DEL LABORATORI A LA CLÍNICA I DE LA
CLÍNICA AL LABORATORI
Dr Xavier Muñoz
Hospital Vall d’Hebron
XXVIII DIADA PNEUMOLÒGICA
Girona 2010
TRASLACIONALITAT
1) Aplicació dels coneixements biomèdics basics a la
investigació clínica de la forma més ràpida possible.
2) Aplicabilitat no només a la investigació clínica sinó
també a la practica assistencial, per tal de millorar la
qualitat de vida dels pacients al transferir nous
coneixements en relació a la prevenció, diagnòstic i
tractament de les malalties.
Línia de recerca en Patologia Ocupacional
Respiratòria i Mediambiental
Pneumonitis per hipersensibilitat (NH)
1976: Primeres proves de provocació
bronquial específiques en NH
Morell F et al. Medicine 2008; 87(2): 110-30.
Línia de recerca en Patologia ocupacional respiratòria
i mediambiental
Asma ocupacional (AO)
1995 cabina de provocació bronquial
1998 nou Laboratori Pneumologia
ASMA OCUPACIONAL: Sals de persulfat
Total IgE
(kU/L)
Prick test to inhalant allergens
Prick test to persulphates*
Methacholine PC20 (mg/ml)
PEF study
Response to specific bronchial challenge
test
1 182 + -/- 0.36 ND + (late) 2 203 - -/- 0.06 + + (biphasic) 3 1295 - -/- 0.18 + + (late) 4 25 - +/+ > 8 ND + (late) 5 509 - +/+ 0.06 + + (late) 6 32 - +/+ 1.50 + ND** 7 342 + +/+ 1.89 + + (immediate) 8 541 + +/+ 6.50 - + (late)
* ammonium/potassium ** severe bronchospasm after prick test with persulphates ND- not done
Muñoz X et al. Chest 2003;123:2124-9
ASMA OCUPACIONAL
Agent Number of cases % of cases
Isocyanates 27 15.5
Persulphates 21 12.1
Cleaning products 15 8.6
Wood dust 14 8
Flour 13 7.5
Latex 12 6.9
Glues and resins 8 4.6
Animal products 7 4.0
Colophony 7 4.0
Grain 4 2.3
Aldehydes 4 2.3
Other chemical products 29 16.7
Other agents 9 5.2
Not identified 4 2.3
Orriols R et al. Occup Environ Med 2006;63(4):255-60
Model animal d’asma ocupacional
Sensibilització prèvia
Símptomes d’asma
ASMA OCUPACIONAL: Sales de persulfat
SALS DE PERSULFAT:
SENSIBILITZACIÓ DÈRMICA
Mètode validat:
Local Lymph Node Assay (Kimber et al., 1986)
Día 1 63
Autòpsia: Obtenció dels nòduls limfàtics auriculars
Sensibilització dèrmica25 µl/orella
2
Mesura de la proliferació de limfòcits
SALS DE PERSULFAT :
SENSIBILITZACIO DÈRMICA
Cruz MJ et al. Contact
Dermatitis 2009;60: 85-90.
Lymph node weight
0 1 2 3 4 5
0.000
0.002
0.004
0.006
0.008
0.010
0.012
0.014
**
**
% Potassium Persulfate
gr/
LN
DPM
0 1 2 3 4 5
0
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
**
**
% Potassium PersulfateD
PM
Stimulation Index
0 1 2 3 4 5
0
1
2
3
4
5
6
7
**
**
% Potassium Persulfate
SI
EC3 = 2.39
Lymph node weight
0 1 2 3 4 5
0.000
0.002
0.004
0.006
0.008
0.010
0.012
0.014
**
**
% Ammonium Persulfate
gr/L
N
DPM
0 1 2 3 4 5
0
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000 **
*
% Ammonium Persulfate
DP
M
Stimulation Index
0 1 2 3 4 5
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9 **
*
% Ammonium Persulfate
SI
EC3 = 1.90
Lymph node weight
0 1 2 3 4 5
0.000
0.002
0.004
0.006
0.008
0.010
0.012
0.014
**
**
% Sodium Persulfate
gr/
LN
DPM
0 1 2 3 4 5
0
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
**
**
% Sodium Persulfate
DP
M
Stimulation Index
0 1 2 3 4 5
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
**
**
% Sodium Persulfate
SI
EC3 = 0.84
% Persulfato amónico
% Persulfato sódico
% Persulfato potásico
Lymph node weight
0 1 2 3 4 5
0.000
0.002
0.004
0.006
0.008
0.010
0.012
0.014
**
**
% Potassium Persulfate
gr/
LN
DPM
0 1 2 3 4 5
0
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
**
**
% Potassium PersulfateD
PM
Stimulation Index
0 1 2 3 4 5
0
1
2
3
4
5
6
7
**
**
% Potassium Persulfate
SI
EC3 = 2.39
Lymph node weight
0 1 2 3 4 5
0.000
0.002
0.004
0.006
0.008
0.010
0.012
0.014
**
**
% Ammonium Persulfate
gr/L
N
DPM
0 1 2 3 4 5
0
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000 **
*
% Ammonium Persulfate
DP
M
Stimulation Index
0 1 2 3 4 5
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9 **
*
% Ammonium Persulfate
SI
EC3 = 1.90
Lymph node weight
0 1 2 3 4 5
0.000
0.002
0.004
0.006
0.008
0.010
0.012
0.014
**
**
% Sodium Persulfate
gr/
LN
DPM
0 1 2 3 4 5
0
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
**
**
% Sodium Persulfate
DP
M
Stimulation Index
0 1 2 3 4 5
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
**
**
% Sodium Persulfate
SI
EC3 = 0.84
% Persulfato amónico
% Persulfato sódico
% Persulfato potásico
Cruz MJ et al. Contact Dermatitis 2009;60: 85-90.
Extrem: EC3 < 0.1%,
Fort: EC3 0.1% - 1%
Moderat: EC3 1% - 10%
Dèbil: EC3 10% - 100%
SALS DE PERSULFAT:
SENSIBILITZACIÓ DÈRMICA
Sensibilització prèvia
Símptomes d’asma
ASMA OCUPACIONAL: Sals de persulfat
Model animal d’asma ocupacional
SALS DE PERSULFAT:
SENSIBILITZACIÓ RESPIRATÒRIA
Día 1 10 117
Instilación nasal 20ul/cabidadInstilación nasal 20ul/cabidad
Sensibilizacióndérmica20 µl/oreja
Sensibilizacióndérmica20 µl/oreja
Provocación con metacolinaProvocación con metacolina
Respuesta inmediataMedida durante 40 min del Penh en la cámarapletismografica
Respuesta inmediataMedida durante 40 min del Penh en la cámarapletismografica
Autopsia- Suero- BAL- Nódulos linfáticos
auriculares y cervicales
Autopsia- Suero- BAL- Nódulos linfáticos
auriculares y cervicales
SALS DE PERSULFAT:
SENSIBILITZACIÓ RESPIRATÒRIA
SALS DE PERSULFAT:
SENSIBILITZACIÓ RESPIRATÒRIA
Early ventilatory response
-5 0 5 10 15 20 25 30 35 400
1
2
30/0
0/1
1/1
Minutes
Pe
nh
SALS DE PERSULFAT:
SENSIBILITZACIÓ RESPIRATÒRIA
AHR
Baseline0
1
2
3
4
0 1.25 2.5 5 10
0/0
1/1
0/1
Methacholine (mg/ml)R
(c
mH
2O
.s/m
l)
Cruz MJ et al. Thorax 2010; 65: 252-7.
BAL total cell count
0/0/0 0/0/1 1/1/10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Cell
s (
x10
4)
BAL Neutrophils
0/0/0 0/0/1 1/1/10
10
20
30
**
% c
ell
s
RBA: Cèl·lules totals RBA: Neutròfils
% C
èl·lu
les
Cèl
·lule
s (x 1
04)
BAL total cell count
0/0/0 0/0/1 1/1/10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Cell
s (
x10
4)
BAL Neutrophils
0/0/0 0/0/1 1/1/10
10
20
30
**
% c
ell
s
RBA: Cèl·lules totals RBA: Neutròfils
% C
èl·lu
les
Cèl
·lule
s (x 1
04)
BA
L:
Célu
las t
ota
les
SALS DE PERSULFAT:
SENSIBILITZACIÓ RESPIRATÒRIAB
AL
: %
Neu
tró
filo
s
BAL total cell count
0/0/0 0/0/1 1/1/10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Cell
s (
x10
4)
BAL Neutrophils
0/0/0 0/0/1 1/1/10
10
20
30
**
% c
ell
s
RBA: Cèl·lules totals RBA: Neutròfils
% C
èl·lu
les
Cèl
·lule
s (x 1
04)
BAL total cell count
0/0/0 0/0/1 1/1/10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Cell
s (
x10
4)
BAL Neutrophils
0/0/0 0/0/1 1/1/10
10
20
30
**
% c
ell
s
RBA: Cèl·lules totals RBA: Neutròfils
% C
èl·lu
les
Cèl
·lule
s (x 1
04)
Auricular lymph nodes
CD3 CD3CD4 CD3CD4CD25 CD3CD8 CD190.0
0.5
1.0
1.5
2.0 *
*
*
*
0/0
0/1
1/1**
Ce
lls
(x
106
)
+
+
++
Cervical lymph nodes
CD3 CD3CD4 CD3CD4CD25 CD3CD8 CD190.0
0.5
1.0
1.5
2.0
**
*
*
*
0/0
0/1
1/1**
Ce
lls
(x
106
)
++
+
++
++
++
Cruz MJ et al. Thorax 2010; 65: 252-7.
SALS DE PERSULFAT:
SENSIBILITZACIÓ RESPIRATÒRIA
Cruz MJ et al. Thorax 2010; 65: 252-7.
(0,0) (0,1) (1,1)
SALS DE PERSULFAT:
SENSIBILITZACIÓ RESPIRATÒRIA
Cruz MJ et al. Thorax 2010; 65: 252-7.
p < 0.001
SALS DE PERSULFAT:
SENSIBILITZACIÓN RESPIRATÒRIA
Cruz MJ et al. Thorax 2010; 65: 252-7.
Conclusions:
La sensibilització dèrmica a sals de persulfat pot conduir a una
resposta asmàtica.
Resposta asmàtica: hiperresposta bronquial, inflamació neutrofílica,
nivells incrementats d’IgE i una resposta específica de limfòcits T i B.
Mecanisme d’acció probablement IgE dependent.
SALS DE PERSULFAT:
SENSIBILITZACIÓ RESPIRATÒRIA
Muñoz X et al. Arch Bronconeumol 2008;44 (3):140-5.
¿Per què persisteix la hiperresposta bronquial desprès
d’evitar l’exposició?
SALS DE PERSULFAT:
SENSIBILITZACIÓN RESPIRATÒRIA
Día 1 10 117
Instilación nasal 20ul/cabidadInstilación nasal 20ul/cabidad
Sensibilizacióndérmica20 µl/oreja
Sensibilizacióndérmica20 µl/oreja
Provocación con metacolinaProvocación con metacolina
Respuesta inmediataMedida durante 40 min del Penh en la cámarapletismografica
Respuesta inmediataMedida durante 40 min del Penh en la cámarapletismografica
Autopsia- Suero- BAL- Nódulos linfáticos
auriculares y cervicales
Autopsia- Suero- BAL- Nódulos linfáticos
auriculares y cervicales
Dia: 21, 28, 35,
45, 60, 90
Tipus cel·lulars
IgE, IgG1, IgG2a
Citoquines TH1/Th2
Metaloproteinases
SALS DE PERSULFAT:
CÈL·LULES MESENQUIMALS
IL33: En resposta a un agent inflamatori provoca canvis patològics en el
pulmó mitjançant la seva unió al receptor ST2L. sST2 te un efecte
antiinflamatori.Schmitz J et al. Immunity 2005
SALS DE PERSULFAT:
CÈL·LULES MESENQUIMALS
Día 1 14 207
Instilación nasal 20ul/cabidadInstilación nasal 20ul/cabidad
Sensibilizacióndérmica20 µl/oreja
Sensibilizacióndérmica20 µl/oreja
Provocación con metacolinaProvocación con metacolina
RespuestainmediataMedidadurante40 min del Penh en la cámarapletismografica
RespuestainmediataMedidadurante40 min del Penh en la cámarapletismografica
Autopsia- Suero- BAL- Nódulos linfáticos
auricularesy cervicales
Autopsia- Suero- BAL- Nódulos linfáticos
auricularesy cervicales
Inyección células
madre
SALS DE PERSULFAT:
CÈL·LULES MESENQUIMALS
(1,1
) MSC+S
T2
(1,1
) PBS
(0,0
) MSC+S
T2
(0,0
) PBS
0
5
10
15
%
% neutrofils
MOLTES GRACIES