ATP-mittarit, mikrobien identifiointimenetelmä ja CO2 ... · variaatiokerroin (CV%) kertoo...

LABEMA – Life science and biotechnology expert

ATP-mittarit, mikrobien identifiointimenetelmäja CO2-tuotannon mittaaminen

HAMK, Hämeenlinna, 8.5.2018

Petri Muranen

LABEMA – Life science and biotechnology expert

Hygienia ja omavalvonta

Swab-testit kuivamaljat kontaktimaljat laskeumamaljat Dipslide-pintanäytteenottoputket

a) Mikrobiologiset menetelmät

LABEMA – Life science and biotechnology expert

Hygienia ja omavalvonta

3M™ Clean-Trace™ ATP –järjestelmä:

b) Luminometria / ATP

3M™ Clean-Trace™ Surface ATP pintanäytteille3M™ Clean-Trace™ Water ATP vesinäytteille

LABEMA – Life science and biotechnology expert

Miten ATP-menetelmä eroaamikrobiologisista menetelmistä?

Mikrobiologinen menetelmä

kasvuviive 1-3 vrk mikrobit vaatii koulutusta

ATP

reaaliaikainen kokonaislika helppo, ei pitkäaikaista

koulutusta

LABEMA – Life science and biotechnology expert

1. ATP-menetelmä ATP (adenosiinitrifosfaatti) on runsasenerginen yhdiste =

siihen varastoituu energiaa ATP:tä on kaikissa elävissä soluissa:

ruoka hiiva bakteerit homeet

LABEMA – Life science and biotechnology expert

ATP-menetelmä perustuu lusiferaasi-entsyymin toimintaan: ATP + lusiferaasi = valoa

LABEMA – Life science and biotechnology expert

ATP-menetelmä mittaa kokonaislikaa mitä enemmän likaa (ATP:tä)

sitä enemmän syntyy valoa sitä suurempi mittaustulos (Relative Light Unit, RLU)

nopea, helpokäyttöinen reaaliaikainen toistettavat tulokset = luotettava trendianalyysi pitkäaikainen säilytys: jääkaapissa +2-8oC.

Ota tikut huoneenlämpöön vähintään 10 minuuttia ennen käyttöä lyhytaikainen säilytys : huoneenlämmössä +21oC 28 päivän ajan

LABEMA – Life science and biotechnology expert

PintanäytteenottoPidä tikkua peukalon ja etusormenvälissä niin, että tikkua on helppopyörittää.

Älä koske tikun pumpulipäähän tai varteen!

Paina tikkua kohti pintaa.

Pyöritä samalla tikkua ja kerää näytettä koko pumpulipäällä!

LABEMA – Life science and biotechnology expert

Aktivoi tikku painamalla sinisestäpäästä niin pitkälle, että tikunpumpulipää uppoaa putkessaolevaan nesteeseen.

Pidä putkea peukalonja etusormen välissä. Heiluttele puoleltatoiselle vähintään 5 sekuntia.

Paina tikkuputkeen.

LABEMA – Life science and biotechnology expert

Näytteenotto nesteestä

Pidä putkea peukalonja etusormen välissäja heiluttele puoleltatoiselle vähintään 5 sekuntia.

Ota näytenesteestä.

Laita tikku putkeen ja aktivoi se painamalla punaisesta päästä: muovipää uppoaanesteeseen.

LABEMA – Life science and biotechnology expert

Mittaus avaa luminometrin kansi, aseta tikku sisään ja paina ”Mittanäyte”

lue tulokset suhteellisina RLU-yksiköinä

LABEMA – Life science and biotechnology expert

Tulokset

LABEMA – Life science and biotechnology expert

LM1

LABEMA – Life science and biotechnology expert

Tulosten toistettavuus

3M™ Clean-Trace™ 9% Kilpailija 1 25% Kilpailija 2 50% Kilpailija 3 75%

useita eri luminometritoimittajia

variaatiokerroin (CV%) kertoo poikkeamasta eli kuinka lähellä mittaustulokset ovat toisiaan

suuria eroja testien suorituskyvyssä = mittausten toistettavuudessa

LABEMA – Life science and biotechnology expert

toistettavuuden vaikutus käytännössä: turhaa siivousta

0 25 50 75 100 125 150

RLU of Result

Num

be

r o

f R

esults

~15% VÄÄRIÄ POSITIIVISIA, jos testin toistettavuus on huono(CV >38%)

TulosjakaumaCV=8%

TulosjakaumaCV=38%

tuhlataan aikaa ja rahaa, ei vaarallista

LABEMA – Life science and biotechnology expert

0 50 100 150 200 250 300 350

toistettavuuden vaikutus käytännössä: ei siivota riittävästi

RLU of Result

Num

be

r o

f R

esults

TulosjakaumaCV=8%

TulosjakaumaCV=38%

~15% VÄÄRIÄ NEGATIIVISIA, jos testin toistettavuus on huono(CV >38%)

liian optimistinen kuva hygieniatasosta, VAARALLISTA !!

LABEMA – Life science and biotechnology expert

erilainen signaalin tulkinta 3M™ Clean-Trace™ photomultiplier Kilpailija 1 photodiode

erot tikuissa 3M™ Clean-Trace™ koko tikun pää mitataan Kilpailija 1 vain huuhteluvesi mitataan

LABEMA – Life science and biotechnology expert

Raja-arvot

Käyttäjien määriteltävissä omassa työympäristössään. Kansainvälisissätutkimuksissa 250 RLU:ta katsottu hyväksi tasoksi sairaaloissa

Käyttöpaikka OK ?? Hälytys

Tavallinen osasto < 500 500 – 1000 > 1000

Teho-os., leikkausos. < 250 250 – 500 > 500

Välinehuolto ja sterilointipalvelut

< 100 100 - 200 > 200

Esimerkkejä:

LABEMA – Life science and biotechnology expert

Sovellusalueet ja asiakkaat siivousyritykset uimahallit terveystarkastajat sairaalat elintarviketeollisuus (käytössä jo 20 vuotta)

Atria, Saarioinen, HK… Valio panimot (Hartwall, Pyynikki)

Lisätietoja: iiris.ylostalo@labema.fi

LABEMA – Life science and biotechnology expert

2. Mikrobien identifiointimenetelmäBiolog MicroLog Manual

tunnistaminen perustuu bakteerien “sormenjälkeen”: 96 reaktiota mikrokuoppalevyllä yhdellä kerralla

LABEMA – Life science and biotechnology expert

sokerit

aminohapot

heksoosihapot

karboksyylihapot, esterit ja rasvahapot

hapan pH

NaCl

maitohappo

pelkistysvoima

Gram+ Gram-

heksoosi-PO4:t

71 hiilenlähdettä + 23 kemiallista herkkyystestiä

LABEMA – Life science and biotechnology expert

helppoa ja yksinkertaista: ei tarvita värjäyksiä, oksidaasitestiä, katalaasitestiä, vaan aerobiset G+ ja G- bakteerit samalla levyllä

vaaditaan puhdasviljelmä ja yksi pesäke pesäke siirrostetaan siirrostusliemeen, joka sekoitetaan siirrostusliemi lisätään levylle => inkuboitumaan 18 tunniksi tulosten tulkinta seuraavana päivänä

kunkin kuopan väriä verrataan valkoiseen taustaan (pos, neg, rajat.) tulos syötetään ohjelmaan, joka vertaa sitä tietokantaan => nimi

tietokannassa yli 1800 G+ ja G- mikrobia: 267 hiivaa, 361 anaerobia jne

LABEMA – Life science and biotechnology expert

täysin automaattinen

semi-automaattinen

manuaalinen

LABEMA – Life science and biotechnology expertLisätietoja: timo.tumelius@labema.fi

Asiakkaat Allergan

MedImmune

Pfizer

Apotex

Banner Pharmacaps

Amylin

Alcon

Biogen IDEC

Sun Pharmaceuticals

Sandoz

Ciba Vision

Genentech

Bristol Myers Squibb

Neogen

MSD

Fresenius Kabi

Bausch and Lomb

Bayer

Sanofi

Actavis

Baxter

Roche

Teva

GSK

Novartis

Mead Johnson

LABEMA – Life science and biotechnology expert

3. Panimohiivan laaduntarkkailu hiivalla on merkittävä panos oluiden makuun ja laatuun,

siksi on tärkeää saada luotettavaa tietoa sen toiminnasta fermentointikyvyn määrittäminen tapahtuu mittaamalla hiivojen

metabolian tuottaman hiilidioksidin määrää CO2-tuotannon määrä korreloi hiivan kunnon kanssa

ANKOMin valmistama GPM-laitteisto (Gas Production Measurement) on automaattinen mittausjärjestelmä kaasunmuodostuksen seurantaan

LABEMA – Life science and biotechnology expert

RF1-moduli

Puhdistusportti

Poistoventtiilikaasunäytteille

Pullokoot100, 250, 500 ja

1000 ml

LABEMA – Life science and biotechnology expert

Langattomuus / etämittaukset kukin RFS-yksikkö voi johtaa 50 modulia ja inkubointipaikat voivat sijaita

hajallaan: langattomuus tarjoaa joustavuutta

LABEMA – Life science and biotechnology expert

GPM-laitteiston etuja pullojen inkubointi ja mittaukset tuotantolämpötilassa nopea, tuloksia saadaan riittävästi jo 2-3 tunnissa: jos hiiva on kunnossa,

kaasua muodostuu nopeasti (1 bar / alle 140 min) automaattinen järjestelmä korkissa on painetunnistin, joka mittaa kumuloituvaa painetta ja lähettää

tiedot inkubointilämpötilan ja mittausaikaväli (esim. 30-90 sek) säädettävissä

LABEMA – Life science and biotechnology expert

Lisätietoja: timo.tumelius@labema.fi

Käytössäpanimoteollisuudessa, esim. Carlsbergillä useita satoja

Starter Pack

LABEMA – Life science and biotechnology expert

Kiitos tarkkaavaisuudesta!www.labema.fi

LABEMA – Life science and biotechnology expert

Labema Suomi 1988

Labema OÜ Tallinna 1998

UAB Labema Vilna 2017

SIA Labema Riga (syksy 2018)

Labema kartalla