Université de La Rochelle
Identification sur tro
is jours d'une souche
bactérienne issue d'un mélange
A la découverte de la microbiologie
29/05/17
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IUT La Rochelle
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Bonjour !
Bienvenue à l’IUT de la Rochelle, dans le
département Génie Biologique.
Ce diaporama a été réalisé par un groupe d’élèves de 1ère
année dans le cadre d’un projet tutoré afin de présenter la
démarche d’identification d’une souche bactérienne en 3
jours en microbiologie.
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La microbiologie
C’est quoi ?
C’est une science permettant l'étude des micro-organismes (bactéries, champignons, …)
Les objectifs ?
- Apprendre les manipulations courantes pratiquées en laboratoire
- Savoir identifier et caractériser les différents types de micro-organismes
Comment ?
Regardez la suite...
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Primordial: le lavage des mains
Tes indispensables : → ta blouse → un briquet → ton cahier de microbiologie → un marqueur
Le vestiaire
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Jour 1
État frais: observation microscopique utile pour découvrir la forme de la bactérie et sa mobilité
Bacille = forme de bâton
Coque= forme circulaire
Pour nous orienter vers une catégorie de bactéries, on peut réaliser un ÉTAT FRAIS.
2 formes possibles
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La coloration de GRAM:Chez les bactéries : 2 types de parois cellulaires
→ donne un indice supplémentaire pour l'orientation de notre identification.
But : découvrir quelle paroi possède la bactérie.
Jour 1
Interprétation :VIOLET => Gram +ROSE => Gram -
Coloration cristal violet
Décoloration à
l'éthanol
Contre coloration safranine
Mélange bactérien
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Dans notre échantillon, nous avons 3 bactéries différentes et nous voulons en identifier une seule : réalisation d’isolements.
Isolements = mise en culture sur différents milieux en boite afin de séparer les bactéries. Colonie = résultat de la multiplication d’une bactérie initiale
Jour 1
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Jour 2
Lecture des boites ensemencées le jour 1:
Ce milieu permet de visualiser les différentes colonies du mélange
Ce milieu permetuniquement la culture desbactéries Gram-
Objectif : identifier la bactérie de la colonie entourée en rouge (Bacille Gram -) !
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Colonie entourée en rouge = Bacille Gram – à identifier remise en →suspension :
Jour 2
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Tests enzymatiques : les bactéries possèdent certaines enzymescaractéristiques
Ces tests nous permettent d'avancer dans notre démarched'identification => tests d’orientation de l’identification
Jour 2
Pas de coloration violette => Test oxydase négatif
C'est un indice supplémentaire pour trouver le nom de la bactérie...
Ici, nous avons réalisé le test oxydase
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Ensemencement de la galerie API 10S :
Jour 2
Galerie vide
Eau physiologique + 1 colonie de bactérie.
Aspiration de la suspension bactérienne dans la pipette Pasteur
Remplissage des puits
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Suite des ensemencements : Tests complémentaires en tubes et boites
Jour 2
Viande-Foie → type respiratoire
MMN → mobilité, utilisation
du mannitol
HK→fermentation du glucose, oxydation du lactose , H2S
TCS → vérification de
la puretéMacConkey
→ culture de Gram – & oxydation du lactose
Caractères mis en évidence :
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Lecture des milieux ensemencés :
Jour 3
TCS de contrôle de pureté :
● Colonies semblables = culture pure → Tests validés !
Mac Conkey
● Culture sur le milieu bacilles Gram -→
● Les colonies ne sont pas roses, le milieu est jaune lactose - →
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Lecture des milieux ensemencés :
Jour 3
Viande Foie
Ensemble du tube flou
→ aéro-anaérobie facultatif (AAF)
Présence de bulles
→ gaz+
Mannitol Mobilité Nitrate
Le milieu est orange
→ mannitol +
La piqûre est floue
→ mobilité +
Hajna Kligler
La pente est rouge lactose -→
Noircissement → H2S +
Le fond du tube est orange → glucose +
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Lecture de notre galerie Api10S ensemencée au J2 :
Jour 3
- + + + + + + - - -
Les couleurs obtenues indiquent les résultats des tests
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Exploitation des résultats : identification via cheminement logique
Jour 3
Bacille Gram-
BG -AAF
Oxydase -Glucose +
Enterobacteriaceae2) Détermination de la famille :
Mannitol +Mobilité +
H2S +Lactose -ONPG -
3) Détermination du genre : Salmonella
GRACILICUTES Non exigeant et AAF } Groupe 5
1) Détermination du grand groupe :
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On recherche une bactérie avec ce profil :
Jour 3
Caractère ONPG GLU ARA LDC ODC CIT H2S URE TDA IND OX NO2
Bacterie - + + + + + + - - - - +
Notre bacille Gram – serait donc Salmonella spp
Noir +→Blanc -→
4) Détermination de l’espèce :
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Nous vérifions ensuite nos résultats grâce à un programme sur Excel :
Jour 3
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Fin
Les techniques pratiquées à l’IUT sont variées, efficaces et permettent de déterminer l’espèce d’une bactérie inconnue.
Cependant, au sein des entreprises toutes ces techniques sont
automatisées afin d’obtenir des résultats plus rapidement.
Bonne visite ! Et peut-être à l’année prochaine … ?