View
12
Download
0
Category
Preview:
Citation preview
Kinolon Dirençli ve Duyarlı İnvaziv Escherichia coli Kan İzolatlarında
ST131/H30 klon/altklonunun Virülans ile İlişkisi
Öznur Gürpınar1, Ahmet İlbay2, Gökhan Metan3, Pınar Zarakolu3,
Özgen Köseoğlu Eser1
1Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Ankara 2Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi İç Hastalıkları Anabilim Dalı, Ankara
3Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dalı,
Ankara
Öznur Gürpınar
HÜTF Tıbbi Mikrobiyoloji AD
Yüksek Lisans Öğrencisi
Tübitak 1002 Hızlı Destek Projesi (Proje No: 116S009)
Hacettepe BAP
Escherichia coli ST131,
üriner sistem ve kan
dolaşımı enfeksiyonlarında
ortaya çıkan çok ilaca
dirençli bir klondur.
•O25b:H4 serotipi
•O16:H5 serotipi Japonya, Danimarka, Avustralya, İspanya, Pakistan
ve Fransa'da tespit edilmiştir.
•Serotiplendirilemeyen E.coli ST131 izolatları bulunmaktadır.
ST131 KLONU
E.coli ST131 suşunun 2008 yılında ilk tanımlanmasının ardından üç kıtadan
çeşitli ülkelerden çok sayıda bildirim yapılmıştır.
•Kuzey Amerika Kanada
•Avrupa Fransa, Portekiz, İspanya, İsviçre
•Asya Hindistan, Güney Kore, Kuveyt, Lübnan
ST131 EPİDEMİYOLOJİSİ
• İdrar yolu enfeksiyonu
• Bakteriyemi
• Karın içi ve yumuşak doku enfeksiyonları
• Menenjit
• Osteoartiküler enfeksiyonlar
• Miyozit
• Septik şok
ENFEKSİYON DAĞILIMI
Hacettepe Üniversitesi Erişkin Hastanelerinde kan yolu enfeksiyonu nedeniyle yatarak takip edilen erişkin hastaların kan kültürlerinden izole edilen kan E.coli izolatlarının
•Doğru tanımlanması
•Antimikrobiyal duyarlılıklarının belirlenmesi
•Antimikrobiyal direnç genlerinin ve virülans faktörlerinin belirlenmesi
•E.coli kan izolatlarının ST131 klon ve H30-alt klonlarının sıklığının belirlenmesi
E.coli izolatları
• Hacettepe Üniversitesi Erişkin Hastanesi yoğun bakım ve servis/acil hastalarında
üreyen tüm E. coli kan izolatları.
• 2015 (1 Ocak-31 Aralık) yılına ait toplam 157 klinik izolat
• MALDİ-TOF/Phoenix (BD, ABD), konvansiyonel yöntemler
Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı
Hastaların Klinik Özellikleri
Demografik bilgiler
• Yaş
• Cinsiyet
• Yatış süresi
Altta yatan hastalıklar
• Malignite
• Koroner arter hastalığı
• Diabetes mellitus
• Kronik böbrek yetmezliği
• Obezite
• Kronik akciğer hastalığı
• Kronik karaciğer hastalığı
İnvaziv İşlemler
•Üriner kateterizasyon
•Cerrahi
•Santral venöz kateter
•Mekanik ventilasyon
•Nazogastik sonda
•Arteriyel kateter
•Gastronomi
Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi
Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dalı
Antibiyotik Duyarlılık Testleri
•Ampisilin
•Ampisilin/sulbaktam
•Seftriakson
•Gentamisin
•Trimetoprim-Sulfametokzasol (Bioanalyse, Ankara, Türkiye)
•Siprofloksasin
•İmipenem (Bioanalyse, Ankara, Türkiye)
Disk
Difüzyon
Testi
Antibiyotik
Gradiyent testi
• 2ml Mueller Hinton Buyyon
• 0.5 McFarland
• Mueller Hinton Agar besiyeri
GSBL varlığı
•Sefotaksim
•Sefotaksim/klavulonik asit
•Seftazidim
•Seftazidim/klavulonik asit
Karbapenemaz varlığı
•Ertapenem
•Ertapenem/boronik asit
Fenotipik Yöntemler
Kombine disk difüzyon testi
Antibiyotik Direnç Genlerinin Belirlenmesi
Karbapenem direnç genlerinin PCR ile belirlenmesi
• blaNDM F- 5′- GGT TTG GCG ATC TGG TTT TC- 3′
R-5′- CGG AAT GGC TCA TCA CGA TC- 3′
(621 bp)
• blaKPC F- 5′- CGT CTA GTT CTG CTG TCT TG- 3′
R-5′- CTT GTC ATC CTT GTT AGG CG- 3′
(798 bp)
• blaOXA-48 F- 5′- GCG TGG TTA AGG ATG AAC AC- 3′
R-5′- CAT CAA GTT CAA CCC AAC CG- 3′
(438 bp)
• blaVIM F- 5′- GAT GGT GTT TGG TCG CAT A- 3′
R- 5′- CGA ATG CGC AGC ACC AG - 3′
(390 bp)
• blaIMP F- 5′- GGA ATA GAG TGG CTT AAY TC- 3′
R- 5′- TCG GTT TAA YAA AAC AAC CAC C- 3′
(232 bp)
ThermalCycler (Global Genomics
Partner, MyGenie96)
10 dakika 94 °C
30 saniye 94 °C
40 saniye 55 °C
50 saniye 72 °C
Amplifikasyonun sonunda tüplerin 72
°C’de 5 dakika bekletilmesinin ardından
reaksiyon sonlandırıldı.
X 36 döngü
Loirel Poirel 2011 Diag Microbiol Infect Dis
GSBL Direnç Genlerinin Belirlenmesi
blaCTX-M F-5- ATAAAACCGGCAGCGGTGG- 3
blaCTX-M R-5- GAATTTTGACGATCGGGG- 3
(909 bp)
ThermalCycler (Global Genomics Partner,
MyGenie96)
5 dakika 94 °C
20 saniye 95 °C
30 saniye 51 °C
30 saniye 72 °C
Amplifikasyonun sonunda tüplerin 72 °C’de
3 dakika bekletilmesinin ardından reaksiyon
sonlandırıldı.
blaCTX-M-15 F-5- ATAAAACCGGCAGCGGTGG- 3
universal
reverse primer
5- GAATTTTGACGATCGGGG- 3
(483 bp) Colpan A, CID 2013
ST131 klonunun belirlenmesi
• O25pabBspe.F 5-TCCAGCAGGTGCTGGATCGT-3
• O25pabBspe.R 5-GCGAAATTTTTCGCCGTACTGT-3
(347 bp)
• trpA2.F 5-GCTACGAATCTCTGTTTGCC-3
• trpA2.R 5-GCAACGCGGCCTGGCGGAAG-3
(427 bp)
ThermalCycler (Global Genomics
Partner, MyGenie96)
4 dakika 94 °C
5 saniye 94 °C X 30
döngü
10 saniye 65 °C
Amplifikasyonun sonunda tüplerin 72
°C’de 5 dakika bekletilmesinin ardından
reaksiyon sonlandırıldı.
Colpan A, CID 2013
H30/H30-Rx alt klonlarının belirlenmesi
• fimH30 F-5-CCGCCAATGGTACCGCTATT-3
• fimH30 R-5-(CAGCTTTAATCGCCACCCCA-3
(354 bp)
• fimH30Rx F-5-GGTTGCGGTCTGGGCA-3
• fimH30Rx R-5-CAATATCCAGCACGTTCCAGGTG-3
(194 bp)
ThermalCycler (Global Genomics
Partner, MyGenie96)
5 dakika 94 °C
20 saniye 95 °C X 30
döngü
30 saniye 51 °C
Amplifikasyonun sonunda tüplerin 72 °C’de
30 saniye bekletilmesinin ardından
reaksiyon sonlandırıldı.
usp (üropatojen-spesifik protein)
• F-ACATTCACGGCAAGCCTCAG
• R-AGCGAGTTCCTGGTGAAAGC
(440 bp)
papA (adezin)
• F-ATGGCAGTGGTGTCTTTTGGTG
• R-CGTCCCACCATACGTGCTCTTC
(717 bp)
ompT (dış zar reseptörü)
• F-ATCTAGCCGAAGAAGGAGGC
• R-CCCGGGTCATAGTGTTCATC
(559 bp)
iutA (aerobaktin reseptörü)
• F-GGCTGGACATCATGGGAACTGG
• R-CGTCGGGAACGGGTAGAATCG
(302 bp)
Virülans Genlerinin Belirlenmesi
Hasta sayısı; 152
Hastaların yaş ortalaması; 60.3±18.6
Hastanede yatış süresi; ortalama 25.9±35.1
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
KADIN ERKEK
%[VALUE] s: 86 %[VALUE]
s: 66
Cinsiyet dağılımı
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100[CATEGORY
NAME];
%[VALUE] s: 81
[CATEGORY NAME];
%[VALUE] s: 75
64
Hasta
Ex
Mortalite
%42
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Malignite
Koroner Arter Hastalığı
Diabetes Mellitus
Kronik Böbrek Yetmezliği
Obezite
Kronik Akciğer Hastalığı
Kronik Karaciğer Hastalığı
%[VALUE]; s=91
%[VALUE]; s=68
%[VALUE]; s=39
%[VALUE]; s=28
%[VALUE]; s=22
%[VALUE]; s=11
%[VALUE]; s=3
ALTTA YATAN HASTALIKLAR MALİGNİTE %59.9 s: 91
Lösemi %13.2; s: 12
Lenfoma
%12.1; s:11
Solid Tümör
%73.6; s:67
İmmünsupresyon Steroid kullanımı: %17.8
s=27 Transplantasyon
Kemik İliği TÜ: %3.9 s=6 Solid Organ TÜ:%3.3 s=5 Diğer: %2.6 s=4
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Üriner Kateterizasyon
Cerrahi
Santral Venöz Kateter
Mekanik Ventilasyon
Nazogastik Sonda
Arteriyel Kateter
Gastronomi
%[VALUE]; s=56
%[VALUE]; s=40
%[VALUE]; s=31
%[VALUE]; s=18
%[VALUE]; s=13
%[VALUE]; s=8
%[VALUE],0; s=6
İNVAZİV İŞLEMLER
CERRAHİ %26.3 s=40
Acil %17.5; s=11
Elektif
%70.0; s=28
Bilinmeyen
% 2.5; s= 1
0102030405060708090
100
%[VALUE], s=37
%[VALUE], s=22 %[VALUE], s=20 %[VALUE], s=13 %[VALUE], s=10 %[VALUE], s=8
%[VALUE], s=4
Bakteriyemi öncesi antibiyotik kullanımı %46.1 s=70 Acil servis s=63 (%40.4)
Yoğun bakım ünitesi s=29 (%18.1)
Onkoloji s=25 (%16.0)
Cerrahi servisler s=20 (%13.0)
Dahiliye servisleri s=15 (%10.0)
Kemik iliği TÜ s= 3 (% 1.9)
Enfeksiyon hastalıkları servisi
s= 1 (% 0.6)
İzolatların ürediği hastaların servisleri
Antimikrobiyal Direnç
ANTİMİKROBİYAL
İLAÇ (Disk Difüzyon Testi)
DİRENÇ
ORANI
%
Ampisilin
65
Ampisilin/sulbaktam 23
Seftriakson 23.5
Gentamisin 32
Trimetoprim-
Sulfametokzasol
37
Siprofloksasin (Antibiyotik gradiyent testi)
0.05
≥32
0.02 - ≥32
53.5
İmipenem (Antibiyotik gradiyent testi)
0.20 0.25 0.125-0.281 0
ANTİMİKROBİYAL
İLAÇ
MİK50
(µg/ml)
MİK90
(µg/ml)
MİK
ARALIĞI
(µg/ml)
DİRENÇ
ORANI
%
Fenotipik Yöntemler
Fenotipik olarak GSBL yapımı %53.5
Kombine disk difüzyon testi
CAZ/CAZ-CLA
CTX/CTX-CLA
Antibiyotik diskleri
Seftazidim diski (30 µg)
Sefotaksim (30 µg)
Klavulonik asit (10µg)
Fenotipik Yöntemler
Fenotipik olarak karbapenemaz yapımı 0
Kombine disk difüzyon testi
ERT/ERT-BA
Antibiyotik diskleri ve boronik asit
Ertapenem diski (10 µg)
Boronik asit (400 µg)
[CATEGORY NAME] %21; 33
[CATEGORY NAME] %3.2; 5
[CATEGORY NAME] %1.3; 2
KARBAPENEM DİRENÇ GENLERİ
blaOXA-48 blaVIM blaNDM blaKPC blaIMP
KPC, 798bp
VIM, 390bp
IMP, 232bp OXA-48, 438bp
NDM, 621bp
% 49,7 (s=78) % 45,2 (s=71)
GSBL Direnç Genleri
[CATEG
ORY
NAME]
%70.7;
[VALUE
]
[CATEG
ORY
NAME];
%29.3,
[VALUE
]
H30 VARLıĞı
[CATEG
ORY
NAME]
%99.4;
[VALUE]
[CATEG
ORY
NAME];
%0.6,
[VALUE]
ST131 VARLıĞı
H30, 354bp
trpA, 427bp
ST131, 347bp
H30-Rx
klonu
%97; 69
H30RX VARLıĞı
[CATEGORY
NAME];
[VALUE]
[CATEGORY
NAME];
[VALUE]
[CATEGORY
NAME];
[VALUE]
[CATEGORY
NAME];
[VALUE]
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
papA usp iutA ompT
Virülans genleri
Virülans Genleri
Virülans Genleri
• Bu çalışmada ST131 ile enfekte hastaların sıklıkla bakteriyemi öncesi antibiyotik kullanım
öyküsü olan, invaziv girişim uygulanan, hastanede yatış süresi uzun olan immünsupresif
hastalar olduğu görülmektedir.
• ST131 klonuna sahip kan izolatlarında, karbapenemazlar arasında yer alan blaOXA-48 en sık
görülen enzim, ompT ve iutA ise en sık görülen virülans genleri olarak belirlenmiştir. ST131
pozitif kan izolatlarında H30-Rx ve CTX-M-15 pozitifliğinin yüksek, ayrıca H30-Rx
izolatlarının hepsinin CIP dirençli olduğu saptanmıştır.
• Bu çalışma, hastanemiz kan izolatlarında E.coli ST131 klonuyla beraber H30Rx altklonunun
hakimiyetini, ayrıca bu alt klon ile direnç ve virülansın başarılı birlikteliğinin var olduğunu
işaret etmektedir.
TEŞEKKÜRLER
Recommended