PENGARUH PENAMBAHAN MINYAK PEPPERMINT SEBAGAI PENETRATION
ENHANCER TERHADAP KARAKTERISTIK DAN SIFAT FISIK SEDIAAN GEL
EKSTRAK TEMPE
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Cindy Tiara Sari
NIM : 108114142
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2014
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
i
PENGARUH PENAMBAHAN MINYAK PEPPERMINT SEBAGAI
PENETRATION ENHANCER TERHADAP KARAKTERISTIK DAN
SIFAT FISIK SEDIAAN GEL EKSTRAK TEMPE
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Cindy Tiara Sari
NIM : 108114142
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2014
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
“All that is gold does not glitter; not all those who wander are lost; the old that is strong does not wither; deep roots are not reached by the frost.”
– J. R. R. Tolkien
"You are not entitled to your opinion. You are entitled to your informed opinion. No one is entitled to be ignorant."
– Harlan Ellison
“Whether the chicken crossed the road or the road crossed the chicken depends on your frame of reference.”
– Albert Einstein
“Life is either a daring adventure or nothing at all.” – Helen Keller
Karya ini kupersembahkan untuk:
Tuhan Yesus Kristus, Eyang Putri, Mama, Pakde, Bude, dan
semua saudara dan adik-adikku , sahabat-sahabatku, semua yang
telah mendukungku, almamaterku, dan semua yang membutuhkan
karya ini.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
v
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vii
PRAKATA
Puji syukur kepada Tuhan Yesus Kristus atas berkat dan penyertaan yang telah
diberikan kepada penulis sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul
“Pengaruh Penambahan Minyak Peppermint Sebagai Penetration Enhancer
Terhadap Karakteristik Dan Sifat Fisik Sediaan Gel Ekstrak Tempe” ini
dengan baik.
Penulis banyak mengalami kesulitan dan hambatan dalam proses
penyusunan skripsi ini. Namun, dengan adanya bantuan dan dukungan dari perbagai
pihak, akhirnya penulis dapat menyelesaikan penyusunan skripsi ini. Oleh karena itu,
dengan kerendahan hati penulis ingin mengucapkan terimakasih kepada:
1. Eyang Putri, Mama, Pakde Tomi, Bude Reni, Prima, Putri, dan dek Rara yang
telah memberikan kasih sayang, semangat, dukungan, dan doa selama penulis
menempuh perkuliahan dan tugas akhir.
2. Aris Widayati, M.Si., Ph.D., Apt. selaku dekan Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma Yogyakarta.
3. Dr. Sri Hartati Yuliani, M.Si., Apt., selaku dosen pembimbing atas bimbingan,
arahan, perhatian, semangat, dukungan dan kesabaran yang diberikan selama
penyusunan skripsi ini.
4. C. M. Ratna Rini Nastiti, M.Pharm., Apt. selaku dosen pembimbing akademik
dan dosen penguji atas bimbingan, saran dan pengarahannya selama
penyusunan skripsi.
5. Melania Perwitasari, M.Sc., Apt. selaku dosen penguji atas bimbingan, saran
dan pengarahannya selama penyusunan skripsi ini.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
viii
6. Ipang Djunarko, M.Sc., Apt., Phebe Hendra, Ph.D., Apt. Dewi Setyaningsih,
M.Sc., Apt., dan Maria Dwi Budi Jumpowati, S.Si., atas kesediaan untuk
berkonsultasi dan membantu penulis dalam menyelesaikan masalah-masalah
dalam penyelesaian tugas akhir.
7. Segenap dosen dan karyawan Fakultas Farmasi Sanata Dharma atas kesabarannya
dalam mengajar dan membimbing penulis selama perkuliahan.
8. Pak Musrifin, Mas Agung, Mas Bimo, Pak Heru, Pak Parjiman, Pak Wagiran, Pak
Iswandi, dan laboran-laboran lain serta Pak Darto atas bantuan yang diberikan
selama penelitian dan menempuh perkuliahan.
9. Sahabat-sahabat penulis Mega, Lia, Ivan, Jessi, Tere dan Tari yang selalu
menemani, menghibur dan mendoakan selama ini serta kesediaan untuk selalu
direpotkan.
10. Segenap umat Lingkungan St. Antonius Gendeng Selatan atas doa, dukungan,
perhatian, dan pengertiannya selama ini.
11. Dion, Nana, Detha, Acong (Reza), Koko Kiki, Satya, mbak Dynna, dan teman-
teman Gereja Kristus Raja Paroki Kristus Raja Baciro untuk semangat, doa, dan
perhatian yang diberikan selama ini.
12. Vivian, Lilin, Sisca, Sita, Nessya, Sefi, Bakti, Kelvin, Rosa, Marcel, dan
teman-teman satu kelompok praktikum dan kelompok presentasi, FST B 2010
dan seluruh angkatan 2010 atas kebersamaan dan keceriaannya selama ini.
13. Serta semua pihak yang telah membantu penulis dan tidak dapat disebutkan
satu per satu.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ix
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ................................................................................................ i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ..................................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................. ii
HALAMAN PERSEMBAHAN ........................................................................... iiv
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ... v
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................................ vi
PRAKATA ............................................................................................................ vii
DAFTAR ISI ............................................................................................................ x
DAFTAR TABEL ................................................................................................ xiii
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xivv
DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... xv
INTISARI ............................................................................................................ xvii
ABSTRACT ......................................................................................................... xviii
BAB I ....................................................................................................................... 1
A. Latar Belakang ............................................................................................... 1
1. Perumusan masalah ................................................................................ 4
2. Keaslian Penelitian ................................................................................. 4
3. Manfaat Penelitian .................................................................................. 5
B. Tujuan Penelitian ........................................................................................... 6
BAB II ...................................................................................................................... 7
A. Skin Aging ...................................................................................................... 7
B. Kulit ............................................................................................................... 9
C. Kedelai ......................................................................................................... 12
D. Gel ................................................................................................................ 15
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
E. Bahan Formulasi .......................................................................................... 18
1. Gelling Agent ........................................................................................ 18
2. Penetration enhancer ........................................................................... 19
3. Propilen Glikol ..................................................................................... 22
4. Trietanolamin ........................................................................................ 22
5. Benzalkonium Klorida .......................................................................... 23
6. Tween 80 .............................................................................................. 24
F. Uji Iritasi HET-CAM ................................................................................... 25
G. Uji Sifat Fisik ............................................................................................... 26
1. Viskositas.............................................................................................. 26
2. Daya sebar ............................................................................................ 27
H. Metode Penetapan Kadar dengan menggunakan HPLC .............................. 28
I. Landasan Teori ............................................................................................. 31
J. Hipotesis ....................................................................................................... 32
BAB III .................................................................................................................. 33
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ................................................................... 33
B. Variabel Penelitian ....................................................................................... 33
C. Definisi Operasional..................................................................................... 34
D. Bahan Penelitian........................................................................................... 35
E. Alat Penelitian .............................................................................................. 35
F. Tata Cara Penelitian ..................................................................................... 36
1. Pembuatan crude extract tempe ........................................................... 36
2. Penetapan kadar isoflavon genistein dari crude extract tempe ............ 36
3. Pembuatan gel anti-aging ekstrak kedelai ............................................ 38
4. Uji Sifat Fisik........................................................................................ 39
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
5. Uji Iritasi HET-CAM............................................................................ 41
BAB IV .................................................................................................................. 43
A. Ekstraksi isoflavon genistein dari tempe...................................................... 43
B. Standarisasi isoflavon genistein dari tempe ................................................. 46
C. Pembuatan Gel Anti-Aging ........................................................................... 51
1. Uji Organoleptis dan pH ....................................................................... 54
2. Uji Viskositas ....................................................................................... 55
3. Uji Daya Sebar...................................................................................... 57
D. Uji Iritasi HET-CAM ................................................................................... 59
BAB V .................................................................................................................... 62
A. Kesimpulan .................................................................................................. 62
B. Saran ............................................................................................................. 62
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................ 63
LAMPIRAN ........................................................................................................... 69
BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................... 85
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Skor Uji Iritasi HET-CAM ...................................................................... 26
Tabel 2. Kategori Iritasi Berdasarkan Skor Iritasi Pada HET-CAM ..................... 26
Tabel 3. Batas Bawah Transparensi Macam-Macam Pelarut Organik .................. 30
Tabel 4. Perhitungan regresi linier kurva baku standar genistein .......................... 48
Tabel 5. Perhitungan Jumlah Genistein dalam Ekstrak Tempe dengan Kurva
Loading Mass ......................................................................................................... 50
Tabel 6. Hasil Uji Saphiro-Wilk Viskositas ........................................................... 57
Tabel 7. Hasil Uji Saphiro-Wilk ........................................................................... 58
Tabel 8. Tabel Skor Iritasi Uji HET-CAM ............................................................ 60
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Skema perbedaan kulit pada usia muda usia dan tua ............................. 7
Gambar 2. Bagian-bagian dari epidermis............................................................... 10
Gambar 3. Mekanisme absorpsi dan rute obat dalam sistem penghantaran obat
topikal dan transdermal .......................................................................................... 11
Gambar 4. Struktur umum isoflavon kedelai dan singkatannya ............................ 14
Gambar 5. Struktur Carbopol® ............................................................................... 19
Gambar 6. Struktur Propilen Glikol ....................................................................... 22
Gambar 7. Stuktur Trietanolamin .......................................................................... 23
Gambar 8.Struktur Benzalkonium klorida ............................................................. 24
Gambar 9. Macam-macam modifikasi gel silica.................................................... 29
Gambar 10. Reaksi Hidrolisis Glukosida Isoflavon Genistin menjadi Aglikon
Isoflavon Genistein ................................................................................................ 43
Gambar 11. Kurva Baku Standar Genistein AUC vs Konsentrasi (ppm) .............. 49
Gambar 12. Kromatogram ekstrak tempe ............................................................. 50
Gambar 13. Carbomer dalam bentuk coil akan mengalami pembasahan dan
mengembang ketika didispersikan dalam air ......................................................... 52
Gambar 14. Molekul Carbopol® terurai (uncoil) ketika molekul asamnya
ternetralisir menjadi bentuk garam dan mencapai kekentalan maksimum ............ 53
Gambar 15. Mekanisme penurunan tegangan muka oleh surfaktan (Tween 80) ... 53
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Pembuatan crude extract tempe ......................................................... 70
Lampiran 2. Standarisasi kandungan isoflavon genistein dari crude extract
tempe… .................................................................................................................. 70
Lampiran 3. Pembuatan gel anti-aging ekstrak kedelai ......................................... 76
Lampiran 4. Uji Sifat Fisik .................................................................................... 77
Lampiran 5. Uji Statistik ........................................................................................ 78
Lampiran 6. Uji Iritasi HET-CAM......................................................................... 82
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvi
INTISARI
Dalam penelitian-penelitian sebelumnya telah diketahui efek isoflavon
dalam ekstrak tempe dalam mencegah terjadinya penuaan dini pada kulit,
khususnya isoflavon genistein. Tujuan dari penelitian ini untuk melihat
peppermint oil sebagai enhancer dalam formulasi terhadap karakteristik dan sifat
fisik sediaan gel. Berbagai konsentrasi minyak peppermint (0,5%; 1%; 2%)
diformulasikan ke dalam sediaan gel. Formulasi gel ekstrak tempe yang telah
dibuat kemudian diuji karakteristiknya seperti pH, viskositas, dan daya sebarnya.
Uji iritasi dilakukan dengan metode HET-CAM yang menggunakan membran
chorioallantoic pada telur ayam. Data kemudian dianalisis dengan ANOVA untuk
data parametrik dan Kruskal-Wallis untuk data non-parametrik menggunakan
program R 2.1.3.2. Analisis stastistik dilakukan pada tingkat kepercayaan 95%.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa penambahan peppermint oil
dalam formulasi memberikan pengaruh terhadap viskositas dan daya sebar sediaan
berdasarkan uji Kruskal-Wallis. Tidak ada efek iritasi ditemukan pada hasil HET-
CAM setiap formula. Semua formula memenuhi kriteria sifat fisik yang
disyaratkan.
Kata kunci : ekstrak tempe, gel, peppermint oil, uji iritasi, sifat fisik, HET-CAM
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvii
ABSTRACT
Recent studies have shown the effect of soy isoflavones in tempeh extract
in preventing skin photoaging, especially for genistein. The objective of this study
was to observe the effect of peppermint oil as penetration enhancer in gel
formulation on its characteristic and physical properties. Various concentrations
of peppermint oil (0,5%; 1%; 2%) were incorporated into gels. The tempeh crude
extracts were made into suitable gel formulation and is evaluated for their gel
characteristics such as: pH, viscosity, and spreadability. The irritation test was
examined with HET-CAM methods using chorioallantoic membrane on Hen’s egg. Data were analyzed using R 2.13.2 program with ANOVA test for parametric
data and Kruskal-wallis test for nonparametric data. Statistical analysis was
performed at 95% confidence interval.
The result of this study showed that incorporation of peppermint oil in
formulation was significantly affecting the viscosity and spreadability based on
Kruskal Wallis test. There were no irritation effect in all formulas’ result on HET-
CAM to be found. All of the formulas met the physical properties in accordance with
criteria.
Keywords : tempeh extract, gel, peppermint oil, irritation test, physical
properties, HET-CAM
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang
Penuaan merupakan sesuatu yang tidak bisa kita hindari dalam siklus
hidup manusia. Namun laju penuaan dapat diatasi sehingga membuat penampilan
seseorang tetap awet muda. Gejala penuaan pada kulit (skin aging) yang dapat
diamati dengan kasat mata antara lain: kulit menipis dan menjadi longgar serta
elastisitasnya berkurang (Brincat, Kabalan, Studd, Moniz, de Trafford, dan
Montgomery, 1987). Elastisitas kulit berkurang karena adanya penurunan jumlah
hormon estrogen yang menyebabkannya menurunnya jumlah kolagen dan serat
elastin. Kolagen dan serat elastin merupakan komponen penting dalam
mempertahankan konsistensi dan kekenyalan kulit (Brincat et al., 1987).
Ada berbagai macam cara untuk mengatasi aging, salah satunya dengan
terapi estrogen. Namun terapi ini dapat menyebabkan efek samping dalam jangka
panjang (U.S. Department Of Health and Human Services, 2005). Salah satu
alternatif dari terapi estrogen adalah menggunakan senyawa fitoestrogen dalam
sediaan. Senyawa fitoestrogen mempunyai struktur yang mirip dengan steroid
estrogen. Aglikon isoflavon pada tanaman kedelai (Glycine max) merupakan salah
satu contoh fitoestrogen. Salah satu isoflavon kedelai, genistein, menunjukkan
aktivitas penghambatan enzim tirosin kinase dan MAP kinase. Genistein yang
berperan sebagai inhibitor tirosin kinase merangsang produksi kolagen melalui
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
jalurde novo (Yoon, Chen, Baylink, dan Lau, 1998), menghambat terbentuknya
proteinase yang secara spesifik dapat mendegradasi kolagen atau elastin (Shao,
Shen, dan Barsky, 1998). Penelitian Indranupakorn (2010) menyatakan genistein
terbukti efektif dalam melindungi kulit dari oxidative stress yang disebabkan oleh
paparan sinar UV B sebagai antioksidan. Hal ini menunjukkan bahwa genistein
yang berada pada ekstrak kedelai berpotensi untuk diformulasikan ke dalam
sediaan anti-ageing.
Isoflavon genistein yang diaplikasikan topikal dapat menimbulkan efek
lokal pada terapi kemopreventif dari sinar UV yang dapat memicu kerusakan kulit
maupun efek sistemik dalam mencegah pertumbuhan beberapa jenis kanker.
Sediaan topikal juga membantu memperbaiki bioavalabilitas genistein yang
masuk ke dalam tubuh dibandingkan ketika diberikan secara oral, di mana terjadi
pengurangan yang cukup berarti karena adanya first pass hepatic system (Setchell,
1998). Sediaan anti-ageing dibuat ke dalam gel. Gel merupakan sediaan semisolid
yang menimbulkan cooling effect sehingga nyaman digunakan dan mudah
diaplikasikan. Basis gel single phase sering digunakan pada formulasi sediaan
topikal dan kosmetik karena mempunyai berbagai keuntungan, seperti: warna
lebih menarik, mudah diaplikasikan dan mudah juga untuk dicuci. Gel berpotensi
untuk memberikan pelepasan yang lebih baik, karena dalam menghantarkan
senyawa tidak tergantung pada kelarutan senyawa tersebut dalam air
dibandingkan dengan dalam bentuk krim dan losion. Selain itu gel dapat
meningkatkan waktu retensi obat pada kulit sehingga meningkatkan efek lokal
terapeutik.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
Efek yang optimal dari terapi anti-ageing dapat ditingkatkan dengan
menggunakan penetration enhancer dalam formulasi. Dalam formulasi sediaan
biasanya digunakan chemical enhancer yang mempunyai kelebihan yaitu dapat
diaplikasikan ke area yang lebih luas (>10 cm2). Chemical enhancer ditambahkan
untuk meningkatkan kekuatan partisi senyawa aktif sehingga dapat menembus
stratum corneum dan mempengaruhi properti dari diffusional barrier-nya. Terpen
diketahui mempunyai aktivitas sebagai penetration enhancer dengan
memodifikasi kelarutan pelarut pada stratum corneum sehingga dapat
meningkatkan partisi obat ke dalam kulit (Vikas, Seema, Gurpreet, Rana, dan
Baibhav, 2011). Dalam peppermint oil mengandung banyak terpen: pinene,
phellandrene, sineol (3,5 – 14%), limonene (1 – 5%), menthone (14 – 32%),
menthol (30 – 55%), menthofuran (1 – 9%), isomenthone (1,5 – 10%), menthyl
acetate (2,8 – 10%), pulegone (<4%), dan carvone (≤1%) (Sayre, 1917; Alankar,
2009). Namun, minyak peppermint mempunyai sifat mengiritasi ringan sehingga
perlu dilakukan uji iritasi untuk menghasilkan sediaan yang aman dan acceptable.
Dalam formulasi, pencampuran bahan-bahan sediaan eksipien dalam
sediaan dapat mempengaruhi sifat fisika kimia dari sediaan yang dihasilkan. Atas
pertimbangan tersebut maka peneliti melihat pengaruh dari peppermint oil sebagai
penetration enhancer terhadap sifat fisika kimia dari gel ekstrak tempe dan
potensi iritannya dengan menggunakan uji HET-CAM dalam formulasi sediaan
gel pada penelitian kali ini.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
1. Perumusan masalah
Berdasarkan latar belakang tersebut, permasalahan yang diangkat penulis
dalam penelitian ini adalah sebagai berikut:
a. Apakah peningkatan penambahan peppermint oil sebagai penetration
enhancer mempengaruhi sifat fisika kimia dari sediaan gel ekstrak tempe
secara signifikan?
b. Apakah penambahan peppermint oil dalam formulasi sediaan gel ekstrak
tempe menimbulkan reaksi iritasi melalui uji iritasi HET-CAM?
2. Keaslian Penelitian
Zukhdiyanah (2012) pada tesisnya memformulasikan minyak atsiri daun
jeruk purut ke dalam emulgel berbasis Carbopol® kemudian dilihat pengaruh
peningkatan konsentrasinya terhadap sifat fisika kimia dan uji aktivitas terhadap
bakteri P. acne. Hubungan peningkatan konsentrasi minyak atsiri daun jeruk purut
dengan sifat fisika kimia dan aktivitas diuji menggunakan analisis regresi. Hasil
penelitian ini menunjukkan semakin tinggi konsentrasi minyak atsiri daun jeruk
purut dalam emulgel maka pH, viskositas, daya sebar semakin rendah.
Rajan dan Vasudevan (2012) meneliti kemampuan peppermint oil dalam
meningkatkan penetrasi ketoconazole yang diformulasikan dalam basis hidrogel
dibandingkan dengan minyak atsiri lainnya, seperti eucalyptus oil, dan turpentine
oil. Hasil penelitian menunjukkan bahwa eucalyptus oil, turpentine oil, dan
peppermint oil mempunyai aktivitas peningkatan permeasi ketoconazole secara
signifikan.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
Perbedaan penelitian ini dengan penelitian yang sudah pernah dilakukan
terletak pada ekstrak yang digunakan, dan minyak atsiri yang digunakan. Sejauh
penelusuran pustaka yang dilakukan penulis, penelitian tentang pengaruh
pemberian minyak peppermint sebagai penetration enhancer terhadap sifat fisika
kimia gel ekstrak tempe dan potensi iritannya belum pernah dilakukan.
3. Manfaat Penelitian
a. Manfaat teoretis
Hasil penelitian diharapkan dapat menambah khasanah ilmu
pengetahuan tentang pengaruh peningkatan pemberian minyak peppermint
sebagai penetration enhancer terhadap kemampuan sifat fisika kimia gel
ekstrak tempe dalam formulasi sediaan.
b. Manfaat praktis
Penelitian ini diharapkan dapat menghasilkan bentuk sediaan
kosmetik berupa gel anti-aging ekstrak kedelai yang memenuhi persyaratan
kriteria sifat fisik, efektif, dan aman untuk digunakan oleh pasien.
c. Manfaat metodologis
Penelitian ini diharapkan dapat menambah informasi dalam bidang
kefarmasian mengenai penerapan uji statistika dalam mengamati pengaruh
peningkatan pemberian minyak peppermint sebagai penetration enhancer
terhadap sifat fisika kimia sediaan gel dalam formulasi sediaan.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
B. Tujuan Penelitian
1. Tujuan umum
Secara umum, penelitian ini bertujuan untuk mengamati sifat fisik
dan kemanan sediaan gel ekstrak tempe yang dibuat sesuai dengan formula
yang telah ditentukan.
2. Tujuan khusus
Secara khusus penelitian ini bertujuan untuk mengetahui signifikansi
pengaruh peningkatan penambahan minyak peppermint sebagai penetration
enhancer terhadap sifat fisika kimia gel ekstrak tempe dalam formulasi
sediaan. Selain itu penelitian ini juga bertujuan untuk melihat apakah
pemberian peppermint oil dalam formulasi sediaan gel ekstrak tempe
memberikan efek iritasi pada uji HET-CAM atau tidak.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Skin Aging
Menua (aging) secara umum adalah suatu proses menghilangnya
secara perlahan-lahan kemampuan jaringan untuk memperbaiki diri/mengganti
diri dan mempertahankan struktur dan fungsi normalnya, sehingga tidak dapat
memperbaiki kerusakan yang diderita. Gejala penuaan pada kulit (skin aging)
yang dapat diamati dengan kasat mata antara lain: kulit menipis dan menjadi
longgar serta elastisitasnya berkurang. Pada pria proses ini terjadi secara bertahap
dan konstan setiap tahunnya. Pada wanita, ketika memasuki tahap menopause
kulit dapat mengalami perubahan biologis yang cukup drastis, karena adanya
penurunan produksi hormon estrogen dan progesterone (Brincat et al., 1987).Pada
kulit yang mengalami aging perubahan lebih banyak terjadi pada dermis daripada
pada lapisan epidermis (Schmid, 2001).
Gambar 1. Skema perbedaan kulit pada usia muda usia dan tua
(Schmid, 2001).
kulit pada usia muda kulit pada usia tua
keratinosit
fibroblast kolagen
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
Lapisan dermis tersusun dari serat kolagen dan serat elastin yang
tergabung dalam kompleks dengan proteoglikan dan penyusun matriks
ekstraseluler lainnya. Sel fibroblast juga terikat pada matrik ekstraseluler. Protein
kolagen dan elastin mempunyai peranan penting untuk menjaga kekuatan dan
kekenyalan kulit. Pada kulit yang mengalami aging, jika dilihat dari histologinya
mengalami kelainan pada jaringan konektif dermal (Campisi, 1998).
Reseptor estrogen mempunyai peranan penting terhadap keadaan
fisiologis kulit. Estrogen menstimulasi terbentuknya kolagen dan elastin dan
menghambat pemecahan kolagen yang sudah terbentuk (Brincat et al., 1987).
Kolagen dan serat elastin mempunyai peranan penting terhadap mempertahankan
konsistensi kekenyalan kulit. Jumlah estrogen yang menurun dalam darah
berakibat kulit menjadi rapuh, penggelapan warna kulit yang berujung pada kulit
mengendur dan terbentuknya keriput (Krutman, 2006).
Penuaan dapat mengalami percepatan, yang disebut juga dengan istilah
premature aging. Terdapat dua faktor yang dapat mempercepat terjadinya
penuaan pada kulit; faktor internal dan faktor eksternal. Contoh dari faktor
internal penuaan dini adalah pemendekan telomer secara progresif, sehingga
terjadi penuaan sel kulit lebih cepat dari yang seharusnya. Contoh dari faktor
eksternal (di luar tubuh) antara lain: asap rokok, minuman keras, nutrisi yang
kurang, dan paparan sinar matahari langsung dalam waktu yang cukup lama
(Binic, Lazarevic, Ljubenovic, Mojsa, dan Sokolovic, 2013). Radiasi sinar UV
dari paparan sinar matahari menyebabkan terbentuknya ROS (Reactive Oxygen
Species) dalam darah.ROS inilah yang berperan dalam mempercepat terjadinya
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
penuaan pada kulit.ROS (Reactive Oxygen Species) dapat merusak membran sel
kulit (Zanchetta, Kirk, Lyng, Walsh, dan Murphy, 2010) sehingga mengakibatkan
terjadinya aging. Terbentuknya ROS secara berkelanjutan berakibat timbulnya
kerusakan di dalam sel secara kumulatif (oxidative stress) sehingga muncul
gejala-gejala aging pada kulit: menipisnya lapisan antara dermis-epidermis,
kerusakan matriks ekstraselular karena adanya penurunan jumlah fibroblast,
kolagen dan elastin (Campisi, Velarde, Flynn, Day, dan Melov, 2012,).
B. Kulit
Kulit merupakan bagian paling luar dari tubuh, dan merupakan organ
yang paling besar. Terdapat bermacam-macam aplikasi penghantaran obat topikal
dan transdermal dalam terapi, namun untuk mencapai sistem penghantaran yang
diinginkan obat terlebih dahulu harus melalui barrier pertama yang cukup kuat,
yaitu kulit. Kulit terdiri dari tiga komponen utama: epidermis, dermis, dan lapisan
subkutan atau hipodermis. Dari tiga lapisan tersebut, epidermis merupakan lapisan
yang paling susah ditembus. Epidermis sendiri merupakan membran multi-layer,
dengan ketebalan berbeda-beda di tiap-tiap bagian kulit dari 60 μm pada kelopak
mata sampai kurang lebih 800 μm pada telapak tangan dan kaki. Pada epidermis
tidak terdapat pembuluh darah maka untuk menjaga integritasnya nutrisi dan
metabolit harus berdifusi melalui lapisan dermo-epidermal. Epidermis terdiri dari
lima lapisan yang mempunyai histologi berbeda-beda, dari dalam ke luar: stratum
germinativum, stratum spinosum, stratum granulosum, sratum lucidum dan
stratum korneum (Hadgraft, 2001).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
Gambar 2. Bagian-bagian dari epidermis (Kelly et al., 2009)
Stratum korneum terdiri dari susunan sel kulit mati datar yang berbentuk
seperti amplop, pipih, polihedral, lebar, dan berisi keratin yang bermigrasi dari
stratum granulosum. Meskipun tebal stratum korneum kurang lebih 20 dan 25
µm, sudah efektif dalam membatasi penetrasi obat dan senyawa kimia lainnya.
Sifat kulit yang impermeabel menjadi masalah yang perlu diatasi untuk
mendapatkan penghantaran obat yang diinginkan (Hadgraft, 2001; Trommer dan
Neubert, 2006). Stratum lucidum terletak di bawah stratum korneum. Lapisan ini
hanya ditemukan pada epidermis bagian kulit yang lebih tebal di telapak tangan
dan kaki. Lapisan ini terdiri dari 5 lapis sel keratinosit yang sudah mati dan
memipih. Di bawahnya lagi terdapat stratum granulosum dan stratum spinosum,
sedangkan lapisan terbawah epidermis adalah stratum germinativum atau lapisan
basal (stratum basale). Sel basal pada lapisan ini disebut sebagai sel akar dari
epidermis yang belum berdiferensiasi dan bertugas untuk proliferasi dan
menciptakan sel anak yang akan bermigrasi ke atas dan mengalami proses
diferensiasi (Hadgraft, 2001; McGrath et al., 2004).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
Sifat barrier pada kulit telah diteliti sejak bertahun-tahun lamanya untuk
permeasi obat dan beberapa penemuan dengan menggunakan teknik biofisika
telah menyediakan informasi mengenai mekanisme absorpsi obat pada level
molekular (Guy dan Hadgraft, 1989; Roberts dan Walters, 1998; Hadgraft 2001).
Terdapat beberapa macam cara agar obat dapat menembus stratum korneum,
yaitu: interselular, transelular, dan rute melalui pori-pori kulit. Rute transeluler
dan interseluler dikenal sebagai rute transepidermal. Rute transeluler bersifat lebih
langsung, di mana obat menembus langsung melalui lapisan lemak pada stratum
korneum dan sitoplasma sel keratinosit yang telah mati. Meskipun rute ini
merupakan rute yang paling pendek dalam permeasi, namun molekul obat
mempunyai sifat yang terbatas karena struktur lipofilik dan hidrofilik yang
dimilikinya (Hadgraft, 2001). Rute interseluler lebih banyak dipakai dalam
permeasi obat karena obat dapat menembus stratum korneum melewati sela-sela
korneosit (Trommer dan Neubert, 2006).
Gambar 3. Mekanisme absorpsi dan rute obat dalam sistem penghantaran
obat topikal dan transdermal (Williams, 2003)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
C. Kedelai
Kedelai mempunyai nama ilmiah Glycine max (L.) Merill. Menurut
Adisarwanto (2005) klasifikasi tanaman kedelai yaitu sebagai berikut :
Kingdom : Plantae
Subkingdom : Tracheobionta
Super Divisi : Spermatophyta
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Sub Kelas : Rosidae
Ordo : Fabales
Famili : Fabaceae
Genus : Glycine
Spesies : Glycine max (L.) Merr.
Pada tanaman golongan Leguminoceae, khususnya pada tanaman kedelai
mengandung senyawa isoflavon yang cukup tinggi. Bagian tanaman kedelai yang
mengandung senyawa isoflavon yang lebih tinggi terdapat pada biji kedelai
(Anderson, 1999). Kandungan isoflavon pada kedelai berkisar 2-4 mg/g
kedelai.Senyawa isoflavon tersebut pada umumnya berupa senyawa kompleks
atau konjugasi dengan senyawa ikatan glukosida (Synder dan Kwon, 1987).
Selama proses pengolahan, baik melalui proses fermentasi maupun proses non-
fermentasi, senyawa isoflavon dapat mengalami transformasi, terutama melalui
proses hidrolisa, sehingga dapat diperoleh senyawa isoflavon bebas yang disebut
aglikon. Senyawa aglikon tersebut adalah genistein, glisitein dan daidzein
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
(Pawiroharsono,1998). Selain pada tanaman kedelai, senyawa isoflavon dapat
ditemukan terutama produk-produk olahannya, seperti tahu, tempe, tauco, dan
kecap (Achdiat, 2003).
Kandungan isoflavon yang terdapat dalam kedelai telah banyak diteliti
untuk diformulasikan ke dalam kosmetik untuk terapi anti-aging karena aktivitas
antioksidan yang dimiliki dan peranannya sebagai fitoestrogen (Wang dan
Murphy, 1994). Aglikon isoflavon mempunyai struktur yang sangat mirip dengan
steroid estrogen. Kemiripan struktur ini memungkinkan aglikon isoflavon dapat
mengikat pada reseptor yang sama dengan hormon estrogen. Terapi estrogen telah
diketahui dapat mengembalikan jumlah serat kolagen, ketebalan dan elastisitas
kulit wanita setelah mengalami menopause (Callens et al. 1996; Schmidt et al.
1996). Dibandingkan dengan hormon estrogen, aglikon isoflavon mempunyai
afinitas lebih lemah terhadap ERα, sedangkan terhadap ERß afinitasnya sama kuat
(Kuiper, Lemmen, Carlsson, Corton, Safe, Van Der Saag, Van Der Burg, dan
Gustafsson, 1998). Digunakannya fitoestrogen sebagai senyawa aktif dalam
formulasi sediaan kosmetik anti-aging untuk menggantikan terapi hormon
estrogen yang penggunaannya dilarang dalam kosmetik karena berpotensi
menimbulkan efek samping yaitu meningkatkan resiko terbentuknya kanker rahim
atau payudara akibat pengonsumsian jangka panjang (National Health Institute,
2010). Kandungan isoflavon utama yang terdapat dalam adalah genistein (4,5,7-
trihidroxyisoflavone), daidzein (4,7-dihidroxyisoflavone), glycitein (4,7-
dihidroxy-6-metoxi-isoflavone) dan bentuk lain dari isoflavon tersebut dalam
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
asetil, malonil, dan aglikon (Bingham, Atkinson, Liggins, Bluck, dan Coward,
1998).
Gambar 4. Struktur umum isoflavon kedelai dan singkatannya (Rostagno et
al., 2008)
Salah satu isoflavon kedelai, genistein, menunjukkan aktivitas
penghambatan enzim tirosin kinase dan MAP kinase. Enzim-enzim ini terlibat
dalam transmisi sinyal intraseluler yang memodulasi pertumbuhan dan
diferensiasi sel. Genistein yang berperan sebagai inhibitor tirosin kinase
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
merangsang produksi kolagen melalui jalur de novo (Yoon et al. 1998),
menghambat terbentuknya proteinase yang secara spesifik dapat mendegradasi
kolagen atau elastin (Shao et al., 1998). Uji pada kultur sel menunjukkan bahwa
genistein mengatur metabolisme komponen matriks kulit kolagen dan elastin.
Studi yang lain menunjukkan bahwa isoflavon kedelai mempunyai aktivitas
antioksidan dengan DPPH radical scavenging assay. Pada studi tersebut
dinyatakan genistein mempunyai aktivitas antioksidan yang lebih kuat
dibandingkan daripada isoflavon lainnya, yaitu daidzein berdasarkan nilai TEAC-
nya (Trolox Equivalent Antioxidant Capacity) (Indranupakorn, 2010).
Metode ekstraksi isoflavon biasanya menggunakan pelarut organik
seperti: methanol (MeOH) murni atau methanol campuran dengan air, ethanol
(EtOH), asetonitril (ACN) atau acetone (ACE) dengan atau tanpa menggunakan
penambahan asam kemudian dapat direndam, digojog, dicampur atu diekstraksi
dengan soxlethasi (Luthria dan Natarajan 2007).
D. Gel
Gel adalah suatu sistem setengah padat yang terdiri dari suatu dispersi
yang tersusun baik dari partikel anorganik yang kecil atau molekul organik yang
besar dan saling diresapi cairan (Ansel, 1989). Konsistensi gel berasal dari
gelling agent (zat pengental), biasanya berbentuk polimer, membentuk struktur
tiga dimensi. Gaya intermolekul kemudian mengikat pelarut di sekitar struktur
polimer, menstabilkan gerakan molekulnya sehingga kekentalan pelarut
meningkat. Gel biasanya berwarna transparan, warna transparan tersebut didapat
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
apabila semua bahan terlarut atau terdispersi secara koloidal, misalnya sampai
dalam ukuran partikel submikron (Lachmann, 1989). Sifat dan karakteristik gel
adalah sebagai berikut:
a. Swelling
Gel dapat mengembang karena komponen pembentuk gel dapat mengabsorbsi
larutan sehingga terjadi pertambahan volume. Pelarut akan berpenetrasi
diantara matriks gel dan terjadi interaksi antara pelarut dengan gel.
(Lachmann, 1989).
b. Sineresis.
Suatu proses yang terjadi akibat adanya kontraksi di dalam massa gel. Cairan
yang terjerat akan keluar dan berada di atas permukaan gel. Pada waktu
pembentukan gel terjadi tekanan yang elastis, sehingga terbentuk massa gel
yang tegar. Mekanisme terjadinya kontraksi berhubungan dengan fase
relaksasi akibat adanya tekanan elastis pada saat terbentuknya gel. Adanya
perubahan pada ketegaran gel akan mengakibatkan jarak antar matriks
berubah, sehingga memungkinkan cairan bergerak menuju permukaan.
Sineresis dapat terjadi pada hidrogel maupun organogel (Lachmann, 1989).
c. Efek suhu
Efek suhu mempengaruhi struktur gel. Gel dapat terbentuk melalui penurunan
temperatur tapi dapat juga pembentukan gel terjadi setelah pemanasan hingga
suhu tertentu. Polimer separti MC, HPMC, terlarut hanya pada air yang dingin
membentuk larutan yang kental. Pada peningkatan suhu larutan tersebut
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
membentuk gel. Fenomena pembentukan gel atau pemisahan fase yang
disebabkan oleh pemanasan disebut thermogelation (Lachmann, 1989).
d. Efek elektrolit.
Konsentrasi elektrolit yang sangat tinggi akan berpengaruh pada gel hidrofilik
dimana ion berkompetisi secara efektif dengan koloid terhadap pelarut yang
ada dan koloid digaramkan (melarut). Gel yang tidak terlalu hidrofilik dengan
konsentrasi elektrolit kecil akan meningkatkan rigiditas gel dan mengurangi
waktu untuk menyusun diri sesudah pemberian tekanan geser. Gel Na-alginat
akan segera mengeras dengan adanya sejumlah konsentrasi ion kalsium yang
disebabkan karena terjadinya pengendapan parsial dari alginat sebagai kalsium
alginat yang tidak larut (Lachmann, 1989).
e. Elastisitas dan rigiditas
Sifat ini merupakan karakteristik dari gel gelatin agar dan nitroselulosa,
selama transformasi dari bentuk sol menjadi gel terjadi peningkatan elastisitas
dengan peningkatan konsentrasi pembentuk gel. Bentuk struktur gel resisten
terhadap perubahan atau deformasi dan mempunyai aliran viskoelastik.
Struktur gel dapat bermacam-macam tergantung dari komponen pembentuk
gel. (Lachmann, 1989).
f. Rheologi
Larutan pembentuk gel (gelling agent) dan dispersi padatan yang terflokulasi
memberikan sifat aliran pseudoplastis yang khas, dan menunjukkan jalan
aliran non – Newton yang dikarakterisasi oleh penurunan viskositas dan
peningkatan laju aliran (Lachmann, 1989).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
Hidrogel merupkan polimer hidrofilik, mengandung 85 – 95% air atau
campuran air dengan alkohol. Contoh dari hidrogel adalah: asam poliakrilat
(Carbopol®), sodium karboksimetilselulosa, atau selulose ester nonionik.
Formulasi dengan hidrogel harus menggunakan pengawet untuk mencegah
pertumbuhan mikroba. Setelah pemakaian, hidrogel membarikan sensasi dingin
pada kulit karena adanya pelarut yang menguap. Gel mudah diaplikasikan dan
mudah melembabkan kulit, namun penambahan pada humektan tetap disarankan
dalam formulasinya (Aulton, 2013).
Salah satu alasan mengapa hidrogel lebih disukai sebagai komponen dari
sistem penghantaran dan pelepasan obat adalah kompatibilitasnya yang relatif
baik dengan jaringan biologis (Zatz dan Kushla, 1996). Setelah pemakaian,
hidrogel akan meninggalkan lapisan tipis yang transparan dan memiliki daya lekat
yang tinggi, serta mudah dicuci dengan air (Voigt, 1994).
E. Bahan Formulasi
1. Gelling Agent
Gelling Agent yang digunakan dalam percobaan ini adalah Carbopol®.
Carbopol®
merupakan polimer asam akrilat yang mempunyai rantai cross-link
dengan polialkenil eter, alil sukrosa, atau divinil alkohol. Polimer Carbopol®
mempunyai kemampuan untuk menyerap air dalam jumlah banyak. Polimer ini
mengembang sampai 1000 kali dari volume asal dan diameternya ikut
mengembang sampai 10 kali dalam bentuk gel ketika dilarutkan dalam air dengan
pH di atas pKa 6. Dalam proses pengembangan ini terjadi ionisasi gugus
karboksilat pada backbone polimer sehingga partikel negatif akan saling tolak
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
menolak menyebabkan gel mengembang (Carnali dan Naser 1992; Rowe et al.,
2006). Formulasi sediaan semisolid menggunakan Carbopol® terbukti aman dan
efektif karena mempunyai potensi iritan yang sangat rendah dan tidak memicu
kulit sensitive untuk pemakaian yang berulang. Karena mempunyai bobot molekul
yang cukup tinggi, Carbopol® tidak terpenetrasi ke dalam kulit maupun
mempengaruhi senyawa obat yang didispersikan (Chadha, 2009).
Gambar 5. Struktur Carbopol® (Rowe et al., 2006).
2. Penetration enhancer
Penetration enhancer digunakan untuk meningkatkan transport obat
melalui sawar kulit. Terdapat bermacam-macam mekanisme dalam meningkatkan
penetrasi, salah satunya interaksi antara enhancer dengan gugus kepala polar dari
struktur fosfolipid pada kulit sehingga dapat meningkatkan penetrasi obat.
Mekanisme lain melalui interaksi antar lemak pada gugus kepala dan struktur
lemak yang berubah karena adanya fasilitator terhadap difusi senyawa hidrofilik
(Vikas, 2011).
Penetration enhancer yang ideal harus dapat mengurangi pertahanan
sawar kulit pada stratum corneum secara reversibel tanpa merusak sel kulit.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
Menunrun Finnin et al. (cit. Rachakonda, 2008), penetration enhancer yang ideal
harus memenuhi syarat-syarat sebagai berikut:
1. Inert secara farmakologis.
2. non-toksik, tidak mengiritasi, dan non-alergenik.
3. Mempercepat onset dengan waktu dan durasi yang tepat sesuai dengan tujuan
terapi.
4. Efeknya bersifat reversible pada stratum corneum.
5. Kompatibel secara disik dan kimia dengan sediaan.
6. Tidak mahal dan acceptable ketika digunakan untuk kosmetik.
Berdasarkan konsep partisi obat terhadap struktur lemak-protein, terdapat
tiga peran utama penetration enhancer (Vikas, 2011):
1. Perusakan struktur lemak – enhancer mengubah struktur lemak stratum
corneum dan membuatnya menjadi permeabel terhadap obat.
2. Modifikasi protein – surfaktan ionik, desilmetilsulfoksida dan DMSO
berinteraksi dengan keratin pada korneosit dan membuka struktur protein yang
semula rapat sehingga lebih permeabel.
3. Peningkatan partisi – penggunaan pelarut yang mengubah kelarutan obat pada
lapisan tanduk dan meningkatkan kekuatan partisi dari obat, sebagai co-
enhancer maupun kosolven.
Bermacam-macam jenis penetration enhancer di antaranya (Trommer
dan Neubert, 2006): alkohol dan glikol, alkyl-N,N-disubstitusi aminoasetat, azon
dan turunannya, ester, asam lemak, propilen glikol, pirolidon, sulfoksida,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
surfaktan, terpen dan terpenoid, urea dan turunannya. Oleum menthae piperita
atau peppermint oil merupakan minyak hasil distilasi dari bagian tanaman
Menthae piperita yang berupa cairan tidak berwarna atau kekuningan atau kuning
kehijauan; berubah gelap dan kental karena penyimpanan atau terkena udara;
memiliki aroma khas yang kuat, rasa pedas diikuti sensasi dingin ketika
diaplikasikan. Dalam peppermint oil mengandung banyak terpen: pinene,
phellandrene, sineol (3,5 – 14%), limonene (1 – 5%), menthone (14 – 32%),
menthol (30 – 55%), menthofuran (1 – 9%), isomenthone (1,5 – 10%), menthyl
acetate (2,8 – 10%), pulegone (<4%), dan carvone (≤1%) (Sayre, 1917; Alankar,
2009). Struktur terpen berbentuk rantai isoprena berulang yang dikelompokkan
sesuai dengan jumlah unit isoprenanya. Klasifikasi terpen meliputi monoterpen
yang mempunyai dua unit isoprena (C10), seskuiterpen yang mempunyai tiga unit
(C15), dan diterpen yang mempunyai empat unit isopren (C20) units (Sinha dan
Kaur 2000). Terpen merupakan komponen yang sangat lipofilik karena
mempunyai koefisien partisi oktanol/air yang tinggi (Williams dan Barry 2004).
Terpen diketahui mempunyai aktivitas sebagai penetration enhancer
dengan memodifikasi kelarutan pelarut pada stratum corneum sehingga dapat
meningkatkan partisi obat ke dalam kulit (Vikas, 2011). Aktivitas terpen
dipengaruhi oleh kecocokan struktur kimia terpen tersebut dan sifat fisika kimia
dari senyawa yang akan ditranspor. Senyawa yang bersifat lipofilik lebih baik
dipermeasikan dengan terpen yang bersifat lipofilik (Okabe, Takayama, Ogura,
dan Nagai, 1989).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
Pada penggunaan peppermint oil sebagai penetration enhancer dalam
sediaan perlu dilakukan uji iritasi karena kandungan menthol di dalamnya
dilaporkan menimbulkan iritasi sedang pada kulit dan sedikit mengiritasi mata
meskipun tidak menyebabkan edema yang berkelanjutan (Asbill et al., 2000).
Menurut Orafidiya dan Oladimeji (2002), rHLB minyak peppermint adalah
sebesar 12,3.
3. Propilen Glikol
Gambar 6. Struktur Propilen Glikol (Rowe, et al., 2006).
Propilen glikol berbentuk cairan kental, jernih, tidak berwarna, tidak
berbau.Propilen glikol dapat berfungsi sebagai pengawet, disinfektan, humektan,
plasticizer, pelarut, stabilizing agent dan kosolven water-miscible. Pada formulasi
sediaan topikal propilen glikol digunakan sebagai humektan dengan konsentrasi
≈15%.Propilen glikol larut dalam aseton, kloroform, etanol, gliserin, dan
air.Propilen glikol bersifat higroskopis (Rowe, et al., 2009).
4. Trietanolamin
Gambar 7. Stuktur Trietanolamin (Rowe, et al., 2006).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
23
Trietanolamin (TEA) berbentuk cairan kental, tidak berwarna sampai
kuning pucat dan berbau amoniak.TEA berperan sebagai alkalizing agent. TEA
bersifat sangat higroskopis dan larut dalam air (Rowe, et al., 2009).
Trietanolamin yang bersifat basa dapat digunakan untuk netralisasi
Carbopol®
. Penambahan trietanolamin pada Carbopol® akan menetralisasi gugus
asam karboksilat, membentuk garam yang larut. Sebelum netralisasi, Carbopol® di
dalam air akan ada dalam bentuk tak terion pada pH sekitar 3. Pada pH ini,
polimer sangat fleksibel dan strukturnya random coil. Penambahan trietanolamin
akan menggeser kesetimbangan ionik membentuk garam yang larut. Hasilnya
adalah ion yang saling tolak menolak dari gugus karboksilat dan polimer menjadi
kaku dan rigid, sehingga meningkatkan viskositas.
Viskositas dan kejernihan gel yang dapat diterima yaitu pada pH 4,5-5,0
dan mencapai titik optimum pada pH 7 (Osborne and Amann, 1990).
Overnetralisasi dapat menyebabkan penurunan viskositas karena kation basa yang
berlebih akan melingkupi gugus karboksilat sehingga mengurangi tolakan
elektrostatik (Walters, 2007).
5. Benzalkonium Klorida
Gambar 8. Struktur benzalkonium klorida (Rowe, et al., 2006).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
24
Benzalkonium klorida merupakan senyawa ammonium kuartener yang
digunakan dalam sebagai pengawet dalam formulasi produk
farmasetika.Benzalkonium klorida juga biasanya ditambahkan ke dalam formulasi
kosmetik.Benzalkonium klorida berbentuk bubuk amorf berwarna putih atau putih
kekuningan, dapat juga dalam bentuk yang menyerupai gel. Benzalkonium klorida
bersifat higroskopis, melihat bau khas yang lemah, dan rasa yang pahit. Berat
jenis benzalkonium klorida pada suhu 20o C adalah 0,98 g/cm
3. Dalam
pengadukan, larutan benzalkonium klorida dapat membentuk foam sehingga dapat
menurukan tegangan antar muka (Rowe, et al., 2009).
6. Tween 80
Tween 80 mempunyai kelarutan yang baik dalam air, larut dalam etanol
95% dan etilasetat, dan tidak larut dalam parafin cair (Depkes RI, 1993).Tween 80
memiliki nilai HLB sebesar 15 (Zhong, Xu, Fu, dan Li, 2012). Penggunaan tween
80 dalam farmasi yakni sebagai emulsifying agent, wetting agent, penetrating
agent, dan diffusan (Som, Bhatia, danYasir, 2012). Tween 80 dapat menurunkan
tegangan antarmuka antara obat dan medium sekaligus membentuk misel
sehingga molekul obat akan terbawa oleh misel larut ke dalam medium (Martin,
1993). Tween 80 termasuk golongan polisorbat, oleh sebab itu mempunyai
inkompatibilitas dengan pengawet paraben, karena dapat membentuk misel dan
menurunkan aktivitas antimikrobial dari paraben tersebut (Rowe, et al., 2009).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
25
F. Uji Iritasi HET-CAM
Hen's Egg Test-Chorioallantoic Membrane (HET-CAM) merupakan
salah satu metode uji iritasi menggunakan hewan uji yaitu telur ayam. Sebelum
dilakukan uji, telur ditempatkan dalam inkubator dan disimpan pada suhu 38,3°C
± 0,2°C dan kelembaban relatif 58,5% ± 2%. Uji dilakukan saat embrio berusia 9-
10 hari (Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative
Methods, 2006). Metode HET-CAM menggunakan membran chorioallantoic
(CAM), membran pernapasan vaskuler yang mengelilingi embrio burung yang
sedang berkembang. Pembuluh darah yang ada pada CAM adalah cabang dari
arteri dan vena dari allantois embrio yang berisi eritrosit dan leukosit yang terlibat
dalam respon inflamasi jika terkena rangsangan eksternal. Contohnya adalah efek
iritasi yang disebabkan oleh zat uji pada pembuluh darah dan protein pada
jaringan lunak membran ini (ICCVAM, 2006).
Tujuan uji HET-CAM ini adalah memberi data tentang potensi iritan
sejumlah sampel sediaan dari kemampuannya menginduksi toksisitas pada
membran chorioallantoic ayam. Metode ini meliputi uji terhadap kontrol negatif,
kontrol pelarut (jika diperlukan), kontrol positif, dan kontrol pembanding (jika
diperlukan).Efek toksisitas diamati dari waktu onset (1) hemorrhagia; (2)
koagulasi; dan (3) pecahnya pembuluh darah. Hasil data ini kemudian
dikombinasikan dan diderivatisasi menjadi skor untuk mengklasifikasi level iritasi
yang ditimbulkan oleh sediaan. Nilai skor maksimal untuk potensi iritan yang
paling berat adalah 21 (ICCVAM, 2006).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
26
Tabel 1. Skor Uji Iritasi HET-CAM (Luepke, 1985)
Efek Skor
0,5 menit 2 menit 5 menit
Lisis 5 3 1
Hemorraghia 7 5 3
Koagulasi 9 7 5
Tingkat iritasi kemudian ditentukan dari nilai rata-rata skor ketiga telur
dan dapat diklasifikasikan sebagai berikut:
Tabel 2. Kategori Iritasi Berdasarkan Skor Iritasi Pada HET-CAM (Luepke,
1985)
Skor HET-CAM Kategori Iritasi
0 – 0,9 Tidak mengiritasi
1 – 4,9 Iritasi lemah
5 – 8,9 atau 5 – 9,9 Iritasi sedang
9 – 21 atau 10 – 21 Iritasi kuat
G. Uji Sifat Fisik
1. Viskositas
Pada pembuatan kosmetik, reologi berpengaruh pada penerimaan pasien,
stabilitas fisika dan ketersediaan hayati, salah satunya adalah viskositas.
Viskositas merupakan pernyataan tahanan untuk mengalir dari suatu sistem di
bawah stress yang digunakan. Makin kental suatu cairan, makin besar kekuatan
yang diperlukan untuk digunakan supaya cairan tersebut dapat mengalir dengan
laju tertentu (Martin, et al., 1993). Peningkatan viskositas akan meningkatkan
waktu retensi pada tempat aplikasi, tetapi menurunkan daya sebar (Garg,
Aggarwal, Garg, dan Singla, 2002).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
27
Ketika menggunakan Carbopol® sebagai basis gel, sifat viskoelastis dari
dispersi Carbopol®
memungkinkan basis ini sangat cocok digunakan dalam
sediaan topikal sebagai mukoadesif. Pada konsentrasi 0,2% pH 7,5 viskositas
Carbopol®
dapat mencapai 200 – 300 mPas. Viskositas gel Carbopol® stabil
dalam perubahan suhu karena adanya struktur cross-linked dari mikrogel.
Penambahan bahan humektan seperti propilen glikol dapat memodifikasi ikatan
hidrogen antara air, pelarut, dan polimer sehingga dapat mempengaruhi sifat
viskoelastis dari Carbopol® (Islam, 2004).
2. Daya sebar
Daya sebar adalah kemampuan dari suatu sediaan untuk menyebar di
tempat aplikasi. Hal ini berhubungan dengan sudut kontak dari sediaan dengan
tempat aplikasinya. Daya sebar merupakan salah satu karakteristik yang
bertanggung jawab dalam keefektifan dalam pelepasan zat aktif dan penerimaan
konsumen dalam menggunakan sediaan semisolid. Faktor-faktor yang
mempengaruhi daya sebar yaitu viskositas sediaan, lama tekanan, temperatur
tempat aksi (Garg, et al., 2002).
Metode plat sejajar adalah metode yang paling banyak digunakan untuk
menentukan dan mengukur daya sebar sediaan semi padat. Keuntungan dari
metode ini adalah sederhana dan relatif murah. Selain itu, peralatan dapat didesain
dan dibuat sesuai dengan kebutuhan tiap individu berdasarkan tipe data yang
dibutuhkan, rute administrasi, luas permukaan yang ditutupi, dan pertimbangan
model membran (Garg, et al., 2002).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
28
H. Metode Penetapan Kadar dengan menggunakan HPLC
Kromatografi merupakan suatu cara pemisahan fisik dengan unsur-unsur
yang akan dipisahkan terdistribusikan antara dua fase, satu dari fase-fase ini
membentuk suatu lapisan stasioner dengan luas permukaan yang besar dan yang
lainnya merupakan cairan yang merembes lewat atau melalui lapisan yang
stasioner (Day dan Underwood, 2002). HPLC (High Performance Liquid
Chromatography) atau Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) merupakan
teknik kromatografi yang banyak dilakukan untuk analisis baik kualitatif maupun
kuantitatif suatu senyawa organik yang terdapat di dalam suatu bahan
multikomponen, seperti ekstrak tanaman. Sistem HPLC terdiri dari kolom, botol
fase gerak (eluen), pompa fase gerak, injektor, dan detektor. Sistem HPLC diatur
oleh suatu program komputer yang menyertakan profil kromatografi dan data-data
peak seperti: waktu retensi (time retention; Tr), tinggi peak, lebar peak, luas area
peak, efisiensi sistem, peak symmetry factor, dan sebagainya. Kolom di mana
tempat pemisahan senyawa analit terjadi tersambung dengan detektor, sehingga
HPLC dapat mendeteksi dan mengindentifikasi secara langsung berbagai macam
senyawa organik maupun anorganik (Kazekevich, 2007).
Elemen utama yang terdapat pada HPLC adalah kolom yang digunakan
dalam proses separasi analit. Dalam analisis dibutuhkan kolom yang digunakan
dalam waktu yang lama, dan berperforma prima (Rohman, 2009).
Kebanyakan fase diam pada HPLC berupa silica yang dimodifikasi
secara kimiawi, silika yang tidak dimodifikasi, atau polimer-polimer stiren dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
29
divinil benzene.Permukaan silika adalah polar dan sedikit asam karena adanya
residu gugus silanol (Si-OH) (Rohman, 2009).
Gambar 9. Macam-macam modifikasi gel silica (Corradini, 1998)
HPLC dengan metode fase terbalik (reversed-phase) merupakan teknik
kromatografi yang paling sering digunakan.Sebagian besar proses pemisahan
analit menggunakan fase diam yang dimodifikasi dengan rantai oktadesil silika
(C18). Kromatografi fase terbalik (Reversed-phase chromatography) adalah
metode kebalikan dari kromatografi fase normal dimana fase diam lebih bersifat
non-polar daripada fase gerak (Sarker, Latif, danGray, 2006).Oktadesil silika
(ODS atau C18) merupakan fase diam yang paling banyak digunakan karena
mampu memisahkan senyawa-senyawa dengan kepolaran yang rendah, sedang,
maupun tinggi. Selain itu metode analisis dengan fase diam ini relatif lebih murah
dan mudah (Rohman, 2009).
Fase gerak yang sering digunakan pada KCKT fase terbalik (reverse-
phase) merupakan campuran pelarut organik dan air. Modifikasi yang paling
sering digunakan adalah methanol atau asetonitril. Konsentrasi pelarut organik
yang digunakan sebagai eluen menjadi salah satu faktor penting untuk
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
30
menentukan retensi analit pada metode fase terbalik. Kemurnian pelarut yang
digunakan juga merupakan salah satu faktor yang harus diperhatikan untuk
meminimalkan kontaminasi pada fase diam dan mereduksi absorbansi komponen
pengotor yang bisa dideteksi dengan panjang gelombang > 190 nm. Disarankan
untuk menggunakan pelarut HPLC grade (Kazekevich, 2007).
Faktor-faktor yang bisa dijadikan pertimbangan dalam memilih fase
gerak yaitu: kompatibilitas antar pelarut, kelarutan sampel analit dalam eluen,
polaritas, transmisi cahaya, viskositas, stabilitas, dan pH. Pelarut fase gerak harus
dapat bercampur dan tidak menimbulkan pengendapan ketika dicampurkan.
Sampel juga harus larut pada fase gerak untuk mencegah terjadinya pengendapan
pada kolom. Transmisi cahaya menjadi salah satu faktor penting apabila detektor
yang digunakan adalah detektor UV (Kazekevich, 2007).
Tabel 3. Batas Bawah Transparensi Macam-Macam Pelarut Organik
Pelarut UV Cutoff
Asetonitril 190
Isopropil alkohol 205
Methanol 205
Ethanol 205
THF 215
Etil asetat 256
DMSO 268
Pelarut yang mempunyai UV cutoff yang tinggi seperti aseton (UV cutoff
330 nm dan etil asetat (UV cutoff 256 nm) tidak dapat digunakan pada panjang
gelombang rendah, misalnya pada 210 nm. Methanol, ethanol, dan isopropanol
mempunyai UV cutoff < 205 nm pada konsentrasi pelarut organik yang semakin
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
31
tinggi mentrasmisikan lebih sedikit cahaya sehingga cocok untuk dipakai dalam
analisis yang menggunakan panjang gelombang > 210 nm (Kazekevich, 2007).
I. Landasan Teori
Aging pada kulit membuat tampak menipis dan menjadi longgar serta
elastisitasnya berkurang sehingga dapat mengurangi estetika penampilan tubuh.
Aging pada kulit disebabkan karena kurangnya hormon estrogen yang
menstimulasi pembentukan serat kolagen dan elastin, dua komponen penting yang
berperan dalam menjaga konsistensi dan kekenyalan kulit. Fitoestrogen
merupakan senyawa dari tumbuhan yang mempunyai struktur yang mirip dengan
steroid estrogen. Aglikon isoflavon dari tanaman kedelai merupakan salah satu
senyawa yang mempunyai struktur yang mirip dengan steroid estrogen. Salah satu
isoflavon dari tanaman kedelai, genistein, merangsang produksi kolagen dengan
menghambat enzim pemecah kolagen. Selain itu, genistein juga memilki aktivitas
antioksidan yang dapat mencegah terbentuknya radikal bebas yang dapat
mempercepat terjadinya penuaan dini.
Gel merupakan suatu sediaan dispersi semisolid yang mengandung
gelling agent yang mengembang dalam pelarut menjadi struktur tiga dimensi. Gel
termasuk ke dalam bentuk sediaan yang paling banyak diminati sebagai sediaan
topikal karena propertinya yang menarik, warnanya yang transparan, dan
menimbulkan sensasi dingin ketika diaplikasikan pada kulit. Dalam formulasi
sediaan gel untuk meningkatkan efektifitas terapi diperlukan penetration enhancer
dalam meningkatkan kekuatan permeasi zat aktif dalam sediaan tersebut.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
32
Sifat fisika kimia sediaan sangat penting karena berpengaruh terhadap
acceptability pasien dan efektifitas terapetik suatu sediaan. Pencampuran bahan-
bahan dalam formulasi sediaan semisolid dapat mempengaruhi karakteristik dari
sediaan yang dihasilkan.
J. Hipotesis
Peningkatan penambahan peppermint oil dalam formulasi sediaan anti-
aging memberikan pengaruh pada sifat fisika gel ekstrak tempe. Pemberian
peppermint oil tidak memberikan efek iritasi pada uji iritasi HET-CAM.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
33
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian tentang pengaruh penambahan peppermint oil ke dalam
sediaan gel anti-aging ekstrak tempe terhadap sifat fisika kimia dari sediaan
termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan rancangan penelitian acak
lengkap pola searah.
B. Variabel Penelitian
1. Variabel Utama
a. Variabel bebas pada penelitian ini adalah konsentrasi penetration
enhancer yaitu peppermint oil.
b. Variabel tergantung pada penelitian ini adalah sifat fisik gel yang dilihat
dari viskositas dan daya sebar dari gel.
2. Variabel Pengacau
a. Variabel pengacau terkendali pada penelitian ini adalah urutan
pencampuran bahan ketika pembuatan sediaan.
b. Variabel pengacau tak terkendali pada penelitian ini adalah suhu dan
kelembaban ruangan ketika pembuatan sediaan.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
34
C. Definisi Operasional
1. Gel adalah suatu sediaan dispersi semisolid yang mengandung gelling agent
yang mengembang dalam pelarut menjadi struktur tiga dimensi. Gel ekstrak
tempe adalah sediaan semisolid dengan basis gel yang mengandung ekstrak
tempe sebanyak 1% dari total formula.
2. Penetration enhancer adalah bahan yang digunakan untuk meningkatkan
transport obat melalui sawar kulit. Dalam percobaan ini digunakan peppermint
oil sebagai penetration enhancer.
3. Sifat fisik gel adalah parameter untuk mengetahui kualitas fisik gel yang
meliputi viskositas dan daya sebar.
4. Viskositas sadalah suatu pertahanan dari gel untuk mengalir setelah adanya
pemberian gaya. Semakin besar viskositas, maka gel akan makin tidak mudah
untuk mengalir. Kriteria viskositas optimum adalah 200-300 dPas.
5. Daya sebar adalah diameter penyebaran tiap 1 gram gel pada alat uji daya
sebar yang diberi beban kaca dan pemberat hingga 125 gram dan didiamkan.
Kriteria daya sebar optimum adalah 3 – 5 cm.
6. Iritasi adalah terjadinya hemoragi dan lisis pada bagian Chorioallantoic
Membrane (CAM) telur ayam yang mungkin timbul setelah pengaplikasian
sediaan gel. Hemoragi merupakan perdarahan pembuluh darah, sedangkan
lisis merupakan pecahnya pembuluh darah.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
35
D. Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah Carbopol® 940,
Tween 80, Oleum Menthae Piperita, Propilenglikol, tempe kedelai putih,
aquadest, etanol teknis, etil asetat p.a, etanol p.a, metanol p.a, aquabidest,
petroleum eter, standar Genistein, NaOH 1N, telur ayam berumur 9-10 hari.
E. Alat Penelitian
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas (PYREX
GERMANY), corong pisah, cawan porselen, neraca digital, waterbath, magnetic
stirrer, tabung effendorf, pipet volume, HPLC (High Perfomance Liquid
Chromatography) Shimadzu model LC-2010C HT, Serial No. C21254706757 LP,
Cat. No. 228-46703-38, membrane filter, sendok, pH meter (pH meter 744
Methrom), kertas pH, mikropipet Socorex, pompa vakum, corong buchner, kertas
saring, kertas saring metanol, kertas saring, aquadest, penyaring milipore, spuit,
Viskometer seri VT 04 (RION-JAPAN), scalpel, pH stick, kolom oktadesilsilan
Shim-Pack XR-ODS dengan dimensi 150 x 4,6 mm, syringe filter 0,22 μm ,
syringe filter 0,45 μm, degassing, botol fase gerak, Spektrofotometri UV-Vis
merk Shimadzu UVmini-1240.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
36
F. Tata Cara Penelitian
1. Pembuatan crude extract tempe
Tempe seberat 1 kg dihaluskan dengan blender kemudian direndam
dengan perbandingan 1:1 dengan petroleum eter, setelah itu cairan filtrat
dibuang dengan cara menyaring tempe dengan corong Buchner. Tempe yang
sudah disaring kemudian dimaserasi dengan etanol teknis 70% dengan
perbandingan 1:2 selama 24 jam dengan kecepatan 150 rpm. Hasil maserasi
disaring dengan corong Buchner sehingga didapatkan residu padat dan ekstrak
cair kuning kecoklatan. Residu filtrat kemudian diremaserasi dengan etanol
teknis 70% dengan perbandingan 1:1. Hasil remaserasi disaring kembali
kemudian ekstrak cair yang didapatkan dari hasil maserasi pertama dan kedua
dipekatkan menggunakan rotary evaporator selama 45-60 menit dengan suhu
50o C hingga didapatkan volume sebanyak 10% volume awal. Ekstrak tempe
kemudian dikeringkan dalam oven dengan suhu 40 ºC hingga bobot tetap.
2. Penetapan kadar isoflavon genistein dari crude extract tempe
a. Penetapan Panjang Gelombang Maksimum
Standar genistein konsentrasi 186 ppm diukur pada panjang gelombang
200 – 361 nm dengan menggunakan spektrofotometer UV sebanyak tiga
kali repetisi. Hasil rata-rata pengukuran yang memberikan serapan yang
paling besar digunakan sebagai panjang gelombang maksimum
pengukuran kadar isoflavon genistein menggunakan instrumen HPLC.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
37
b. Pembuatan Fase Gerak
Fase gerak yang digunakan dalam penelitian ini adalah metanol:air pada
perbandingan (70:30). Fase gerak yakni 500 mL metanol p.a dan
aquabidest difilter terlebih dahulu dengan menggunakan membrane filter
yang diintegrasikan dengan corong buchner. Sebelum dipompakan pada
system HPLC perlu dilakukan degassing pada metanol p.a dan aquabidest
untuk mengusir gelembung dan gas yang terlarut dalam solvent.
c. Pembuatan larutan stok genistein
Larutan stok dibuat dengan menimbang standar genistein sebanyak 2 mg
kemudian melarutkannya dalam tabung effendorf dengan pelarut ethanol
p.a sebanyak 1 mL.
d. Pembuatan kurva baku standar genistein
Larutan stok genistein kemudian disaring dengan menggunakan membrane
filter dengan diameter pori 0,45 µm dan di-degassing untuk mengeluarkan
gelembung udara di dalamnya. Standar genistein kemudian diinjeksikan ke
dalam sistem dengan volume injeksi yang berbeda-beda, yaitu 1 µL, 2 µL,
3 µL, 4 µL, dan 5 µL. Metode HPLC yang digunakan adalah isokratik
dengan kolom C18, flow rate 0,7 mL / menit dan volume injeksi sebanyak
10 μl untuk sampel dan pembuatan kurva baku. Data respon yang muncul
dilihat regresi linearnya dari 3 repetisi untuk menentukan persamaan kurva
baku yang sesuai.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
38
e. Penetapan kadar genistein pada crude extract tempe
Crude extract tempe ditimbang sebanyak 0,5 g dan dilarutkan dalam labu
ukur 25 mL dengan pelarut ethanol p.a. Kemudian sebanyak sebanyak 500
µl diambil dari larutan stok crude extract dan dilarutkan dalam labu ukur
10 mL dengan pelarut ethanol p.a. Larutan sampel crude extract dibuat
replikasi sebanyak tiga kali dan disaring dengan menggunakan membrane
filter. Data respon yang didapat pada analisis sampel ekstrak dimasukkan
ke dalam persamaan kurva baku untuk diketahui kadar dalam satuan ppm.
3. Pembuatan gel anti-aging ekstrak kedelai
a. Formulasi gel anti-aging
Pada pengamatan pengaruh penambahan peppermint oil terhadap permeasi
genistein dari sediaan gel anti-aging digunakan variasi konsentrasi
peppermint oil dalam formulasi gel anti-aging sebagai berikut:
Bahan Formula I Formula II Formula III Formula IV
Crude extract
tempe
0,5 g 0,5 g 0,5 g 0,5 g
Carbopol® 940 0,5 g 0,5 g 0,5 g 0,5 g
Aquadest 28,35 g 28,10 g 27,85 g 27,35 g
Tween 80 15 g 15 g 15 g 15 g
Propilenglikol 5 g 5 g 5 g 5 g
Benzalkonium
klorida
0,05 g 0,05 g 0,05 g 0,05 g
Trietanolamin 0,6 g 0,6 g 0,6 g 0,6 g
Peppermint oil - 0,25 g 0,5 g 1 g
Total berat 50 g 50 g 50 g 50 g
b. Pembuatan gel anti-aging
Carbopol® 940 dikembangkan dengan menggunakan sebagian
aquadest dari formula selama 24 jam. Setelah serbuk Carbopol® terbasahi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
39
dengan sempurna, trietanolamin dan benzalkonium klorida ditambahkan
ke dalam kembangan Carbopol® kemudian dihomogenkan sampai merata
menggunakan mixer. Crude extract kedelai yang dilarutkan dalam
propilenglikol, dan tween 80 ditambahkan ke dalam gel kemudian
dihomogenkan dengan mixer selama 5 menit dengan kecepatan 40 rpm.
Peppermint oil ditambahkan kemudian dihomogenkan kembali dengan
mixer dengan kecepatan yang sama seperti sebelumnya selama 1 menit.
4. Uji Sifat Fisik
a. Uji Organoleptis dan pH
Uji Organoleptis dilakukan dengan mengamati warna, bentuk, dan
bau dari sediaan gel anti-aging. Pengukuran pH dilakukan dengan
menggunakan indikator pH universal, yaitu dengan memasukkan indikator
pH universal (pH strips) ke dalam gel anti-aging ekstrak kedelai yang
telah dibuat. Kemudian warna yang muncul pada kertas pH strips
dibandingkan dengan nilai pH pada kotak kemasan pH strips.
b. Uji Viskositas
Uji viskositas dilakukan satu kali setelah 48 jam pembuatan
sediaan gel dengan menggunakan alat Viscotester Rion seri VT 04. Ukuran
rotor yang digunakan adalah 2. Data yang didapat kemudian dikonversi ke
dalam cP (centipoise).
c. Uji Daya Sebar
Pengujian daya sebar dilakukan dengan modifikasi metode dari
Garg, et al. (2002). Sediaan gel ditimbang seberat 1 gram dan diletakkan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
40
di tengah kaca bulat berskala. Di atas gel diletakkan kaca bulat lain dan
pemberat sehingga berat kaca bulat dan pemberat 125 gram, didiamkan
selama 1 menit, kemudian dicatat penyebarannya. Pengujian daya sebar
dilakukan 48 jam setelah gel selesai dibuat. Dilakukan replikasi sebanyak
3 kali.
d. Analisis statistik pengaruh peningkatan pemberian minyak
peppermint terhadap sifat fisik gel
Data viskositas dan daya sebar dianalisis dengan uji Saphiro-wilk
(untuk sampel yang kurang dari atau sama dengan 50) untuk melihat
kenormalan distribusi data dan uji kesamaan varians Levene’s test untuk
melihat kesamaan variansi. Dalam uji normalitas Shapiro-wilk dengan
taraf kepercayaan 95%, jika nilai probability value (p-value) lebih dari
0,05 maka data terdistribusi normal sedangkan jika p-value kurang dari
0,05 maka data terdistribusi tidak normal.
Data yang diperoleh terdiri dari 5 kelompok formula sehinnga
pengujian dilakukan dengan menggunakan one way ANOVA atau uji
Kruskal-wallis. Jika data sesuai dengan kriteria uji statistik parametrik
yakni memiliki distribusi data yang normal dan kesamaan varians, maka
analisis dilanjutkan dengan pengujian signifikansi menggunakan one way
ANOVA. Jika data tidak memenuhi kriteria uji statistik parametrik, maka
analisis data menggunakan uji statistik non-parametrik yaitu uji Kruskal-
wallis. Pada uji one way ANOVA dan Kruskal-wallis dengan tingkat
kepercayaan 95%, maka faktor dikatakan berpengaruh signifikan jika
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
41
nilai p-value kurang dari 0,05 yang berarti paling tidak terdapat dua
kelompok data yang memiliki perbedaan signifikan.
Analisis Post-Hoc dilakukan apabila data berbeda signifikan
dimana uji Post-Hoc dilakukan untuk mengetahui kelompok mana yang
memiliki perbedaan signifikan (Dahlan, 2009). Analisis Post-Hoc untuk
ANOVA yaitu dengan uji T sedangkan untuk Kruskal-wallis adalah
dengan uji Wilcoxon. Pada uji T dua arah dan Wilcoxon dua arah, dengan
tingkat kepercayaan 95%, maka dua kelompok dikatakan berbeda jika
nilai p-value kurang dari 0,05. Analisis data dilakukan dengan
menggunakan software R 2.13.2.
5. Uji Iritasi HET-CAM
Uji iritasi dengan metode HET-CAM dilakukan sesuai rekomendasi
prosedur dari ICCVAM (2006).Uji iritasi dilakukan dengan menggunakan
telur ayam dimana uji dilakukan pada saat embrio berusia 9 hari. Pada saat uji
dilakukan, kulit telur disekitar rongga udara dibuka sehingga akan terlihat
membran dalam telur. Membran dalam tersebut dibasahi dengan larutan NaCl
0,9 % hingga membran berwarna bening. Setelah itu, dengan bantuan pinset
membran dalam dibuang sehingga akan terlihat chorioallantoic membrane
CAM. Dilakukan analisis visual ntuk memverifikasi apakah terdapat kondisi
dalam sistem vaskular CAM yang membuat telur tidak layak untuk uji.
Berikutnya sebanyak 0,3 gram sediaan uji ditempatkan pada permukaan CAM.
Setelah 20 detik, sediaan uji dicuci dengan larutan NaCl 0,9% hingga benar-
benar hilang. Telur kemudian diamati dibawah kaca pembesar selama 300
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
42
detik untuk mengamati apakah terjadi efek iritan pada pembuluh darah CAM
meliputi hemoragi, lisis dan koagulasi. Dilakukan replikasi sebanyak 3 kali.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
43
BAB IV
DATA DAN PEMBAHASAN
A. Ekstraksi isoflavon genistein dari tempe
Ekstraksi merupakan pengambilan senyawa aktif dalam bagian tanaman
tertentu dengan menggunakan pelarut tertentu yang selektif. Dalam penelitian kali
ini senyawa aktif yang akan diekstraksi dan ditentukan kadarnya adalah aglikon
isoflavon genistein. Dalam pembuatan crude extract kedelai digunakan tempe dari
kedelai putih. Ekstrak dari produk kedelai yang telah difermentasi mengandung
lebih banyak aglikon isoflavon. Selama proses fermentasi, ikatan -O- glikosidik
terhidrolisis, sehingga dibebaskan senyawa gula dan isoflavon aglikon yang
bebas. Senyawa isoflavon aglikon ini dapat mengalami transformasi lebih lanjut
membentuk senyawa transforman baru. Hasil transformasi lebih lanjut dari
senyawa aglikon ini justru menghasilkan senyawa-senyawa yang mempunyai
aktivitas biologi lebih tinggi (Pawiroharsono, 2001). Tempe mengandung total
isoflavon genistein yang paling banyak dibandingkan dengan produk fermentasi
kedelai lainnya.
Gambar 10. Reaksi Hidrolisis Glukosida Isoflavon Genistin menjadi Aglikon
Isoflavon Genistein (Ariani, 2003).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
44
Tempe dihaluskan terlebih dahulu dengan blender sebelum dimaserasi
untuk memperkecil ukuran partikel sehingga kontak pelarut dengan sampel tempe
semakin luas. Luas permukaan yang semakin besar akan memperbesar
pembasahan bahan yang akan diekstrak sehingga penyarian senyawa aktif dapat
berjalan dengan optimal (Harborne, 1987). Setelah tempe dihaluskan kemudian
dilakukan perendaman dengan petroleum eter untuk menghilangkan lemak pada
matriks. Perendaman dilakukan selama 45 menit dengan penggojogan oleh shaker
supaya setiap partikel bahan lebih terbasahi oleh petroleum eter sehingga dapat
menyari lemak secara optimal.
Pelarut yang digunakan dalam menyari senyawa aglikon isoflavon
genistein adalah etanol teknis 70%. Dipilih pelarut organik etanol sebagai penyari
karena aglikon isoflavon genistein termasuk golongan senyawa fenolik. Dalam
mengekstraksi senyawa fenolik biasanya digunakan pelarut seperti etanol,
metanol, n-butanol, aseton, dimetilformamida, dimetilsulfoksida dan air.Pelarut-
pelarut ini aman untuk digunakan karena dapat mencegah pertumbuhan kapang
dan jamur, netral, tidak toksik, dan absorbsinya baik (Hargono, 1997). Selain itu
etanol dipilih karena murah dan ramah lingkungan. (2004). Rostagno et al.
melakukan optimasi penyarian isoflavon dengan memvariasikan komposisi etanol
dan air. Hasil dari penelitiannya menyatakan bahwa peningkatan efisiensi
ekstraksi berbanding lurus dengan peningkatan jumlah komposisi air pada
persentase air 0-30%, sementara jumlah komposisi air di atas presentase tersebut
menurunkan efektifitas efisiensi. Digunakan komposisi etanol 70% berdasarkan
optimasi dari penelitian yang dilakukan oleh Rostagno et al.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
45
Pada ekstraksi aglikon isoflavon pada penelitian kali ini digunakan metode
maserasi karena metode ini tidak membutuhkan pemanasan. Pemanasan sampai
60o C dapat mengkonversi bentuk isoflavon yang akan diekstraksi karena reaksi
de-esterifikasi dan pemanasan sampai 80 o
C dapat mempercepat laju reaksi de-
esterifikasi tersebut ke bentuk isoflavon yang tidak dikehendaki (Barnes et al.,
1994). Metode maserasi juga bersifat lebih praktis, efisien, dan harganya lebih
terjangkau jika dibandingkan dengan metode lain seperti perkolasi. Pada maserasi
dilakukan penggojogan juga dengan bantuan shaker untuk membantu
mengoptimalkan kontak sel pada tempe dengan pelarut sehingga pelarut dapat
menyari isoflavon secara optimal apabila dibandingkan dengan yang hanya
didiamkan saja. Dalam maserasi digunakan perbandingan antara sampel dan
pelarut etanol 1:2 pada maserasi pertama dan 1:1 pada maserasi kedua. Dilakukan
remaserasi untuk memaksimalkan proses penyarian isoflavon dari matriks tempe
jika dibandingkan dengan satu kali maserasi.
Setelah sampel tempe dimaserasi dengan pelarut etanol tahap selanjutnya
adalah penyaringan. Penyaringan dilakukan untuk memisahkan pelarut yang
sudah menyari senyawa analit pada sampel dengan matriks. Pada proses
penyaringan menggunakan corong Buchner yang dihubungkan dengan pompa
vakum untuk mempercepat waktu dan meningkatkan efisiensi penyaringan.
Prinsip kerja dari corong Buchner sendiri adalah memisahkan endapan dari
pelarutnya atau cairan dari residunya dengan cara menyedot udara di dalam
corong dengan pompa vakum sehingga tekanan di dalamnya lebih kecil daripada
yang di dalamnya dan cairan yang ada didalam corong dapat menetes serta
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
46
menghasilkan filtrat yang lebih banyak dan residu atau ampasnya dapat tetap
ditinggalkan didalam corong tersebut.
B. Standarisasi isoflavon genistein dari tempe
Sebelum dilakukan pengukuran kadar genistein dengan menggunakan
HPLC, perlu dicari terlebih dahulu panjang gelombang maksimum yang akan
digunakan dalam penelitian. Pengukuran pada panjang gelombang maksimum
akan memberikan serapan yang maksimum sehingga hasil lebih reprodusibel pada
pengulangan pengukuran, meningkatkan sensitivitas dan meminimalkan kesalahan
dalam pengukuran. Pengukuran gelombang maksimum dilakukan dengan
menggunakan spektrofotometer UV, karena detektor yang digunakan pada
instrumen HPLC juga merupakan detektor UV. Genistein dapat diukur dengan
spektrofotometer UV karena mempunyai ikatan rangkap terkonjugasi yang dari
cincin benzennya sehingga dapat menyerap spektrum UV. Menurut penelitian
yang dilakukan oleh Lin (2012), Isoflavon mempunyai panjang gelombang
maksimum teoritis pada 260 nm. Dari hasil penetapan gelombang maksimum
ditemukan panjang gelombang 261 nm sebagai panjang gelombang yang akan
digunakan dalam analisis kuantitatif genistein dengan menggunakan HPLC.
Penetapan kadar aglikon isoflavon genistein dilakukan dengan
menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi atau HPLC (High Performance
Liquid Chromatography). Dipilih instrumen HPLC untuk menetapkan kadar
karena genistein merupakan komponen minor dalam kedelai sehingga dibutuhkan
instrumen yang sensitif untuk mendeteksi kadar yang kecil.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
47
Metode kromatografi yang digunakan mengacu pada penelitian yang telah
dilakukan oleh de Vargas et al. (2010). Fase diam yang digunakan adalah silanol
dengan modifikasi penempelan gugus oktadesil silika (ODS atau C18) karena
mampu memisahkan senyawa dengan kepolaran rendah, sedang, maupun tinggi.
Metode pemisahannya menggunakan reversed phase, di mana fase gerak bersifat
lebih polar daripada fase diam. Genistein memiliki nilai log Kow 2,94 sebesar
sehingga sifatnya cenderung non polar (Rostagno et al., 2002). Digunakan metode
reversed phase agar senyawa diharapkan dapat tertahan lebih lama pada fase diam
sehingga pemisahan dapat berjalan dengan optimal. Interaksi yang terjadi antara
fase diam dan analit isoflavon merupakan interaksi hidrofobik atau van der waals
sedangkan gugus OH pada isoflavon berinteraksi dengan fase gerak yang bersifat
polar. Fase gerak yang dipakai adalah campuran 70% methanol dan 30% air
karena campuran ini mempunyai nilai kepolaran yang mirip dengan kepolaran
genistein. Salah satu syarat dari fase gerak adalah harus dapat melarutkan analit
dalam sampel sehingga dibutuhkan kepolaran yang mirip supaya analit dapat larut
dalam fase gerak (like-dissolve-like).
Fase gerak yang dipilih juga harus memiliki nilai UV cut off jauh di bawah
panjang gelombang maksimum analit. Menurut Rohman (2009), methanol
mempunyai nilai UV cut off sebesar 205 nm dan aquadest mempunyai nilai UV
cut off sebesar 170 nm kedua pelarut ini mempunyai nilai UV cut off yang cukup
jauh di bawah panjang gelombang maksimum isoflavon genistein yakni 261 nm
sehingga tidak akan mengganggu serapan. Selain itu kedua pelarut ini mudah
untuk didapatkan dan affordable.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
48
Pada pembuatan kurva baku standar genistein dilarutkan dalam ethanol p.a
karena genistein mempunyai kelarutan yang tinggi pada pelarut organik polar
seperti methanol. Penentuan persamaan kurva baku ditentukan dari regresi linier
yang dihasilkan oleh tiga kali repetisi dengan metode loading mass. Regresi linier
ini dilihat dari respon AUC yang dimiliki oleh peak analit sebagai nilai fungsi (x)
dan konsentrasi seri larutan baku sebagi nilai (x). Persamaan dengan regresi linier
yang nilainya paling mendekati 1 merupakan persamaan kurva baku yang
memenuhi syarat linearitas yang baik. Linearitas menentukan kemampuan metode
analisis memberikan respon proporsional terhadap konsentrasi analit dalam
sampel.
Tabel 4. Linearitas kurva baku standar genistein
Konsentrasi AUC
0,002 µg 50344
0,004 µg 102206
0,005 µg 160040
0,007 µg 291895
0,009 µg 299067
b 34598642,83
a -19430,1
r2
0,998
Dalam analisis menggunakan HPLC terdapat dua macam analisis yang
dapat dilakukan, yaitu: analisis kualitatif dan analisis kuantitatif. Analisis
kualitatif genistein dilihat dari profil kromatografi yang dihasilkan dengan
membandingkan puncak dengan waktu retensi yang sama dengan standar. Waktu
retensi merupakan waktu yang diperlukan solut untuk keluar dari kolom dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
49
mencapai detektor. Rentang waktu retensi yang ditentukan berkisar dari menit ke-
3,913 – 4,297.
Gambar 11. Kurva Baku Loading Mass Standar Genistein AUC vs massa
(µg)
Analisis kuantitatif genistein dihitung dengan memasukkan respon AUC
pada sampel ekstrak tempe ke dalam persamaan kurva baku yang sudah
ditentukan. Pada penetapan kadar genistein pada ekstrak tempe digunakan kurva
baku loading mass di mana nilai (x) merupakan jumlah massa genistein pada
sampel dalam satuan µg. Persamaan regresi linier yang digunakan adalah y=
34598642,83x + 19430,1. Crude extract yang diukur ditimbang sebanyak 0,5 mg
kemudian dilarutkan dalam ethanol p.a sebanyak 25 mL. Dalam larutan stok crude
extract diambil sebanyak 50 µL kemudian diencerkan sampai 1 mL, dilakukan
tiga kali replikasi. Volume crude extract yang diinkjeksikan ke dalam sistem
adalah sebanyak 20 µL, sehingga diketahui 0,02 mg crude extract tempe
diinjeksikan ke dalam sistem.
y= 34598642,83x + 19430,1
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
50
Tabel 5. Perhitungan Jumlah Genistein dalam Ekstrak Tempe dengan Kurva
Loading Mass
AUC Jumlah genistein dalam
vol. injeksi 20 µL
92885 2,12 ng
77662 1,68 ng
77472 1,68 ng
Rata-rata= 82673 ± 8844, 36 1,83 ng ≈ 2 ng = 0,002 µg
Pada tiga kali replikasi dalam crude extract tempe ditemukan rata-rata
kandungan genistein sebanyak 0,002 µg sehingga dapat disimpulkan dalam
kandungan genistein dalam crude extract tempe yang digunakan sebanyak 10%.
Gambar 12. Kromatogram Crude Extract Tempe
Pada kromatogram crude extract tempe dapat dilihat bahwa pada peak
menit ke-4,370 diduga merupakan senyawa genistein, namun senyawa ini
tercampur dengan senyawa-senyawa hidrofobik lainnya karena tidak ada proses
pemisahan lebih lanjut sampel ekstrak. Hal ini juga bisa disebabkan oleh sistem
yang digunakan kurang optimal karena pada penelitian tidak dilakukan validasi
terhadap metode yang digunakan. Ketidakoptimalan ini dapat dilihat dari resolusi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
51
peak yang nilainya kurang dari 2, sehingga tidak sesuai dengan criteria SST
(System Suitability Testing) dan membutuhkan optimasi dan validasi metode lebih
lanjut.
C. Pembuatan Gel Anti-Aging
Genistein dalam ekstrak tempe dibuat dalam sediaan dispersi gel, bukan
larutan, karena sisa obat yang tertinggal pada dispersi akan menggantikan obat
yang sudah terabsorpsi untuk menjaga gradien konsentrasi pada uji difusi in vitro.
Langkah pertama yang dilakukan dalam membuat sediaan gel yaitu
mengembangkan gelling agent, Carbopol®. Carbopol
® 940 digunakan sebagai
gelling agent dengan konsentrasi 0,5 - 2% (Rowe, et al., 2009).
Carbopol®
merupakan polimer asam akrilat yang mempunyai rantai cross-link
dengan polialkenil eter, alil sukrosa, atau divinil alkohol. Polimer Carbopol®
mempunyai kemampuan untuk menyerap air dalam jumlah banyak. Polimer ini
mengembang sampai 1000 kali dari volume asal dan diameternya ikut
mengembang sampai 10 kali dalam bentuk gel ketika dilarutkan dalam air dengan
pH di atas pKa 6. Dalam proses pengembangan ini terjadi ionisasi gugus
karboksilat pada backbone polimer sehingga partikel negatif akan saling tolak
menolak menyebabkan gel mengembang (Carnali dan Naser 1992; Rowe et al
2006). Carbopol®
940 cocok dipilih sebagai gelling agent jika digunakan untuk
menghasilkan viskositas yang tinggi pada konsentrasi rendah (Curteis, 1991).
Carbopol® dalam bentuk tidak terdispersi berbentuk serbuk putih yang
mengandung molekul rantai panjang dalam bentuk coil. Saat didispersikan ke
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
52
dalam air, molekul Carbopol® terbasahi dan mengalami uncoil sebagian, melepas
asam bebas. Untuk mencapai kekentalan yang maksimum, molekul Carbopol®
harus sepenuhnya uncoil, yang dapat dicapai dengan dua mekanisme seperti pada
gambar 13 dan 14. Metode yang umum digunakan yaitu mengkonversi molekul
asam menjadi garam, yaitu dengan menambahkan neutralizing agent secukupnya.
Neutralizing agent yang digunakan dalam formulasi ini adalah trietanolamin.
Trietanolamin mengionisasi molekul Carbopol®, menyebabkan polimer backbone
bermuatan negatif dan menghasilkan gerakan tolak-menolak secara elektrostatik
sehingga terbentuk struktur tiga dimensi. Penambahan neutralizing agent
dilakukan secukupnya saja jangan sampai berlebihan agar tidak merubah profil
viskositas dan tiksotropinya. Netralisasi yang berlebihan akan mengurangi
viskositas, karena basa kation akan melapisi gugus karboksi dan mengurangi gaya
antar tolak-menolak tanpa backbone. Molekul Carbopol® dapat kembali menjadi
uncoil meskipun telah didispersi di dalam air karena penambahan 10 – 20% donor
hidroksil seperti surfaktan non-ionik atau poli-ol, yang mampu berikatan hidrogen
dengan polimer (Walters, 2002).
Gambar 13. Carbomer dalam bentuk coil akan mengalami pembasahan dan
mengembang ketika didispersikan dalam air (Williams, 2003).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
53
Gambar 14. Molekul Carbopol® terurai (uncoil) ketika molekul asamnya
ternetralisir menjadi bentuk garam dan mencapai kekentalan maksimum
(Williams, 2003).
Karena penetration enhancer merupakan peppermint oil yang berupa
minyak, maka perlu ditambahkan surfaktan sebagai wetting agent untuk
membantu pendispersiannya dalam hidrogel yang merupakan fase air. Surfaktan
yang digunakan adalah Tween 80. Digunakan Tween 80 sebagai surfaktan karena
Tween 80 mempunyai nilai HLB 15 yang mempunyai kepolaran lebih mirip
dengan air, sehingga cocok digunakan untuk pendispersian minyak dalam air.
Mekanisme pendispersian peppermint oil dalam sediaan gel dengan cara
menurunkan tegangan antar muka antara peppermint oil dan air dalam basis gel.
Gambar 15. Mekanisme penurunan tegangan muka oleh surfaktan (Tween
80) (Modifikasi Voigt, 1994).
Pemberian surfaktan
Pembentukan misel
Droplet minyak
terdispersi dalam air
molekul
surfaktan
gugus hidrofilik
guguslipofilik
Misel surfaktan
yang
mengembang
setelah
memerangkap
minyak
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
54
Benzalkonium klorida dan ekstrak tempe dilarutkan pada propilen glikol
karena kepolarannya yang relatif rendah sehingga kurang larut dalam air.
Digunakan benzalkonium klorida sebagai pengawet karena menurut Rowe et al.,
(2006) benzalkonium klorida kompatibel dengan carbomer dan bisa digunakan
pada sediaan gel apabila jumlah yang digunakan tidak melebihi 0,01% dari bahan
dan merupakan alternatif dari penggunaan paraben yang tidak kompatibel dengan
surfaktan non-ionik seperti Tween 80. Pengawet benzalkonium klorida bersifat
tidak iritatif ketika diaplikasikan pada kulit atau membran mukosa.Aktivitas
mikrobanya aktif pada pH 4 – 11 (Rowe et al., 2006). Tidak digunakan ethanol
dalam melarutkan ekstrak tempe dalam sediaan gel karena penambahan ethanol
pada Carbopol® akan membuatnya menjadi suspensi, bukan dispersi halus
(Chadha, 2009), sehingga akan menurunkan kejernihan warna gel. Minyak
peppermint ditambahkan terakhir untuk mencegah penguapan bahan.
D. Uji Sifat Fisik
1. Uji Organoleptis dan pH
Pengamatan organoleptis penting dilakukan untuk memastikan
penampilan fisik dari sediaan gel yang dibuat cukup acceptable atau tidak, dilihat
dari bentuk, warna dan baunya. Dari keempat formula tersebut semuanya
berbentuk semisolid, warnanya kuning agak coklat terang, dan pada formula 1, 2,
dan formula 3 baunya khas bau minyak peppermint yang semakin kentara
semakin bertambahnya minyak peppermint yang ditambahkan. Pada formula 0
yang tidak menggunakan minyak peppermint bau yang dominan berasal dari
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
55
ekstrak tempe yang digunakan, sehingga dapat disimpulkan penambahan minyak
peppermint memperbaiki bau sediaan kosmetik dan dapat meningkatkan
akseptabilitas pasien.
Uji pH dilakukan untuk memastikan pH sediaan gel anti-aging ekstrak
tempe berada pada pH yang cocok pada kulit manusia, sehingga meminimalkan
terjadinya iritasi. Hasil pengukuran pH pada keempat formula dengan tiga kali
replikasi menunjukkan pH berkisar antara 5,5 – 6,0 di mana rentang pH ini masuk
pada rentang pH fisiologis kulit manusia, yaitu 4,5 – 6,5 (Trenggono dan Latifah,
2007).
2. Uji Viskositas
Viskositas merupakan salah satu faktor yang diamati dalam menentukan
akseptabilitas sediaan ketika digunakan oleh konsumen. Viskositas menyatakan
secara langsung kekentalan sediaan tersebur, karena yang diamati adalah
ketahanan sediaan untuk mengalir dalam suatu sistem di bawah stress yang
diberikan. Makin kental suatu cairan, makin besar kekuatan yang diperlukan
untuk digunakan supaya cairan tersebut dapat mengalir dengan laju tertentu
(Martin, et al., 1993). Viskositas suatu sediaan diharapkan tidak terlalu tinggi dan
tidak terlalu rendah karena akan mempengaruhi daya sebarnya. Seiring dengan
meningkatnya viskositas, maka dapat meningkatkan waktu retensi pada tempat
aplikasi namun akan menurunkan daya sebarnya (Garg, et al., 2002). Viskositas
yang dikehendaki pada sediaan gel anti-aging ekstrak kedelai yaitu 200-300 dPas.
Pengujian viskositas dilakukan 48 jam setelah pembuatan bertujuan untuk
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
56
membebaskan sistem dari pengaruh energi dan gaya geser yang ditimbulkan
selama pembuatan, yang dapat mempengaruhi nilai viskositas. Digunakan rotor
nomor 2 dalam pengukuran viskositas dengan menggunakan viscotester Rion-
Japan seri VT-04 karena memiliki rentang 100 – 4000 dPas. Saat pengukuran,
setelah sediaan dituang ke dalam wadah viscotester kemudian didiamkan terlebih
dahulu selama 5 menit yang bertujuan untuk membebaskan emulgel dari pengaruh
gaya geser setelah pemindahan tempat. Nilai viskositas emulgel ditunjukkan
dengan skala yang ditunjukkan oleh jarum pada alat viscotester tersebut.
Penambahan propilen glikol sebagai pada sediaan gel dapat meningkatkan
viskositas gel karena mekanismenya membentuk ikatan hidrogen antara gugus –
OH pada propilen glikol dengan air yang terdapat pada lingkungan (Prankerd,
2004) sehingga meningkatkan interaksi antar molekul hidrogel dan meningkatkan
ketahanan gel.
Hasil dari pengukuran viskositas untuk keempat formula tersebut
menunjukkan bahwa sediaan mempunyai viskositas yang sesuai dengan criteria
yang diharapkan. Nilai viskositas Formula 0 adalah 283,33 ± 2,89; Formula 1:
280; Formula 2: 238,33 ± 2,89; Formula 3: 221,67 ± 2,89.
Viskositas tiap formula kemudian diuji secara statistik untuk melihat
apakah ada pengaruh yang signifikan dari penambahan minyak peppermint dalam
gel ekstrak tempe terhadap sifat fisik gel. Pertama-pertama dilakukan uji Shapiro-
Wilk untuk melihat normalitas data. Hasil dari uji Saphiro-Wilk untuk data
viskositas menunjukkan semua formula tidak mempunyai p-value di atas 0,05
yang berarti ada kelompok data yang tidak terdistribusi normal sehingga tergolong
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
57
data non-parametris. Untuk data non-parametris dilakukan uji Kruskal-wallis
untuk melihat adanya perbedaan antar kelompok perlakuan. Hasil dari uji
Kruskal-wallis menyatakan p-value yang didapat kurang dari 0,05; yaitu 0,01675
untuk viskositas dan 0,02981 untuk daya sebar sehingga dapat dikatakan bahwa
paling tidak terdapat dua kelompok atau lebih yang berbeda signifikan.
Tabel 6. Hasil Uji Saphiro-Wilk Viskositas
Formula p-value
F0 < 2.2 e-16
F1 < 2.2 e-16
F2 < 2.2 e-16
F3 < 2.2 e-16
Selanjutnya dilakukan analisis Post-Hoc dari uji Kruskal-wallis, yaitu uji
Wilcoxon. Uji Wilcoxon dilakukan dengan membandingkan antara F0 dan F1, F0
dan F2, F0 dan F3, F1 dan F2, F1 dan F3, F2 dan F3. Hasil uji Wilcoxon pada
viskositas menunjukkan semua perbandingan mempunyai nilai p-value lebih dari
0,05 yang berarti tidak ada perbedaan signifikan pada perbandingan-perbandingan
tersebut. Perbedaan hasil uji Kruskal-wallis dengan hasil uji Wilcoxon dikarenakan
pada uji Wilcoxon yang dilakukan tidak dapat menghitung p-value dengan tepat jika
terdapat ties atau data yang identik dalam satu kelompok yang sama (Ligges, 2008).
3. Uji Daya Sebar
Daya sebar merupakan karakteristik penting dalam formulasi yang
bertanggung jawab terhadap kemudahan saat diaplikasikan di kulit, pengeluaran
dari wadah dan dapat mempengaruhi penerimaan konsumen. Makin kental suatu
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
58
sediaan, daya sebarnya makin berkurang. Daya sebar yang diharapkan masuk ke
dalam kriteria acceptable berkisar antara 3 – 5 cm.
Hasil dari pengukuran daya sebar untuk keempat formula tersebut
menunjukkan hanya sediaan formula 2 dan formula 3 yang mempunyai daya sebar
yang sesuai dengan kriteria. Nilai daya sebar Formula 0 adalah 2,8 ± 0,1 cm;
Formula 1: 2,77 ± 0,05 cm; Formula 2: 3,03 ± 0,05 cm; Formula 3:3,17± 0,15 cm.
Hasil dari uji Saphiro-Wilk untuk daya sebar menunjukkan tidak semua
formula mempunyai p-value di atas 0,05 yang berarti ada kelompok data yang
tidak terdistribusi normal sehingga digunakan uji Kruskal-Wallis untuk melihat
signifikansi perbedaan. Hasil dari uji Kruskal-wallis menyatakan p-value yang
didapat kurang dari 0,05; yaitu 0,02981 untuk daya sebar sehingga dapat
dikatakan bahwa paling tidak terdapat dua kelompok atau lebih yang berbeda
signifikan. Namun ketika dilakukan uji Post-Hoc Wilcoxon, tidak dapat dilihat
signifikansi data karena terdapat kesamaan data atau ties.
Tabel 7. Hasil Uji Saphiro-Wilk Daya Sebar
Formula p-value
F0 1
F1 < 2.2 e-16
F2 < 2.2 e-16
F3 0,6369
Untuk data non-parametris dilakukan uji Kruskal-wallis untuk melihat
adanya perbedaan antar kelompok perlakuan. Hasil dari uji Kruskal-wallis
menyatakan p-value yang didapat kurang dari 0,05; yaitu 0,01675 untuk viskositas
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
59
dan 0,02981 untuk daya sebar sehingga dapat dikatakan bahwa paling tidak
terdapat dua kelompok atau lebih yang berbeda signifikan.
Selanjutnya dilakukan analisis Post-Hoc dari uji Kruskal-wallis, yaitu uji
Wilcoxon. Uji Wilcoxon dilakukan dengan membandingkan antara F0 dan F1, F0
dan F2, F0 dan F3, F1 dan F2, F1 dan F3, F2 dan F3. Hasil uji Wilcoxon pada
viskositas dan daya sebar menunjukkan semua perbandingan mempunyai nilai p-
value lebih dari 0,05 yang berarti tidak ada perbedaan signifikan pada
perbandingan-perbandingan tersebut. Perbedaan hasil uji Kruskal-wallis dengan
hasil uji Wilcoxon dikarenakan pada uji Wilcoxon yang dilakukan tidak dapat
menghitung p-value dengan tepat jika terdapat ties atau data yang identik dalam satu
kelompok yang sama (Ligges, 2008)
D. Uji Iritasi HET-CAM
Uji iritasi dilakukan untuk memastikan keamanan formula emulgel yang
akan dilihat pengaruh kecepatan putarnya. Uji iritasi dilakukan dengan metode HET-
CAM (Hen's Egg Test - Chorioallantoic Membrane), yaitu menggunakan hewan uji
berupa telur ayam dimana uji dilakukan saat embrio berusia 9 hari.
Uji iritasi dilakukan dengan mengoleskan sediaan gel ekstrak tempe pada
bagian chorioallantoic membrane (CAM) telur ayam. CAM merupakan bagian pada
telur ayam yang merupakan gabungan antara korion dan allantois. Korion merupakan
kantung tempat tumbuhnya embrio sedangkan allantois merupakan bagian yang
mengandung banyak pembuluh darah untuk fungsi pernapasan bagi embrio ayam.
Adanya iritasi ditunjukkan dengan munculnya hemoragi (perdarahan pada pembuluh
darah), lisis (pecahnya pembuluh darah) dan koagulasi (denaturasi protein vaskuler)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
60
yang diamati selama 300 detik pada bagian CAM setelah pengaplikasian sediaan
(ICCVAM, 2006).
Selain emulgel dilakukan pula pengujian terhadap basis gel, NaCl 0,9%,
NaCl 0,9% dalam basis gel, NaOH 0,1 N, NaOH 0,1 N dalam basis gel. Pengujian
terhadap basis dimaksudkan untuk melihat apakah basis gel juga dapat berpotensi
mengiritasi atau tidak. Larutan fisiologis NaCl 0,9% berfungsi sebagai kontrol negatif,
yaitu suatu kontrol pembanding yang diharapkan tidak terjadi efek iritasi sehingga
perubahan (iritasi) yang terjadi pada saat pengujian emulgel dapat terlihat. NaOH 0,1
N berfungsi sebagai kontrol positif, yaitu merupakan suatu kontrol pembanding yang
digunakan untuk menghasilkan efek yang diharapkan (efek iritasi) sehingga
perubahan positif saat pengujian gel dapat diketahui. Kontrol digunakan untuk
memvalidasi prosedur yang digunakan. NaCl 0,9% dan NaOH 0,1 N juga dibuat
dalam bentuk semisolid dengan dicampurkan dalam basis gel. Hal ini karena larutan
bersifat lebih mudah menyebar sehingga efek iritasi dapat terjadi lebih cepat. Oleh
karena itu, kontrol positif dan negatif dibuat dalam bentuk semisolid untuk
menyamakan perlakuan dengan gel ekstrak tempe.
Tabel 8. Tabel Skor Iritasi Uji HET-CAM
Skor Iritasi
Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3
NaCl 9% 0 0 0
Basis + NaCl 9% 0 0 0
Basis + NaOH 7 7 7
NaOH 12 12 12
Basis Gel 0 0 0
Gel F0 0 0 0
Gel F1 0 0 0
Gel F2 0 0 0
Gel F3 0 0 0
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
61
Berdasarkan skor iritasi dan klasifikasi kategori iritasi ICCVAM (2006), didapatkan
hasil uji iritasi yaitu semua formula gel ekstrak tempe tidak menunjukkan adanya
iritasi sehingga aman digunakan. Basis gel, NaCl 0,9% serta NaCl 0,9% dalam basis
gel juga tidak menunjukkan adanya iritasi sedangkan pada NaOH 0,1 N menunjukkan
terjadinya iritasi kuat dan pada NaOH 0,1 N dalam basis emulgel menunjukkan
terjadinya iritasi sedang.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
62
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa peningkatan
pemberian minyak peppermint sebagai penetration enhancer dalam formulasi gel
ekstrak tempe memberikan pengaruh terhadap viskositas dan daya sebar
berdasarkan uji Kruskal-Wallis. Dari keempat formula gel anti-aging ekstrak
tempe tidak ada yang memberikan efek samping iritasi berdasarkan hasil uji iritasi
HET-CAM sehinga aman untuk digunakan.
B. Saran
Perlu adanya studi penetrasi secara in vitro pada formulasi gel anti-aging
ekstrak tempe dengan menggunakan minyak peppermint untuk melengkapi data
bioavailibitas gel yang diberikan secara topikal, serta uji aktivitas untuk
memastikan efektivitas terapi dari sediaan gel anti-aging. Perlu dilakukan
optimasi lebih lanjut terhadap system yang digunakan pada pengukuran kadar
genistein dalam ekstrak tempe.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
63
DAFTAR PUSTAKA
Achdiat, C.M. 2003. Fitoestrogen untuk Wanita Menopause. http://www.
situs.kesrepro.info/aging/jul/2003 /ag01.html.
Adisarwanto, R. 2005. Meningkatkan Hasil Panen Kedelai di Lahan Sawah
Kering Pasang Surut, Jakarta, Penerbit Swadaya, p. 3
Alankar, S., 2009, A review on Peppermint Oil, Asian Journal of Pharmaceutical
and Clinical Research, 2, pp. 27 – 32
Anderson, J.W., Smith, B.M., & Washnock, C.S., 1999, Cardiovascular and Renal
Benefits of Dry Bean and Soybean Intake, The American Journal of
Clinical Nutrition, Vol.70, Suppl.3, pp. 464-474
Ansel, H. C, 1989, Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi Edisi 4, Jakarta, UI Press.
pp. 390-391.
Ariani, 2003, Pembuatan Keju Kedelai yang Mengandung Senyawa Faktor-2
Hasil Biokonversi Isoflavon pada Tahu oleh Rhizopus oligosporus
(L.41), BioSMART, Volume 5 No. 1, pp. 8-12
Asbill, C. S., and Michniak, B. B. 2000. Percutaneous penetration enhancers:
local versus transdermal activity. Pharm. Sci. Technolo. Today, pp. 36-
41
Aulton, M., Taylor, 2013, Aulton’s Pharmaceutics:The Design and Manufacture of
Medicines, United Kingdom, Churchill Livingstone, p. 347
Bingham, S.A., C. Atkinson, J. Liggins, L. Bluck, dan A. Coward, 1998, Phyto-
estrogens: Where are we now? Br. J. Nutr. 79, pp. 393-406
Binic, I. Lazarevic, V., Ljubenovic, M., Mojsa, J., dan Sokolovic, D., Review
Article Skin Ageing: Natural Weapons and Strategies, Hindawi
Publishing Corporation Evidence-Based complementary and Alternative
Medicine Volume 2013, 00. 323, 325
Brincat, M., Kabalan, S., Studd, J. W. W., Moniz, C.F., de Trafford, J, &
Montgomery, J., 1987, A Study of the Decrease of Skin Collagen
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
64
Content, Skin Thickness, and Bone Mass in the Postmenopausal Woman.
Obstet. Gynecol. 70, pp. 840-845
Brincat, J. Krutman and B. Gilchrest, 2006, Skin Aging, Berlin, Germany,
Springer, pp. 23, 27
Bronaugh, R.L., Maibach H.I., 1999, Percutaneous Absorption: Drugs--
Cosmetics--Mechanisms--Methodology, Third Edition, CRC Press, p.
205
Campisi, J., Velarde, M.C., Flynn, J. M., Day, N. U., dan Melov, S., 2012,
Mitochondrial oxidative stress caused by Sod2 deciency promotes
cellular senescence and aging phenotypes in the skin, Aging, vol. 4, no. 1,
pp. 3–12,
Callens, A., Vaillant, L., Lecomte, P., Berson, M., Gall, Y. & Lorette, G., 1996,
Does Hormonal Skin Aging Exist? A Study of the Influence of Different
Hormone Therapy Regimens on the Skin of Postmenopausal Women
Using Non-Invasive Measurement Techniques, Dermatology 193, pp:
289-294
Chadha, G., Sathigari, S., Parsons, D.L., Babu, R.J., 2011, In vitro percutaneous
absorption of genistein from topical gels through human skin, Drug
Development and Industrial Pharmacy, Informa Healthcare USA, Inc.,
USA, pp. 498–505
Corradini, D., Eksteen, E. (Katz), Eksteen, R., Schoenmakers, P., dan Neil Miller,
1998, Handbook of HPLC, CRC Press, pp. 795-797
Curteis, T., 1991, An Investigation of The Use of Solvent Gels for The Removal
of Wax-Based Coatings from Wall Paintings, Dissertation, University of
London, London, pp. 13-17.
Day, R.A dan Underwood, A.L., 2002, Analisis Kimia Kuantitatif, Erlangga,
Jakarta, p. 5
Finnin BC., Morgan TM., 1999, Transdermal Penetration Enhancers:
Applications, limitations, and potential, J Pharm Sci, pp. 955-958
Garg, A., Aggarwal, D., Garg, S., and Singla, A. K., 2002, Spreading of Semisolid
Formulations, Pharmaceutical Technology, pp. 84-102.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
65
Georgetti S.R., Casagrande R., Verri Jr., W.A., Lopez R.F.V., Fonseca M.J.V.,
2008, Evaluation of In Vivo Efficacy Of Topical Formulations
Containing Soybean Extract, International Journal Of Pharmaceutics,
352, pp. 189-190.
Hadgraft, J. 2001. Skin, the final frontier,Int. J. Pharm. 224, pp. 1-18.
Hargono, D., 1997, Obat tradisional dalam Zaman Teknologi, Majalah Kesehatan
Masyarakat, No. 56, pp. 3
Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative Methods
(ICCVAM), 2006, Current Status of In Vitro Test Methods for
Identifying Ocular Corrosives and Severe Irritants: Hen’s Egg Test -
Chorioallantoic Membrane Test Method, US Department of Health and
Human Service, United States, pp. 1-7, 1-13, 2-2, 2-3, 2-15, 2-17.
Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative Methods
(ICCVAM), 2006 ,ICCVAM Test Method Evaluation Report: In Vitro
Ocular Toxicity Test Methods for Identifying Severe Irritants and
Corrosives, US Department of Health and Human Service, United States,
pp. G1-G10.
Indranupakorn, R., P. Sobharaksha, M. Luangtana-anan, 2010, Antioxidant
Activities of The Soybean Extracts Obtained by Classical Extraction,IJPS
Vol. 6, No.3, Sep-Dec 2010
Islam, M.T., Rodrı´guez-Hornedo, N., Ciotti,S., Ackermann, C., 2004,
Rheological Characterization ofTopical Carbomer Gels Neutralized
toDifferent pH, Pharmaceutical Research, Vol. 21, No. 7, pp. 1192 –
1199
Jain, A.K., Thomas, N.S., Panchagnula, R., 2002, Transdermal drug delivery of
imipramine hydrochloride.: Effect of terpenes, J. Control. Release, pp.
79, 93-101.
Kazekevich, Y.V., LaBrutto, R., 2007, HPLC For Pharmaceutical Scientists,
John Wiley & Sons, pp. 623, 626
Kelly, P.A., Taylor, S., 2009, Dermatology For Skin Of Color, McGraw-Hill, p.
23
Kobayashi S, Shinohara M, Nagai T, Konishi Y, 2013, Transport Mechanisms of
Soy Isoflavones and their Microbial Metabolites Dihydrogenistein and
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
66
Dihydrodaidzein Across Monolayers and Membranes, Pharmaceut Anal
Acta , p. 227
Krutman, J., Gilchrest, B., 2006, Skin Aging, Springer, Berlin, Germany, p. 21
Kuiper, G. G. J. M., Lemmen, J. G., Carlsson, B., Corton, J. C., Safe, S. H., Van
Der Saag, P. T., Van Der Burg, B. & Gustafsson, J.-A., 1998, Interaction
of Estrogenic Chemicals and Phytoestrogens with Estrogen Receptor,
Endocrinology, pp. 4252-4263,
Lachman, 1989, Pharmaceutical Dosage System, Dysperse system, Vol.2, pp. 495,
496
Lieberman, H. A., Rieger, M. M., and Banker, G. S., 1996, Pharmaceutical
Dosage Forms: Disperse Systems, Volume 1, 2nd Ed., Marcel Dekker
Inc., New York, pp. 57, 157-158.
Ligges, U., 2008, http://r.789695.n4.nabble.com/What-are-ties-Wilcox-u-
testtd857059.html, What are Ties? Wilcox U-test, diakses pada tanggal 16
Juni 2014.
Lin LZ, Harnly JM, 2012, Quantitation of flavanols, proanthocyanidins,
isoflavones, flavanones, dihydrochalcones, stilbenes, benzoic acid
derivatives using ultraviolet absorbance after identification by liquid
chromatography-mass spectrometry, J Agric Food Chem., pp. 657-663
Luepke N, 1985,Hen's egg chorioallantoic membrane test for irritation potential.
Food Chem Toxicol.,pp. 287–291
Luthria, D.L., Natarajan, S.S., 2009, Influence of Sample Preparation on the Assay of
Isoflavones, Planta Med, 75, 708.
Martin, A., Swarbrick, J., Cammarata, A., 1993, Physical Pharmacy, Physical
Chemical Principle in the Pharmaceutical Sciences, Edisi Ketiga, Jilid
Kedua, Jakarta, UI Press, pp. 997, 1078, 1083-1085, 1150-1151
McGrath, J. A., Eady, R. A., and Pope, F. M. 2004.Rook's Textbook of
Dermatology (Seventh Edition), Blackwell Publishing, pp. 3-7
Okabe, H., Takayama, K., Ogura, A., dan Nagai, T., 1989, Effect of limonene and
related compounds on the percutaneous absorption of indomethacin,
Drug Des.Deliv., pp. 313–321.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
67
Orafidiya, L.O., Oladimeji, F.A., Determination of the required HLB values of
Some Essential Oils, International Journal of Pharmaceutics, 241-249
Osborne, D. W., and Amann, A. H., 1990, Topical Drug Delivery Formulations,
Marcel Dekker Inc., New York, p. 383.
Pawiroharsono, S., 1998, Benarkah tempe sebagai anti kanker, Jurnal Kedokteran
dan Farmasi MEDIKA, No.12 Tahun ke-XXIV, pp.815-817
Prankerd, R. J., 2004, Formulations Chemistry II : Humectans and Preservatives,
http://cmapspublic.ihmc.us/rid=1099887089839_1869867864_1886/08V
CF2071SIIHumectantsPreservatives.pdf, diakses tanggal 20 April 2014.
Rajan, R., Vasudevan, D.T., 2012, Effect of permeation enhancers on the
penetration mechanism of transfersomal gel of ketoconazole, Journal of
Advanced Pharmaceutical Technology & Research, pp. 112 - 116
Roberts, M.S. dan Walters, K.A.,1998, Dermal Absorption and ToxicityAssesment,
Marcel Dekker, New York, pp.161-169.
Rohman, A., 2009, Kromatografi untuk Analisis Obat, Edisi pertama, Cetakan
pertama, Graha Ilmu, Yogyakarta, pp. 2-10.
Rowe, R. C., Sheskey, P. J., and Quinn, M. E., 2009, Handbook of
Pharmaceutical Excipients, 6th ed, Pharmaceutical Press, London, pp.
17-19, 110-112, 441-445, 445-446, 549-553, 592-594, 596-598, 675-678,
754-755.
Sayre, L.E., 1917, A Manual of Organic Materia Medica and Pharmacognosy, 4th
Edition, P. Blakiston’s Son & Co., Philadelphia, p. 473
Sarker, S.D., Z. Latif, A. I. Gray, 2005, Natural Products Isolation, Springer
Science & Business Media, p. 269
Setchell, K. D. R., 1998, Phytoestrogens: the biochemistry, physiology, and
implications for human health of soy isoflavones, Am. J. Clin. Nutr. 68
(suppl), p. 13335 – 13465
Schimd, D., Reto, M., Zulli, F., 2002, Dermatological Application of Soy Isoflavones
to Prevent Skin Ageing in Postmenopausal Women, Cosmetic & Toiletries
Magazine, 117 (6), pp. 146-151.
Sinha, VR, Kaur, MP, 2000, Permeation enhancers for transdermal drug delivery,
Drug Development and Industrial Pharmacy, pp. 1131-1140
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
68
Shao, ZM., Shen, J., Barsky, S.H., 1998, Genistein inhibits both constitutive and
EGF-stimulated invasion in ER-negative human breast carcinoma cell
lines, Anticancer Res., pp. 1435-1440
Snyder, H.E., T. W. Kwon, 1987, Soybean Utilization. An AVI Book, New
York , Van Nostrand Reinhold Company, pp. 132-133
Som, I., Bhatia, K., Yasir, M., 2002, Status of surfactant as penetration enhancer
in transdermal drug delivery, Journal Pharmacy Bioalllied Scienced, pp.
2-9
Tranggono, R. I., dan Latifah, F., 2007, Buku Pegangan Ilmu Pengetahuan
Kosmetik, PT Gramedia Pustaka Utama, Jakarta, p. 21.
Trommer, H., and Neubert, R. H., 2006, Overcoming the stratum corneum: the
modulation of skin penetration.Skin Pharmacol. Physiol. 19: 106-121.
Troy, D.B., P. Beringer, 2006, Remington: The Science and Practice of
Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins, pp. 873
Vikas, S., Seema, S., Gurpreet, S., Rana A.C., Baibhav, J., 2011, Penetration
Enhancers: A Novel Strategy For Enhancing Transdermal Drug Delivery,
IRJP 2 (12), p. 32 – 36
Voigt, R., 1994, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, Penerjemah: Soendani
Noerono. Yogyakarta, Gadjah Mada University Press,pp. 370, 398-434
Walters, K. A., 2002, Dermatological and Transdermal Formulations, Volume
119, Informa Healthcare Inc., New York, p. 326.
Wang, H. & Murphy, P. A., 1994,Isoflavone Content in Commercial Soybean
Foods, J. Agric.Food Chem. 42, pp. 1666-1673.
Williams, AC., 2003, Transdermal and Topical Drug Delivery, London,
Pharmaceutial Press PhP, pp. 124-127
Williams, A.C., and Barry, B.W., 2004, Penetration Enhancers, Advanced Drug
Delivery Reviews, 56, 611-612.
World Health Organization, 2006, Dermal Absorption, pp. 24-25
Yoon H.K., Chen, K., Baylink, D.J., dan Lau, K.H.W., 1998, Differential effects
of two protein tyrosine kinase inhibitors, tyrphostin and genistein, on
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
69
human bone cell proliferation as compared with differentiation, Calcif.
Tissue Int., pp. 243-249
Zanchetta, L.M., D. Kirk, F. Lyng, J. Walsh, dan J. E. J. Murphy, 2010, Cell-
density-dependent changes in mitochondrial membrane potential and
reactive oxygen species production in human skin cells post sunlight
exposure,Photodermatology Photoimmunology and Photomedicine, vol.
26, no. 6, pp. 311–317, 2010
Zatz, J.L., Kushla, G.P., 1996, Gels, Dekker, NY, 1996, Vol. 2, pp. 399-421
LAMPIRAN
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
70
Lampiran 1. Pembuatan crude extracttempe
Crude extracttempe bobot tetap Suspensi crude extract yang
digunakan dalam formulasi
Lampiran 2. Standarisasi kandungan genistein dari crude extract tempe
1. Penentuan panjang gelombang maksimum
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
71
2. Parameter kromatogram:
Fase gerak : 70% Metanol 30% Air
Fase diam : C18 ukuran partikel 45 µm panjang kolom 15 cm
Flow rate : 0,7 ml/menit
Wavelength UV : 261 nm (hasil optimasi)
Dari larutan konsentrasi 1,8126 ppm diinjeksikan 1,2,3,4 dan 5µl ke dalam
sistem.
3. Data kromatogram
Kromatogram loading mass 0,002 µg
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
72
Kromatogram loading mass 0,004 µg
Kromatogram loading mass 0,005 µg
Kromatogram loading mass 0,007 µg
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
73
Kromatogram loading mass 0,009 µg
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
74
Kurva baku loading mass
Persamaan regresi linier:
Replikasi I II III
b 39796149.18 34598642.83 36623260.27
a -34287.9 -19430.1 -29055.20548
r2
0,995 0,998 0,996
Berdasarkan nilai r2, maka persamaan y= 34598642.83x + 19430.1 dipilih
sebagai persamaan untuk penetapan kadar genistein dalam crude extract.
Kromatogram crude extract
Replikasi 1
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
75
Replikasi 2
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
76
Replikasi 3
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
77
Perhitungan kandungan genistein:
Replikasi 1:
y= 34598642,83x + 19430,1
73565,9 = 34598642,83x
x= 0,002123 µg ~ 0,002 µg
Replikasi 2:
y= 34598642,83x + 19430,1
58231,9 = 34598642,83x
x= 0,001683 µg ~ 0,002 µg
Replikasi 3:
y= 34598642,83x + 19430,1
58041,9 = 34598642,83x
x= 0,001677 µg ~ 0,002 µg
Lampiran 3. Gel anti-aging ekstrak kedelai setelah pembuatan
Formula 0 Formula 1
(tanpa peppermint oil) (0,5% peppermint oil)
Formula 2 Formula 3
(1% peppermint oil) (2% peppermint oil)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
78
Lampiran 4. Uji sifat fisik
1. Uji organoleptis dan pH sediaan
F0 F1 F2 F3
Warna Kuning
kecoklatan
Kuning
kecoklatan
Kuning
kecoklatan
Kuning
kecoklatan
Bau Tidak berbau Bau mint Bau mint Bau mint
pH 6,0 5,5 5,5 5,5
2. Uji Viskositas
Replikasi F0 (dPas) F1 (dPas) F2 (dPas) F3 (dPas)
1 280 280 240 225
2 285 280 235 220
3 285 280 240 220
Rata-rata 283,33 280 238,33 221,67
SD 2,89 0 2,89 2,89
3. Uji Daya Sebar
Replikasi F0 (cm) F2 (cm) F2 (cm) F3 (cm)
1 2,8 2,8 3,0 3,2
2 2,9 2,8 3,0 3,0
3 2,7 2,7 3,1 3,3
Rata-rata 2,8 2,77 3,03 3,17
SD 0,1 0,05 0,05 0,15
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
79
Lampiran 5. Uji Statistik
a. Uji normalitas Saphiro-Wilk, p-value > 0,05
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
80
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
81
b. Uji Kruskal Wallis untuk data non-parametrik, p≤0,05
c. Uji Post-Hoc Wilcoxon (p≤0,05)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
82
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
83
Lampiran 6. Uji iritasi HET-CAM
NaCl 9% (sesudah) Basis + NaCl 9% (sesudah)
Basis gel (sesudah) Gel F0 (sesudah)
NaOH (sesudah) Basis + NaOH (sesudah)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
84
Gel F1 (sesudah) Gel F2 (sesudah)
Gel F3 (sesudah)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
85
BIOGRAFI PENULIS
Cindy Tiara Sari, lahir di Sleman pada tanggal 18
November 1993. Penulis merupakan anak dari pasangan
CM. Sulistya dan VT.Ambardini.
Penulis telah menempuh pendidikan di TK Kapas
(TK Negeri 2) pada tahun 1997 dan TK Stella Maris pada
tahun 1998, SD Kanisius Baciro pada tahun 1999-2005, SMP Pangudi Luhur 2 pada
tahun 2005 dan SMP Pangudi Luhur 1 pada tahun 2006, Akselerasi SMA Negeri 3
Yogyakarta pada tahun 2008-2010. Selanjutnya penulis melanjutkan pendidikan di
Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma pada tahun 2010-2014.
Selama menempuh perkuliahan di Universitas Sanata Dharma, penulis
pernah menjadi asisten Praktikum Farmasi Fisika pada tahun 2014. Penulis juga
pernah menjadi seksi Usaha Dana Seminar Nasional yang diadakan oleh JMKI pada
tahun 2010, juga anggota kepanitian inisiasi mahasiswa Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2012.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI