Upload
resul-oezbilgic
View
450
Download
3
Embed Size (px)
Citation preview
• Moleküler Biyolojinin en temel
tekniklerinden biridir.
• Hücre membranını ve duvarını
yıkarak DNA’yı ayırma işlemidir.
DNA İZOLASYONU
DNA’NIN TEMEL ÖZELLİKLERİ
• Adenin, Guanin, Sitozin
ve Timin bazlarını içerir.
• Dayanıklı bir yapısı vardır.
• Negatif yüklüdür.
• Suda çözünebilir ama
alkolde çözünmez.
İZOLASYON YÖNTEMİNİN BELİRLENMESİ
• DNA’sı izole edilecek hücre tipi
• İstenilen DNA miktarı
• İstenilen Saflık Derecesi
• İzolasyon Sonrası Kullanılacak Yöntemler
• Zaman
• Ekonomik Durum
PÜRİFİKASYON
• Pürifikasyon yöntemleri,
1-Organik Ekstraksiyon
2-Tuzla Çöktürme
3-Sezyum Klorid Yoğunluk Gradiyenti
4-DNA’nın Katı Yüzeye Bağlanması
*Anyon Değişim Kromotografisi
*Silika Bazlı Kolonlar
*Manyetik Ekstraksiyon
ORGANİK EKSTRAKSİYON
Fenolle karıştırılır
Üst faz:DNA veya RNA
Orta faz: Proteinler
Alt faz:Fenol
Santrüfüjleme sonunda
Fenol;Kloroform;İzoamil Alkol Ekstraksiyonu
PRESİPİTASYON
• Absolut soğuk etanol ile presipitasyon yapılır.
• Ve DNA soğuk %70 lik etanol ile yıkanır.
• DNA Tris-Edta ile çözdürülür ve saklanır.
Anyon Değişim Kromotografisi
depo(tampon)
sabit faz(katı porlu matriks)
mobil faz(tampon)
elüent
Proteinkarışımı
DNA’NIN MİKTARI VE SAFLIĞI
DNA Miktarı=260nmODxSulandırma OranıxKatsayı
Katsayı;
Çift iplikçikli DNA=50
Tek iplikçikli DNA ve
RNA için=40
OD;
DNA=1,8
RNA=2
KAYNAKLAR
1-Dr. Zekiye BAKKALOĞLU DNA İZOLASYON YÖNTEMLERİ
RSHMB, SHAM, Moleküler Mikrobiyoloji Araştırma ve Uygulama Laboratuvarı
2-Genetik Mühendisliğine Giriş ,Doç.Dr.Nurettin Yörek
3-DNA Pürifikasyon Yöntemleri,Dr.Ayla Avcıkurt
4-DNA Ekstraksiyonu ve Saflaştırması,Gıda Örneklerinde GDO.M.SOMMA
5- 7.Prof. Dr. Rıza DURMAZ,UYGULAMALI MOLEKÜLER
MİKROBİYOLOJİ,İnönü Üniversitesi Tıp Fakültesi,Mikrobiyoloji ve Klinik
Mikrobiyoloji Anabilim Dalı,MALATYA