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Mtodos de coleta, preparo,
e colorao de material em
citologia crvico-vaginal.
Citologia normal da crvice
uterina
Jacqueline Plewka
UNIOESTE PR
DEZ/2011
http://www.teslasociety.com/pop.jpg
EXAME DE PAPANICOLAOU
COLETA
CITOLOGIA CONVENCIONAL (esfoliativa, abrasiva)
CITOLOGIA EM MEIO LQUIDO
CONFECO DO ESFREGAO
FIXAO
COLORAO DE PAPANICOLAOU
MONTAGEM DAS LMINAS
ESCRUTNIO DAS LMINAS
INTERPRETAO/RESULTADOS
Anatomia do Aparelho Reprodutor
Feminino
Fonte: McCkee, 1997.
Nulpara: 6 a 7 cm e 4 cm
Multpara: 7 a 8 cm e 5 cm
Espessura: 25 a 30 cm
Peso varia de 40 a 50 gramas nulparas e
de 60 a 70 gramas nas multparas
Colo Uterino
www.fcm.unicamp.br/departamentos/anatomia/lamgin1.html
Epitlio Escamoso Estratificado
Epitlio Escamoso Estratificado
Fonte:www.screening.iarc.fr/atlashisto
http://screening.iarc.fr/atlashisto_detail.php?flag=1&lang=4&Id=hexocole&cat=B2
Epitlio Cilndrico Endocervical
Fonte:www.screening.iarc.fr/atlashisto
http://screening.iarc.fr/atlashisto_detail.php?flag=1&lang=4&Id=00003828&cat=B3
www.fcm.unicamp.br/departamentos/anatomia/lamgin1.html
Fonte: Longatto, 2000.
Juno Escamo Colunar - JEC
www.fcm.unicamp.br/departamentos/anatomia/lamgin1.html
PUBERDADE FASE FRTIL MENOPAUSA
Localizao da JEC conforme a idade,
estado hormonal (gravidez, ACO)
METAPLASIA
Reprogramao gentica das clulas tronco em tecido epitelial ou de clulas mesenquimais do tecido conetivo
Processo reversvel
Colo uterino: substituio fisiolgica do epitlio colunar evertido na ectocrvice epitlio escamoso recm-formado de clulas subcolunares de reserva (ZT)
Se a causa persistir, pode progredir para metaplasia atpica.
Epitlio normal Epitlio metaplsico
Clulas parabasais: pequenas, redondas e ovais, cianoflicas, com ncleo vesicular de
10 a 12 m, cromatina finamente distribuda de forma homognea
Clula escamosa Basal
Clulas Escamosas Parabasais
Medem 15 a 20 m de dimetro, citoplasma basfilo, redondo ou oval com
pequenos vacolos. O ncleo 10 a 12 m, R N/C, so vesiculados e contm
grnulos de cromocentro
Medem 30 a 40 m de dimetro, citoplasma cianoflico (basfilo), poligonal, pode conter dobras e rico em glicognio. Ncleo possui 10 a 12 m, vesicular, oval com cromatina finamente granulosa. Os cromocentro e a cromatina sexual podem ser visualizados.
Clulas Escamosas Intermedirias
Medem 40 a 60 m, so poligonais com citoplasma predom. eosinfilo ou
levemente cianoflico, com ncleo picntico 5 a 8 m e muito denso. O citoplasma
contm filamentos de queratina ( tonofibrilas) que confere certa rigidez a clula
Clulas Escamosas Superficiais
http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=1&lang=1&Id=cyto6024&cat=D1
- Clulas de maturao hbrida, de tamanho e forma variveis: redondas, ovais ou com finas projees - Ncleo com cromatina finamente granular, membrana fina e delicada e pequeno nuclolo, semelhante ao ncleo das clulas endocervicais - O citoplasma denso cianoflico
METAPLSICAS
CLULAS METAPLSICAS
http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=1&lang=1&Id=cyt14730&cat=D5a
Clulas Glandulares Endocervicais
Alongadas, com 8 a 20 m em seu maior dimetro, com citoplasma cianoflico
claro, ncleo excntrico e vesicular, com cromatina regularmente distribuda e
nuclolo pequeno, redondo, avermelhado e refringente
http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=0&lang=1&Id=cyto6112&cat=D5a
Citoplasma cianoflico claro escasso pouco definido 4 a 16 m s vezes vacuolizado, ncleo 8 m redondo ou oval, usualmente excntrico e vesicular, com cromatina finamente granular e regularmente distribuda, podendo haver micronuclolo. Observa-se superposio de ncleos
Clulas Endometriais
http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=1&lang=1&Id=cyt20322&cat=D3&PHPSESSID=7bb17bf13db335cd6588e351389f349a
LEUCCITOS:
Citologia em Meio Lquido
CITOLOGIA CONVENCIONAL
CITOLOGIA EM MEIO LQUIDO
METODOLOGIAS DE COLETA
Quais os cuidados que devo ter antes de fazer o exame?
Identificao dos esfregaos e
informes clnicos Realizada no momento da coleta
Dados clnicos:
Idade, data de nascimento
DUM, estado gestacional, menopausa
Uso de contraceptivos hormonais, terapia de reposio hormonal, uso DIU
Radioterapia, quimioterapia, cirurgia ginecolgica
Resultado exame anterior
Histria de cncer
Sinais clnicos
Instrumentos para a coleta: Esptulas
Salazay
Instrumentos para a coleta: Escovas
Cervex Broom
Escova endocervical - cytobrush
Escova endocervical - cnica
V
- fundo de saco posterior (muco, clulas de
descamao, leuccitos, restos celulares)
- parede lateral superior da vagina( clulas para
avaliao hormonal)
C - ectocrvice e JEC
E - mucosa endocervical
Coleta Trplice - VCE
Coleta Dupla
MS 1996
Ectocrvice e JEC
Endocrvice
Coleta Espculo Vaginal
Fonte: www.inca.gov.br.
Espculo
inserido lateralizado apoiado na frcula vaginal;
lubrificado com SF 0,9%;
ligeiramente aberto;
deve ser rodado;
deve atingir o fundo da vagina;
abrir o espculo
Observar
paredes vaginais;
contedo vaginal;
caractersticas do colo uterino:
-Colorao e presena de secrees
- presena de leses;
- juno stio externo com JEC
Ectocrvice e JEC
Endocrvice
Teste de Shiller
Teste cido actico 5%
Aspecto Superfcie cido Actico Lugol
CONFECCO DOS ESFREGAOS
Modo regular
Boa espessura
Rapidamente para evitar dessecao
Confeco do Esfregao na
Citologia Convencional
Coleta Citologia em Meio Lquido
Fonte: www.digene.com.br
Metodologia de preparo citologia em
meio lquido
DNA Citoliq (DIGENE-Brasil) citopreparao
atravs de filtros
Thin Prep (Cyty Corp., USA) citopreparao
atravs de vcuos
Autocyte (Tripath, USA) citocentrifugao
Outros
Amostra cervical Esfregao no
representativo
sobre a lmina
Mais 80% da amostra
coletada descartada
Fixador
Perdas de clulas importantes
para diagnstico por
Sobreposio, m fixao,
Artefactos de colorao
COLETA - Base lquida x Convencional
Amostras no-representativas
no reflete a condio atual
da paciente
Os problemas do preparado convencional
COLETA - Base lquida x Convencional
Amostra cervical
Esfregao 100%
representativo
Amostra preservada
Processo de filtragem,
imprint (clulas randomizadas)
Citocentrfuga (Sistema AutoCyte)
Diagnstico em camada
celular mais
homognea e dispersa
Incremento na deteco
precoce de clulas anormais
O princpio da citologia em base lqida
AUTOCYTE - COLETOR
Soluo 10 ml
1 escova (cerdas plsticas)
Materiais para coleta em Base Lquida pelo Sistema AutoCyte
DNA Citoliq
Thin Prep
Fixao
Objetivo: preservar as caractersticas
citomorfolgicas
Reagem quimicamente com macromolculas
como: cidos nuclicos, polissacardeos, lipdeos
e protenas, promovendo sua estabilizao
molecular
Desidratam os componentes moleculares
protoplasmticos
Funo:
- penetrar rapidamente nas clulas;
- manter integridade morfolgica;
- inativar enzimas autolticas;
- contribuir p/ a adeso clulas em lmina;
- impedir degradao bacteriana;
- facilitar o processo de colorao;
Fixao
Tipos de fixao
mida lcool etlico 95%
mida com subsequente secagem ao ar
Cobertura soluo de polietilenoglicol
ETANOL 95%
- reduz a constante isoeltrica das
protenas;
- causa precipitao em seus pontos
isoeltricos;
- alteram a estrutura terciria das
protenas ruptura das pontes
hidrofbicas;
- removem histonas.
REMOO
250 ml de Glicerina Liquida
250 ml de gua
Mergulhar as lminas por 8 minutos
Lavar as laminas em uma cuba com lcool 50%, para
tirar o excesso da Glicerina;
Passar por 4 cubas de lcool absoluto, sendo que na
4 cuba deve-se deixar as laminas por 12 minutos;
http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=0&lang=1&Id=cyt15984&cat=A1
Colorao de Papanicolaou
Regressiva: ginecolgicas
- HE Harris, excesso soluo HCL
Progressiva: no ginecolgicas (urina e
preparaes gstricas) e amostras com
pouca aderncia
- HE Mayer, Gill e Gill-Baker-May
- hidrxido de amnio, carbonato de ltio
Colorao de Papanicolaou
Etanol a 95% 10 mergulhos
Etanol a 80% 10 mergulhos
Etanol a 70% 10 mergulhos
Etanol a 50% 10 mergulhos
gua destilada 10 mergulhos
Hematoxilina de Harris 6 min
gua corrente 6 min
HCL 0,25% 2 a 6 mergulhos
gua destilada 10 mergulhos
Etanol a 50% 10 mergulhos
Etanol a 70% 10 mergulhos
Etanol a 80% 10 mergulhos
Etanol a 95% 10 mergulhos
OG 1min 30 seg
Etanol 95% 10 mergulhos
Etanol 95% 10 mergulhos
EA (36,50, 65) 1min 30 seg
Etanol a absoluto 10 mergulhos
Etanol a absoluto 10 mergulhos
Etanol absoluto 10 mergulhos
Etanol/xilol 1:1 10 mergulhos
Xilol 10 mergulhos
Xilol 10 mergulhos
Hematoxilina Harris
pH cido (2,95)
Agente oxidante: xido de mercrio (hematoxilina
hematena)
Mordante: sulfato de potssio e alumnio (induo da cor)
Solvente: lcool (agente nivelador, reduz a oxidao)
Acidificante: cido actico glacial (seletividade ao material
nuclear e estabilizao oxidao)
pH 8,0: carbonato de ltio, gua
CORANTE DE HEMATOXILINA DE HARRIS
Hematoxilina de Harris Hematoxilina de Harris Merck cristalizada CI 75.290 pureza 95%
5 g
(5,263g)
Almen de.potssio AlK(SO4) 2
Sulfato de Potssio e Alumnio ou Sulfato de Amnio e Alumnio
100 g
xido de mercrio HgO 2,5 g
Metanol ou alcol etlico 50 ml
gua destilada 1000 ml qsp
cido actico glacial (opcional) 4 ml a cada 100 ml
Dissolver a hematoxilina em metanol (56 C ou banho maria); Dissolver o AlK(SO4) 2 em gua destilada, levando fervura; Adicionar a hematoxilina dissolvida soluo de almen de potssio em gua e levar para ferver novamente Afastar o frasco do calor, resfriar o frasco e adicionar HgO; Homogenizar at aparecer a cor prpura; Esfriar a soluo em gua fria - choque trmico Filtrar em Watman 1 e estocar em frasco mbar; Amadurecer 1 semana, antes do uso adicionar o cido actico, filtrar antes do uso
Orange G
Corante Monocromtico - contracorantes
Cora queratina em tom laranja
Corante cido
Solvel em etanol
Mordante: cido fosfotngstico
CORANTE ORANGE G -6
Soluo estoque:
Orange-G
Orange G Merck CI 16.230 pureza 80%
5 g
(6,25g)
gua destilada 50 ml
Deixar amadurecer por vrios dias em temperatura ambiente.
Soluo de uso:
Soluo aquosa Orange-G 50 ml
cool etlico 95% 950 ml
cido fosfotngstico 0,15 g
Dissolver o Orange G na gua destilada. Misturar a soluo aquosa OG no lcool etlico e acrescentar o cido fosfotngico Estocar em frasco escuro ermeticamente fechado; Filtrar em Whatman 1; Amadurecer 1 semana e filtrar antes do uso.
EA - 36
Verde brilhante ou Ligth green: corante cido,
cora clulas metabolicamente ativas
Mais fotossensvel da bateria
Eosina amarelada: corante cido, cora o
citoplasma de clulas escamosas superficias,
nuclolos, hemcias e clios
Marron Bismarck: corante cido, diferencia a
colorao em presena de cido fosfotngstico
Soluo uso (estoque) Vesuvina ou Bismarck Brown Merck CI 21.000 pureza 50% Frmula: 1g vesuvina (2 g Merck) 10 ml de gua destilada Soluo estoque 1g de vesuvina em gua qsp 10 ml; Dissolver 5 ml da soluo estoque em em 95 ml de etanol 95%; Filtrar em Whatman 1 ; Amadurecer 1 semana e filtrar antes do uso.
100 ml
Soluo uso Light Green ou Verde Brilhante Merck CI 42.095 Frmula: 2g ligth green (3,07 g) 100 ml de gua Etanol 95% qsp 1000 ml Soluo estoque: dissolver 2 g de light green em 100 ml de gua destilada Soluo uso: dissolver 50 ml de soluo estoque em 1000 ml de etanol 95% qsp Filtrar em Whatman 1 Amadurecer 1 semana e filtrar antes do uso.
450 ml
Soluo uso de Li2 CO 3 1,5 g de Li2 CO 3 em gua destilada 100 ml qsp
Filtrar em Whatman 1 antes de usar
30 gotas
Soluo uso de eosina amarelada
Eosina Amarelada
Merck pureza 88% CI 4.5380
Frmula: 5g eosina amarelada (5,681 g)
1000 ml de etanol a 95% qsp
Soluo estoque: dissolver 5 g de eosina amarelada em 1000 ml etanol 95%
Filtrar em Whatman 1
Amadurecer 1 semana e filtrar antes do uso
450 ml
Soluo EA 36
450 ml de soluo uso Light Green;
100 ml de soluo uso Marron Bismark;
30 gotas soluo uso de Li2 CO 3 450 ml de soluo estoque de eosina amarelada
Filtrar em Whatman 1 ;
Amadurecer 1 semana e filtrar antes do uso.
Colorao de Papanicolaou
Colorao Nuclear Plida:
- contaminao com fixador de cobertura
- remoo incompleta do HCL
- concentrao HCL
- artefato de fixao (dessecao)
- validade corante
- reas espessas no esfregao
Colorao Nuclear Forte:
- concentrao lcool (fixao)
- tempo na descolorao (HCL)
Colorao citoplasmtica plida:
tempo no lcool
Ausncia diferenciao:
flora cocide
mal fixao
Citoplasma cinza ou prpura
tempo HE
falha em remover o excesso de HE
Colorao de Papanicolaou
COLORAO DE SHORR
lcool etlico 70% 10 mergulhos
Hematoxilina de Harris 1 a 3 minutos
Lavar em gua corrente 5 minutos
Diferenciar soluo aquosa de HCL a 1% mergulhos rpidos
lcool 70% 10 mergulhos
lcool 80% 10 mergulhos
lcool 90% 10 mergulhos
Shorr 3 a 10 segundos
lcool 70% 10 mergulhos
lcool 80% 10 mergulhos
lcool 95% 10 mergulhos
Xilol 10 mergulhos
Xilol 10 mergulhos
Corante de Shorr
lcool etlico a 50% 100 ml
Biebricht scarlat (solvel em gua) 0,5 g
Orange G 0,25g
Verde Luz C 0,075 g
cido fosfotngstico 0,5 g
cido fosfomolbdico 0,5 g
cido actico glacial 1 ml
Misturar todos os componentes e dissolver em lcool. Acondicionar a
soluo filtrada em frasco escuro, bem vedado
Remover colorao
Xilol
Etanol absoluto (3) 1 min
Etanol 95% (2) 1 min
gua corrente 1min
Soluo aquosa de HCL 0,2 ou 0,5% (etanol 70%) 5 min a 1 h
gua corrente por 10 a 15 min
Montagem das Lminas:
Entellan
Meio Lquido Convencional
Fonte: www.digene.com.br
Miscvel com o agente
clareador e ter ndice
refrativo que mantenha o
sistema transparente;
pH neutro.
Escrutnio das Lminas
M.O - 100x , 400x e 1000 x
Avaliao da citologia crvico-vaginal
Interpretao/Resultados: Segundo
Sistema Bethesda 2001
Observar:
Tipos celulares
Alteraes celulares
Organismos
Efeitos citopticos de
organismos
Anormalidades epiteliais
Critrios de malignidade
Tamanho das clulas
Tamanho dos ncleos
Relao ncleo/citoplasma
Cor do ncleo
Estrutura da cromatina
Cor do citoplasma
Aspecto do citoplasma
Forma da clula
Forma do ncleo
Agrupamentos celulares
Morfologia de organismos
Nomenclatura Brasileira para laudos
citopatolgicos cervicais, 2006
TIPOS DA AMOSTRA Citologia:
Convencional
Em meio lquido
AVALIAO PR-ANALTICA Amostra rejeitada por:
Ausncia ou erro de identificao da lmina e/ou do frasco;
Identificao da lmina e/ou do frasco no coincidente com a
do formulrio;
Lmina danificada ou ausente;
Causas alheias ao laboratrio (especificar);
Outras causas (especificar).
Nomenclatura Brasileira para laudos
citopatolgicos cervicais, 2006
ADEQUABILIDADE DA AMOSTRA Satisfatria
Insatisfatria para avaliao onctica devido ao:
Material acelular ou hipocelular (< 10% do esfregao)
Leitura prejudicada (> 75% do esfregao) por presena de:
sangue;
picitos;
artefatos de dessecamento;
contaminantes externos;
intensa superposio celular;
outros (especifi car).
Epitlios representados na amostra:
Escamoso
Glandular
Metaplsico
Sistema Bethesda 2001
Tipo de amostra
Adequao da amostra
Satisfatria para avaliao: indicar a presena de
componente endocervical/ZT ou outros agentes indicadores de qualidade; por ex. se est parcialmente obscurecida por leuccitos ou hemcias
Adequao da amostra
Insatisfatria para avaliao:
Amostra rejeitada/no processada (indicar razes)
Amostra processada e examinada, mas insatisfatria p/ avaliao de anormalidades epiteliais (indicar razes)
http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=1&lang=1&Id=cyto7435&cat=A2e
http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=0&lang=1&Id=00018592&cat=A2e
http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=1&lang=1&Id=cyt15366&cat=A1&PHPSESSID=3a42099843fd8c07fb682ec8104772cd
http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=1&lang=1&Id=cyt15373&cat=A1
Aspergillosis sporangium - rompimento de um dos conidisporos com liberao
de condios. (Papanicolaou 400x)
Balantidium coli
Enterobius vermicularis
BIBLIOGRAFIA
-BIBBO, M. Comprehensive Cytopathology. New York: Saunders, 1997.
-GOMPEL, C. & KOSS, L. G. Citologia Ginecolgica e suas Bases Anatomoclnicas. So Paulo: Manole, 1997.
--MCKEE, G.T. Citopatologia. So Paulo: Artes Mdicas, 1997.
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