สารไคตนเปนสารอนทรยทพบมากในบรเวณปาชาย

เลน เนองจากสารไคตนเปนองคประกอบหลกของสตวท

ะเลหนาดนจำาพวกเปลอกแขงหลายชนด กลไกการยอยสลายสารไคตนในแบคทเรยทสามารถสรางเอนไซมไคตนเนสจดวามความสำาคญตอระบ

บนเวศปาชายเลนเปนอยางยง เพราะทำาใหเกดการหมนเวยนของสารไคตนในธรรมชาต โดยสารไคตนจะถกยอยสลายเปนแอมโมเนย

กรดอนทรย และสารประกอบชนดอนๆ ทอยในรปทตนไมสามารถนำาไปใชไดแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนสจงถอเปนกลมสงมชวตทเปนสวนสำาคญในการทำาใหปาชายเลนเปนระบบนเวศทมความอดมสมบรณและชวยลดปญหาการทบถมของ

ซากสตวทะเลหนาดนจำาพวกเปลอกแขง นอกจากนเอนไซมไคตนเนสทสรางจากแบคทเรยกลมดงกลาวยงมประโยชนทางดานการเกษตรและอ

ตสาหกรรมอกดวย

ทมาและความสำาคญ

ผจดทำาโครงงานจงมความสนใจในการจดทำาโครงงานสำารวจแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนสใ

นดนปาชายเลน บรเวณจงหวดสมทรปราการ ซงเปนบรเวณทไมคอยมนกวจยเขาไปทำาการศก

ษามากนก เพอสำารวจกลมแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเ

นสตามปจจยการเจรญเตบโต โดยผลจากการสำารวจจะสามารถนำาไปเปนฐานขอมลสำาหรบการพฒนาระบบนเวศของปาชายเลน

อยางยงยนในอนาคต

• เพอสำารวจปจจยทางกายภาพและทางชวภาพของบรเวณทเกบดนตวอยาง

• เพอตรวจหาแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนสในดนตวอยาง

• เพอดการตดสแกรมและรปรางใตกลองจลทรรศนของแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนส

วตถประสงคของโครงงาน

วธการทดลอง

สำารวจพนทบรเวณวดอโศการาม อ.บางป จงหวดสมทรปราการ

สมเกบตวอยางดน 4 บรเวณ บรเวณละ 1 ตวอยาง ตวอยางละ 100 กรม โดยเกบทความลก 10 ซม. จากผวดน

บนทกปจจยทางกายภาพและชวภาพในแตละบรเวณทเกบ ไดแก อณหภม คาความเปนกรดดางของดน(pH)

นำาดนตวอยางมาเกบรกษาในตเยนทอณหภมประมาณ 25 C

ขนตอนท 1 การเกบตวอยางดน

ชงดนจากแตละตวอยางมาตวอยางละ 1 กรม

ละลายดนตวอยางในหลอดทดลองดวยนำากลน ทำาใหตกตะกอน ทำาใหเจอจางจนไดความเขมขนเปน 10-1, 10-

3, 10-5, 10-7และ 10-9

นำาสารละลายดนแตละความเขมขนมาใชในการเพาะเลยงเชอ ในอาหารเลยงเชอ NA โดยอาศยการ spread plate

ขนตอนท 2 การละลายดนและเตรยมเชอ

นำาสารไคตนบรสทธ 15 กรม มาละลาย ในกรดซลฟวรก ( H2SO4 )ในอตราสวน 1: 1

นำาสารละลายไปแชตเยนทอณหภม 25 องศาเซลเซยส เปนเวลาประมาณ 12-15 ชวโมง

เตมสารละลายโพแทสเซยมไฮดรอกไซด ( KOH ) 20% ปรมาตร 140 ml เพอใหสารไคตนตกตะกอน

นำาตะกอนไคตนทไดมาลางดวยนำากลนหลาย ๆ ครง จนมคาความเปนกรดดาง (pH) เปนกลางเมอทดสอบดวยกระดาษลตมส

ขนตอนท 3 การเตรยมอาหารเลยงเชอ Chitin Medium

ทำาการผสมตะกอนไคตน 35 กรมกบอาหารเลยงเชอแขง NA ( ประกอบดวยกลโคส 0.1 %, เปปโทน 0.1 %, ไดโพแทสเซยมไฮโดรเจนฟอสเฟต 0.005 % )

นำาสารละลายไปการออโตเคป(autoclave)เพอฆาเชอจลนทรย

เขยาสารละลายเพอใหสารไคตนมการกระจายอยางสมำาเสมอ จากนนนำาไปเทในถาดเพาะเชอ

ไดอาหารเลยงเชอทมสขาวขน คลายนม

นำาสารละลายดนทเตรยมในขนตอนท 2 มาเลยงบนอาหารเลยงเชอ NAเพอคดแยกแบคทเรยทสามารถเจรญไดด และมปรมาณมากในดนตวอยาง

บมทอณหภม 25-27 องศาเซลเซยส เปนเวลา 24 ชวโมง

นำาแบคทเรยทเจรญไดดบน NA มาเลยงบนอาหารเลยงเชอ Chitin medium เพอคดแยกแบคทเรยทสามารถสรางเอนไซมไคตนเนส และยอยสลายสารประกอบไคตนได

บมทอณหภม 25-27 องศาเซลเซยส เปนเวลา 24 ชวโมง

ขนตอนท 4 การเพาะเชอและแยกเชอบรสทธ

บนทกระยะเวลาทแบคทเรยใชในการยอยสลายไคตน เพอเปรยบเทยบ ความสามารถในการยอยสลายไคตนของแบคทเรย

แยกเชอแบคทเรยบรสทธ โดยการใชลปชอนโคโลนทตองการมาใสในอาหารเลยงเชอใหม

นำาเชอทไดจากอาหารชดใหมไป streak ใน Nutient Agar เพอ นำาไปศกษาการตดสแกรมและลกษณะใตกลองจลทรรศนตอไป

แบคทเรยทสามารถยอยสลายไคตนไดจะทำาใหเกดวงใสใน 2 วน ขณะทแบคทเรยชนดอนๆจะใชเวลา 8-10 วน แบคทเรยเหลานจะเจรญในอาหารนเชนกน แตไมทำาใหเกดวงใสทสงเกตได

ยอมสแบคทเรยทเจรญบนอาหารเลยงเชอ Chitin Medium และทำาใหเกดวงใส เพอศกษาการตดสแกรม

บนทกผลการทดลอง

นำาเชอแบคทเรยไปสองดลกษณะใตกลองจลทรรศน

บนทกลกษณะทสงเกตไดใตกลองจลทรรศน

วเคราะหและสรปผลการทดลอง

ขนตอนท 6 การศกษาลกษณะเชอแบคทเรย

และสรปผล

ผลการทดลอง

การสำารวจปจจยทางกายภาพบรเ

วณทเกบตวอยางดน

เศษใบไม และเศษกง

ไมตำาสดำาเนอเปนดนรวนปน

ดนเหนยว ชมนำามตนแสมขาวและไมพมเตย

บรเวณ D

หนขนาดเลก, ใบไม

ปานกลางสดำา

เนอเปนดนรวน ชมนำา

จบตวเปนกอน

มตนแสมขาวและไมพมเตย

บรเวณ C

เศษใบไมปานกลาง

สนำาตาลดำา

เปนดนรวนปนดนเหนยว

บางสวนจบตวกนเปนกอน

มตนแสมและโกงกางขนหนา

แนน นำาทะเลทวมถ

ง

บรเวณ B

เศษใบไมและ กงไม

คอนขางตำา

สนำาตาลดำา

เปนดนรวนปนดนเหนยว

คอนขางละเอยด ชมนำา

มตนแสมและโกงกางขนหนา

แนน นำาทะเลทวมถ

ง

บรเวณ A

สงเจอปนทสงเกตได

ความรวนซ

ยสเนอดน

ลกษณะของดนสภาพพนทโด

ยทวไปบรเวณ/ปจจย

การสำารวจปจจยทางชวภาพบรเว

ณทเกบตวอยางดน

27.5±0.50

27.5

28.0

27.0

8.17±0.06

8.15

8.22

8.1150บรเว

ณ D

27.83±0.76

28.5

27.0

28.0

8.06±0.03

8.06

8.08

8.0250บรเว

ณ C

30.2±1.04

30.5

29.0

31.0

7.92±0.04

7.96

7.93

7.88

20บรเวณ B

29.5±0.50

29.0

30.0

29.5

7.98±0.01

7.98

7.97

7.9820บรเว

ณ A

คาเฉลยครงท 3

ครงท 2

ครงท 1

คาเฉลย

ครงท 3

ครงท 2

ครงท 1

คาอณหภม (องศาเซลเซยส)

ความเปนกรดดางบรเวณดน (คา pH)

ระยะทางจากระดบนำาทะเล

ลงตำาสด (เมตร)

บรเวณ/ปจจย

การเลยงเชอแบคทเรยทไดจากดน

ตวอยางบรเวณ A

1. โคโลนกลม ขนาดเลกมาก สขาวสามารถสงเกตได

10-9

1. โคโลนวงกลม ขนาดเลก สขาวขน2. โคโลนรปพด ตรงกลางของโคโลน มสเขม รอบนอกมสขาว3. โคโลนกลม สเหลองใส

สามารถสงเกตได

10-7

1. โคโลนกลม เปนแผนบาง มสขาวใส2. โคโลนแบบกงไม แผกระจายเปนบรเวณกวาง มสเนอออน3. โคโลนกลม ขนาดเลก มสเหลองใส 4. โคโลนรปวงร ขนาดเลก มสขาวขน

สามารถสงเกตได

10-5

1. โคโลนกลม ขนาดเลก มสเหลองใส 2. โคโลนรปกงไม แผกระจายเปนบรเวณกวาง สขาวขน3. โคโลนกลม เปนแผนบาง มสขาวใส

สามารถสงเกตได

10-3

ลกษณะโคโลนทสงเกตไดการเจรญของแบคทเรย

ความเขมขน

g/ml

1. โคโลนกลม ตรงกลางโคโลนเปนสเนอ รอบนอกเปนสขาวขน

2. โคโลนกลม ขนาดเลก สขาวขน3. โคโลนกลม ขนาดเลก เปนแผนหนา สเนอ

สามารถสงเกตได

10-9

1. โคโลนรปกงไม แผกระจายเปนบรเวณกวาง สขาวขน

สามารถสงเกตได

10-7

1. โคโลนรปพด แผกระจายรอบทศทาง สเนอออน

2. โคโลนกลม ขนาดเลกมาก สขาว3. โคโลนกลม ขนาดเลก มสเหลองใส

สามารถสงเกตได

10-5

1. โคโลนกลม เปนแผนบาง สเนอออน2. โคโลนกลม ขนาดเลก สขาวขน

สามารถสงเกตได

10-3

ลกษณะโคโลนทสงเกตไดการเจรญของแบคทเรย

ความเขมขน

g/ml

การเลยงเชอแบคทเรยทไดจากดน

ตวอยางบรเวณ B

1. โคโลนรปพด ขนาดเลก สเหลอง2. โคโลนกลม ตรงกลางโคโลนเปนสเนอ

รอบนอกเปนสขาวขน

สามารถสงเกตได

10-9

1. โคโลนกลม ขนาดเลก เปนแผนหนา สเหลอง

2. โคโลนกลม ขนาดเลกมาก สขาว3. โคโลนรปพด ขนาดเลก เปนแผนหนา

สสม4. โคโลนรปพด ขนาดเลก สเหลอง

สามารถสงเกตได

10-7

1. โคโลนรปพด ขนาดใหญ แผกระจายรอบทศทาง สเนอ

2. โคโลนรปพด แผกระจายรอบทศทาง สเนอออน

สามารถสงเกตได

10-5

1. โคโลนกลม ขนาดเลก มสเหลองใสสามารถสงเกตได

10-3

ลกษณะโคโลนทสงเกตไดการเจรญของแบคทเรย

ความเขมขน

g/ml

การเลยงเชอแบคทเรยทไดจากดน

ตวอยางบรเวณ C

1. โคโลนกลม เปนแผนหนา สสม2. โคโลนกลม

ตรงกลางโคโลนมสเขมกวารอบนอก สเหลองเนอ

3. โคโลนกลม ขนาดเลก สเหลอง

สามารถสงเกตได

10-9

1. โคโลนรปพด ตรงกลางของโคโลนมสเขมกวารอบนอก สขาว

สามารถสงเกตได

10-7

1. โคโลนรปกงไม แผกระจายเปนบรเวณกวาง สขาวขน

2. โคโลนกลม เปนแผนบาง สเนอออน3. โคโลนกลม ตรงกลางโคโลนสเนอ

รอบนอกเปนสขาว4. โคโลนรปกงไม

ตรงกลางโคโลนสเขมกวาบรเวณรอบนอก สขาวขน

สามารถสงเกตได

10-5

1. โคโลนกลม เปนแผนบาง สเนอออน2. โคโลนกลม ขนาดเลก สเหลอง

สามารถสงเกตได

10-3

ลกษณะโคโลนทสงเกตไดการเจรญของ

แบคทเรย

ความเขมขน

g/ml

การเลยงเชอแบคทเรยทไดจากดน

ตวอยางบรเวณ D

ภาพท 4.8-4.9 : ภาพโคโลนของแบคทเรยจากแหลงดนตวอยาง A ทเจรญบนอาหารเลยงเชอ NA ทระดบความเขมขน 10-3 และ 10-7 g/ml

ภาพท 4.10 -4.11 : ภาพ โคโลนของแบคทเรยจากแหลงดนตวอยาง B ทเจรญบนอาหารเลยงเชอ NA ทระดบความเขมขน 10-7 และ 10-9 g/ml

ภาพท 4.12 -4.13 : ภาพโคโลนของแบคทเรยจากแหลงดนตวอยาง C ทเจรญบนอาหารเลยงเชอ NA ทระดบความเขมขน 10-5 และ 10-7 g/ml

ภาพท 4.14 -4.15 : ภาพโคโลนของแบคทเรยจากแหลงดนตวอยาง D ทเจรญบนอาหารเลยงเชอ NA ทระดบความเขมขน 10-5 และ 10-9 g/ml

การตรวจหาเชอแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนส ในดนตวอยางโดยการเลยงเชอบน

Chitin Medium

ภาพท 4.16 – 4.19 : ภาพโคโลนของแบคทเรยทไดจากการเลยงเชอบนอาหาร chitin medium

การตดสแกรมและลกษณะใตกลองจลทรรศน

ของแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนส

จากการสำารวจแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนสในดนตวอยางจากปาชายเลนไม

พบวา มแบคทเรยทสรางเอนไซมไค-ตนเนสและทำาใหเกดวงใส (Clear Zone)

ทสงเกตไดบน Chitin Medium จงไมสามารถทำาการทดสอบการตดสแกรมและการสงเกตลกษณะใตกลองจลทรรศ

นของแบคทเรยกลมดงกลาวได

สรปผลการศกษา

การสำารวจปจจยทางกายภาพ

จากการสำารวจปจจยทางกายภาพและทางชวภาพบรเวณโดยรอบจดทเกบตวอยางดน พบวา ปจจยทางกายภาพ และปจจยทางชวภาพของบรเวณทเกบตวอยางดนมความใกลเคยงกน

การสำารวจปจจยทางกายภาพพบวา พนทสวนใหญมตนแสมขาวขนกระจายอยทวไป มนำาทะเลทวมถง บนพนดนมเศษใบไมและกงไม ดนเปนดนคอนขางเหนยว สคลำา ชมนำาและจบตวเปนกอน โดยพนททใกลทะเลมากกวา (บรเวณ A และ B ) จะมตนโกงกางขนหนาแนนมากกวา และมดนสออนกวา

การสำารวจปจจยทางชวภาพ

การสำารวจปจจยทางชวภาพพบวา ความเปนกรดดางของดน (คา pH) ของดนทงสบรเวณมความแตกตางกนเลกนอย โดยพบวาดนบรเวณทอยใกลทะเล (บรเวณ Aและ B) มความเปนกลางมากกวา(มคา pHประมาณ 7.92-7.98 ) ในขณะทดนบรเวณทอยไกลทะเล (บรเวณ CและD) มความเปนเบสมากกวา (มคา pHประมาณ8.06-8.17 ) สวนอณหภมดนทวดไดมคาเฉลยตงแต 27.5 ถง 30.2 โดยพบวาบรเวณทอยใกลทะเลจะมคาเฉลยทสงกวาเลกนอย (ประมาณ 2-3 องศาเซลเซยส) ซงคาดวาเปนผลมาจากการไดรบแสงอาทตยและการทวมถงของนำาทะเลเปนระยะเวลาทนานกวา

เมอนำาตวอยางดนจากแตละจดมาทดสอบหาเชอแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนส ดวยการละลายดน (Serial Dilution) และ การเลยงเชอบนอาหารเลยงเชอ Nutrient Agar (NA) พบวาในการเลยงเชอบน NA สามารถสงเกตเหนการเจรญของเชอบนถาดเพาะเชอจำานวนมากในการละลายดนทกความเขมขน (ความเขมขนตงแต 10-3, 10-5, 10-7 และ 10-9

) โดยพบวาเชอทเจรญมความหลากหลายมาก และเชอสวนใหญมโคโลนลกษณะกลม เปนรปพดหรอรปกงไม

การเลยงเชอแบคทเรยทไดจากดนตวอยาง

เมอนำาเชอทสามารถสงเกตเหนการเจรญของโคโลน อยางเดนชดบน NA ไปเพาะเลยงบน Chitin Medium เพอทดสอบการสรางเอนไซมไคตนเนส พบวา เชอตวอยางทนำาไปเลยงบน Chitin Medium สวนใหญสามารถเจรญไดด มการสรางโคโลนตามลกษณะเฉพาะของเชอแตละชนดทสามารถสงเกตไดใน 1-2 วน แตเมอเลยงเชอไปเปนระยะเวลาประมาณ 1 สปดาหพบวา เชอแบคทเรยทไดจากการละลายดนตวอยางไมเกดวงใส (Clear Zone) รอบโคโลนทสามารถสงเกตไดตามทไดคาดการณไวจากการศกษาเอกสารอางอง

การตดสแกรมและลกษณะใตกลองจลทรรศน

ของแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนส

จากการสำารวจแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนสในดนตวอยางจากปาชายเลนไมพบวา

มแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนสและทำาใหเกดวงใสทสงเกตไดบน Chitin Medium

จงไมสามารถทำาการทดสอบการตดสแกรมและการสงเกตลกษณะใตกลองจลทรรศนของแบคท

เรยกลมดงกลาวได ซงจากการศกษาคนควาพบวา

สาเหตทคาดวาจะทำาใหไมพบแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนสและทำาใหเกดวงใสทสงเกตได

บน Chitin Medium มดงตอไปน

• บรเวณททำาการสมตวอยางดน มสงมชวตททำาหนาทสรางเอนไซมไค-ตนเนส

จำานวนมาก และสงมชวตหลกททำาหนาทยอยสลายไคตนอ

าจจะไมใชแบคทเรย• บรเวณททำาการสมตวอยางดน

มการกระจายตวของแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนสทไมสมำาเสมอ

ทำาใหเมอทำาการสมตวอยางดน พบวามเชอแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนส

ปรมาณนอยเกนกวาทจะตรวจสอบได• อาหารเลยงเชอ NA หรอ Chitin

Mediumไมเหมาะสมตอการเจรญของแบคทเรยกลมทสรางเอนไซมไคตนเนสได

เนองจากการทำาอาหารเลยงเชอ NA และ Chitin Medium

มตวแปรทไมสามารถกำาหนดไดแนชดจำานวนมาก

เชน สารอาหารทเหมาะสมตอการเจรญของแบคทเร

ยกลมทสรางเอนไซมไคตนเนส ความเปนกรดดางของอาหารเลยงเชอทเหมาะ

สมตอการเจรญของเชอ และความเคมของอาหารเลยงเชอทควรจะมความใกลเคยงกบความเคมทเชอเจรญไดดตามธร

รมชาต • เชอแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนส มการสรางโคโลนนอยเกนไปหรอไมมการสราง

โคโลนทเดนชด ทำาใหเมอทำาการสมเชอแบคทเรยทเจรญไดดบ

น NA มาเลยงบนChitin Mediumไมพบเชอทสรางเอนไซมไค-ตนเนส

• เชอแบคทเรยทสรางเอนไซมไคตนเนสกลมทไดจากดนตวอยางอาจไมสามารถยอยสลายสารประกอบไคตนสงเคราะหชนดทนำามาทำาการทด

ลอง ซงมความแตกตางจากสารประกอบไคตนตามธ

รรมชาต หรอสามารถยอยสลายได แตไมทำาใหเกดวงใสทสามารถสงเกตได

อยางไรกตาม แบคทเรยกลมทสามารถเจรญไดดบน NA

และถกนำาไปเลยงบน chitin Medium ไดถกนำาไปยอมสแกรมและสงเกตลกษณะใต

กลองจลทรรศน พบวาสามารถแบงแบคทเรยทพบตามลกษณะและการตดสแกรมไดเปนสองกลมใหญคอ

• ลกษณะ coccus และตดสแกรม negative

• ลกษณะ bacillus และการตดสแกรม positive

เอกสารอางอง• สนท อกษรแกว. “ปาชายเลน: นเวศวทยาและการจดการ”.

มหาวทยาลยเกษตรศาสตร, 2541.• “เทคนคทางโรคพช” มหาวทยาลยเชยงใหม [online]:

http://web.agri.cmu.ac.th/ppath/course/360301/lesson2_example.htm

• “บทปฏบตการท1:การเตรยมอาหารเลยงเชอ” [online]: http://science.kmutt.ac.th/class/mic211/lesson1.doc

• “Mangrove Ecosystems, Communities and Conflict: Developing Knowledge-Based Approaches to Reconcile Multiple Demands” Kasetsart University,2005 [online]: http://www.streaminitiative.org/Mangrove/pdf/ppt/ThailandOverview.pdf

• เสาวนตย ทองพมพ และคณะ. “การแยกหาและศกษาเชอซงแสดงศกยภาพแบคทเรยโปรไบโอตกทสามารถยบยงโรคตดเชอแบคทเรยในปลานล” 2545 [online]: http://www.irpus.org/project_file/B144.pdf

• “Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology,Vol. 2” Springer,2005.

• รศ.ดร.ไพโรจน วรยจาร. “หลกการวเคราะหจลนทรย”. มหาวทยาลยเชยงใหม,2545.

• รศ.บญญต สขศรงาม. “จลชววทยาทวไป” โอเดยนสโตร:กรงเทพ, 2534.

• Jordan,H.D. 1964.The Relation of Vegetation and Soil to the Development of Mangrove Swamp for Rice Growing in Sierra Leone.J. Appl. Ecol. 1 : 209 - 212

• Kuenzler, E.J. 1968.Mangrove Swamp System. Coastal Ecological System of the United States.pp.

• 83 – 353. In Odum,H.T.,B.J. Copeland and E.A. McMahon, ( eds. ). Chapel Hill, N.C. : Int.Mar. Sci.,Univ. of North Caralina.

• Macnae, W. 1968.A General Account of The Fauna and Flora of Mangrove Swamps and Forests in the Indo-West Pacific Region. Advanced. Mar. Biol. 6:73-270

•Miyawaki ,A. and K.Suzuki. 1980. Process of Phytosociological Studies and Vegetation Mapping. Bull. Of Int. of Env. And Tech. Yokohama Nation Univ., 6(1) : 65-76.•Navalkar, B.S. and F.R. Bharucha. 1948. Studies in the Ecology of Mangroves. IV. The Hydrogen Ion Concentration of the Sea Water, Soil Solution and the Leaf Cell-Sap the Mangroves,. J. Univ. Bombey. 16 : 35 - 45•Phillips, O.P. 1903. How the Mangrove Tree Adds New Land to Florida.J.Geog. 2 : 10 - 18•Schimper,A.F.W. 1903.Plant Geography on a Physiological Basin. Oxford Univ. Press, Oxford. P.839.•Steenis ,C.G.G.J. Van. 1958. Rhizophoraceae. Fl. Males. 5 : 431 - 93•Watson , J.G. 1928. Mangrove Forests of the Malayan Peninsula.Malay. For.Rec.Singapore : Fraser and Neave, Ltd. P.275