2752 Tecnicas de Colecta y Tincion de Parsitos

1UNAM

FACULTAD DE ESTUDIOS

SUPERIORES ZARAGOZA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA II

TÉCNICAS DE COLECTA Y TINCIÓN DE PARÁSITOS

EQUIPO: 3

Barrientos Hernández FernandoGarcía Flores Eduardo

Romero Medina Luz Elena

Que el alumno aprenda a colectarmaterial parasitario de animales deexperimentación y domésticos.

Que el alumno utilice y practique lasdiferentes técnicas de tinción,utilizadas en parasitología.

Que el alumno aprenda a conocerlas preparaciones, de diversosparásitos colectados por él.

A los animales

solicitados se les sacrifica

en una forma rápida y los

menos dolorosa posible,

se les toma sangre y se

realiza lo siguiente:

MÉTODO

Materia fecal: Frasco limpio de boca ancha

lejos del calor y el frío.

Muestra de orina: 1ª parte de la micción de

preferencia en tubo de ensayo e hisopo.

Muestra sanguínea: Punción o extracción en

tubo.

Los embases deben estar completamente

limpios y secos antes de usarse.

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Radicará en el mantenimiento

del parásito en condiciones

apropiadas, en donde se

asegure la integridad de este,

para el desarrollo de un

diagnóstico apropiado.

IMPORTANCIA DE LA

COLECTA.

Conservación:

Puede ser física: Temperatura

Puede ser química : Soluciones

químicas

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Impregnación que se

produce al ejercer presión

con un portaobjetos sobre

el tejido que va a ser

examinado.

Se fijan y se tiñen como un

frotis sanguíneo.

IMPRONTA

a) Técnica

de gota

gruesa

I) SANGRE

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b) Frotis o extensión fina de sangre:

Fijación:

Los procedimientos químicos son los

más utilizados para matar y fijar

parásitos.

El objetivo de la fijación es detener los

procesos metabólicos.

Los fijadores conservan indefinidamente

la muestra.

FIJADORES

Schaudinn

PVA

MIF

PAFAFA

For-malina

Glicerolgelatina

Útil para diferentes

formas

parasitarias

Estas se colorean

en verde-amarillo

o marrón

Composición ya

antes

mencionada, se

toman 2 o 3 gotas

de MIF más

heces, ya antes

tratadas y se pone

en un porta

objetos limpio.

Tinción MIF

Fijador de quistes,

protozoarios,huevos,

helmintos.

Se recomienda calentar la

formalina a 60 grados C al

usarse para huevos de

helmintos (inhibe su

desarrollo infectivo)

Formula

Formaldehído

Soloucion salina 0.85%

Proporcion de uso

3 partes de formalina por

una parte de materia fecal

Formalina

Fijador de trofozoitos

y quistes

(combinación

Shaudinn más resina)

PVA

Etanol 95%

HgCl2

Ácido acetico

glacial

Glicerina

Proporción 1:3

(muestra/fijador)

PVA (Alcohol polivinilico)

Tinción:

Las tinciones pueden realizarse en dosformas:

Progresivas: son aquellas en las que elmaterial se coloca en colorante diluido,durante el tiempo necesario para lograr latinción hasta la intensidad deseada.

Regresivas: son las tinciones en las que elmaterial o preparaciones se colocan encolorante concentrado hasta lograr unasobre tinción y posteriormente decolorarhasta lograr la intensidad deseada.

TIPOS DE TINCION

SU FORMA DE ACCION

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Para que los productos tomen el colorde un colorante, ya sea uno a uno omezclados adecuadamente a veces esnecesario la acción de un mordente;generalmente se utiliza una salcompuesta de aluminio o hierro o bienun ácido, ya sea antes del colorante, oadicionado a la solución de tinción.Para procesos contrastantes esnecesario utilizar más.

Montaje:

Los especimenes ya aclarados , se montan con

bálsamo de Canadá o resina sintética. Para

piezas grandes como proglótidos de cestodos

o trematodos como F. Hepática, se requiere un

medio de montaje espeso, mientras que para

frotes debe estar diluido para posteriormente

hacer una buena observación con objetivos de

inmersión.

Identificación de parásitos de

carácter uni o pluricelular para

la realización de un diagnostico

confirmativo.

Ciclo

biológico

Enfermedades

Vectores

Parásitos

de

Importancia

Médica

Ectoparásitos

Endoparásitos

Hemoparásitos

MANIPULACIÓN DEL VECTOR

› Mantener la integridad del capturador.

› Mantener vivo e integro al vector hasta la

recolección del parásito.

› El parásito debe ser recién extraído.

› Debe ser representativo a la enfermedad

que produce.

› Representa la magnitud de la enfermedad

en el paciente y en la población.

Parásito

representati

vo

Colorante

de

contras

te

Fresco

Fijación

Pluricelulares Aseguramiento de la

eliminación de la

patogenicidad

Unicelulares.

Extremar

precaución

Aun patógeno

Aclaración de

tejidos y

tinción

Tipos de

muestra

Cuidados de la

muestra

Técnicas Parásitos

sangre

• Heparina

• Azida de

sodio

• Recién

extraída

•Gota gruesa

•Gota fina

•Hemoparásitos

intra/extra

eritrocitarios

ectoparásito vivo •Sacrificado

•Fraccionado

•garrapata

Heces fecales

•Frasco boca

ancha limpio y

seco ausencia de

orina y rotulado

Varios procesos

Parásitos

intestinales

sólidas

Cerradas( evitar

desecación) y

refrigeradas

2grados C

•Cps

•Flotación

•concentración

Huevos y/o

quistes

nemátodos

líquidas

37 grados C

recién

obtenidas

Observación

en fresco

Trofozoitos y

quistes

tejidos

frascos con

fijador

•formalina

Varios

procesos T. solium

•Orina

•exudados

Frascos

limpios,

secos, boca

ancha. Tubo

con sol’n

salina

isotónica

Observación

en fresco y/o

tinción de

exudado

Trichomonas

vaginalis

Obtención

Fijación

Conservador

Tinción

Montaje

Observación

Identificación

TINCIONES

Temporales

•Lugol

•Giemsa

•Eosina 5%

Fijas

•Hematoxilina

Férrica

•Tinción indica

Supravitales

•Azul de cresilo

•75% solución

Fijador de quistes, trofozoitos, huevos, larvas

Solución de trabajo más muestra ( no se almacena)

Proporción 1:3 (muestra/fijador)

Solución concentrada

HgCl2

Agua destilada

Etanol

Solución de trabajo

Solución concentrada

Acido acetico glacial

SHAUDIN

Fijador y conservador de casi todos los elementos parasitarios

1) Agua destilada

Tintura de merthiolate, formaldehído y glicerol

2) Lugol

Porción 14 mL de 1) más 1mL de 2) más 2g de muestra

MIF (Merthiolate-yodo-

formaldehído)

Preserva quistes y

trofozoitos, además

de huevos y larvas

de helmintos

Fórmula

Fenol

Solución salina

Etanol 95%

Formaldehído

Proporción 1:5

(muestra /fijador)

PAF (Fenol-alcohol-formaldehído)

Preservador de

trematodos y

cestodos

Fórmula

Etanol 95%

Formaldehído

Agua destilada

Ácido acético

glacial

AFA (Alcohol-formaldehído-ácido acético)

Preparaciones

permanentes

de nematodos

Formulación

Gelatina

Agua

destilada

Glicerina

Fenol

Glicerina-gelatina

Tinción de negro E de clorazol.Hematoxilina ferrica HeidenhainTinción tricomicaHematoxilina tungstica de DobellHematoxilina molibdica de DobellTinción de Hematoxilina y eosinaTinción de NobleColorante de MannTinción para Cryptosporidium ssp e isospora sppColoración de GiemsaTécnica de tinción para Trichomonas vaginalesColoración para parásitos sanguíneosTinción WrightTinción tricromica (modificada por Cerva), para amibas de vida libre.

TINCIONES PARA PROTOZOARIOS

Hematoxilina:colorante básico parateñir estructuras(núcleos celulares).

Existen distintas lacasalumínicas dehematoxilina:

Hematoxilina deHarris: Por suestabilidad (seconserva entre 6-12meses). Es de fácilmanejo.

Coloración regresiva,se elimina el excesode colorante conalcohol.

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Como agente oxidante se utiliza elóxido de mercurio.

Tiñe los núcleos de color azulado.Hematoxilina de Mayer: Es un tipo de

coloración progresiva (no requiere lavadoposterior). Se usa el yodato de sodiocomo agente oxidante.

Tiñe los núcleos de azul suave.Hematoxilina ácida de Erlich.Hemalumbre de Delafield: Utilizada en

técnicas histoquímicas e inmunológicas.

Coloración para platelmintos.

Tinción con alumbre carmín.

Hematoxilina Dalafield.

Tinción de Reynold.

Tinción de carmín acético de Semichon.

Tinción con hemateína de Roudabush.

Tinciones para

helmintos

2) Busqueda y estudio de

ectoparácitos.

a) Localice o obtenga los parásitos que se

encuentran sobre los animales asignados.

b) Sacrifique los ectoparásitos.

c) Haga observaciones de diferentes

porciones del artrópodo

d) Realice diversas preparaciones, ya sea

para sangre en solución salina, se utiliza

colorantes de contrastes.

Los pasos a seguir son:

Obtención fijación

conservación

Tinción

Montaje

Observación

Identificación

3) Obtención de protozoarios

y helmintos.

a) Al animal que se sacrifico se le hace unaincisión a lo largo de toda la línea mediaventral

b) Una vez abierto el animal se busca en lasuperficie de los órganos internos y lasmembranas serosas la presencia dequistes.

c) A continuación se va extrayendo órganopor órgano, estos se colocan en placascon solución salina.

TRATAMIENTO PARA ANIMALES Y

VÍSCERAS

a) Los órganos huecos se abrirán con tijeras ylos esponjosos se desmenuzaran en buscade helmintos, el contenido del intestino seobservara al microscopio en busca deprotozoarios y helmintos

b) A los helmintos encontrados se les quitarael moco y el resto de tejido

c) A los helmintos limpios se les conservaraen AFA y se les fijara posteriormente conalguna de las técnicas que se sugieren enanexo de la practica.

Manual de biología medica; Facultad de

Estudios Superiores Zaragoza; QFB

Manual de técnicas para el diagnostico

morfológico de las parasitosis; Paz María

Salazar S. Irene de Haro A.; Ed. Francisco

Méndez Cervantes.

BIBLIOGRAFÍA