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biologia
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METODO DE CUENTA TOTAL DE MOHOS Y LEVADURAS EN
ALIMENTOS
Conocer las tcnicas ms comunes para la cuenta de mohos y levaduras en alimentos, se observaran adems las caractersticas morfolgicas y fisiolgicas de los mohos que
comnmente contaminan a los alimentos.
HONGOS
LEVADURAS: Hongos unicelulares esfricos u ovoides.
MOHOS: Hongos pluricelulares filamentosos.
- Eucariotas - hetertrofos - Algunos son dimrficos - Ausencia de movilidad - Reproduccin sexual y asexual - Importantes en la industria y la medicina - La mayora son Aerobios - Muchos son Anaerobios facultativos (Levaduras) Condiciones optimas: - acidez, [sales y azucares] - Temperaturas, [nutrientes]
LEVADURAS - La mayora de las levaduras crecen en humedad
- Temperaturas de 25 30 C
- pH acido
- En pH bsico pueden adaptarse y crecer lentamente en condiciones aerobias
- Las levaduras fermentadoras crecen lentamente en condiciones anaerobias
- Azucares como fuente de energa, algunas utilizan cidos orgnicos y alcohol
Saccharomyces cerevisiae
MOHOS - La mayora son aerobios (algunos son anaerobios facultativos)
- Temperaturas de 20 30 C (algunos crecen a bajas temperaturas)
- Crecen en altos porcentajes de humedad (pueden adaptarse)
- pH < 7
HIFAS MICELIO VEGETATIVO
MICELIO AEREO ESPORAS
Aspecto aterciopelado
MEDIOS DE CULTIVO - Selectivos para hongos
- Agar-Papa, Agar-Harina de Maz, mezclas de vegetales, sust. nat., etc.
- Picadura (Normalmente)
- Identificar el hongo a simple vista
-AGAR PAPA DEXTROSA:
Utilizado para el cultivo y recuento colonial de hongos y levaduras.
Altamente nutritivo
Permite la esporulacin y la produccin de pigmentos en algunos dermatofitos
Infusin de Papa 4.0 g/L
Dextrosa 20.0 g/L
Agar Bacteriolgico 15.0 g/L
pH 5.6 0.2
-Acido tartrico al 10%:
Adicionado al medio para inhibir el crecimiento bacteriano
-Solucin diluyente (NaCl 0.09%):
Para no daar las clulas
MEDIOS DE CULTIVO - Azul de metileno:
Utilizado para la tincin
-MEDIO WICKERHAM:
Es utilizado para el aislamiento de levaduras, puede ser adicionado con agentes selectivos
Agar bacteriolgico 15 g/L Fuente de N y a.a.
Extracto de levadura 3 g/L Fuente de Vitaminas
Extracto de malta 3 g/L C, Protenas y Nutrientes
Dextrosa 10 g/L Fuente de energa
Agar 20 g/L Agente solidificante
Peptona 5 g/L Nutrientes para rpido crecimiento
- Rafinosa:
La rafinosa es selectiva para una genero de levaduras
- Malta:
Deteccin y aislamiento de levaduras
PROCEDIMIENTO CUENTA DE MOHOS Y LEVADURAS
Inicio
Preparar las soluciones decimales de la muestra
Sembrar sobre superficie (con varilla doblada) 0.1 ml de cada dilucin (5x2) en placas de PDA.
Incubar las placas entre 25-30 C durante 2 a 5 Das
Sacar las cajas de incubacin y contar las colonias caractersticas de mohos y levaduras.
Fin
PROCEDIMIENTO OBSERVACIONES DE LAS CARACTERISTICAS DE MOHOS
Inicio
Cortar cada colonia caractersticas de mohos con un bistur.
Separar el agar con la colonia procurando no daarla.
Colocar estos fragmentos en portaobjetos limpios.
Observar morfologa miceliar area en microscopio de diseccin.
Transferir parte del micelio a otro portaobjeto y observarlo en microscopio ptico
Dibujar las estructuras observadas y compararlas con bibliografa
Fin
PROCEDIMIENTO OBSERVACIONES DE LAS CARACTERISTICAS DE LEVADURAS
Preparar frotis de las colonias de levaduras, teirlas con azul de metileno al 0.5 % durante 1 min y lavar con agua destilada.
Inicio
Observar al microscopio su morfologa.
L. grandes, valos aislados o apiculares aislados
Sembrar en tubos
(16x150mm) con medio
Wickerham y campana de Durham
con dextrosa
Fin
L. ovales, pequeas, agrupadas en micelio ramificado de L. apiculares, aisladas
Sembrar en tubos (16x150mm) con medio
Wickerham y campana de Durham adicionado
con rafinosa
Sembrar en tubos (25x150mm) con 10 mL de
caldo de extracto de malta esteril
Incubar a 25-30C
durante 2 a 8 dias.
Observar gas y turbidez
Observar pelicula superficial
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