View
230
Download
0
Category
Preview:
Citation preview
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
1/23
LAPORAN PRAKTIKUM BIOTEKNOLOGI FARMASI
MINGGU - 2
ISOLASI PLASMID, PURIFIKASI HASIL PCR, LIGASI, DIGESTI DAN ISOLASI
FRAGMEN DNA
Kelompok 8
BIOTEKNOLOGI KELAS A1
Agnes Rebecca Novalia 1306480862
Chavella Avatara 1306402545
Gerardo Laudus 130641134
!ilda Nur A"i"a 13063620Lid#a $arti%a 13063601
&etah 'utri &utia 13063646
&err# (lora 13063)631Rah*a +uci 13063))120
UNIERSITAS INDONESIA
FAKULTAS FARMASI
DEPOK
2!1"
ISOLASI PLASMID
I# PENDAHULUAN
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
2/23
+etia, organis*e *e*ili%i -NA #ang terleta% dala* inti sel atau nucleus #ang
disebut sebagai -NA %ro*oso*al. begitu ,ula ba%teri/ +elain dna %ro*oso*al ba%teri
uga *e*ili%i -NA e%stra%ro*oso*al/ 'las*id *eru,a%an -NA e%stra%ro*oso*al
#ang berbeda %ara%tern#a dengan -NA %ro*oso*al/ entu% ,las*id beru,a *ole%ul
-NA utas ganda sir%uler #ang beru%uran %ecil dan berat se%itar 1300 %b +nustad dan
+i**ons 2003. terda,at didala* sito,las*a dan da,at *elalu%an re,li%asi secara
autono* %arena adan#a suatu urutan -NA sebagai asal re,li%asi dan ,las*id uga
*eru,a%an salah satu vector dala* ,roses ,eng%lonan gen/
-ala* bidang biote%nologi. te%ni% %loning *i%roba *eru,a%an salah satu te%ni%
#ang u*u* dila%u%an untu% *enghasil%an ,rodu% hasil *ere%a#asa geneti%a/ 'ada
te%ni% ini. se%uens -NA #ang diingin%an disisi,%an %e dala* ve%tor sebelu* nantin#a
di,er%enal%an %e,ada sel/ e%tor #ang biasa diguna%an adalah ,las*id ba%teri/
'las*id ba%teri #ang biasan#a diguna%an dala* te%nologi -NA re%o*binan
*engguna%an E. coli sebagai host . sehingga dala* re%a#asa geneti%a ,las*id sering
diguna%an sebagai ve%tor untu% *e*baa *ole%ul -NA #ang diingin%an %e dala*
suatu sel inang/ 'enggunaan ,las*id dala* -NA re%o*binan dila%u%an %arena ,las*id
*e*ili%i tiga region #ang ber,eran ,enting untu% -NA %loning. #aitu. re,lication origin.
*ar%er #ang *e*ung%in%an adan#a sele%si biasan#a gen resisten antibioti% dan
region #ang *a*,u disisi,i oleh 7rag*en -NA dari luar/ +alah satu %ara%teristi%
,las*id. #aitu *e*ili%i R9 Origin of replication/ 9nti dari isolasi ,las*id ba%teri
adalah *enghancur%an *e*bran sel sehingga se*ua organel sel da,at %eluar :usu7
2001/
9solasi ,las*id adalah a%tivitas #ang *ela%u%an ,eng%lonan gen/ salah satu *etode
#ang ban#a% diguna%an dala* isolasi ,las*id saat ini adalah *etode alkaline lysis/
&etode ini ,erta*a %ali di,ubli%asi%an oleh irnboi* dan -oll# tahun 1) Nucleic
Acids Res/ ). 15131523/ &etode al%aline l#sis secara garis besar terbagi %e dala*
ena* taha,. #a%ni taha, k$l%&'()& *(k%e+& ( pem(e( )el, %(.(p +e)$)pe)& )el.
%(.(p l&)&) )el ( e(%$+()& DNA. %(.(p e%+(l&)()&, %(.(p p$+&/&k()&. dan %(.(p
pemek(%( DNA/ +ecara u*u*. isolasi ,las*id bertuuan *enge%stra% ,las*id dan
*e*isah%ann#a dari berbagai %o*,onen selular ba%teri lainn#a. se,erti ,rotein. le*a%.
http://nar.oxfordjournals.org/cgi/content/abstract/7/6/1513http://nar.oxfordjournals.org/cgi/content/abstract/7/6/1513http://nar.oxfordjournals.org/cgi/content/abstract/7/6/1513http://nar.oxfordjournals.org/cgi/content/abstract/7/6/1513
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
3/23
RNA. dan -NA %ro*oso*al/ $eberhasilan taha, isolasi bergantung ,ada su*ber bahan.
%onsentrasi bahan. stabilitas dan %adar %e*urnian ,rodu% a%hir/
II# PRINSIP
'rinsi, dala* *ela%u%an isolasi ,las*id adalah ,enghancuran dinding sel. lisis sel.
,e*bersihan debris sel. dan ,resi,itasi -NA/ 'rinsi,,rinsi, tersebut a%an dibahas lebih
lanut dala* bagian ,e*bahasan
III# TU0UAN
9solasi;e%stra%si -NA ,las*id bertuuan untu% *e*,eroleh -NA ,las*id dengan
%ualitas %e*urnian #ang bai% *engguna%an *etode *odi7i%asi Al%alin Lisis atau
*engguna%an %olo*%it
I# ALAT DAN BAHAN
1# Al(%
• +entri7uge *i%ro
•
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
4/23
P+o%okol Me%oe Alk(l& L&)&)
1/ +el >/coli -!5? ,DC1 ditu*buh%an dala* *ediu* LBA*, 100 =g;*l ,ada
3)EC secara aerobi% sela*a se*ala*/
2/ +eban#a% 8 tabung *i%ro dia*bil dan diberi label ,DC1 ,ada 4 buah tabung/
&asu%%an 1.5 *l %ultur ba%teri %e dala* tabung *i%ro/
3/ +el ba%teri di%u*,ul%an *elalui sentri7usi ,ada sentri7uge *i%ro ,ada 10000r,*
sela*a 2 *enit/ +u,ernatan dibuang sa*,ai tinggal ,eletn#a saa/
4/ 'ellet diresus,ensi%an dala* 110 =L larutan A dan dia*%an ,ada suhu ruang sela*a
510 *enit/5/ Larutan #ang telah disia,%an terdiri dari ca*,uran 4.25 *l d!2 sterilF 0.5 *l 10
+-+ F 0.25 *l 4N Na!
6/ +eban#a% 200 =L larutan dita*bah%an ,ada *asing*asing tabung *i%ro.
%e*udian tabung dibola%bali%%an dan secara ,erlahan terca*,ur%an sa*,ai teradilisis larutan *enadi bening dan %ental
)/ $e*udian diin%ubasi ,ada 0EC diatas ,ecahan es sela*a 510 *enit/
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
5/23
$ultur disia,%an dengan *engino%ulasi%an ba%teri %e *edia L/ Lalu. diin%ubasi
sela*a 24 a* sa*bil disha%ing/ $ultur ba%teri di*asu%%an %e tabung *i%ro dan
disentri7ugasi%an sela*a 30 deti% dengan %ece,atan 11/000 r,*/ +u,ernatan dibuang dan
,ellet diresus,ensi%an dengan bu77er A1/ Ca*,uran divorte/ u77er A2 dita*bah%an %e
dala* sus,ensi dan di%oco% ,erlahan tida% *engguna%an vorte/ $e*udian. bu77er A3
dita*bah%an dan di%oco% ,erlahan sa*,ai sus,ensi berarna %e,utihan/ Ca*,uran
disentri7ugasi sela*a 5 H 10 *enit dengan %ece,atan 11/000 r,*/ Lisat *urni
di*asu%%an %e minispin column-centrifuge/ Lalu. lisat dicuci dengan bu77er A4 atau
wash bu77er/ $e*udian ca*,uran disentri7ugasi/ Ca*,uran %e*udian di%ering%an dan
disentri7ugasi %e*bali/ u77er elusi dita*bah%an dan diin%ubasi sela*a 1 *enit/
Ca*,uran disentri7ugasi
I# ALUR KER0A
/coli -!5? ,DC1 di dala*
*ediu* LBA*, ,ada suhu 3)0c sela*a se*ala*
TAHAP
PEMANENAN
SEL
A*bil 8 tabung *i%ro dan diberi label 'uc1.
ta*bah%an 1.5 *l %ultur ba%teri %e dala* 4
buah tabun *i%ro
$u*,ul%an a%teri *elalui sentri7usi ,ada sentri7uge
*i%ro ,ada 10000r,* sela*a 2 *enit/ +u,ernatan dibuang
sa* ai tin al eletn a sa a/
TAHAP
RESUSPENSI
'ellet diresus,ensi%an dala* 110 =L larutan A
dan dia*%an ,ada suhu ruang sela*a 510
*enit/
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
6/23
II# Pem*(.()(
in%ubasi%an ,ada 0EC diatas ,ecahan es sela*a
510 *enit/
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
7/23
'las*id dari ba%teri E. coli -!5? #ang a%an di,eroleh sebagai hasil isolasi
adalah ,DC1/ Dntu% *enda,at%an ,las*id tersebut *a%a sel ba%teri harus dihancur%an
terlebih dahulu %e*udian dila%u%an ,uri7i%asi untu% *e*bersih%an ,las*id dari
%o*,onen sel lainn#a/ Dntu% *ela%u%an isolasi ini *a%a *etode #ang a%an diguna%an
adalah al%alin lisis/
-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
8/23
E.coli.,e*anenan >/coli. dan ,e*urnian dari %onta*inan lain *elalui *etode lisis al%ali/
'las*id dari ba%teri E. coli -!5? #ang a%an di,eroleh sebagai hasil isolasi adalah
,DC1/
I3# DAFTAR PUSTAKA
$ar,. Gerald/ 2010/ Cell and Molecular Biology/ -enver. A+ @ :ohns Iile# J +ons Co/
&ali%. A/ 2016/ 'enuntun $era @ 9solasi 'las*id dan $loning -NA/ -e,o% @ (a%ultas
(ar*asi Dniversitas 9ndonesia
ron 77ect o7 !eat +hoc%
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
9/23
PURIFIKASI HASIL PCR
I# PENDAHULUAN
'uri7i%asi hasil 'CR *eru,a%an *etoda untu% *enga*,li7i%asi 7rag*en -NA
s,esi7i% dala* u*lah besar secara in vitro dari seu*lah %ecil te*,late aal/ 'erta*a
%ali dite*u%an oleh $ar# &ullis ,ada tahun 183/ 'ercobaan ini *engguna%an 'CR
%arena 'CR *e*ili%i %euta*aan sebagai beri%ut @
-a,at *enga*,li7i%asi 7rag*en -NA dala* a%turelati7 sing%at 2 a* -NA te*,late tida% ,erlu dala* %eadaan *urni
'rodu% 'CR da,at di digesti dengan en"i* restri%si.se%uen atau di %lon
&a*,u *enga*,li7i%asi single -NA *ole%ul e/g/single s,er*
'uri7i%asi hasil 'CR dila%u%an dengan *engguna%an Gel;'CR -NA
(rag*ents >%straction $it dari Geneaid 2008/ 'rosesn#a adalah ,enguraian
gel. ,engi%atan -NA. ,encucian -NA. dan elusi -NA/
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
10/23
III# TU0UAN
• 'uri7i%asi hasil 'CR adalah te%ni% #ang bertuuan untu% *e*,eroleh -NA hasil 'CR
-NA a*,li%on #ang *urni/
• &e*aha*i 'uri7i%asi !asil 'CR
I# ALAT DAN BAHAN
I#1# Al(%
+entri7us *i%ro
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
11/23
*engguna%an ,isau silet atau cutter #ang baru dan steril/ 9risan gel di,indah%an %e dala*
tabung *i%ro 1/5 *L baru dan steril/ 300 L da,ar -( dita*bah%an lalu di,uri7i%asi
dengan vorte dan diinbu%asi ,ada 55600C sela*a 1015 *enit hingga irisan gel terlarut
se*,urna/ +ela*a in%ubasi tabung *i%ro dibola%bali% setia, 23 *enit/ $e*udian
ca*,uran tersebut didia*%an dingin ,ada suhu %a*ar/ Ca*,uran tersebut di,i,et dan
di*asu%%an %e dala* %olo* -( #ang ter,asang ,ada tabung ,ena*,ang/ 'ada %ece,atan
*a%si*u* 13/000 r,* disentri7usi%an sela*a 30 deti%/ Cairan #ang terta*,ung
dibuang dan %olo* -( dite*,at%an %e*bali ,ada tabung ,ena*,ung/ 600 L da,ar
,encuci ash 'uffer #ang telah dita*bah etanol dita*bah%an dan disentri7usi %e*bali
,ada %ece,atan *a%si*u* sela*a 30 deti%/ Cairan #ang ter%u*,ul dibuang %e*bali dan
%olo* -( dite*,at%an %e*bali %e dala* tabung ,ena*,ung. ,ada %ece,atan *a%si*u*
sela*a 3 *enit disentri7us sa*,ai *e*bran %olo* *engering/ $olo* -( #ang telah
%ering di,indah%an %e dala* tabung *i%ro 1/5 *L #ang baru dan steril/ $e*udian 25 L
a%uabides steril dita*bah%an %e dala* bagian tengah dari *e*bran %olo* -( agar
,engenda,an ,ada dinding %olo* da,at dihindari/ iar%an a%uabides tersera,sela*a 2
*enit %e*udian ,ada %ece,atan *a%si*u* disentri7us sela*a 1 *enit untu%
*enda,at%an -NA *urni/ -NA disi*,an ,ada suhu 20oC/ -NA hasil ,uri7i%asi dia*ati
secara visual. lalu -NA dianalisa %e*bali dengan ele%tro7oresis agaros gel *ini/ :i%a
in7or*asi se%uens -NA a*,li%on di,erlu%an. *a%a da,at dila%u%an se%uensing -NA/
I# ALUR KER0A
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
12/23
Hasil PCR +loading buferdielektroforesiskan di gel
agarosa
Pita angdiinginkandi!otong"
di!inda#kanke ta$%ng
&ikro
Da!ar D'dita&$a#kan lal%
di!%ri(kasi)orte*"
ke&%diandiink%$asi
Didinginkan"di!i!et" di&as%kkan
ke kolo& D'
Sentrif%gasidi
kee!atan&aksi&%&
,-./000r!&1 " .0
detik
Cairanterta&!%ng
di$%ang"ta&$a#kan
da!ar !en%idan etanol"
sentrif%sike&$ali
Cairan terk%&!%ldi$%ang" te&!atkan
di ta$%ng!ena&!%ng"
sentrif%gasi sa&!ai&e&$ran&engering
Kolo& D' di!inda#kan"ta&$a#kan ak%a$idessteril ke $agian tenga#
&e&$ran kolo&" $iarkan 2&enit" sentrif%gasi
kee!atan &aksi&%&
Dida!atkanDNA" disi&!andi s%#% 20oC"
dia&ati"dianalisisdengan
elektroforesisagaros gel &ini
*&oee+#4om, 2!1"
II# PEMBAHASAN
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
13/23
ila hasil ,uri7i%asi *enunu%an ,ita tunggal #ang u%urann#a sesuai #aitu tida%
teradi ,erubahan u%uran setelah dila%u%an ,uri7i%asi *enunu%an baha ,uri7i%asi
berhasil dila%u%an %arena sa*,el tida% *engala*i degradasi/ 'ita hasil ,uri7i%asi terlihat
lebih tebal dan lebih terang #ang *engindi%asi%an baha ,engotor telah berhasil
dibersih%an atau dihilang%an/
T(*el 2# M()(l(. 5(6 )e+&6 %e+7(& ( pe5ele)(&(5(
&asalah 'en#elesaian
!asil rendah +el tida% lisis secara se*,urna. terlalu ban#a% sel ba%teri
#ang diguna%an
'roses ,uri7i%asi -NA tida%
beralan dengan bai%
1/ Adan#a %onta*inasi RNA sebelu* *engguna%an
bu7er '&1. ,eri%sa %e*bali RNase A #ang
dita*bah%an a,a%ah *asih la#a% atau sudah
%edaluarsa. dan uga terlalu ban#a% sel ba%teri #ang
dguna%an
2/ Adan#a %onta*inasi -NA geno* angan
*engguna%an sa*,el %ultur #ang sebelu*n#a sudah
ditu*buhi ba%teri
$olo* tersu*bat
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
14/23
10440305. htt,@;;d/doi/org;10/1016;+104403050000122)/
htt,@;;/sciencedirect/co*;science;article;,ii;+104403050000122)
>ng/bioneer/co*/ 2016/ *ccuBead+ ,ilica Coated Magnetic Bead / PonlineQ Available
at@ htt,@;;eng/bioneer/co*;,roducts;'rotein;&agneticeadstechnical/as,
PAccessed A,r/ 2016Q/
&ali%. A*arila/ 2015/ Penuntun era PC/$ Purifikasi PC/$ dan ,0,-P*!E / -e,o%@
Laboratoriu* &i%robiologi dan iote%nologi (a%ultas (ar*asi D9/
iagin. +/ n/d// !enomic 0&* Purification/ 1st ed/ Peboo%Q Available at@
htt,@;;science/*arshall/edu;*urra#e;lin%s207or20students;sa*antha
20Miagin20*ethod/,d7 PAccessed A,r/ 2016Q/
!ida#atulloh. +#ari7/ PC/ and Primer 0esign/
htt,s@;;/acade*ia/edu;))22484;'CRSandS'ri*erS-esign dia%ses ,ada
+abtu. 0 A,ril 2016 ,u%ul 22/01
AM*arina. Arie/. d%%/ loning 1ragmen 0&* Mikrosatelit *2uilaria malaccensis/
htt,s@;;/acade*ia/edu;162085;$loningS(rag*enS-NAS&i%rosatelitSAMuil
ariaS*alaccensis dia%ses ,ada +abtu. 0 A,ril 2016 ,u%ul 22/35
PEMOTONGANDIGESTI DNA PLASMID DENGAN EN9IM
RESTRIKSI
I# PENDAHULUAN
http://dx.doi.org/10.1016/S1044-0305(00)00122-7http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1044030500001227https://www.academia.edu/7722484/PCR_and_Primer_Designhttps://www.academia.edu/9162085/Kloning_Fragmen_DNA_Mikrosatelit_Aquilaria_malaccensishttps://www.academia.edu/9162085/Kloning_Fragmen_DNA_Mikrosatelit_Aquilaria_malaccensishttp://dx.doi.org/10.1016/S1044-0305(00)00122-7http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1044030500001227https://www.academia.edu/7722484/PCR_and_Primer_Designhttps://www.academia.edu/9162085/Kloning_Fragmen_DNA_Mikrosatelit_Aquilaria_malaccensishttps://www.academia.edu/9162085/Kloning_Fragmen_DNA_Mikrosatelit_Aquilaria_malaccensis
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
15/23
-NA hasil isolasi *asih beru,a se%uens #ang ,anang dengan 7rag*en7rag*en
#ang saling beri%atan/ 'e*otongan dengan suatu en"i* ,ada -NA tersebut dila%u%an
untu% *enghasil%an se%uens -NA tertentu #ang s,esi7i%/ >n"i* retri%si da,at *engenali
situs ,engenalan ,ada -NA secara s,esi7i% dan *e*otongn#a secara s,esi7i%/-igesti *eru,a%an ,roses ,e*otongan 7rag*en -NA dengan *engguna%an suatu
en"i* %husus #aitu en"i* restri%si/ >n"i* restri%si #ang diguna%an #aitu en"i* restri%si
endonu%lease #ang a%an *engenali dan *e*otong 7rag*en -NA ,ada se%uens #ang
s,esi7i%/ (rag*en #ang di,otong a%an digabung%an dengan suatu 7rag*en -NA lain
#ang ber,eran sebagai ve%tor/ e%tor *eru,a%an *ole%ul -NA #ang da,at bere,li%asi
secara autono* #ang a%an *e*7asilitasi ,roses *ani,ulasi dan identi7i%asi *ole%ul
-NA re%o*binan #ang terbentu% $lug J Cu**ings. 14/
n"i* restri%si ti,e 9 *engenali suatu -NA ,ada suatu
lo%asi secara aca% ,ada bebera,a ara% dari situs ,engenalann#a/ >n"i* restri%si ti,e 99
*engenali suatu se%uens s,esi7i% dan *e*otong dengan te,at %edua untai di dala*
se%uens/ >n"i* ti,e ini. situs ,engenalann#a beru,a ,alindro*i% #ang *e*baca secara
sa*a arah 5T %e 3T ,ada untai %o*,le*enter/ >n"i* restri%si ti,e 999 *engenali urutan
-NA #ang s,e7isi% dan *e*otong di de%at situs ,engenalann#a. biasan#a se%itar 25 b,/
-ari 3 enis. en"i* ti,e 99 #ang sering diguna%an ,ada te%ni% geneti%a/ +atu diantaran#a
en"i* #ang dite*u%an berasal dari >/coli dan telah diberi na*a >coR9 'ierce. 2002/
II# PRINSIP
'e*otongan 7rag*en -NA *engguna%an en"i* restri%si #aitu en"i* restri%si
endonu%lease #ang a%an *engenali dan *e*otong 7rag*en -NA ,ada se%uens #ang
s,esi7i%/ +itus ,engenalann#a beru,a ,alindro*i% #ang *e*baca secara sa*a arah 5T %e
3T ,ada untai %o*,le*enter dan *enghasil%an ,otongan uung %ohesi7 sticky end dan
uung rata 'lunt end /
III# TU0UAN
'e*otongan -NA 'las*id dengan en"i* restri%si bertuuan untu% *e*,eroleh
7rag*en -NA ,las*id #ang tergolong *enadi linier agar sia, untu% disisi,i dengan
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
16/23
7rag*en -NA sisi,an/ n"i* endonu%lease restri%si >R@ a*!9. >coR9
c/ u77er *asing*asing >R
d/ d!2 steril atau 1 ,! 8e/ +tandar u%uran *ole%ul -NA
Al(%
a/ 'i,et *i%ro 020 =l b/ 'i,et *i%ro 20200 =l
c/
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
17/23
A$il DNA !UC-3 2 4l" as%kkan ke ta$%ng ikro
Mas%kkan en5i restriksi
Ta$a#kan 2 4l -0* $%6er
Ta$a#kan dH27 steril 8 4l
Ink%$asikan !ada .9oC: ini% 2 ;a
2/ 9n%ubasi%an ,ada 3)oCF *ini*u* 2 a*/ 9ngat tida% se*ua en"i* restri%si o,ti*u*
,ada suhu 3)oC/ sela*a *enunggu in%ubasi. sia,%an gel/3/
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
18/23
II# PEMBAHASAN
>n"i* restri%si #ang diguna%an ,ada ,ra%ti%u* ini adalah >coR9 dan a*!9/
>n"i* >coR9 *e*otong -NA ,ada bagian #ang urutan basan#a adalah GAA
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
19/23
'e*otongan 7rag*en -NA *engguna%an en"i* restri%si #aitu en"i* restri%si
endonu%lease #ang a%an *engenali dan *e*otong 7rag*en -NA ,ada se%uens #ang
s,esi7i%/ >n"i* >coR9 *e*otong -NA ,ada bagian #ang urutan basan#a adalah
GAA
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
20/23
dengan uung tu*,ul 'lunt end /
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
21/23
DNA =ektor
Ta$a#kan DNA Sisi!an
T8 DNA Ligase - 4l
Ta$a#kan 8 4l -0?-
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
22/23
II# PEMBAHASAN
'ada ,ra%ti%u* ligasi. en"i* #ang diguna%an untu% ligasi adalah n"i* ini *eng%atalisasi ,e*bentu%an
i%atan %ovalen antara gula dengan 7os7at dari nu%leotida #ang berde%atan. sehingga
terbentu% i%atan ,hos,odiester di*ana satu nu%leotida *e*ili%i uung 5T ,hos,hate
bebas dan nu%leotida lain *e*ili%i uung 3T gugus hidro%sil/ Ligasi berhasil bila %eduauung 7rag*en -NA #ang a%an disa*bung%an ber%o*,le*en/
&e%anis*e
8/18/2019 Laporan Praktikum Bioteknologi Ligasi, Digesti.docx
23/23
se%itar 8/ :i%a dilarut%an dala* d!2 ada ,eluang untu% berubahn#a ,!/ 9ni da,at teradi
%arena -NA dan RNA *e*ili%i si7at asa* le*ah. #ang dala* a%tu la*a da,at
*en#ebab%an degradasi -NA;RNA/
III# KESIMPULAN
Ligasi *eru,a%an ,en#a*bungan dua uung -NA #ang se*ulan#a ter,otong oleh
en"i* ligase/ >n"i* ligase #ang diguna%an adalah ngleood cli77s/
&ali%. A/ 2016/ Protokol era Bioteknologi/ -e,o%@ Laboratoriu* &i%robiologi dan
iote%nologi (a%ultas (ar*asi Dniversitas 9ndonesia/
'ierce. A/ 2002/ !E&E4"C, * Conceptual *pproach$ 5th Ed / 'a,erbac%/
Recommended