Upload
medikcz
View
2.042
Download
2
Embed Size (px)
Citation preview
Praktikum 1Organizační záležitosti
Úvod do klinické genetiky a cytogenetiky
Mikroskopická technika
Vyplnit prezenční karty
• Uveďte čitelně své příjmení a jméno, číslo kruhu, domácí a pražskou adresu do předtištěných řádků.
• Na volné místo doplňte mailovou adresu, kterou si pravidelně vybíráte, popř. číslo mobilu.
• Karta slouží k registraci vaší prezence, testových výsledků, popř. dalších poznámek k vaší účasti na praktikách.
Organizační záležitosti
Ústav biologie a lékařské genetiky
• Věra Tůmová
• Dr. Eduard Kočárek
• telefon FN Motol: 224 435 980 (E. Kočárek)
• telefon TPÚ Plzeňská: 257 296 151 (pí.Tůmová)
• Sekretariát ÚBLG – FN Motol, dětská část,
4.patro – G
PROSÍME, MLUVTE S NÁMI!
Praktikum z lékařské biologie
• Koná se vždy v TPÚ Plzeňská v posluchárně ÚBLG
• Jednorázově lze tolerovat pozdní příchod do 15 minut po začátku praktika, jinak nelze uznat prezenci.
• V letním semestru se přestávky během výuky nekonají, každý student má možnost se na krátkou dobu (cca 5 minut) vzdálit.
Kritétria k udělení zápočtu z lékařské biologie v letním semestru 1. ročníku
• Maximálně dvě neomluvené absence na praktiku/semináři
– Další absenci lze omluvit pouze při závažných důvodech a po předložení
příslušného potvrzení.
– Nekázeň nebo zásadní neznalosti mohou vést k vyloučení z praktik
a neuznání prezence.
– Jakákoliv absence má za následek ztrátu bodů za zameškaný test.
– Přestupy studentů do jiných kruhů jsou nepřípustné.
• Minimálně 80% maximálního možného bodového zisku za testy
– Každý test bude bez ohledu na počet otázek hodnocen stupnicí 0 - 10
bodů. Bodové zisky z jednotlivých testů se v závěru semestru sčítají.
– Až 5 bodů navíc lze udělit za referát.
• Osobní přítomnost na zápočtovém praktiku
Studenti nesplňující některou z uvedených podmínek pro udělení
zápočtu
• budou podrobeni ústnímu přezkoušení v závěrečném praktiku, případně v jiném termínu (v odůvodněných případech a po předchozí dohodě se zkoušejícím)
• Při neúspěchu lze přezkoušení na zápočet ještě dvakrát opakovat.
• Studenti s neuděleným zápočtem budou nuceni opakovat 1.ročník.
Doporučená literatura ke studiu• Kočárek E., Pánek M., Novotná D.: Klinická
cytogenetika I. skriptum UK 2.LF, Karolinum, Praha, 2006
• Kočárek E.: Praktická cvičení z klinické cytogenetiky. skriptum UK 2.LF, Karolinum, Praha, 2006
• Goetz P. a kol.: Kapitoly z lékařské biologie I. skriptum UK 2.LF, H&H, Praha, 1993
• Goetz P. a kol.: Vybrané kapitoly z lékařské biologie II. skriptum UK 2.LF, Karolinum, Praha, 2002
Od příštího týdne najdete prezentace k cytogenetickým
praktikám na www:
• http://camelot2.lf2.cuni.cz/turnovec/ublg/vyuka/
Doplňující literatura
• Kočárek E.: Genetika. Scientia, Praha, 2004
• Nussbaum R. L., McInnes R. R., Willard H. F.: Thompson & Thompson – Klinická genetika. Triton, Praha, 2004
Skripta pro ostatní LF• Kapras J. a kol.: Kapitoly z lékařské biologie a
genetiky I. skriptum UK 1.LF, Karolinum, Praha, 1996
• Soukupová M., Soukup F.: Kapitoly z lékařské biologie a genetiky II. skriptum UK 1.LF, Karolinum, Praha, 1998
• Kapras J., Kohoutová M.: Kapitoly z lékařské biologie a genetiky III. skriptum UK 1.LF, Karolinum, Praha, 1999
• Reischig J.: Obecná genetika – praktická cvičení. skriptum UK LF Plzeň, Karolinum, Praha, 1998
Prosíme vyplnit lístky na
stolech – slouží jako kontrola
a podklad pro prezenci.
Laboratorní vyšetření
v klinické genetice,
základy cytogenetiky
Jak vzniká geneticky podmíněné onemocnění?
DNA RNA protein
znak, resp. fenotypový
projevmutace
Změna sekvence DNA, změna
struktury a počtu chromozomů
Změna genové exprese, vznik RNA o chybné
sekvenci
Změna enzymové aktivity, poruchy stavby buněk a
tkání
Změna stavby a funkce orgánů,
poruchy metabolismu,
poruchy vývoje
Jak geneticky podmíněná onemocnění vyšetřujeme?
rodinagenealogické
vyšetření
chromozomy
cytogenetické vyšetření
DNAmolekulárně-
biologické vyšetření
pacient
Základem cytogenetického vyšetření je analýza chromozomů.
Chromozom
krátké (p-) raménko
dlouhé (q-) raménko
centromera
chromatida
telomera
telomera
repetitivní (satelitní) sekvence
DNA
repetitivní sekvence
(TTAGGG)n
repetitivní sekvence
(TTAGGG)n
DNA
Telomery lidských chromozomů
Kolik má chromozom chromatid?
syntéza (replikace)
DNA
DNA
chromozom
1 chromatida = 1 molekula DNA
Typy chromozomů
metacentrický
(mediocentrický)
submetacentrický
(submediocentrický)
akrocentrický telocentrický
satelity(nesměšovat se satelitní DNA)
Vizualizace a pozorování chromozomů,
mikroskopická technika
Úkol 1:
Pojmenujte
jednotlivé
části
mikroskopu
1
2
4
5
6
7
3
okulár
objektiv
stolek
kondenzor
stativ
šroub hrubého zaostření
šroub jemného zaostření
Stereomikroskop
Stereomikroskopy vybavené zdroji studeného světla
„husí krk“
Studené světlo
• Tradiční světelné zdroje jako žárovky nebo
plynem plněné výbojky vyzařují světlo i
teplo stejným směrem. Osvětlovaný objekt
se proto během osvětlování ohřívá.
• Diody LED (Light-Emitting Diode) vyzařují
světelnou a tepelnou energii (infračervené
záření) v rozdílných směrech.
Měření velikosti mikroskopických objektů v optickém mikroskopu
okulárové měřítko (okulárový mikrometr)
Kalibrace okulárového měřítka
Měření velikosti mikroskopických objektů
Barvení chromozomů pro účely světelné mikroskopie
• Giemsa-Romanowski (Wrightovo barvivo)
• (Hematoxylin – v cytogenetice zřídka)
• Acetokarmín
• Acetoorcein
• Fuchsin – Feulgenova reakce
Barvení Giemsou
leukocyty chromozomy
Úkol 2: Pozorování chromozomů
• Preparáty byly získány z dělících se lymfocytů lidské periferní krve.
• Krev jsme po odběru kultivovali v médiu, kde byly buňky přinuceny k mitotickému dělení.
• Vzniklou suspenzi jsme fixovali, nakapali na skla a po zaschnutí obarvili roztokem Giemsa-Romanowski.
• Blíže viz skripta Praktická cvičení– str. 9 – 2.4.Úkol 1
Prohlídka skel pod mikroskopem
• Sklo položíme (buňkami nahoru!) na stolek mikroskopu a prohlížíme objektivem o malém zvětšení (4x–10x).
• Po zaostření na plochu obsahující větší počet buněk (výrazně modrofialově zbarvená jádra nebo skupinky chromozomů) použijeme objektiv s vyšším zvětšením (nejlépe 40x – 45x) – pozor při zaostřování (nebezpečí poškození preparátu a znehodnocení objektivu!)
• Vyhledáme chromozomy a zkusíme je spočítat. Obraz v mikroskopu srovnáme s přiloženou fotografií.
Úkol 3: Na obrázku jsou znázorněny chromozomy lidské somatické buňky obarvené Giemsovým
barvivem.
A) Jaké chromozomy jsou na
obrázku : jednochromatidové
nebo dvouchromatidové?
B) Určete jednotlivé typy
chromozomů.
C) Zjistěte, kolik chromozomů
obsahuje lidská somatická
buňka.
velké metacentry
malé metacentry
velké akrocentry
malé akrocentry
zbytek - submetacentry
14
8
10
14
14 + 8 + 14 + 10 = 46
Počet chromozomů
Fluorescenční mikroskop
Princip fluorescence:
Schéma fluorescenčního mikroskopu
Fluorescenční barviva v genetice
• DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole)
• PI (propidium iodide)
• Chinakrin
• Ethidium bromid
Příprava na příští týden
• Skripta Klinická cytogenetika I.
– Kapitola 5 (str. 34 – 36)
• Skripta Praktická cvičení
– Kapitola 3 (str. 13 – 15)
• Referát – konfokální mikroskopie
Na shledanou!