungan signifikan dengan meningkatnya
konsentrasi di kisaran 10-50 mg mL Selain itu
efek scavenging ekstrak ofmethanol secara signifikan mirip
dengan yang BHT standar Pada 50 mg mL ekstrak metanol
dan BHT dipamerkan 7935 dan 8642 inhibisi dan
Nilai IC50 ( konsentrasi dengan aktivitas scavenging
50 ) adalah 24 dan 19 mg mL hasil yang diperoleh respectivelyThe
di sini lebih rendah dari aktivitas pemulungan dilaporkan
ekstrak metanol L nodiflora ( 1203 mg mL ) [ 33 ] antara
fraksi yang DPPH secara signifikan memulung oleh etil∙
fraksi asetat ( EAF ) dengan cara yang tergantung dosis dengan
nilai IC50 dari 26 mg mL diikuti oleh WF dan BF dengan
Nilai-nilai IC50 dari 66 dan 83 mg mL ( Tabel 1 ) Oleh karena itu EAF
menjadi sasaran berulang bioassay - dipandu fraksinasi pada
kromatografi kolom silika gel menggunakan petroleum eter
EtOAc gradien sistem elusi Pemurnian lebih lanjut
fraksi aktif yang diperoleh dari kromatografi kolom silika gel
akhirnya menghasilkan senyawa antioksidan bioaktif dari
dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 v v ) campuran itu
Prosedur ekstraksi untuk isolasi senyawa aktif
yang skematis ditunjukkan pada Gambar 1 Gambar 2 ( a) menunjukkan
Profil HPLC dari kandungan kimia hadir dalam 90
ekstrak metanol L nodiflora The HPLC Kromatogram
senyawa murni terkena kehadiran puncak dengan
waktu retensi 72 menit dielusi isocratically dengan ponsel
fase metanol - 05 asam fosfat dalam air ( 60 40
v v ) ( Gambar 2 ( b ) )
Senyawa tersebut diperoleh sebagai pucat putih amorf
bubuk (hasil 117mg 068 ) Puncak FTIR ditentukan
obligasi yang relevan dengan alkohol O - H peregangan ( 3267 - cm 1 )
= C - H peregangan ( 3010 cm - 1 ) - C - H peregangan ( 2975 cm - 1 )
- C = O peregangan ( 1605 - cm 1 ) - C = peregangan C ( 1506 cm - 1 )
Tabel 1 Aktivitas radikal DPPH dari ekstrak kasar dan
fraksi udara bagian Lippia nodiflora L
Contoh DPPH ( IC50 ) ( mg mL )
CME 2466 plusmn 11
EAF 2606 plusmn 095
BF 8362 plusmn 045
WF 6639 plusmn 052
BHTa 1912 plusmn 057
aBHT Standard antioksidan Data direpresentasikan sebagai berarti plusmn SD ( 119899 = 3 )
- C - H membungkuk ( 1154 - cm 1 ) C - O peregangan ( 1315 - cm 1 )
= C - H membungkuk ( 1030 - cm 1 ) dan O - H membungkuk ( 993 cm - 1 )
1H ( CDCl3 400MHz ) δ ( ppm ) 391 ( 3H 119904 4 1015840 - OMe )
389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )
664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =
63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H
H6 1015840 ) 13C NMR ( CDCl3 100MHz ) δ ( ppm ) 17161 ( C - 4 )
14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682
( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )
15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -
10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka
S1 dan S2 dari Informasi Tambahan tersedia secara online
di httpdxdoiorg1011552014549836 ) senyawa
menunjukkan berat molekul 329 ( ESI - MS 119898 119911 351084 [ M
+ Na ] + ) dengan rumus unsur C18H16O6 ( Gambar 3 )
Dari interpretasi ini spektral senyawa terisolasi
telah ditandai sebagai 2 - ( 3 4 - dimethoxyphenyl ) -5 -
hidroksi - 7 - metoksi - 4H - chromen - 4 -one ( 5 - hydroxy - 3 1015840 4 1015840
7 - trimethoxyflavone ) ( Gambar 4 ) yang setuju dengan data
dilaporkan [ 34 ]
32 Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Metanol dan Terisolasi
Senyawa dari Fraksi Etil Asetat ( EAF ) Flavonoid a kelompok utama dari polifenol dianggap aktif prinsip pada tanaman diversemedicinal dan telah dilaporkan untuk memiliki berbagai sifat farmakologi yang paling penting flavonoid activityof biologis ismainlydue untuk mereka antioksidan properti dengan bertindak sebagai pemulung radikal hidrogen donor zat pereduksi dan inhibitor peroksidasi Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa farmakologis yang efek L nodiflora seperti antioksidan diuretik antiradang dan kegiatan antimikroba diakui karena adanya fenol dan senyawa flavonoid Dalam penelitian ini senyawa hasil isolasi adalah diidentifikasi sebagai flavone dan kegiatan antioksidan diperiksa dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model
321 DPPH Radical Scavenging Effect
Zat yang dianggap antioksidan ketika mereka mampu mengurangi DPPH radikal stabil ( ungu ) ke nonradical membentuk DPPH - H ( kuning ) dan dengan demikian mereka bertindak sebagai radikal pemulung karena kemampuan hidrogen menyumbangkan mereka [ 37 ]
Hasil kegiatan pemulungan DPPH dari semua sampel uji disajikan pada Gambar 5 ( a) Aktivitas scavenging ekstrak metanol senyawa dan BHT meningkat dengan peningkatan konsentrasi sampel ( 10-50 mg mL ) itu(GAMBAR)
Ekstrak metanol mentah
(647 g)
Resuspend dengan air hangat
Ekstraksi dengan etil asetat
fase cair
(367 g)
Fraksi etil asetat
(EAF 172 g)
Ekstraksi dengan n-butanol
Kromatografi kolom (CC)
Pet eter-EtOAc (100 0 ~ 0 100)
Fraksi n-Butanol
(BF 153 g)
fraksi air
(WF 186 g)
Fr A Fr B Fr C Fr D Fr E Fr F Fr G
CC pada silika gel
Fr B1 Fr B2 Fr Fr B3 B4 Fr B5
(25 75)
senyawa
(117mg)
(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)
pada silika gel
(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)
(1-13)
Petether-EtOAc
Bubuk udara bagian L Nodiflora
(GAMBAR)
highestDPPHscavenging aktivitas untuk ekstrak senyawa dan
BHT ditemukan menjadi 7935 7266 dan 8609 masing-masing
pada 50 mg mL Perlu dicatat bahwa scavenging
aktivitas compoundwas ditemukan dekat dengan ekstrak
Nilai-nilai IC50 aktivitas scavenging pada DPPH radikal
ekstrak dan BHT diberikan dalam Tabel 1 sedangkan untuk senyawa
ditemukan menjadi 27 mg mL Dari data yang diperoleh tersebut
ekstrak dan senyawa dianggap sebagai efektif
inhibitor radikal bebas serta antioksidan primer
yang dapat membatasi kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi di
tubuh
322 Superoksida Radical Scavenging Effect Pembentukan
spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil hidrogen
peroksida dan singlet oksigen dalam sistem hidup terutama
karena partisipasi radikal anion superoksida baik
secara langsung atau secara luas melalui enzim atau perkembangan logam katalis
[ 38 ] Oleh karena itu diantisipasi untuk mengevaluasi
Kapasitas interceptive relatif ekstrak dan senyawa
untuk mengais-ngais yang superoksida radikal Dari data yang disajikan
pada Gambar 5 ( b ) tercatat bahwa ekstrak senyawa
dan BHT menunjukkan aktivitas radikal tertinggi
( 7107 -8464 ) pada 50 mg mL dan aktivitas pemulungan
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sampel itu
kemampuan senyawa pembilasan pada radikal superoksida
ditemukan moderat dibandingkan dengan ekstrak metanol
Namun kegiatan pemulungan ekstrak ( 8309 ) yang
ditemukan sangat dekat dengan yang BHT ( 8464 ) yang merupakan
dianggap sebagai scavenger radikal superoksida yang kuat itu
Nilai IC50 dari ekstrak tumbuhan senyawa dan BHT ditemukan
menjadi 32 38 dan 26 mg mL masing-masing
323 Hydroxyl Radical Scavenging Effect Radikal hidroksil
spesies oksigen reaktif sangat dikenal kompeten
untuk menyerang dan merusak hampir setiap molekul dalam sel-sel hidup
[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid
Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari
membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging
ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil
Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -
trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara
L nodiflora
penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa
menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada
Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk
ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan
7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora
( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa
( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat
mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50
dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa
mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙
sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena
Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙
324 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas
digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam
polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya
terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka
dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen
atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan
dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
Hasil disajikan dalam μMFe ( II ) g dan diperkirakan
menggunakan berair FeSO4 sdot 7H2O ( 20 - 100μM ) sebagai standar untuk
kalibrasi
245NitricOxide Radical ScavengingAssay pada fisiologis
pH oksida nitrat yang dihasilkan dari natrium nitroprusside di
larutan berinteraksi dengan oksigen untuk menghasilkan nitrit
ion whichwere diukur dengan theGriess reaksi [ 31 ] Secara singkat
3ml dari reactionmixture mengandung 10mMsodiumnitroprusside
dan sampel uji ( 10-50 mg mL ) fosfat
penyangga diinkubasi selama 150min pada 25 ∘ C Setelah inkubasi
05ml dari campuran reaksi dicampur dengan 1 mL dari
pereaksi asam sulfanilat ( 033 dalam 20 asam asetat glasial ) dan
didiamkan selama 5 menit untuk diazotisasi lengkap kemudian
1mL dari naftil etilen diamin dihidroklorida ( 01
w v ) ditambahkan dan campuran didiamkan selama
30 menit pada 25 ∘ C Sebuah kromofor berwarna merah muda yang dihasilkan
dan absorbansi diukur secara spektrofotometri
pada 540 nm terhadap sampel kosong The oksida nitrat radikal
aktivitas scavenging ekstrak dan senyawa dilaporkan
sebagai penghambatan dan dihitung dengan menggunakan rumus sebagai
dijelaskan untuk uji DPPH
246 Lipid Peroksidasi Assay Peroksidasi lipid ( PUT )
assay dilakukan menurut protokol yang dijelaskan oleh
Damien et al [ 32 ] tomeasure lipid peroksida yang terbentuk dengan menggunakan
homogenates kuning telur sebagai media yang kaya lipid Secara singkat 05ml dari
homogenate telur ( 10 v v disusun 115 b v KCl ) adalah
ditambahkan ke 01ml masing-masing sampel uji ( 10-50 mg mL ) diambil
dalam tabung reaksi dan disusun sampai dengan 1mL dengan ganda suling
air Setelah itu 005mL dari FeSO4 ( 007M ) ditambahkan ke
menginduksi peroksidasi lipid dan campuran diinkubasi selama
30 menit pada roomtemperatureThen 15mL asam 35Macetic
( pH disesuaikan menjadi 35 ) ditambahkan diikuti oleh 15mL dari TBA
( 006M ) sodium dodesil sulfat ( 004M ) Hasil dari paket tersebut
Campuran adalah vortex dan dipanaskan pada 95 ∘ C untuk 1hrAfter pendinginan
5 mL dari butanol ditambahkan ke masing-masing tabung dan disentrifugasi pada
3000 rpm selama 10 menit Absorbansi dari atas organik
lapisan diukur pada 532 nm dan prosedur di atas adalah diikuti untuk kontrol dengan menggunakan 01ml SDS bukan
sampel uji Penghambatan Persentase dihitung
sesuai dengan rumus berikut
Persentase penghambatan peroksidasi lipid = (1 - 119864 119862) times 100 (2)
mana 119864 adalah absorbansi sampel uji dan 119862 adalah absorbansi kontrol sepenuhnya teroksidasi
25 Analisis Statistik Percobaan dilakukan di
rangkap tiga dan data dinyatakan sebagai berarti plusmn standar deviasi
(SD) Semua analisa statistik dilakukan dengan menggunakan grafik
pad prisma (versi 50 Graph Pad software Inc San Diego
CA USA) The IC50 mewakili nilai konsentrasi
sampel uji yang menyebabkan penghambatan 50 Nilai 119875 lt005
dianggap signifikan
3 Hasil dan Diskusi
31 Isolasi dan Penentuan Struktur dari Antioksidan
Compound Ekstrak metanol dan potensi antioksidan
fraksi L nodiflora awalnya disaring oleh
uji DPPH spektrofotometri dan hasilnya ditampilkan
pada Tabel 1 The DPPH assay mengungkapkan bahwa metanol
ekstrak memiliki efek pemulungan signifikan dengan meningkatnya
konsentrasi di kisaran 10-50 mg mL Selain itu
efek scavenging ekstrak ofmethanol secara signifikan mirip
dengan yang BHT standar Pada 50 mg mL ekstrak metanol
dan BHT dipamerkan 7935 dan 8642 inhibisi dan
Nilai IC50 ( konsentrasi dengan aktivitas scavenging
50 ) adalah 24 dan 19 mg mL hasil yang diperoleh respectivelyThe
di sini lebih rendah dari aktivitas pemulungan dilaporkan
ekstrak metanol L nodiflora ( 1203 mg mL ) [ 33 ] antara
fraksi yang DPPH secara signifikan memulung oleh etil∙
fraksi asetat ( EAF ) dengan cara yang tergantung dosis dengan
nilai IC50 dari 26 mg mL diikuti oleh WF dan BF dengan
Nilai-nilai IC50 dari 66 dan 83 mg mL ( Tabel 1 ) Oleh karena itu EAF
menjadi sasaran berulang bioassay - dipandu fraksinasi pada
kromatografi kolom silika gel menggunakan petroleum eter
EtOAc gradien sistem elusi Pemurnian lebih lanjut
fraksi aktif yang diperoleh dari kromatografi kolom silika gel
akhirnya menghasilkan senyawa antioksidan bioaktif dari
dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 v v ) campuran itu
Prosedur ekstraksi untuk isolasi senyawa aktif
yang skematis ditunjukkan pada Gambar 1 Gambar 2 ( a) menunjukkan
Profil HPLC dari kandungan kimia hadir dalam 90
ekstrak metanol L nodiflora The HPLC Kromatogram
senyawa murni terkena kehadiran puncak dengan
waktu retensi 72 menit dielusi isocratically dengan ponsel
fase metanol - 05 asam fosfat dalam air ( 60 40
v v ) ( Gambar 2 ( b ) )
Senyawa tersebut diperoleh sebagai pucat putih amorf
bubuk (hasil 117mg 068 ) Puncak FTIR ditentukan
obligasi yang relevan dengan alkohol O - H peregangan ( 3267 - cm 1 )
= C - H peregangan ( 3010 cm - 1 ) - C - H peregangan ( 2975 cm - 1 )
- C = O peregangan ( 1605 - cm 1 ) - C = peregangan C ( 1506 cm - 1 )
Tabel 1 Aktivitas radikal DPPH dari ekstrak kasar dan
fraksi udara bagian Lippia nodiflora L
Contoh DPPH ( IC50 ) ( mg mL )
CME 2466 plusmn 11
EAF 2606 plusmn 095
BF 8362 plusmn 045
WF 6639 plusmn 052
BHTa 1912 plusmn 057
aBHT Standard antioksidan Data direpresentasikan sebagai berarti plusmn SD ( 119899 = 3 )
- C - H membungkuk ( 1154 - cm 1 ) C - O peregangan ( 1315 - cm 1 )
= C - H membungkuk ( 1030 - cm 1 ) dan O - H membungkuk ( 993 cm - 1 )
1H ( CDCl3 400MHz ) δ ( ppm ) 391 ( 3H 119904 4 1015840 - OMe )
389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )
664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =
63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H
H6 1015840 ) 13C NMR ( CDCl3 100MHz ) δ ( ppm ) 17161 ( C - 4 )
14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682
( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )
15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -
10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka
S1 dan S2 dari Informasi Tambahan tersedia secara online
di httpdxdoiorg1011552014549836 ) senyawa
menunjukkan berat molekul 329 ( ESI - MS 119898 119911 351084 [ M
+ Na ] + ) dengan rumus unsur C18H16O6 ( Gambar 3 )
Dari interpretasi ini spektral senyawa terisolasi
telah ditandai sebagai 2 - ( 3 4 - dimethoxyphenyl ) -5 -
hidroksi - 7 - metoksi - 4H - chromen - 4 -one ( 5 - hydroxy - 3 1015840 4 1015840
7 - trimethoxyflavone ) ( Gambar 4 ) yang setuju dengan data
dilaporkan [ 34 ]
32 Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Metanol dan Terisolasi
Senyawa dari Fraksi Etil Asetat ( EAF ) Flavonoid a kelompok utama dari polifenol dianggap aktif prinsip pada tanaman diversemedicinal dan telah dilaporkan untuk memiliki berbagai sifat farmakologi yang paling penting flavonoid activityof biologis ismainlydue untuk mereka antioksidan properti dengan bertindak sebagai pemulung radikal hidrogen donor zat pereduksi dan inhibitor peroksidasi Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa farmakologis yang efek L nodiflora seperti antioksidan diuretik antiradang dan kegiatan antimikroba diakui karena adanya fenol dan senyawa flavonoid Dalam penelitian ini senyawa hasil isolasi adalah diidentifikasi sebagai flavone dan kegiatan antioksidan diperiksa dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model
321 DPPH Radical Scavenging Effect
Zat yang dianggap antioksidan ketika mereka mampu mengurangi DPPH radikal stabil ( ungu ) ke nonradical membentuk DPPH - H ( kuning ) dan dengan demikian mereka bertindak sebagai radikal pemulung karena kemampuan hidrogen menyumbangkan mereka [ 37 ]
Hasil kegiatan pemulungan DPPH dari semua sampel uji disajikan pada Gambar 5 ( a) Aktivitas scavenging ekstrak metanol senyawa dan BHT meningkat dengan peningkatan konsentrasi sampel ( 10-50 mg mL ) itu(GAMBAR)
Ekstrak metanol mentah
(647 g)
Resuspend dengan air hangat
Ekstraksi dengan etil asetat
fase cair
(367 g)
Fraksi etil asetat
(EAF 172 g)
Ekstraksi dengan n-butanol
Kromatografi kolom (CC)
Pet eter-EtOAc (100 0 ~ 0 100)
Fraksi n-Butanol
(BF 153 g)
fraksi air
(WF 186 g)
Fr A Fr B Fr C Fr D Fr E Fr F Fr G
CC pada silika gel
Fr B1 Fr B2 Fr Fr B3 B4 Fr B5
(25 75)
senyawa
(117mg)
(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)
pada silika gel
(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)
(1-13)
Petether-EtOAc
Bubuk udara bagian L Nodiflora
(GAMBAR)
highestDPPHscavenging aktivitas untuk ekstrak senyawa dan
BHT ditemukan menjadi 7935 7266 dan 8609 masing-masing
pada 50 mg mL Perlu dicatat bahwa scavenging
aktivitas compoundwas ditemukan dekat dengan ekstrak
Nilai-nilai IC50 aktivitas scavenging pada DPPH radikal
ekstrak dan BHT diberikan dalam Tabel 1 sedangkan untuk senyawa
ditemukan menjadi 27 mg mL Dari data yang diperoleh tersebut
ekstrak dan senyawa dianggap sebagai efektif
inhibitor radikal bebas serta antioksidan primer
yang dapat membatasi kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi di
tubuh
322 Superoksida Radical Scavenging Effect Pembentukan
spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil hidrogen
peroksida dan singlet oksigen dalam sistem hidup terutama
karena partisipasi radikal anion superoksida baik
secara langsung atau secara luas melalui enzim atau perkembangan logam katalis
[ 38 ] Oleh karena itu diantisipasi untuk mengevaluasi
Kapasitas interceptive relatif ekstrak dan senyawa
untuk mengais-ngais yang superoksida radikal Dari data yang disajikan
pada Gambar 5 ( b ) tercatat bahwa ekstrak senyawa
dan BHT menunjukkan aktivitas radikal tertinggi
( 7107 -8464 ) pada 50 mg mL dan aktivitas pemulungan
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sampel itu
kemampuan senyawa pembilasan pada radikal superoksida
ditemukan moderat dibandingkan dengan ekstrak metanol
Namun kegiatan pemulungan ekstrak ( 8309 ) yang
ditemukan sangat dekat dengan yang BHT ( 8464 ) yang merupakan
dianggap sebagai scavenger radikal superoksida yang kuat itu
Nilai IC50 dari ekstrak tumbuhan senyawa dan BHT ditemukan
menjadi 32 38 dan 26 mg mL masing-masing
323 Hydroxyl Radical Scavenging Effect Radikal hidroksil
spesies oksigen reaktif sangat dikenal kompeten
untuk menyerang dan merusak hampir setiap molekul dalam sel-sel hidup
[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid
Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari
membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging
ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil
Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -
trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara
L nodiflora
penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa
menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada
Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk
ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan
7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora
( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa
( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat
mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50
dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa
mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙
sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena
Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙
324 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas
digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam
polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya
terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka
dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen
atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan
dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
dalam tabung reaksi dan disusun sampai dengan 1mL dengan ganda suling
air Setelah itu 005mL dari FeSO4 ( 007M ) ditambahkan ke
menginduksi peroksidasi lipid dan campuran diinkubasi selama
30 menit pada roomtemperatureThen 15mL asam 35Macetic
( pH disesuaikan menjadi 35 ) ditambahkan diikuti oleh 15mL dari TBA
( 006M ) sodium dodesil sulfat ( 004M ) Hasil dari paket tersebut
Campuran adalah vortex dan dipanaskan pada 95 ∘ C untuk 1hrAfter pendinginan
5 mL dari butanol ditambahkan ke masing-masing tabung dan disentrifugasi pada
3000 rpm selama 10 menit Absorbansi dari atas organik
lapisan diukur pada 532 nm dan prosedur di atas adalah diikuti untuk kontrol dengan menggunakan 01ml SDS bukan
sampel uji Penghambatan Persentase dihitung
sesuai dengan rumus berikut
Persentase penghambatan peroksidasi lipid = (1 - 119864 119862) times 100 (2)
mana 119864 adalah absorbansi sampel uji dan 119862 adalah absorbansi kontrol sepenuhnya teroksidasi
25 Analisis Statistik Percobaan dilakukan di
rangkap tiga dan data dinyatakan sebagai berarti plusmn standar deviasi
(SD) Semua analisa statistik dilakukan dengan menggunakan grafik
pad prisma (versi 50 Graph Pad software Inc San Diego
CA USA) The IC50 mewakili nilai konsentrasi
sampel uji yang menyebabkan penghambatan 50 Nilai 119875 lt005
dianggap signifikan
3 Hasil dan Diskusi
31 Isolasi dan Penentuan Struktur dari Antioksidan
Compound Ekstrak metanol dan potensi antioksidan
fraksi L nodiflora awalnya disaring oleh
uji DPPH spektrofotometri dan hasilnya ditampilkan
pada Tabel 1 The DPPH assay mengungkapkan bahwa metanol
ekstrak memiliki efek pemulungan signifikan dengan meningkatnya
konsentrasi di kisaran 10-50 mg mL Selain itu
efek scavenging ekstrak ofmethanol secara signifikan mirip
dengan yang BHT standar Pada 50 mg mL ekstrak metanol
dan BHT dipamerkan 7935 dan 8642 inhibisi dan
Nilai IC50 ( konsentrasi dengan aktivitas scavenging
50 ) adalah 24 dan 19 mg mL hasil yang diperoleh respectivelyThe
di sini lebih rendah dari aktivitas pemulungan dilaporkan
ekstrak metanol L nodiflora ( 1203 mg mL ) [ 33 ] antara
fraksi yang DPPH secara signifikan memulung oleh etil∙
fraksi asetat ( EAF ) dengan cara yang tergantung dosis dengan
nilai IC50 dari 26 mg mL diikuti oleh WF dan BF dengan
Nilai-nilai IC50 dari 66 dan 83 mg mL ( Tabel 1 ) Oleh karena itu EAF
menjadi sasaran berulang bioassay - dipandu fraksinasi pada
kromatografi kolom silika gel menggunakan petroleum eter
EtOAc gradien sistem elusi Pemurnian lebih lanjut
fraksi aktif yang diperoleh dari kromatografi kolom silika gel
akhirnya menghasilkan senyawa antioksidan bioaktif dari
dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 v v ) campuran itu
Prosedur ekstraksi untuk isolasi senyawa aktif
yang skematis ditunjukkan pada Gambar 1 Gambar 2 ( a) menunjukkan
Profil HPLC dari kandungan kimia hadir dalam 90
ekstrak metanol L nodiflora The HPLC Kromatogram
senyawa murni terkena kehadiran puncak dengan
waktu retensi 72 menit dielusi isocratically dengan ponsel
fase metanol - 05 asam fosfat dalam air ( 60 40
v v ) ( Gambar 2 ( b ) )
Senyawa tersebut diperoleh sebagai pucat putih amorf
bubuk (hasil 117mg 068 ) Puncak FTIR ditentukan
obligasi yang relevan dengan alkohol O - H peregangan ( 3267 - cm 1 )
= C - H peregangan ( 3010 cm - 1 ) - C - H peregangan ( 2975 cm - 1 )
- C = O peregangan ( 1605 - cm 1 ) - C = peregangan C ( 1506 cm - 1 )
Tabel 1 Aktivitas radikal DPPH dari ekstrak kasar dan
fraksi udara bagian Lippia nodiflora L
Contoh DPPH ( IC50 ) ( mg mL )
CME 2466 plusmn 11
EAF 2606 plusmn 095
BF 8362 plusmn 045
WF 6639 plusmn 052
BHTa 1912 plusmn 057
aBHT Standard antioksidan Data direpresentasikan sebagai berarti plusmn SD ( 119899 = 3 )
- C - H membungkuk ( 1154 - cm 1 ) C - O peregangan ( 1315 - cm 1 )
= C - H membungkuk ( 1030 - cm 1 ) dan O - H membungkuk ( 993 cm - 1 )
1H ( CDCl3 400MHz ) δ ( ppm ) 391 ( 3H 119904 4 1015840 - OMe )
389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )
664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =
63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H
H6 1015840 ) 13C NMR ( CDCl3 100MHz ) δ ( ppm ) 17161 ( C - 4 )
14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682
( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )
15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -
10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka
S1 dan S2 dari Informasi Tambahan tersedia secara online
di httpdxdoiorg1011552014549836 ) senyawa
menunjukkan berat molekul 329 ( ESI - MS 119898 119911 351084 [ M
+ Na ] + ) dengan rumus unsur C18H16O6 ( Gambar 3 )
Dari interpretasi ini spektral senyawa terisolasi
telah ditandai sebagai 2 - ( 3 4 - dimethoxyphenyl ) -5 -
hidroksi - 7 - metoksi - 4H - chromen - 4 -one ( 5 - hydroxy - 3 1015840 4 1015840
7 - trimethoxyflavone ) ( Gambar 4 ) yang setuju dengan data
dilaporkan [ 34 ]
32 Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Metanol dan Terisolasi
Senyawa dari Fraksi Etil Asetat ( EAF ) Flavonoid a kelompok utama dari polifenol dianggap aktif prinsip pada tanaman diversemedicinal dan telah dilaporkan untuk memiliki berbagai sifat farmakologi yang paling penting flavonoid activityof biologis ismainlydue untuk mereka antioksidan properti dengan bertindak sebagai pemulung radikal hidrogen donor zat pereduksi dan inhibitor peroksidasi Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa farmakologis yang efek L nodiflora seperti antioksidan diuretik antiradang dan kegiatan antimikroba diakui karena adanya fenol dan senyawa flavonoid Dalam penelitian ini senyawa hasil isolasi adalah diidentifikasi sebagai flavone dan kegiatan antioksidan diperiksa dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model
321 DPPH Radical Scavenging Effect
Zat yang dianggap antioksidan ketika mereka mampu mengurangi DPPH radikal stabil ( ungu ) ke nonradical membentuk DPPH - H ( kuning ) dan dengan demikian mereka bertindak sebagai radikal pemulung karena kemampuan hidrogen menyumbangkan mereka [ 37 ]
Hasil kegiatan pemulungan DPPH dari semua sampel uji disajikan pada Gambar 5 ( a) Aktivitas scavenging ekstrak metanol senyawa dan BHT meningkat dengan peningkatan konsentrasi sampel ( 10-50 mg mL ) itu(GAMBAR)
Ekstrak metanol mentah
(647 g)
Resuspend dengan air hangat
Ekstraksi dengan etil asetat
fase cair
(367 g)
Fraksi etil asetat
(EAF 172 g)
Ekstraksi dengan n-butanol
Kromatografi kolom (CC)
Pet eter-EtOAc (100 0 ~ 0 100)
Fraksi n-Butanol
(BF 153 g)
fraksi air
(WF 186 g)
Fr A Fr B Fr C Fr D Fr E Fr F Fr G
CC pada silika gel
Fr B1 Fr B2 Fr Fr B3 B4 Fr B5
(25 75)
senyawa
(117mg)
(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)
pada silika gel
(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)
(1-13)
Petether-EtOAc
Bubuk udara bagian L Nodiflora
(GAMBAR)
highestDPPHscavenging aktivitas untuk ekstrak senyawa dan
BHT ditemukan menjadi 7935 7266 dan 8609 masing-masing
pada 50 mg mL Perlu dicatat bahwa scavenging
aktivitas compoundwas ditemukan dekat dengan ekstrak
Nilai-nilai IC50 aktivitas scavenging pada DPPH radikal
ekstrak dan BHT diberikan dalam Tabel 1 sedangkan untuk senyawa
ditemukan menjadi 27 mg mL Dari data yang diperoleh tersebut
ekstrak dan senyawa dianggap sebagai efektif
inhibitor radikal bebas serta antioksidan primer
yang dapat membatasi kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi di
tubuh
322 Superoksida Radical Scavenging Effect Pembentukan
spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil hidrogen
peroksida dan singlet oksigen dalam sistem hidup terutama
karena partisipasi radikal anion superoksida baik
secara langsung atau secara luas melalui enzim atau perkembangan logam katalis
[ 38 ] Oleh karena itu diantisipasi untuk mengevaluasi
Kapasitas interceptive relatif ekstrak dan senyawa
untuk mengais-ngais yang superoksida radikal Dari data yang disajikan
pada Gambar 5 ( b ) tercatat bahwa ekstrak senyawa
dan BHT menunjukkan aktivitas radikal tertinggi
( 7107 -8464 ) pada 50 mg mL dan aktivitas pemulungan
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sampel itu
kemampuan senyawa pembilasan pada radikal superoksida
ditemukan moderat dibandingkan dengan ekstrak metanol
Namun kegiatan pemulungan ekstrak ( 8309 ) yang
ditemukan sangat dekat dengan yang BHT ( 8464 ) yang merupakan
dianggap sebagai scavenger radikal superoksida yang kuat itu
Nilai IC50 dari ekstrak tumbuhan senyawa dan BHT ditemukan
menjadi 32 38 dan 26 mg mL masing-masing
323 Hydroxyl Radical Scavenging Effect Radikal hidroksil
spesies oksigen reaktif sangat dikenal kompeten
untuk menyerang dan merusak hampir setiap molekul dalam sel-sel hidup
[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid
Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari
membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging
ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil
Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -
trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara
L nodiflora
penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa
menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada
Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk
ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan
7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora
( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa
( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat
mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50
dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa
mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙
sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena
Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙
324 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas
digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam
polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya
terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka
dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen
atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan
dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
ekstrak memiliki efek pemulungan signifikan dengan meningkatnya
konsentrasi di kisaran 10-50 mg mL Selain itu
efek scavenging ekstrak ofmethanol secara signifikan mirip
dengan yang BHT standar Pada 50 mg mL ekstrak metanol
dan BHT dipamerkan 7935 dan 8642 inhibisi dan
Nilai IC50 ( konsentrasi dengan aktivitas scavenging
50 ) adalah 24 dan 19 mg mL hasil yang diperoleh respectivelyThe
di sini lebih rendah dari aktivitas pemulungan dilaporkan
ekstrak metanol L nodiflora ( 1203 mg mL ) [ 33 ] antara
fraksi yang DPPH secara signifikan memulung oleh etil∙
fraksi asetat ( EAF ) dengan cara yang tergantung dosis dengan
nilai IC50 dari 26 mg mL diikuti oleh WF dan BF dengan
Nilai-nilai IC50 dari 66 dan 83 mg mL ( Tabel 1 ) Oleh karena itu EAF
menjadi sasaran berulang bioassay - dipandu fraksinasi pada
kromatografi kolom silika gel menggunakan petroleum eter
EtOAc gradien sistem elusi Pemurnian lebih lanjut
fraksi aktif yang diperoleh dari kromatografi kolom silika gel
akhirnya menghasilkan senyawa antioksidan bioaktif dari
dengan petroleum eter - etil asetat ( 85 15 v v ) campuran itu
Prosedur ekstraksi untuk isolasi senyawa aktif
yang skematis ditunjukkan pada Gambar 1 Gambar 2 ( a) menunjukkan
Profil HPLC dari kandungan kimia hadir dalam 90
ekstrak metanol L nodiflora The HPLC Kromatogram
senyawa murni terkena kehadiran puncak dengan
waktu retensi 72 menit dielusi isocratically dengan ponsel
fase metanol - 05 asam fosfat dalam air ( 60 40
v v ) ( Gambar 2 ( b ) )
Senyawa tersebut diperoleh sebagai pucat putih amorf
bubuk (hasil 117mg 068 ) Puncak FTIR ditentukan
obligasi yang relevan dengan alkohol O - H peregangan ( 3267 - cm 1 )
= C - H peregangan ( 3010 cm - 1 ) - C - H peregangan ( 2975 cm - 1 )
- C = O peregangan ( 1605 - cm 1 ) - C = peregangan C ( 1506 cm - 1 )
Tabel 1 Aktivitas radikal DPPH dari ekstrak kasar dan
fraksi udara bagian Lippia nodiflora L
Contoh DPPH ( IC50 ) ( mg mL )
CME 2466 plusmn 11
EAF 2606 plusmn 095
BF 8362 plusmn 045
WF 6639 plusmn 052
BHTa 1912 plusmn 057
aBHT Standard antioksidan Data direpresentasikan sebagai berarti plusmn SD ( 119899 = 3 )
- C - H membungkuk ( 1154 - cm 1 ) C - O peregangan ( 1315 - cm 1 )
= C - H membungkuk ( 1030 - cm 1 ) dan O - H membungkuk ( 993 cm - 1 )
1H ( CDCl3 400MHz ) δ ( ppm ) 391 ( 3H 119904 4 1015840 - OMe )
389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )
664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =
63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H
H6 1015840 ) 13C NMR ( CDCl3 100MHz ) δ ( ppm ) 17161 ( C - 4 )
14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682
( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )
15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -
10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka
S1 dan S2 dari Informasi Tambahan tersedia secara online
di httpdxdoiorg1011552014549836 ) senyawa
menunjukkan berat molekul 329 ( ESI - MS 119898 119911 351084 [ M
+ Na ] + ) dengan rumus unsur C18H16O6 ( Gambar 3 )
Dari interpretasi ini spektral senyawa terisolasi
telah ditandai sebagai 2 - ( 3 4 - dimethoxyphenyl ) -5 -
hidroksi - 7 - metoksi - 4H - chromen - 4 -one ( 5 - hydroxy - 3 1015840 4 1015840
7 - trimethoxyflavone ) ( Gambar 4 ) yang setuju dengan data
dilaporkan [ 34 ]
32 Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Metanol dan Terisolasi
Senyawa dari Fraksi Etil Asetat ( EAF ) Flavonoid a kelompok utama dari polifenol dianggap aktif prinsip pada tanaman diversemedicinal dan telah dilaporkan untuk memiliki berbagai sifat farmakologi yang paling penting flavonoid activityof biologis ismainlydue untuk mereka antioksidan properti dengan bertindak sebagai pemulung radikal hidrogen donor zat pereduksi dan inhibitor peroksidasi Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa farmakologis yang efek L nodiflora seperti antioksidan diuretik antiradang dan kegiatan antimikroba diakui karena adanya fenol dan senyawa flavonoid Dalam penelitian ini senyawa hasil isolasi adalah diidentifikasi sebagai flavone dan kegiatan antioksidan diperiksa dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model
321 DPPH Radical Scavenging Effect
Zat yang dianggap antioksidan ketika mereka mampu mengurangi DPPH radikal stabil ( ungu ) ke nonradical membentuk DPPH - H ( kuning ) dan dengan demikian mereka bertindak sebagai radikal pemulung karena kemampuan hidrogen menyumbangkan mereka [ 37 ]
Hasil kegiatan pemulungan DPPH dari semua sampel uji disajikan pada Gambar 5 ( a) Aktivitas scavenging ekstrak metanol senyawa dan BHT meningkat dengan peningkatan konsentrasi sampel ( 10-50 mg mL ) itu(GAMBAR)
Ekstrak metanol mentah
(647 g)
Resuspend dengan air hangat
Ekstraksi dengan etil asetat
fase cair
(367 g)
Fraksi etil asetat
(EAF 172 g)
Ekstraksi dengan n-butanol
Kromatografi kolom (CC)
Pet eter-EtOAc (100 0 ~ 0 100)
Fraksi n-Butanol
(BF 153 g)
fraksi air
(WF 186 g)
Fr A Fr B Fr C Fr D Fr E Fr F Fr G
CC pada silika gel
Fr B1 Fr B2 Fr Fr B3 B4 Fr B5
(25 75)
senyawa
(117mg)
(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)
pada silika gel
(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)
(1-13)
Petether-EtOAc
Bubuk udara bagian L Nodiflora
(GAMBAR)
highestDPPHscavenging aktivitas untuk ekstrak senyawa dan
BHT ditemukan menjadi 7935 7266 dan 8609 masing-masing
pada 50 mg mL Perlu dicatat bahwa scavenging
aktivitas compoundwas ditemukan dekat dengan ekstrak
Nilai-nilai IC50 aktivitas scavenging pada DPPH radikal
ekstrak dan BHT diberikan dalam Tabel 1 sedangkan untuk senyawa
ditemukan menjadi 27 mg mL Dari data yang diperoleh tersebut
ekstrak dan senyawa dianggap sebagai efektif
inhibitor radikal bebas serta antioksidan primer
yang dapat membatasi kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi di
tubuh
322 Superoksida Radical Scavenging Effect Pembentukan
spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil hidrogen
peroksida dan singlet oksigen dalam sistem hidup terutama
karena partisipasi radikal anion superoksida baik
secara langsung atau secara luas melalui enzim atau perkembangan logam katalis
[ 38 ] Oleh karena itu diantisipasi untuk mengevaluasi
Kapasitas interceptive relatif ekstrak dan senyawa
untuk mengais-ngais yang superoksida radikal Dari data yang disajikan
pada Gambar 5 ( b ) tercatat bahwa ekstrak senyawa
dan BHT menunjukkan aktivitas radikal tertinggi
( 7107 -8464 ) pada 50 mg mL dan aktivitas pemulungan
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sampel itu
kemampuan senyawa pembilasan pada radikal superoksida
ditemukan moderat dibandingkan dengan ekstrak metanol
Namun kegiatan pemulungan ekstrak ( 8309 ) yang
ditemukan sangat dekat dengan yang BHT ( 8464 ) yang merupakan
dianggap sebagai scavenger radikal superoksida yang kuat itu
Nilai IC50 dari ekstrak tumbuhan senyawa dan BHT ditemukan
menjadi 32 38 dan 26 mg mL masing-masing
323 Hydroxyl Radical Scavenging Effect Radikal hidroksil
spesies oksigen reaktif sangat dikenal kompeten
untuk menyerang dan merusak hampir setiap molekul dalam sel-sel hidup
[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid
Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari
membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging
ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil
Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -
trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara
L nodiflora
penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa
menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada
Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk
ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan
7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora
( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa
( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat
mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50
dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa
mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙
sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena
Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙
324 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas
digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam
polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya
terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka
dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen
atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan
dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
Senyawa tersebut diperoleh sebagai pucat putih amorf
bubuk (hasil 117mg 068 ) Puncak FTIR ditentukan
obligasi yang relevan dengan alkohol O - H peregangan ( 3267 - cm 1 )
= C - H peregangan ( 3010 cm - 1 ) - C - H peregangan ( 2975 cm - 1 )
- C = O peregangan ( 1605 - cm 1 ) - C = peregangan C ( 1506 cm - 1 )
Tabel 1 Aktivitas radikal DPPH dari ekstrak kasar dan
fraksi udara bagian Lippia nodiflora L
Contoh DPPH ( IC50 ) ( mg mL )
CME 2466 plusmn 11
EAF 2606 plusmn 095
BF 8362 plusmn 045
WF 6639 plusmn 052
BHTa 1912 plusmn 057
aBHT Standard antioksidan Data direpresentasikan sebagai berarti plusmn SD ( 119899 = 3 )
- C - H membungkuk ( 1154 - cm 1 ) C - O peregangan ( 1315 - cm 1 )
= C - H membungkuk ( 1030 - cm 1 ) dan O - H membungkuk ( 993 cm - 1 )
1H ( CDCl3 400MHz ) δ ( ppm ) 391 ( 3H 119904 4 1015840 - OMe )
389 ( 3H 119904 7 - OMe ) 387 ( 3H 119904 3 1015840 - OMe ) 649 ( 119904 1H OH )
664 ( 119889 119869 = 663Hz 1H H6 ) 6898 ( 119904 1H H8 ) 699 ( 119889 119869 =
63Hz 1H H2 1015840 ) 752 ( 119889 119869 = 63Hz 1H H5 1015840 ) 8178 ( s 1H
H6 1015840 ) 13C NMR ( CDCl3 100MHz ) δ ( ppm ) 17161 ( C - 4 )
14430 ( C - 4 1015840 ) 12569 ( C - 1 1015840 ) 16287 ( C - 2 ) 16177 ( C - 3 1015840 ) 15682
( C - 5 ) 13087 ( C - 6 1015840 ) 11428 ( C - 5 1015840 ) 13729 ( C - 9 ) 10392 ( C - 2 1015840 )
15774 ( C - 7 ) 9892 ( C - 6 ) 9819 ( C - 8 ) 11147 ( C - 3 ) 11358 ( C -
10 ) 5451 ( 7 - OMe ) 5476 ( 3 1015840 - OMe ) 5488 ( 4 1015840 - OMe ) ( Angka
S1 dan S2 dari Informasi Tambahan tersedia secara online
di httpdxdoiorg1011552014549836 ) senyawa
menunjukkan berat molekul 329 ( ESI - MS 119898 119911 351084 [ M
+ Na ] + ) dengan rumus unsur C18H16O6 ( Gambar 3 )
Dari interpretasi ini spektral senyawa terisolasi
telah ditandai sebagai 2 - ( 3 4 - dimethoxyphenyl ) -5 -
hidroksi - 7 - metoksi - 4H - chromen - 4 -one ( 5 - hydroxy - 3 1015840 4 1015840
7 - trimethoxyflavone ) ( Gambar 4 ) yang setuju dengan data
dilaporkan [ 34 ]
32 Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Metanol dan Terisolasi
Senyawa dari Fraksi Etil Asetat ( EAF ) Flavonoid a kelompok utama dari polifenol dianggap aktif prinsip pada tanaman diversemedicinal dan telah dilaporkan untuk memiliki berbagai sifat farmakologi yang paling penting flavonoid activityof biologis ismainlydue untuk mereka antioksidan properti dengan bertindak sebagai pemulung radikal hidrogen donor zat pereduksi dan inhibitor peroksidasi Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa farmakologis yang efek L nodiflora seperti antioksidan diuretik antiradang dan kegiatan antimikroba diakui karena adanya fenol dan senyawa flavonoid Dalam penelitian ini senyawa hasil isolasi adalah diidentifikasi sebagai flavone dan kegiatan antioksidan diperiksa dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model
321 DPPH Radical Scavenging Effect
Zat yang dianggap antioksidan ketika mereka mampu mengurangi DPPH radikal stabil ( ungu ) ke nonradical membentuk DPPH - H ( kuning ) dan dengan demikian mereka bertindak sebagai radikal pemulung karena kemampuan hidrogen menyumbangkan mereka [ 37 ]
Hasil kegiatan pemulungan DPPH dari semua sampel uji disajikan pada Gambar 5 ( a) Aktivitas scavenging ekstrak metanol senyawa dan BHT meningkat dengan peningkatan konsentrasi sampel ( 10-50 mg mL ) itu(GAMBAR)
Ekstrak metanol mentah
(647 g)
Resuspend dengan air hangat
Ekstraksi dengan etil asetat
fase cair
(367 g)
Fraksi etil asetat
(EAF 172 g)
Ekstraksi dengan n-butanol
Kromatografi kolom (CC)
Pet eter-EtOAc (100 0 ~ 0 100)
Fraksi n-Butanol
(BF 153 g)
fraksi air
(WF 186 g)
Fr A Fr B Fr C Fr D Fr E Fr F Fr G
CC pada silika gel
Fr B1 Fr B2 Fr Fr B3 B4 Fr B5
(25 75)
senyawa
(117mg)
(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)
pada silika gel
(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)
(1-13)
Petether-EtOAc
Bubuk udara bagian L Nodiflora
(GAMBAR)
highestDPPHscavenging aktivitas untuk ekstrak senyawa dan
BHT ditemukan menjadi 7935 7266 dan 8609 masing-masing
pada 50 mg mL Perlu dicatat bahwa scavenging
aktivitas compoundwas ditemukan dekat dengan ekstrak
Nilai-nilai IC50 aktivitas scavenging pada DPPH radikal
ekstrak dan BHT diberikan dalam Tabel 1 sedangkan untuk senyawa
ditemukan menjadi 27 mg mL Dari data yang diperoleh tersebut
ekstrak dan senyawa dianggap sebagai efektif
inhibitor radikal bebas serta antioksidan primer
yang dapat membatasi kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi di
tubuh
322 Superoksida Radical Scavenging Effect Pembentukan
spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil hidrogen
peroksida dan singlet oksigen dalam sistem hidup terutama
karena partisipasi radikal anion superoksida baik
secara langsung atau secara luas melalui enzim atau perkembangan logam katalis
[ 38 ] Oleh karena itu diantisipasi untuk mengevaluasi
Kapasitas interceptive relatif ekstrak dan senyawa
untuk mengais-ngais yang superoksida radikal Dari data yang disajikan
pada Gambar 5 ( b ) tercatat bahwa ekstrak senyawa
dan BHT menunjukkan aktivitas radikal tertinggi
( 7107 -8464 ) pada 50 mg mL dan aktivitas pemulungan
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sampel itu
kemampuan senyawa pembilasan pada radikal superoksida
ditemukan moderat dibandingkan dengan ekstrak metanol
Namun kegiatan pemulungan ekstrak ( 8309 ) yang
ditemukan sangat dekat dengan yang BHT ( 8464 ) yang merupakan
dianggap sebagai scavenger radikal superoksida yang kuat itu
Nilai IC50 dari ekstrak tumbuhan senyawa dan BHT ditemukan
menjadi 32 38 dan 26 mg mL masing-masing
323 Hydroxyl Radical Scavenging Effect Radikal hidroksil
spesies oksigen reaktif sangat dikenal kompeten
untuk menyerang dan merusak hampir setiap molekul dalam sel-sel hidup
[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid
Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari
membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging
ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil
Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -
trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara
L nodiflora
penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa
menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada
Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk
ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan
7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora
( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa
( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat
mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50
dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa
mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙
sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena
Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙
324 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas
digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam
polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya
terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka
dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen
atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan
dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
menunjukkan berat molekul 329 ( ESI - MS 119898 119911 351084 [ M
+ Na ] + ) dengan rumus unsur C18H16O6 ( Gambar 3 )
Dari interpretasi ini spektral senyawa terisolasi
telah ditandai sebagai 2 - ( 3 4 - dimethoxyphenyl ) -5 -
hidroksi - 7 - metoksi - 4H - chromen - 4 -one ( 5 - hydroxy - 3 1015840 4 1015840
7 - trimethoxyflavone ) ( Gambar 4 ) yang setuju dengan data
dilaporkan [ 34 ]
32 Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Metanol dan Terisolasi
Senyawa dari Fraksi Etil Asetat ( EAF ) Flavonoid a kelompok utama dari polifenol dianggap aktif prinsip pada tanaman diversemedicinal dan telah dilaporkan untuk memiliki berbagai sifat farmakologi yang paling penting flavonoid activityof biologis ismainlydue untuk mereka antioksidan properti dengan bertindak sebagai pemulung radikal hidrogen donor zat pereduksi dan inhibitor peroksidasi Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa farmakologis yang efek L nodiflora seperti antioksidan diuretik antiradang dan kegiatan antimikroba diakui karena adanya fenol dan senyawa flavonoid Dalam penelitian ini senyawa hasil isolasi adalah diidentifikasi sebagai flavone dan kegiatan antioksidan diperiksa dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model
321 DPPH Radical Scavenging Effect
Zat yang dianggap antioksidan ketika mereka mampu mengurangi DPPH radikal stabil ( ungu ) ke nonradical membentuk DPPH - H ( kuning ) dan dengan demikian mereka bertindak sebagai radikal pemulung karena kemampuan hidrogen menyumbangkan mereka [ 37 ]
Hasil kegiatan pemulungan DPPH dari semua sampel uji disajikan pada Gambar 5 ( a) Aktivitas scavenging ekstrak metanol senyawa dan BHT meningkat dengan peningkatan konsentrasi sampel ( 10-50 mg mL ) itu(GAMBAR)
Ekstrak metanol mentah
(647 g)
Resuspend dengan air hangat
Ekstraksi dengan etil asetat
fase cair
(367 g)
Fraksi etil asetat
(EAF 172 g)
Ekstraksi dengan n-butanol
Kromatografi kolom (CC)
Pet eter-EtOAc (100 0 ~ 0 100)
Fraksi n-Butanol
(BF 153 g)
fraksi air
(WF 186 g)
Fr A Fr B Fr C Fr D Fr E Fr F Fr G
CC pada silika gel
Fr B1 Fr B2 Fr Fr B3 B4 Fr B5
(25 75)
senyawa
(117mg)
(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)
pada silika gel
(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)
(1-13)
Petether-EtOAc
Bubuk udara bagian L Nodiflora
(GAMBAR)
highestDPPHscavenging aktivitas untuk ekstrak senyawa dan
BHT ditemukan menjadi 7935 7266 dan 8609 masing-masing
pada 50 mg mL Perlu dicatat bahwa scavenging
aktivitas compoundwas ditemukan dekat dengan ekstrak
Nilai-nilai IC50 aktivitas scavenging pada DPPH radikal
ekstrak dan BHT diberikan dalam Tabel 1 sedangkan untuk senyawa
ditemukan menjadi 27 mg mL Dari data yang diperoleh tersebut
ekstrak dan senyawa dianggap sebagai efektif
inhibitor radikal bebas serta antioksidan primer
yang dapat membatasi kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi di
tubuh
322 Superoksida Radical Scavenging Effect Pembentukan
spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil hidrogen
peroksida dan singlet oksigen dalam sistem hidup terutama
karena partisipasi radikal anion superoksida baik
secara langsung atau secara luas melalui enzim atau perkembangan logam katalis
[ 38 ] Oleh karena itu diantisipasi untuk mengevaluasi
Kapasitas interceptive relatif ekstrak dan senyawa
untuk mengais-ngais yang superoksida radikal Dari data yang disajikan
pada Gambar 5 ( b ) tercatat bahwa ekstrak senyawa
dan BHT menunjukkan aktivitas radikal tertinggi
( 7107 -8464 ) pada 50 mg mL dan aktivitas pemulungan
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sampel itu
kemampuan senyawa pembilasan pada radikal superoksida
ditemukan moderat dibandingkan dengan ekstrak metanol
Namun kegiatan pemulungan ekstrak ( 8309 ) yang
ditemukan sangat dekat dengan yang BHT ( 8464 ) yang merupakan
dianggap sebagai scavenger radikal superoksida yang kuat itu
Nilai IC50 dari ekstrak tumbuhan senyawa dan BHT ditemukan
menjadi 32 38 dan 26 mg mL masing-masing
323 Hydroxyl Radical Scavenging Effect Radikal hidroksil
spesies oksigen reaktif sangat dikenal kompeten
untuk menyerang dan merusak hampir setiap molekul dalam sel-sel hidup
[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid
Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari
membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging
ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil
Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -
trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara
L nodiflora
penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa
menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada
Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk
ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan
7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora
( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa
( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat
mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50
dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa
mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙
sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena
Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙
324 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas
digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam
polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya
terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka
dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen
atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan
dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
Kromatografi kolom (CC)
Pet eter-EtOAc (100 0 ~ 0 100)
Fraksi n-Butanol
(BF 153 g)
fraksi air
(WF 186 g)
Fr A Fr B Fr C Fr D Fr E Fr F Fr G
CC pada silika gel
Fr B1 Fr B2 Fr Fr B3 B4 Fr B5
(25 75)
senyawa
(117mg)
(14-35) (36-48) (49-60) (61-70) (71-80) (81-92)
pada silika gel
(95 05) (85 15) (70 40) (0 100)
(1-13)
Petether-EtOAc
Bubuk udara bagian L Nodiflora
(GAMBAR)
highestDPPHscavenging aktivitas untuk ekstrak senyawa dan
BHT ditemukan menjadi 7935 7266 dan 8609 masing-masing
pada 50 mg mL Perlu dicatat bahwa scavenging
aktivitas compoundwas ditemukan dekat dengan ekstrak
Nilai-nilai IC50 aktivitas scavenging pada DPPH radikal
ekstrak dan BHT diberikan dalam Tabel 1 sedangkan untuk senyawa
ditemukan menjadi 27 mg mL Dari data yang diperoleh tersebut
ekstrak dan senyawa dianggap sebagai efektif
inhibitor radikal bebas serta antioksidan primer
yang dapat membatasi kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi di
tubuh
322 Superoksida Radical Scavenging Effect Pembentukan
spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil hidrogen
peroksida dan singlet oksigen dalam sistem hidup terutama
karena partisipasi radikal anion superoksida baik
secara langsung atau secara luas melalui enzim atau perkembangan logam katalis
[ 38 ] Oleh karena itu diantisipasi untuk mengevaluasi
Kapasitas interceptive relatif ekstrak dan senyawa
untuk mengais-ngais yang superoksida radikal Dari data yang disajikan
pada Gambar 5 ( b ) tercatat bahwa ekstrak senyawa
dan BHT menunjukkan aktivitas radikal tertinggi
( 7107 -8464 ) pada 50 mg mL dan aktivitas pemulungan
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sampel itu
kemampuan senyawa pembilasan pada radikal superoksida
ditemukan moderat dibandingkan dengan ekstrak metanol
Namun kegiatan pemulungan ekstrak ( 8309 ) yang
ditemukan sangat dekat dengan yang BHT ( 8464 ) yang merupakan
dianggap sebagai scavenger radikal superoksida yang kuat itu
Nilai IC50 dari ekstrak tumbuhan senyawa dan BHT ditemukan
menjadi 32 38 dan 26 mg mL masing-masing
323 Hydroxyl Radical Scavenging Effect Radikal hidroksil
spesies oksigen reaktif sangat dikenal kompeten
untuk menyerang dan merusak hampir setiap molekul dalam sel-sel hidup
[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid
Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari
membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging
ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil
Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -
trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara
L nodiflora
penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa
menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada
Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk
ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan
7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora
( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa
( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat
mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50
dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa
mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙
sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena
Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙
324 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas
digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam
polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya
terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka
dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen
atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan
dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
ditemukan menjadi 27 mg mL Dari data yang diperoleh tersebut
ekstrak dan senyawa dianggap sebagai efektif
inhibitor radikal bebas serta antioksidan primer
yang dapat membatasi kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi di
tubuh
322 Superoksida Radical Scavenging Effect Pembentukan
spesies oksigen reaktif seperti radikal hidroksil hidrogen
peroksida dan singlet oksigen dalam sistem hidup terutama
karena partisipasi radikal anion superoksida baik
secara langsung atau secara luas melalui enzim atau perkembangan logam katalis
[ 38 ] Oleh karena itu diantisipasi untuk mengevaluasi
Kapasitas interceptive relatif ekstrak dan senyawa
untuk mengais-ngais yang superoksida radikal Dari data yang disajikan
pada Gambar 5 ( b ) tercatat bahwa ekstrak senyawa
dan BHT menunjukkan aktivitas radikal tertinggi
( 7107 -8464 ) pada 50 mg mL dan aktivitas pemulungan
meningkat dengan meningkatnya konsentrasi sampel itu
kemampuan senyawa pembilasan pada radikal superoksida
ditemukan moderat dibandingkan dengan ekstrak metanol
Namun kegiatan pemulungan ekstrak ( 8309 ) yang
ditemukan sangat dekat dengan yang BHT ( 8464 ) yang merupakan
dianggap sebagai scavenger radikal superoksida yang kuat itu
Nilai IC50 dari ekstrak tumbuhan senyawa dan BHT ditemukan
menjadi 32 38 dan 26 mg mL masing-masing
323 Hydroxyl Radical Scavenging Effect Radikal hidroksil
spesies oksigen reaktif sangat dikenal kompeten
untuk menyerang dan merusak hampir setiap molekul dalam sel-sel hidup
[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid
Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari
membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging
ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil
Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -
trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara
L nodiflora
penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa
menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada
Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk
ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan
7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora
( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa
( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat
mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50
dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa
mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙
sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena
Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙
324 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas
digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam
polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya
terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka
dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen
atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan
dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
[ 11 ] Mereka juga mampu merangsang peroksidasi lipid
Proses cepat dengan menyerang rantai samping asam lemak dari
membran fosfolipid [ 38 ] Kegiatan scavenging
ekstrak metanol senyawa dan BHT pada radikal hidroksil
Gambar 4 Struktur dari senyawa hasil isolasi ( 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 -
trimethoxyflavone ) dari etil asetat ( EAF ) sebagian kecil dari bagian udara
L nodiflora
penghambatan yang ditunjukkan pada Gambar 6 Semua sampel diperiksa
menunjukkan aktivitas radikal hidroksil signifikan pada
Konsentrasi 50 mg mL dan aktivitas scavenging untuk
ekstrak senyawa dan BHT adalah 6838 6090 dan
7416 masing-masing Ekstrak metanol L nodiflora
( IC50 = 36μgmL ) adalah lebih kuat daripada senyawa
( IC50 = 43μgmL ) Kontrol positif BHT sangat
mujarab pada radikal hidroksil dengan nilai IC50
dari 32 mg mL Ini kapasitas diamati dari ekstrak dan senyawa
mengais OH radikal menunjukkan bahwa diuji∙
sampel jauh bisa menghambat peroksidasi lipid karena
Radikal OH sangat tertekan selama peroksidasi ∙
324 FRAP ( Ferric Mengurangi Antioksidan Power) Assay itu
ferric mengurangi kekuatan antioksidan ( FRAP assay ) secara luas
digunakan dalam penilaian komponen antioksidan dalam
polifenol makanan [ 39 ] Sifat mengurangi biasanya
terkait dengan keberadaan compoundswhich mengerahkan aksi mereka
dengan memutus rantai radikal bebas dengan menyumbang hidrogen
atom [ 40 ] Hasil potensi reduktif dari ekstrak tumbuhan
dan senyawa relatif terhadap BHT antioksidan terkenal
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
Data ditunjukkan pada Tabel 2Aktifitas mengurangi kemampuan ekstrak
berada di kisaran 2346-7114 dari μMFe ( II ) gThe nilai FRAP
untuk ekstrak metanol secara signifikan lebih tinggi dari itu
senyawa dan BHT sedangkan senyawa mengungkapkan
nilai terendah FRAP ( 1118-5170 μMFe ( II ) g ) Pada 50 mg mL
nilai FRAP L ekstrak nodiflora ditemukan
7114 dibandingkan dengan senyawa BHT dan dengan nilai FRAP
dari 5170 dan 6318 masing-masing (Tabel 2 ) Hasil ini menyiratkan
bahwa senyawa hasil isolasi tidak menunjukkan mengurangi diandalkan
kekuasaan bila dibandingkan dengan DPPH dan superoksida radikal
pemulungan kemampuan
325 Nitric Oxide Radikal Scavenging Assay nitrat oksida
radikal ( NO ) memainkan peran penting dalam mendorong inflamasi∙
respon dan efek toksik mereka meningkat hanya ketika mereka
bereaksi dengan radikal superoksida yang merusak biomolekul seperti
protein lipid dan asam nukleat [ 41 ] Penindasan
NO rilis radikal mungkin disebabkan langsung ( NO )∙
pemulungan efek baik sebagai ekstrak dan senyawa menurun
jumlah nitrit yang dihasilkan dari dekomposisi
sodium nitroprusside melalui penelitian in vitro seperti yang ditunjukkan pada
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
4 Kesimpulan
Penelitian ini diproyeksikan untuk menilai antioksidan
dan kegiatan pemulungan radikal bebas ekstrak dan fraksi
dari bagian aerial L nodiflora dengan menggunakan in vitro antioksidan
model Fraksi etil asetat ( EAF ) dipamerkan
aktivitas scavenging tertinggi radikal bebas di antara fraksi
Sebuah fraksinasi bioassay - dipandu dan pemurnian EAF
menghasilkan identifikasi senyawa flavon
yaitu 5 -hydroxy - 3 1015840 4 1015840 7 - trimethoxyflavone pengukuran
aktivitas antioksidan dari senyawa flavon
dengan menggunakan berbagai in vitro antioksidan model membuktikan kepada
menjadi senyawa antioksidan kuat Hasil ini menandakan
bahwa ekstrak metanol fraksi etil asetat dan terisolasi
senyawa dipamerkan sifat antioksidan yang menarik dan
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi
membeli sebuah dasar yang penting bagi penggunaan L nodiflora di
pengobatan kerusakan oksidatif Selain itu temuan ini
memegang persepsi yang besar dalam pengembangan alternatif
agen antioksidan dan masih bekerja lebih lanjut diperlukan untuk
memilah dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari yang lain
fraksi dalam rangka membangun keberhasilan terapi dan
mekanisme aksi
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan
Ucapan Terima Kasih
Karya ini secara finansial didukung oleh Departemen Ilmu
dan Teknologi ( DST WOS - A ) New Delhi ( Hibah no
SRWOS-ALS-2372010 ) Para penulis berterima kasih kepada Dr K Kulangiappar
Electro Divisi Organik Central Elektrokimia
Research Institute Karaikudi untuk membantu dalam penafsiran NMR
dari senyawa terisolasi