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PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN

CFGS Anatomía Patológica y Citología 47

UNIDAD DIDÁCTICA 11

DESCALCIFICACIÓN. 1.- INTRODUCCIÓN. 2.- DESCALCIFICACIÓN. 3.- FIJACIÓN PREVIA DE HUESO O CARTILAGO. 4.- RECOMENDACIONES GENERALES. 5.- SOLUCIONES DESCALCIFICANTES.

5.1.- Ácido Nítrico Acuoso. 5.2.- Ácido Nítrico Alcohólico. 5.3.- Ácido Tricloracético—Formol. 5.4.- Ácido Fórmico. 5.5.- Solución de Schmorl. 5.6.- Solución de Krajian.

6. DESCALCIFICACIÓN POR ELECTROFORESIS.



1.- INTRODUCCIÓN. Los tejidos que contienen sustancias más o menos duras, no se pueden cortar, o si se cortan se deterioran mucho las cuchillas. Las sales minerales han de ser por lo tanto eliminadas y la osteína reblandecida. 2.- DESCALCIFICACIÓN. Los tejidos óseos o cartilaginosos los descalcificaremos tratándolos con un ácido fuerte, naturalmente según sea su tamaño. Si se trata de calcificaciones de reducido tamaño, basta con añadir un ácido (Acético, Tricloracético) al liquido fijador, quedando así fijadas y descalcificadas. Si se trata de calcificaciones mayores, los líquidos descalcificadores que normalmente utilizaremos serán: ÁCIDO NÍTRICO ACUOSO AL 5%, ÁCIDO NÍTRICO ALCOHÓLICO AL 7.5%, ÁCIDO TRICLORACÉTICO AL 5%, ÁCIDO FÓRMICO CONCENTRADO Y ÁCIDO SULFÚRICO AL 5%. Los dientes se descalcifican en una mezcla de acido FÓRMICO CONCENTRADO Y ALCOHOL de 70º a partes iguales. Luego se lavan con alcohol de 70º. Las piezas deberán haber sido fijadas antes de ser descalcificadas, ya que de lo contrario se macerarían. Los mejores resultados se obtienen si después de la fijación y lavado, las piezas se van pasando por una serie de alcoholes en concentración creciente y decreciente. En la práctica se han de descalcificar trozos pequeños en un volumen grande de líquido que se renueva diariamente, ya que la concentración de los ácidos descalcificadores disminuye al formarse sales de calcio. La velocidad de penetración de los líquidos descalcificadores es de 1 cm cada tres o seis días. 3.- FIJACIÓN DE HUESO O CARTILAGO. Previamente a la descalcificación, habrá que pasar la cantidad de tejido que vamos a utilizar en el estudio, con el fin de poder saber, tanto la cantidad de producto fijador como la cantidad de solución descalcificadora. Normalmente utilizaremos como liquido fijador el líquido de BOUIN, que según los diferentes autores es el que mejores resultados dará. La cantidad de liquido fijador será como siempre 30/40 veces su volumen.



Después de la descalcificación una postfijación de 24 horas da a los colores un tinte más brillante. PICROFORMOL O LÍQUIDO DE BOUIN.

· Solución acuosa saturada de Ácido Pícrico 30 volúmenes · Formol comercial al 35-40% 10 volúmenes · Ácido Acético cristalizable 2 volúmenes

La duración de la fijación para que sea óptima varía entre 3 y 8 días. Esta mezcla se conserva indefinidamente. 4.- RECOMENDACIONES GENERALES. Se recomienda que después de la descalcificación se proceda a un lavado abundante y cuidadoso con alcohol de 70º y nunca con agua pues hincharía las estructuras y las destruiría. La cantidad de solución descalcificante es de aproximadamente 25 gramos por gramo de hueso. Se debe cambiar frecuentemente la solución descalcificante a ser posible todos los días. Si al ir a cortar un bloque de parafina aparece inesperadamente una zona calcificada, se puede colocar el bloque durante un rato en Ácido Fórmico concentrado. De esta forma queda descalcificada la capa superior, lo que nos permitirá realizar algunos cortes. 5.- SOLUCIONES DESCALCIFICANTES.

5.1.- Ácido Nítrico acuoso al 5%. Agua destilada + 5% de Ácido Nítrico.

5.2.- Ácido Nítrico alcohólico al 7.5%.

Alcohol de 100º + 7.5% de Ácido Nítrico. Nota.- verter el Ácido Nítrico sobre el alcohol lentamente nunca a la inversa.



5.3.- Ácido Tricloracético/Formol.

· Solución acuosa al 100% de Ácido Tricloracético 10 ml · Agua 80 ml · Formol comercial 35-40% 10 ml

Nota.- El lavado con alcohol de 70º debe ser prolongado y repetido.

5.4.- Ácido Fórmico al 5%.

Agua destilada + 5% de Ácido Fórmico. También se puede utilizar asociado al Formol o al Citrato Sódico, según las siguientes fórmulas.

5.5.- Solución de Schmorl.

· Ácido Fórmico (90%) 500 ml · Formaldehido (35-40%) 50 ml · Agua destilada 450 ml

5.6.- Solución de Krajlan.

· Ácido Fórmico (90%) 25 ml · Citrato de Na cristalizado 10 g · Agua destilada 75 ml

6. DESCALCIFICACIÓN POR ELECTROFORESIS. La descalcificación podríamos acelerarla utilizando la descalcificación electrolítica, que consiste en hacer pasar una corriente continúa por la solución (mezcla de Ácido Fórmico y Nítrico) en la que se introducen dos electrodos inatacables por los ácidos. La descalcificación electrolítica presenta la ventaja de la ganancia de tiempo pero la calidad de sus resultados se presenta a discusión.

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