Metodos coleta e coloracao Papanicolaou - Prof Jacqueline Plewka.pdf

Mtodos de coleta, preparo,

e colorao de material em

citologia crvico-vaginal.

Citologia normal da crvice

uterina

Jacqueline Plewka

UNIOESTE PR

DEZ/2011

http://www.teslasociety.com/pop.jpg

EXAME DE PAPANICOLAOU

COLETA

CITOLOGIA CONVENCIONAL (esfoliativa, abrasiva)

CITOLOGIA EM MEIO LQUIDO

CONFECO DO ESFREGAO

FIXAO

COLORAO DE PAPANICOLAOU

MONTAGEM DAS LMINAS

ESCRUTNIO DAS LMINAS

INTERPRETAO/RESULTADOS

Anatomia do Aparelho Reprodutor

Feminino

Fonte: McCkee, 1997.

Nulpara: 6 a 7 cm e 4 cm

Multpara: 7 a 8 cm e 5 cm

Espessura: 25 a 30 cm

Peso varia de 40 a 50 gramas nulparas e

de 60 a 70 gramas nas multparas

Colo Uterino

www.fcm.unicamp.br/departamentos/anatomia/lamgin1.html

Epitlio Escamoso Estratificado

Epitlio Escamoso Estratificado

Fonte:www.screening.iarc.fr/atlashisto

http://screening.iarc.fr/atlashisto_detail.php?flag=1&lang=4&Id=hexocole&cat=B2

Epitlio Cilndrico Endocervical

Fonte:www.screening.iarc.fr/atlashisto

http://screening.iarc.fr/atlashisto_detail.php?flag=1&lang=4&Id=00003828&cat=B3

Fonte: Longatto, 2000.

Juno Escamo Colunar - JEC

PUBERDADE FASE FRTIL MENOPAUSA

Localizao da JEC conforme a idade,

estado hormonal (gravidez, ACO)

METAPLASIA

Reprogramao gentica das clulas tronco em tecido epitelial ou de clulas mesenquimais do tecido conetivo

Processo reversvel

Colo uterino: substituio fisiolgica do epitlio colunar evertido na ectocrvice epitlio escamoso recm-formado de clulas subcolunares de reserva (ZT)

Se a causa persistir, pode progredir para metaplasia atpica.

Epitlio normal Epitlio metaplsico

Clulas parabasais: pequenas, redondas e ovais, cianoflicas, com ncleo vesicular de

10 a 12 m, cromatina finamente distribuda de forma homognea

Clula escamosa Basal

Clulas Escamosas Parabasais

Medem 15 a 20 m de dimetro, citoplasma basfilo, redondo ou oval com

pequenos vacolos. O ncleo 10 a 12 m, R N/C, so vesiculados e contm

grnulos de cromocentro

Medem 30 a 40 m de dimetro, citoplasma cianoflico (basfilo), poligonal, pode conter dobras e rico em glicognio. Ncleo possui 10 a 12 m, vesicular, oval com cromatina finamente granulosa. Os cromocentro e a cromatina sexual podem ser visualizados.

Clulas Escamosas Intermedirias

Medem 40 a 60 m, so poligonais com citoplasma predom. eosinfilo ou

levemente cianoflico, com ncleo picntico 5 a 8 m e muito denso. O citoplasma

contm filamentos de queratina ( tonofibrilas) que confere certa rigidez a clula

Clulas Escamosas Superficiais

http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=1&lang=1&Id=cyto6024&cat=D1

- Clulas de maturao hbrida, de tamanho e forma variveis: redondas, ovais ou com finas projees - Ncleo com cromatina finamente granular, membrana fina e delicada e pequeno nuclolo, semelhante ao ncleo das clulas endocervicais - O citoplasma denso cianoflico

METAPLSICAS

CLULAS METAPLSICAS

http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=1&lang=1&Id=cyt14730&cat=D5a

Clulas Glandulares Endocervicais

Alongadas, com 8 a 20 m em seu maior dimetro, com citoplasma cianoflico

claro, ncleo excntrico e vesicular, com cromatina regularmente distribuda e

nuclolo pequeno, redondo, avermelhado e refringente

http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=0&lang=1&Id=cyto6112&cat=D5a

Citoplasma cianoflico claro escasso pouco definido 4 a 16 m s vezes vacuolizado, ncleo 8 m redondo ou oval, usualmente excntrico e vesicular, com cromatina finamente granular e regularmente distribuda, podendo haver micronuclolo. Observa-se superposio de ncleos

Clulas Endometriais

http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=1&lang=1&Id=cyt20322&cat=D3&PHPSESSID=7bb17bf13db335cd6588e351389f349a

LEUCCITOS:

Citologia em Meio Lquido

CITOLOGIA CONVENCIONAL

CITOLOGIA EM MEIO LQUIDO

METODOLOGIAS DE COLETA

Quais os cuidados que devo ter antes de fazer o exame?

Identificao dos esfregaos e

informes clnicos Realizada no momento da coleta

Dados clnicos:

Idade, data de nascimento

DUM, estado gestacional, menopausa

Uso de contraceptivos hormonais, terapia de reposio hormonal, uso DIU

Radioterapia, quimioterapia, cirurgia ginecolgica

Resultado exame anterior

Histria de cncer

Sinais clnicos

Instrumentos para a coleta: Esptulas

Salazay

Instrumentos para a coleta: Escovas

Cervex Broom

Escova endocervical - cytobrush

Escova endocervical - cnica

V

- fundo de saco posterior (muco, clulas de

descamao, leuccitos, restos celulares)

- parede lateral superior da vagina( clulas para

avaliao hormonal)

C - ectocrvice e JEC

E - mucosa endocervical

Coleta Trplice - VCE

Coleta Dupla

MS 1996

Ectocrvice e JEC

Endocrvice

Coleta Espculo Vaginal

Fonte: www.inca.gov.br.

Espculo

inserido lateralizado apoiado na frcula vaginal;

lubrificado com SF 0,9%;

ligeiramente aberto;

deve ser rodado;

deve atingir o fundo da vagina;

abrir o espculo

Observar

paredes vaginais;

contedo vaginal;

caractersticas do colo uterino:

-Colorao e presena de secrees

- presena de leses;

- juno stio externo com JEC

Ectocrvice e JEC

Endocrvice

Teste de Shiller

Teste cido actico 5%

Aspecto Superfcie cido Actico Lugol

CONFECCO DOS ESFREGAOS

Modo regular

Boa espessura

Rapidamente para evitar dessecao

Confeco do Esfregao na

Citologia Convencional

Coleta Citologia em Meio Lquido

Fonte: www.digene.com.br

Metodologia de preparo citologia em

meio lquido

DNA Citoliq (DIGENE-Brasil) citopreparao

atravs de filtros

Thin Prep (Cyty Corp., USA) citopreparao

atravs de vcuos

Autocyte (Tripath, USA) citocentrifugao

Outros

Amostra cervical Esfregao no

representativo

sobre a lmina

Mais 80% da amostra

coletada descartada

Fixador

Perdas de clulas importantes

para diagnstico por

Sobreposio, m fixao,

Artefactos de colorao

COLETA - Base lquida x Convencional

Amostras no-representativas

no reflete a condio atual

da paciente

Os problemas do preparado convencional

COLETA - Base lquida x Convencional

Amostra cervical

Esfregao 100%

representativo

Amostra preservada

Processo de filtragem,

imprint (clulas randomizadas)

Citocentrfuga (Sistema AutoCyte)

Diagnstico em camada

celular mais

homognea e dispersa

Incremento na deteco

precoce de clulas anormais

O princpio da citologia em base lqida

AUTOCYTE - COLETOR

Soluo 10 ml

1 escova (cerdas plsticas)

Materiais para coleta em Base Lquida pelo Sistema AutoCyte

DNA Citoliq

Thin Prep

Fixao

Objetivo: preservar as caractersticas

citomorfolgicas

Reagem quimicamente com macromolculas

como: cidos nuclicos, polissacardeos, lipdeos

e protenas, promovendo sua estabilizao

molecular

Desidratam os componentes moleculares

protoplasmticos

Funo:

- penetrar rapidamente nas clulas;

- manter integridade morfolgica;

- inativar enzimas autolticas;

- contribuir p/ a adeso clulas em lmina;

- impedir degradao bacteriana;

- facilitar o processo de colorao;

Fixao

Tipos de fixao

mida lcool etlico 95%

mida com subsequente secagem ao ar

Cobertura soluo de polietilenoglicol

ETANOL 95%

- reduz a constante isoeltrica das

protenas;

- causa precipitao em seus pontos

isoeltricos;

- alteram a estrutura terciria das

protenas ruptura das pontes

hidrofbicas;

- removem histonas.

REMOO

250 ml de Glicerina Liquida

250 ml de gua

Mergulhar as lminas por 8 minutos

Lavar as laminas em uma cuba com lcool 50%, para

tirar o excesso da Glicerina;

Passar por 4 cubas de lcool absoluto, sendo que na

4 cuba deve-se deixar as laminas por 12 minutos;

http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=0&lang=1&Id=cyt15984&cat=A1

Colorao de Papanicolaou

Regressiva: ginecolgicas

- HE Harris, excesso soluo HCL

Progressiva: no ginecolgicas (urina e

preparaes gstricas) e amostras com

pouca aderncia

- HE Mayer, Gill e Gill-Baker-May

- hidrxido de amnio, carbonato de ltio


Etanol a 95% 10 mergulhos




gua destilada 10 mergulhos

Hematoxilina de Harris 6 min

gua corrente 6 min

HCL 0,25% 2 a 6 mergulhos

gua destilada 10 mergulhos





OG 1min 30 seg

Etanol 95% 10 mergulhos

Etanol 95% 10 mergulhos

EA (36,50, 65) 1min 30 seg

Etanol a absoluto 10 mergulhos

Etanol a absoluto 10 mergulhos

Etanol absoluto 10 mergulhos

Etanol/xilol 1:1 10 mergulhos

Xilol 10 mergulhos

Xilol 10 mergulhos

Hematoxilina Harris

pH cido (2,95)

Agente oxidante: xido de mercrio (hematoxilina

hematena)

Mordante: sulfato de potssio e alumnio (induo da cor)

Solvente: lcool (agente nivelador, reduz a oxidao)

Acidificante: cido actico glacial (seletividade ao material

nuclear e estabilizao oxidao)

pH 8,0: carbonato de ltio, gua

CORANTE DE HEMATOXILINA DE HARRIS

Hematoxilina de Harris Hematoxilina de Harris Merck cristalizada CI 75.290 pureza 95%

5 g

(5,263g)

Almen de.potssio AlK(SO4) 2

Sulfato de Potssio e Alumnio ou Sulfato de Amnio e Alumnio

100 g

xido de mercrio HgO 2,5 g

Metanol ou alcol etlico 50 ml

gua destilada 1000 ml qsp

cido actico glacial (opcional) 4 ml a cada 100 ml

Dissolver a hematoxilina em metanol (56 C ou banho maria); Dissolver o AlK(SO4) 2 em gua destilada, levando fervura; Adicionar a hematoxilina dissolvida soluo de almen de potssio em gua e levar para ferver novamente Afastar o frasco do calor, resfriar o frasco e adicionar HgO; Homogenizar at aparecer a cor prpura; Esfriar a soluo em gua fria - choque trmico Filtrar em Watman 1 e estocar em frasco mbar; Amadurecer 1 semana, antes do uso adicionar o cido actico, filtrar antes do uso

Orange G

Corante Monocromtico - contracorantes

Cora queratina em tom laranja

Corante cido

Solvel em etanol

Mordante: cido fosfotngstico

CORANTE ORANGE G -6

Soluo estoque:

Orange-G

Orange G Merck CI 16.230 pureza 80%

5 g

(6,25g)

gua destilada 50 ml

Deixar amadurecer por vrios dias em temperatura ambiente.

Soluo de uso:

Soluo aquosa Orange-G 50 ml

cool etlico 95% 950 ml

cido fosfotngstico 0,15 g

Dissolver o Orange G na gua destilada. Misturar a soluo aquosa OG no lcool etlico e acrescentar o cido fosfotngico Estocar em frasco escuro ermeticamente fechado; Filtrar em Whatman 1; Amadurecer 1 semana e filtrar antes do uso.

EA - 36

Verde brilhante ou Ligth green: corante cido,

cora clulas metabolicamente ativas

Mais fotossensvel da bateria

Eosina amarelada: corante cido, cora o

citoplasma de clulas escamosas superficias,

nuclolos, hemcias e clios

Marron Bismarck: corante cido, diferencia a

colorao em presena de cido fosfotngstico

Soluo uso (estoque) Vesuvina ou Bismarck Brown Merck CI 21.000 pureza 50% Frmula: 1g vesuvina (2 g Merck) 10 ml de gua destilada Soluo estoque 1g de vesuvina em gua qsp 10 ml; Dissolver 5 ml da soluo estoque em em 95 ml de etanol 95%; Filtrar em Whatman 1 ; Amadurecer 1 semana e filtrar antes do uso.

100 ml

Soluo uso Light Green ou Verde Brilhante Merck CI 42.095 Frmula: 2g ligth green (3,07 g) 100 ml de gua Etanol 95% qsp 1000 ml Soluo estoque: dissolver 2 g de light green em 100 ml de gua destilada Soluo uso: dissolver 50 ml de soluo estoque em 1000 ml de etanol 95% qsp Filtrar em Whatman 1 Amadurecer 1 semana e filtrar antes do uso.

450 ml

Soluo uso de Li2 CO 3 1,5 g de Li2 CO 3 em gua destilada 100 ml qsp

Filtrar em Whatman 1 antes de usar

30 gotas

Soluo uso de eosina amarelada

Eosina Amarelada

Merck pureza 88% CI 4.5380

Frmula: 5g eosina amarelada (5,681 g)

1000 ml de etanol a 95% qsp

Soluo estoque: dissolver 5 g de eosina amarelada em 1000 ml etanol 95%

Filtrar em Whatman 1

Amadurecer 1 semana e filtrar antes do uso

450 ml

Soluo EA 36

450 ml de soluo uso Light Green;

100 ml de soluo uso Marron Bismark;

30 gotas soluo uso de Li2 CO 3 450 ml de soluo estoque de eosina amarelada

Filtrar em Whatman 1 ;

Amadurecer 1 semana e filtrar antes do uso.


Colorao Nuclear Plida:

- contaminao com fixador de cobertura

- remoo incompleta do HCL

- concentrao HCL

- artefato de fixao (dessecao)

- validade corante

- reas espessas no esfregao

Colorao Nuclear Forte:

- concentrao lcool (fixao)

- tempo na descolorao (HCL)

Colorao citoplasmtica plida:

tempo no lcool

Ausncia diferenciao:

flora cocide

mal fixao

Citoplasma cinza ou prpura

tempo HE

falha em remover o excesso de HE


COLORAO DE SHORR

lcool etlico 70% 10 mergulhos

Hematoxilina de Harris 1 a 3 minutos

Lavar em gua corrente 5 minutos

Diferenciar soluo aquosa de HCL a 1% mergulhos rpidos

lcool 70% 10 mergulhos



Shorr 3 a 10 segundos




Xilol 10 mergulhos

Xilol 10 mergulhos

Corante de Shorr

lcool etlico a 50% 100 ml

Biebricht scarlat (solvel em gua) 0,5 g

Orange G 0,25g

Verde Luz C 0,075 g

cido fosfotngstico 0,5 g

cido fosfomolbdico 0,5 g

cido actico glacial 1 ml

Misturar todos os componentes e dissolver em lcool. Acondicionar a

soluo filtrada em frasco escuro, bem vedado

Remover colorao

Xilol

Etanol absoluto (3) 1 min

Etanol 95% (2) 1 min

gua corrente 1min

Soluo aquosa de HCL 0,2 ou 0,5% (etanol 70%) 5 min a 1 h

gua corrente por 10 a 15 min

Montagem das Lminas:

Entellan

Meio Lquido Convencional

Fonte: www.digene.com.br

Miscvel com o agente

clareador e ter ndice

refrativo que mantenha o

sistema transparente;

pH neutro.

Escrutnio das Lminas

M.O - 100x , 400x e 1000 x

Avaliao da citologia crvico-vaginal

Interpretao/Resultados: Segundo

Sistema Bethesda 2001

Observar:

Tipos celulares

Alteraes celulares

Organismos

Efeitos citopticos de

organismos

Anormalidades epiteliais

Critrios de malignidade

Tamanho das clulas

Tamanho dos ncleos

Relao ncleo/citoplasma

Cor do ncleo

Estrutura da cromatina

Cor do citoplasma

Aspecto do citoplasma

Forma da clula

Forma do ncleo

Agrupamentos celulares

Morfologia de organismos

Nomenclatura Brasileira para laudos

citopatolgicos cervicais, 2006

TIPOS DA AMOSTRA Citologia:

Convencional

Em meio lquido

AVALIAO PR-ANALTICA Amostra rejeitada por:

Ausncia ou erro de identificao da lmina e/ou do frasco;

Identificao da lmina e/ou do frasco no coincidente com a

do formulrio;

Lmina danificada ou ausente;

Causas alheias ao laboratrio (especificar);

Outras causas (especificar).

Nomenclatura Brasileira para laudos

citopatolgicos cervicais, 2006

ADEQUABILIDADE DA AMOSTRA Satisfatria

Insatisfatria para avaliao onctica devido ao:

Material acelular ou hipocelular (< 10% do esfregao)

Leitura prejudicada (> 75% do esfregao) por presena de:

sangue;

picitos;

artefatos de dessecamento;

contaminantes externos;

intensa superposio celular;

outros (especifi car).

Epitlios representados na amostra:

Escamoso

Glandular

Metaplsico

Sistema Bethesda 2001

Tipo de amostra

Adequao da amostra

Satisfatria para avaliao: indicar a presena de

componente endocervical/ZT ou outros agentes indicadores de qualidade; por ex. se est parcialmente obscurecida por leuccitos ou hemcias

Adequao da amostra

Insatisfatria para avaliao:

Amostra rejeitada/no processada (indicar razes)

Amostra processada e examinada, mas insatisfatria p/ avaliao de anormalidades epiteliais (indicar razes)

http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=1&lang=1&Id=cyto7435&cat=A2e

http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=0&lang=1&Id=00018592&cat=A2e

http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=1&lang=1&Id=cyt15366&cat=A1&PHPSESSID=3a42099843fd8c07fb682ec8104772cd

http://screening.iarc.fr/atlascyto_detail.php?flag=1&lang=1&Id=cyt15373&cat=A1

Aspergillosis sporangium - rompimento de um dos conidisporos com liberao

de condios. (Papanicolaou 400x)

Balantidium coli

Enterobius vermicularis

BIBLIOGRAFIA

-BIBBO, M. Comprehensive Cytopathology. New York: Saunders, 1997.

-GOMPEL, C. & KOSS, L. G. Citologia Ginecolgica e suas Bases Anatomoclnicas. So Paulo: Manole, 1997.

--MCKEE, G.T. Citopatologia. So Paulo: Artes Mdicas, 1997.

Documents

Metodos coleta e coloracao Papanicolaou - Prof Jacqueline Plewka.pdf