15 los cortes y su preparación

PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIÓN

CFGS Anatomía Patológica y Citología 79

UNIDAD DIDÁCTICA 15

MONTAJE DE LOS CORTES Y PREPARACIÓN PARA SU COLORACIÓN.

1.- INTRODUCCIÓN. 2.- LÍQUIDOS DE EXTENSIÓN Y ADHERENCIA. 3.- EXTENSIÓN. 4.- ESCURRIDO. 5.- SECADO. 6.- MARCADO DE PORTAOBJETOS. 7.- PREPARACIÓN DE MUESTRAS ANTES DE SU COLORACIÓN. 8.- INCIDENTES MÁS COMUNES EN EL MONTAJE. 9.- GLICERO—ALBUMINA. (Preparación de la misma.).



1.- INTRODUCCIÓN. El montaje de los cortes sobre portaobjetos requiere tres operaciones distintas: extendido, adherencia y secado de la preparación. Los cortes aislados y de la tira son irregulares y finalmente plisados. Para ser utilizados se debe, sin modificar los caracteres de sus elementos, aplanarlos, extenderlos y fijarlos sobre una lamina de cristal (portaobjetos). Los portaobjetos de cristal deben estar muy limpios y sobre todo completamente desengrasados, siendo de esta manera perfectamente transparentes y uniformemente mojables. Si sobraran portaobjetos para una posterior utilización, se deberán guardar en tarros llenos de agua destilada. 2.- LÍQUIDOS DE EXTENSIÓN Y ADHERENTES. Estos líquidos deben ser a la vez eficaces y totalmente invisibles, o sea que deben adherir solidamente el corte sobre el portaobjetos, sin alterar en absoluto la transparencia ni la colorabilidad. En la actualidad el más utilizado en la Glicerina-Albúmina o (Glicero-Albúmina de Hayer), compuesto de albúmina de huevo filtrada y glicerina a partes iguales, más un poco de timol para su conservación. 3.- EXTENSIÓN Y ADHERENCIA. Los portaobjetos una vez secos, se les coloca una gota de glicero-albúmina que es extendida sobre toda la superficie del mismo. Los cortes, bien aislados o en tiras, se colocan dentro de una bañera de estiramiento, previo paso por alcohol de 50º, que contiene agua caliente (45ºC). La tira o los cortes aislados en contacto con el agua caliente se extienden desapareciendo completamente el plisamiento. Una vez ocurrido esto, se desliza por debajo de los cortes un portaobjetos limpio e impregnado de glicero-albúmina, elevándolo ligeramente quedará extendida la muestra sobre él, después de lo cual se eliminará el exceso de agua y glicero-albúmina. En algunas preparaciones que contienen núcleos fibrosos o cartilaginosos, se extienden con frecuencia incompletamente y dejan algunos pliegues que no se pueden eliminar.



4.- ESCURRIDO. Inmediatamente después de la extensión, los portaobjetos son escurridos inclinándolos progresivamente de un lado y del otro y dejándolo seguidamente, durante algún tiempo en posición inclinada, en algunos casos incluso se recurrirá a secarlos entre hojas de papel filtro. 5.- SECADO. Una vez realizado el escurrido, procederemos a secar las preparaciones, depositando los portaobjetos sobre una superficie calentada, que permita la evaporación de los restos de agua y una perfecta adherencia de los cortes sobre el portaobjetos. 6.- MARCADO DE LOS PORTAOBJETOS. Con el fin de evitar todo error, los cortes deben ser grabados con lápiz diamante o de esmeril al finalizar el secado. Este marcado se efectúa sobre la cara que tiene el corte a fin de identificar fácilmente esta cara por simple contacto durante las operaciones ulteriores. 7.- PREPARACIÓN DE MUESTRAS ANTES DE SU COLORACIÓN. Los cortes así tratados y adheridos sobre el portaobjetos permanecen envueltos por una fina película de parafina que es preciso hacer desaparecer antes de toda decoloración. La eliminación de esta fina película de parafina, la realizaremos de la siguiente manera:

a) Introduciendo primero los portaobjetos en una estufa a una temperatura superior al punto de fusión de la parafina utilizada (65-75ºC), y colocando los portaobjetos en posición inclinada para que desprenda la parafina sobrante. El tiempo de permanencia en la estufa será de entre 15 a 30 minutos.

b) Sucesivos baños de Touleno o Xilol (4 baños de 7-10 minutos cada uno), seguidos de

sucesivos baños de alcohol (3 ó 4 baños de una duración de un paso cada uno), teniendo que ser este alcohol de 100 y 80º, llegando finalmente a un baño de agua de una duración de un paso para hidratar los cortes.



8.- INCIDENTES Y CONTRATIEMPOS MÁS COMUNES EN EL MONTAJE. LOS CORTES NO SE PEGAN. Ocurre como consecuencia de:

Empleo de una cuchilla poco afilada. El agua de extensión es demasiado caliente y funde la parafina antes de que hayan

desaparecido los pliegues. El agua de la extensión es demasiado fría y no produce el reblandecimiento de la

película de parafina. La pieza es dura y fibrosa.

Solución:

Rehacer los cortes y vigilar la temperatura del agua de extensión. PRESENCIA DE BURBUJAS DE AIRE DEBAJO DE LOS CORTES. Ocurre como consecuencia de:

Los cortes están insuficientemente pegados. Aire procedentes del agua durante su calentamiento y retenido debajo de los

cortes durante su secado. Solución:

Aplanar bien los cortes antes de eliminar el líquido de la extensión. LOS CORTES NO SE ADHIEREN O SE DESPEGAN RÁPIDAMENTE. Ocurre como consecuencia de:

Los portaobjetos están mal desengrasados. La parafina ha fundido durante la extensión. El corte ha sido mal aplanado.

Solución:

Usar portaobjetos adecuadamente limpios y totalmente desengrasados. Si la parafina ha fundido durante la extensión, eliminar y rehacer nuevamente el

corte. Secar lo más rápidamente posible los portaobjetos después del escurrido. Colodionar los portaobjetos.



9.- GLICERO-ALBUNINA. Se bate una clara de huevo hasta que este a punto de nieve, se deja reposar hasta que el fondo se vuelva líquido y se mide. Se coge 1/3 de glicerina y se mezcla con la albúmina resultante de la clara de huevo batida, se le añaden unos cristales de Timol y se guarda en frigorífico para su posterior uso. CANTIDADES: La cantidad de liquido reposado (albúmina) después de batir las claras de huevo, se miden y añadimos la glicerina (1/3 del total del liquido reposado) y también unos cristales de Timol, (muy pocos), para su conservación es imprescindible guardarla en frigorífico.

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