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Autora: María Isabel Ramírez Orellana
UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA
La Universidad Católica de Loja
Escuela de Bioquímica y Farmacia
Directora de Tesis: Dra. Natalia Bailón M.
Asociación Argentina del Cáncer, 2002
Provincia de Loja
Garrido, 2003
Alcohol3%
Fumar30%
Rayos Solares3%
Infección10%
Radiación 1%
Alimentación35%
Contaminación2%
Trabajo 4%
Otras Causas12%
Villalva, 2004
Procesos Quirúrgicos
Radiación
Quimioterapia
Sistémica
ANTINEOPLASICOS
Compuestos de origen natural particularmente drogas y extractos han resultado ser de gran utilidad para desarrollar numerosos fármacos.
Los más estudiados son:
Alcaloides de la vinca Epipodofilotoxinas Taxanos Camptotecinas. (Laza et al. 2003; Balunas, Kinghorn 2005)
Actualmente = Triterpenos (ácido ursólico y oleanólico)
Familia: AsteraceaeSubfamilia: AsteroideaeGenero: PartheniumEspecies: Parthenium argentatum
Desecho resinoso
Argentatina A, B y C
Parra, 2006
•Citotóxico (K562, MCF-7, HCT-15, PC3,U251)•Citostática•Inhibidor del receptor del estradiol •No genotóxico (CBMn)
Parra, 2006
Es una técnica sensible y rápida para el análisis de daño directo al DNA, en células individuales
Daño oxidativo
Entrecruzamientos
Rotura de simple y doblecadena
GENERAL:
Evaluar el efecto genotóxico in vitro de la Argentatina B en cultivo de linfocitos humanos de sangre periférica
ESPECIFICOS:
Establecer las dosis subtóxicas a probar en el ensayo genotóxico. Evaluar el efecto genotóxico de la Argentatina B en función al tamaño
de cola de linfocitos humanos tratados in vitro mediante el Ensayo Cometa
Siembra
Obtención – muestra
Incubamos 48 h
Tratamiento Ag B (5, 15, 25uM) EMS 0.1uM, DMSO 0.5%
Preparación de Placas
Electroforesis
Neutralización
Tinción (BrEt)
Análisis
Incubamos 24 h
Materiales y Métodos
Viabilidad
Viabilidad EMS
Grafica No. 3.1 Porcentaje de viabilidad de linfocitos humanos tratados con Etilmetanosulfonato (0.05, 0.075 y 0.1 uM) Cada barra representa la media de tres experimentos por duplicado de tres donadores diferentes. ( ● p < 0.0001)
0102030405060708090
100
DMSO 5 15 25 EMSConcentraciones uM
% d
e V
iab
ilid
ad
♦ ♦
♦ ●
Grafica No. 3.2 Porcentaje de viabilidad de linfocitos humanos tratados con Argentatina B (5, 15 y 25 uM) y EMS a 0.1 uM Cada barra representa la media de tres experimentos por duplicado de tres donadores diferentes. (♦ p < 0.0001; ● p < 0.002)
Grafico No. 3.3 . Efecto de la actividad genotóxica del Etilmetanosulfonato, usando como referencia el largo de cola en linfocitos humanos ( ● p < 0.0001)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
DMSO 5 15 25 EMS
Concentraciones uM
Larg
o d
e C
ola
♦
♦
♦
♦
Largo de Cola con Argentatina B
Grafica No. 3.5 Efecto genotóxico de diferentes dosis de Argentatina B en Linfocitos humanos. Cada barra representa la media de tres experimentos por duplicado de tres donadores diferentes. ( ● p < 0.0001)
Las concentraciones usadas de Argentatina B (5, 15 y 25uM) no afecta la viabilidad de los linfocitos humanos, ya que presento un supervivencia mayor al 70%.
Se observo un efecto genotóxico dosis
dependiente de la Argentatina B, ya que a medida que se aumentan las concentraciones de la misma se aumenta la migración del ADN (tamaño de Cola) en los linfocitos.
GRACIAS
ácido ursólico y el ácido oleanólico
Uncaria tomentosa (Uña de Gato)