IL LABORATORIO DI ANALISI NELLA DIAGNOSI E NEL FOLLOW-UP DELLE

AMILOIDOSI

COSSEDDU D

LABORATORIO ANALISI

AO ORDINE MAURIZIANO

DIAGNOSI

La diagnosi di amiloidosi richiede la dimostrazione istologica dei depositi

di amiloide

Una piccola VEQ/AmAL

SiSiNoSiSiLab5

SiSiNoSiSiLab4

SiNoNoNoSiLab3

SiSiNoNoNoLab2

SiSiNoSiSiLab1

Camp5Camp4Camp3Camp2Camp1

DIAGNOSI-RUOLO DEL LAB

Dimostrare la presenza del clone plasmacellulare ..

� Biopsia midollare

� CM sangue o nelle urine

Elettroforesi

PERFORMANCE DIAGNOSTICA

� GEL di AGAROSIO ALTA RISOLUZIONE

� CZE (capillary zone electrophoresis)

Larsson et alUpsala J Med Sci 113 (1): 65–72, 2008

• During the last decade, capillary electrophoresis (CE) has emerged as aninteresting alternative to traditional analysis of serum, plasma and urine proteinsby agarose gel electrophoresis.

• There was a very good agreement between the two methods for the detection of M-components > 1 g/L

Elettroforesi

Larsson et alUpsala J Med Sci 113 (1): 65–72, 2008

Both the capillary electrophoresis system and the agarose system provide acceptable separation for mostroutine work.

However the sensitivity of both systems for detection of M-components is less than the sensitivity that can beobtained with immune fixation methods that havebeenoptimized to detect very small M-components

Elettroforesi-IFE

� Ipogammaglobulinemia� Free light chains� CM complete in zona alfa2 beta

(sovrapposizione)

Elettroforesi-IFE

PERFORMANCE DIAGNOSTICA

� Esperienza Mayo Clinic(Katzmann, 2005):

� IFE: 69%

� IFE urine: 83%

� Esperienza Pavia(Merlini, 2001)

� Elettroforesi (siero o urine): 42%

� Elettroforesi+IF (siero o urine): 96%

e le catene leggere libere?

� Mayo Clinic (Katzmann 2005):IFE siero: 69%IFE urine: 83%

FLC κκκκ/λλλλ ratio: 91%FLC κκκκ/λλλλ ratio + IFE siero: 99%

� Venerdì 20/11/08, Merlini (Pavia) a Genova: “Free Light chains? Yes!”

� mentre J.Sheldon (London): “Free Light chain? No!”…..

vantaggi catene leggere libere

� Dato quantitativo: (normale: 0.26<ratio<1.65)� No falsi positivi (Katzmann 2002, 2005)

� Per Sheldon e altri ci sono!!� Marker prognostico e di attività di malattia

� Da utilizzare solo in caso che IFE negativa e sussiste forte sospetto?

� A Torino: Dr.ssa Giarin, Molinette, Lab. Ematologia (prof. Boccadoro)

SerumAmyloidA

� Le fibrille dell’Amiloidosi AA derivano dalla proteina di fase acuta SAA

� Metodi: ELISA, nefelometria, RIADurante infiammazione: >2000 mg/L

SerumAmyloidA

Quindi:� Utile nella diagnosi e soprattutto nel follow-up di AAA

� Chi lo esegue: Lab. Nefrologico Molinette

Lab. ASO Santa Croce e Carle CuneoLab. CMID Giovanni Bosco

B-typeNatriureticPeptide

NTproBNP o BNP

� Classificazione Mayo Clinic basata su BNP e Troponina (Dispenzieri, Lancet 2003)

� Alto rischio (classe III) se NT-proBNP > 332 ng/L (o BNP sopra limite riferimento) e cTnI>0.1ng/mL (o TnT >0.035 ng/mL)

� Hanno valore prognostico sia in pazienti in chemioterapia che in quelli con trapianto

(Palladini, Circulation 2003; Dispenzieri Blood 2004)

NTproBNP valori “normali”

923191965103132Nrsoggetti

969289959092%<cut-off

46917419112317326395°perc

120<2063<20<20<20Mediana

137905441511525694DS

1652058093335213Media

>75<7565-7455-6445-54<45 aa

Definizione del Rischio(Pavia)

Basso Rischio (tutte le condizioni)

� Età ≤ 60 anni

� NTproBNP ≤≤≤≤ 332 ng/L� cTnI <0.1 ng/ml o cTnT < 0.035 ng/ml

� eGFR > 50 ml/min/1.73 mq

� ALP ≤≤≤≤ 4 volte il limite max di intervallo di riferimento

� ALT ≤≤≤≤ 4 volte il limite max di intervallo di riferimento

Alto rischio (una delle seguenti)

� cTnI > 0.1 (o cTnT >0.035) e NTproBNP >332 ng/L (o BNP > al limite di riferimento) – stadio

III Mayo Clinic� Aritmie ventricolari ripetute all’ECG Holter non

corrette da miodareone

� Performance status ECOG ≥ 3

Dosaggio Beta2Micro

� Polipeptide glicosilato presente sulla superficie della maggior parte delle cellule nucleate e in molti liquidi

biologici� Normalmente “clearato” per filtrazione glomerulare e

catabolizzato nel tubulo prossimale� Valori normali: 1.5-3 mg/L

� IRC, processo dialitico? (complemento, citochine)� Valori superiori di 10-60 volte; incidenza >95% dei pazienti in dialisi da > 15aa (dati USA), 100% dopo 13

aa (dati Europa)

Protocollo alla Diagnosi (Pavia)

ESAMI DI LABORATORIO� Elettroforesi in gel di agarosio con immunofissazione su sangue e

urine� Emocromo� Calcemia

� Creatininemia (eGFR)� Proteinuria 24 ore

� ALP, Bilirubina, ALT� INR e dosaggio del FX� Beta2Microglobulina

� SAA� NTproBNP

TAKE HOME MESSAGES

� In Piemonte il Laboratorio è in grado di eseguire con la professionalità richiesta tutti gli esami necessari per porre diagnosi e prognosi dei pazienti

con amiloidosi

� C’è ancora bisogno di collaborazione e aiuto, per questo nasce un gruppo di studio

� C’è posto anche per te

amiloidosi.piemonte@gmail.com