Klinik Örneklerdeki RNA’in korunması,
Patojenlerin inaktivasyonu ve Soğuk
zincire ihtiyaç olmadan taşınabilmesi
için geliştirilmiş özgün moleküler taşıma
ortamı (PrimeStoreMTM)
L.T. Daum and G.W. Fischer
Longhorn Vaccines and Diagnostics, San Antonio 78208, TX, USA.
Prof. Dr. Bülbin SunarReeder
GEREKÇE
Mikrop RNA ve DNA’larının
izolasyonunda ilk ve önemli basamak,
örnekleri nükleik asitleri bozulmadan
testlerin yapılacağı laboratuvara
ulaştırabilmektir.
PrimeStoreMTM bu işlemleri
kolaylaştırmak maksadıyla geliştirilmiş
bir moleküler taşıma mediumu olup,
klinik örnekleri infeksiyon tehlikesi ve
soğuk zincire ihtiyaç olmadan taşıma
imkanı sağlar.
Virus ve bakteri örnekleri
ortama konur konmaz canlılığını
kaybettikleri için Enfeksiyonun
yayılma tehlikesi ortadan
kalkmaktadır.
PrimeStore Kills Microbes
Initial 4-log dilutions of PrimeStore MTM + viruses were required prior to inoculation into tissue culture lines due to PrimeStore MTM lysis of the MDCK tissue culture cells. Therefore, only a minimum 4-log TCID50/mL reduction was observable.
PrimestoreMTM ortamına
RNA (RNA-IPC) kontrol molekülü
ilave edilerek nükleik asitlerin
pozitif kalite kontroluna imkan
sağlanmıştır. Bütün nükleik asit
testlerinde gerçek-zamanlı-RT-
PCR kullanılmıştır.
0
5
10
15
20
25
30
35
40
Positive Control
PrimeStore MTM
Copan UTM
BD UTM
Remel M4RT
Cyc
le T
hre
sho
ld (
CT)
PrimeStore MTM is Ideal for NAT Compared to
Commercial Transport Media†
5-7 Cycle Threshold (CT) values lower; 10-100X more sensitive
during real-time RT-PCR
†Copan UTM is Copan Universal Transport Medium (Copan Diagnostics, Murreta, CA); BD UTM is Becton Dickinson Universal
Transport Medium (Beckin Dickinson, Sparks, MD); PrimeStore MTM is PrimeStore Molecular Transport Medium (Longhorn
Vaccines & Diagnostics, San Antonio, TX). Remel M4RT is Remel MicroTest M4RT Multi-Microbe Media (REMEL, Lenexa, KS).
Taşıma ve saklama süresince
soğuk zincire ihtiyaç
duyulmaz. Örnek çalışması
sonunda artıklar normal
olarak çöphe atılabilir.
PrimeStore MTM Preserves Influenza RNA
@ 37˚C for 14 days
0
5
10
15
20
25
30
35
40
0 2 7 14
Cyl
ce T
hre
sho
ld (
CT)
Days @ 37 °C
PrimeStore MTM
VTM
0
5
10
15
20
25
30
35
40
10e5 10e4 10e3 10e2 10e1
Copan UTM
PrimeStore MTM
Cyc
le T
hre
shold
(CT)
Virus Concentration (TCID50/mL)
PrimeStore MTM vs. Copan UTM Across an Influenza
Viral Dilution
At lower dilutions
(102 to 101
TCID50/mL), influen
za virus was not
detected in 25%
(1/4) and 50% (2/4)
of the replicates
tested compared to
PrimeStore MTM.
Medium’dan nükleik asitlerin
izolasyonu bilinen metotlarda
hiç bir değişiklige ihtiyaç
duyulmadan kolayca
yapılabilmektedir.
0
5
10
15
20
25
30
35
40
10^3 TCID50/mL 10^1 TCID50/mL ssRNA IPC
Cyc
le T
hre
sho
ld (
CT)
Ambion RNAqueous-Micro
Qiagen Viral Mini
Invitrogen ChargeSwitch
Ambion MagMax
PrimeStoreMTM is compatible with
Commercial Extraction Kits
PrimeStoreMTM’u Özetlersek
• Viral örnekleri toplama ve taşıma ortamıdır
• RNA/DNA’rı nükleazlardan korur
• Piyasadaki nükleik asit isolasyon kitleriyle kolaylıkla kullanılabilir
• Örnekleme, Taşıma ve saklama süresince soğuk zincire ihtiyaç olmadan arazide ve laboratuvarda kullanılır
• Nükleik asit testlerinde diğer taşıma ortamlarına göre daha sensitiftir.
References
Daum LT, Worthy SA, Yim KC, Nogueras M, Schuman RF, Choi YW, and Fischer GW. 2010. A Clinical Specimen Collection and Transport Medium for Molecular Diagnostics and Genomic Applications. Epidemiology and Infection. In press, 2010.
Luke T. Daum, Sue A. Worthy, James P. Chambers, Demetra Kelenis, John Rodriquez, Dennis J. Reeder and Gerald W. Fischer. 2011. Commercial Viral Transport Medium (VTM) Inhibits Nucleic Acid Testing. Manuscript Submitted, 2010.
Luke T. Daum, Sue A. Worthy, Deena E. Sutter, Marty Ottolini , Kathryn E. Myhre, Robert L. Elwood, Gerald W. Fischer. Comparison of Influenza Virus Detection Methods from Pediatric Patients and Household Contacts. Journal of Medical Virology. In press, 2011.
Longhorn Vaccines & Diagnostics1747 Citadel Plaza, Suite 206San Antonio, TX 78209Phone: (210) 826-0910Email: [email protected]
Luke T. Daum, Ph.D.Gerald W. Fischer, M.DBülbin Sunar-Reeder,Ph.D
QUESTIONS?
SORULARINIZ?
THANKS!