View
222
Download
0
Category
Preview:
Citation preview
i
EFEK NEFROPROTEKTIF PEMBERIAN JANGKA PANJANG
EKSTRAK ETANOL BIJI Persea americana Mill. TERHADAP KADAR
KREATININ DAN GAMBARAN HISTOLOGIS GINJAL PADA TIKUS
TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu SyaratMemperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh :
Rotua Winata Nopelia Silitonga
NIM : 108114013
FAKULTAS FARMASIUNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA2013
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
“Sebab TUHAN, Dia sendiri akan berjalan di depanmu, Dia sendiri akan
menyertai engkau, Dia tidak akan membiarkan engkau dan tidak akan
meninggalkan engkau ; janganlah takut dan janganlah patah hati.”
Ulangan 31: 8
Hati raja seperti batang air dalam tangan TUHAN, dialirkan-Nya kemana Ia ingini (Amsal 21:1)
Karya ini kupersembahan untuk :Tuhan Yesus Kristus, Bapaku yang setia, Sumber harapankuBapak, Mama, Irna dan Angri, Opung serta keluarga besarkuSahabat-sahabatku yang telah hadir di saat susah dan senangSerta Almamaterku Universitas Sanata Dharma
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
v
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vii
PRAKATA
Puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Pemurah atas segala
penyertaan, kasih dan berkatNya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi
yang berjudul “Efek Nefroprotektif Pemberian Jangka Panjang Ekstrak Etanol
Biji Persea americana Mill. terhadap Kadar Kreatinin dan Gambaran Histologis
Ginjal pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida ” dengan baik. Skripsi ini
disusun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi
(S.Farm) program studi Farmasi Universitas Sanata Dharma.
Penulis menyadari bahwa dalam pembuatan skripsi ini tidak terlepas dari
bantuan dan dukungan dari berbagai pihak. Oleh sebab itu, penulis mengucapkan
terima kasih kepada :
1. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt. selaku Dosen Pembimbing skripsi atas
perhatian, kesabaran, bimbingan, masukan dan motivasi kepada penulis
dalam proses penyusunan skripsi ini.
2. Ibu dr. Fenti, M.Kes., Sp.K sebagai dosen penguji yang telah memberikan
kritik dan saran yang membangun selama proses pembuatan skripsi.
3. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si. sebagai dosen penguji yang telah
memberikan kritik dan saran yang membangun selama proses pembuatan
skripsi.
4. Ibu Rini Dwiastuti, M.Si., Apt. selaku Kepala Penanggungjawab
Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin dalam
penggunaan fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian ini.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
viii
5. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si. yang telah menyediakan waktu untuk
memberikan bantuan dalam determinasi tanaman P.americana.
6. Pak Kayat, Pak Heru, Pak Parjiman, Pak Wagiran, Pak Parlan, Pak Kunto,
dan Pak Bimo selaku laboran laboratorium Fakultas Farmasi yang telah
membantu penulis dalam proses pelaksanaan penelitian di laboratorium.
7. Keluargaku Bapak Dolok Silitonga, Mama Masdiana Sirait, Irna Marsaulina
dan Angri Jwita, yang selalu memberikan doa, perhatian, dan menjadi
motivasi terbesar penulis.
8. Beasiswa Unggulan Kementrian Pendidikan dan Kebudayaan Republik
Indonesia atas kontribusinya dalam membiayai proses perkuliahan dan
penelitian ini.
9. Teman-teman seperjuangan dalam tim alpukat Ayu, Ita, Cilla, Ike kiting,
Lydia, Ike Kum, Dian, Dion, Iren, Liana, Obet, Angel, Dara dan Yudhita atas
kerjasama, bantuan, dan semangat yang selalu di bagikan dalam proses
penyusunan skripsi ini dari awal hingga akhir.
10. Kawan-kawan “sariayuers” Kak Sari Tambunan, Devi Sinaga, Jolina Bitti,
Mauryn Marpaung, Yoestenia, Metta Maurilla, Mariana, Novie Imoliana,
Melisa Dharmawan dan Anna Sofiana atas kebersamaan, kecerian,
dukungan, semangat dan masukan yang diberikan selama pembuatan skripsi
ini.
11. Yudi Theo Lumy yang selalu memberikan dukungan doa dan semangat
selama proses pembuatan skripsi ini.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ix
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL............................................................................................................
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING..................................................................
HALAMAN PENGESAHAN..............................................................................................
HALAMAN PERSEMBAHAN...........................................................................................
PERNYATAANKEASLIAN KARYA..............................................................................
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA
ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS.............................................................
PRAKATA...........................................................................................................................
DAFTAR ISI........................................................................................................................
DAFTAR TABEL................................................................................................................
DAFTAR GAMBAR...........................................................................................................
DAFTAR LAMPIRAN.......................................................................................................
INTISARI............................................................................................................................
ABSTRACT..........................................................................................................................
BAB I. PENGANTAR........................................................................................................
A. LatarBelakang..................................................................................................................
1. Perumusan masalah.................................................................................................
2. Keaslian penelitian...................................................................................................
3. Manfaat penelitian....................................................................................................
B. Tujuan Penelitian.............................................................................................................
i
ii
iii
iv
v
vi
vii
x
xv
xvi
xviii
xx
xxi
1
1
4
4
5
5
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA.................................................................................
A. Persea americana Mill....................................................................................................
1. Taksonomi................................................................................................................
2. Sinonim....................................................................................................................
3. Nama lain.................................................................................................................
4. Morfologi..................................................................................................................
5. Kandungan kimia.....................................................................................................
6. Khasiat dan kegunaan..............................................................................................
B . Ginjal
1. Anatomi dan fisiologi ginjal...................................................................................
2. Fungsi ginjal.............................................................................................................
3. Kerusakan ginjal.......................................................................................................
C. Kreatinin........................................................................................................................
D. Nefrotoksisitas..............................................................................................................
1. Faktor penyebab nefrotoksisitas..............................................................................
2. Nefrotoksikan..........................................................................................................
E. Karbon Tetraklorida......................................................................................................
F. Antioksidan...................................................................................................................
G. Ekstraksi........................................................................................................................
H. Landasan teori...............................................................................................................
I. Hipotesis........................................................................................................................
BAB III. METODE PENELITIAN.....................................................................................
A. Jenis dan Rancangan Penelitian....................................................................................
6
6
6
6
6
7
7
7
8
14
16
17
18
18
20
21
22
23
25
26
27
27
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
B. Variabel dan Definisi Operasional................................................................................
1. Variabel utama.........................................................................................................
2. Variabel pengacau....................................................................................................
3. Definisi Operasional.................................................................................................
C. Bahan Penelitian...........................................................................................................
1. Bahan utama.............................................................................................................
2. Bahan kimia..............................................................................................................
D. Alat dan Instrumen Penelitian.......................................................................................
1. Alat ekstraksi............................................................................................................
2. Alat uji nefroprotektif...............................................................................................
E. Tata Cara Penelitian
1. Determinasi serbuk biji P. americana...................................................................
2. Pembuatan serbuk..................................................................................................
3. Pengumpulan bahan..............................................................................................
4. Penetapan kadar air serbuk P. americana..............................................................
5. Pembuatan ekstrak etanol biji P. americana..........................................................
6. Penetapan konsentrasi pekat ekstrak.....................................................................
7. Penetapan dosis ekstrak etanol biji P. americana..................................................
8. Pembuatan larutan karbon tetraklorida..................................................................
9. Pembuatan suspending agent CMC-Na 1%..........................................................
10. Uji Pendahuluan.....................................................................................................
11. Pengelompokan dan perlakuan hewan uji..............................................................
12. Pembuatan Serum..................................................................................................
27
27
27
28
29
29
29
30
30
30
31
31
31
31
32
33
33
34
34
34
34
35
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
13. Penetapan kadar serum kontrol, kadar kreatinin serum.........................................
F. Tata Cara Analisis Hasil................................................................................................
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN............................................................................
A. Penyiapan Bahan ..........................................................................................................
1. Hasil determinasi serbuk biji P.americana............................................................
2. Penetapan kadar air serbuk biji P. americana........................................................
3. Hasil pembuatan dan penimbangan ekstrak etanol biji P. americana...................
B. Uji Pendahuluan............................................................................................................
1. Penentuan dosis nefrotoksik karbon tetraklorida...................................................
2. Penentuan waktu pencuplikan darah......................................................................
3. Penetapan lama pemejanan ekstrak etanol biji P. americana................................
4. Penetapan dosis ekstrak etanol biji P. americana..................................................
C. Hasil Uji Efek Nefroprotektif Ekstrak Etanol Biji P.americana..................................
1. Kontrol negatif olive oil dosis 2 mL/kgBB ...........................................................
2. Kontrol nefrotoksin karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB...................................
3. Kontrol ekstrak etanol biji P. americana dosis 1400mg/kgBB............................
4. Perlakuan ekstrak etanol biji P.americana dosis 350, 700 dan 1400mg/kgBB
pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB…………………..
D. Rangkuman Pembahasan...........................................................................................
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN..............................................................................
A. Kesimpulan...................................................................................................................
B. Saran..............................................................................................................................
DAFTAR PUSTAKA..........................................................................................................
36
36
38
38
38
39
39
41
41
42
44
44
45
48
51
53
55
60
63
63
63
64
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
LAMPIRAN.........................................................................................................................
BIOGRAFI PENULIS.........................................................................................................
70
94
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xv
DAFTAR TABEL
Tabel I.
Tabel II.
Tabel III.
Tabel IV.
Tabel V.
Tabel VI.
Tabel VII.
Tabel VIII.
Tabel IX.
Tabel X.
Tabel XI.
Senyawa-senyawa yang bersifat
nefrotoksikan.............................................................................
Komposisi dan konsentrasi reagen serum kreatinin..................
Purata kadar kreatinin tikus pada jam ke 0, 24, 48
dan 72........................................................................................
Hasil uji Scheffe kadar kreatinin serum tikus
pada jam ke 0,24, 48 dan 72 setelah pemberian
karbon tetraklorida dosis 2mL/kgBB........................................
Kadar kreatinin serum tikus pada enam kelompok...................
Hasil uji Scheffe kadar kreatinin serum tikus
pada enam kelompok.................................................................
Hasil pemeriksaan histologis ginjal pada
keenam kelompok perlakuan...................................................
Purata kadar kreatinin serum tikus setelah pemejanan
olive oil dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu
0 dan 48 jam............................................................................
Hasil rendemen ekstrak etanol biji
P.americana...............................................................................
Pengeringan ekstrak etanol biji P.americana
hingga terbentuk ekstrak kental.................................................
Hasil validitas dan reliabilitas..................................................
20
30
42
43
46
47
48
49
89
89
90
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1.
Gambar 2.
Gambar 3.
Gambar 4.
Gambar 5.
Gambar 6.
Gambar 7.
Gambar 8.
Gambar 9.
Gambar 10.
Gambar 11.
Gambar 12.
Struktur ginjal.............................................................................
Nefron ginjal..............................................................................
Sel-sel tubulus kontortus proksimal dan distal...........................
Perbedaan bentuk sel tubulus proksimal dan distal...................
Gambaran mikroskopik ductus colligens..................................
Mekanisme biotransformasi dan oksidasi karbon
tetraklorida................................................................................
Diagram batang rata-rata kadar kreatinin
tikus padajam ke 0, 24, 48 dan 72 setelah pemberian
karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB........................................
Diagram batang rata-rata kadar kreatinin serum tikus
pada enam kelompok.................................................................
Diagram batang kadar kreatinin setelah pemejanan
olive oil pada selang waktu 0 dan 48 jam...................................
Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompok perlakuan
kontrol negatif olive oil yang mengalami Intratubular
Hialin Cast (ITC)........................................................................
Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompok
perlakuan kontrol negatif olive oil yang mengalami
Degenerasi Hidropik Epitel Tubulus (DHET)...........................
Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompok
9
10
12
13
14
21
42
47
49
50
50
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvii
Gambar 13.
perlakuan nefrotoksin karbon tetraklorida 2mL/kgBB
dengan kondisi ginjal yang normal...........................................
Gambaran mikroskopik ginjal pada kelompok
perlakuan ekstrak etanol biji P.americana dosis
350mg/kgBB yang mengalami perivaskulitis...........................
52
57
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xviii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1.
Lampiran 2.
Lampiran 3.
Lampiran 4.
Lampiran 5
Lampiran 6.
Lampiran 7.
Lampiran 8.
Lampiran 9.
Lampiran 10.
Lampiran 11.
Lampiran 12.
Lampiran 13.
Foto serbuk biji P.americana................................................
Foto ekstrak kental biji P.americana.....................................
Foto larutan ekstrak etanol biji P.americana.......................
Surat pengesahan determinasi serbuk biji P.americana........
Hasil determinasi serbuk biji Persea americanaMill...........
Surat pengesahan Medical and Health Research Ethics
Committee (MHREC)...........................................................
Analisis statistik kadar kreatinin serum pada
uji penentuan waktu pencuplikan darah tikus
setelah diinduksi karbon tetraklorida 2mL/kgBB..................
Analisis statistik kadar kreatinin serum pada enam
kelompok perlakuan ekstrak etanol biji P.americana
setelah induksi karbon tetraklorida 2mL/kgBB.....................
Analisis statistik kadar kreatinin serum pada
perlakuan kontrol negatif olive oil dosis 2mL/kgBB.............
Perhitungan efek nefroprotektif(%).......................................
Perhitungan penetapan peringkat dosis
ekstrak etanol biji P.americana kelompok
perlakuan................................................................................
Perhitungan konversi dosis untuk manusia..........................
Penetapan kadar air serbuk biji P.americana........................
71
71
71
72
73
75
76
80
84
85
86
87
88
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xix
Lampiran 14.
Lampiran 15.
Lampiran 16
Lampiran 17.
Hasil rendemen ekstrak etanol biji
P.americana...........................................................................
Bobot pengeringan ekstrak etanol biji P.americana hingga
terbentuk ekstrak kental.........................................................
Pengukuran validitas dan reliabilitas.....................................
Surat pengesahan hasil pemeriksaan histologis.....................
89
89
90
91
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xx
INTISARI
Penelitian ini bertujuan membuktikan adanya efek nefroprotektifpemberian jangka panjang ekstrak etanol biji Persea americana Mill.(P.americana) terhadap penurunan kadar kreatinin serum dan gambaran histologisginjal pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dan memperoleh besar dosisefektifnya.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni denganrancangan acak lengkap pola searah. Dalam penelitian ini digunakan tiga puluhekor tikus jantan galur Wistar, umur 2-3 bulan, berat badan ±150-250 gram. Tikusdibagi dalam enam kelompok yaitu kelompok kontrol negatif diberi olive oildosis 2 mL/kgBB, kelompok kontrol nefrotoksin diberikan karbon tetraklorida 2mL/kgBB secara ip, kontrol ekstrak etanol biji P.americana dengan dosis 1400mg/kgBB, dan kelompok empat hingga enam merupakan kelompok perlakuanyang diberi ektrak etanol biji P.americana dosis 350, 700, dan 1400mg/kgBB.Pemberian ekstrak etanol biji P. americana dilakukan secara peroral, sekali sehariselama enam hari berturut-turut kemudian pada hari yang ketujuh semua tikuspada kelompok perlakuan diberi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB secara ip.Empat puluh delapan jam setelah diberikan karbon tetraklorida, darah diambilmelalui sinus orbitalis mata tikus untuk diukur kadar kreatinin serum danpengambilan organ ginjal untuk pemeriksaan histologis. Data kadar kreatinindianalisis dengan analisis ANOVA satu arah dan dilanjutkan dengan uji Scheffeatau uji T-berpasangan untuk dua kelompok sampel berpasangan.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji P.americanamemiliki efek nefroprotektif dengan penurunan kadar kreatinin serum dangambaran mikroskopis ginjal yang normal pada tikus yang terinduksi karbontetraklorida. Tidak terdapat kekerabatan antara dosis dan respon yang dihasilkan.Ekstrak etanol biji P.americana dosis 350, 700, dan 1400 mg/kgBB memiliki efeknefroprotektif berturut-turut sebesar 133,3; 133,3; dan 85,7%. Dosisefektifnefroprotektif ekstrak etanol biji P.americana adalah 350 mg/kgBB.
Kata kunci : Persea americanaMill., etanol, nefroprotektif, karbontetraklorida
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xxi
ABSTRACT
The aim of this research wasto determine about nephroprotective effectof ethanol extract Persea americana Mill. (P.americana) seeds by reducingcreatinine serum level in rats induced by carbon tetrachloride and get the effectivedose.
This research was an experimental research with direct sampling design.This research used Wistar male rats, age 2-3 months, and weight ± 150-250 g. Therats were divided into six treatment groups. The first group (negative control) wasgivenolive oil 2 mL/kgBW. Then, the second group (nephrotoxin control) wasgiven carbon tetrachloride 2 mL/kgBW i.p. Third group (extract control) wasgiven ethanol extract of P.americanaseed 1400mg/kgBW.The fourth until sixthgroup (treatment) were given ethanol extract of P. americana seed dose 350, 700and 1400mg/kgBW orally once a days for six days successively and then in theseventh day all of the treatments group were given carbon tetrachloride 2mL/kgBW by i.p. Fourty eight hours later, blood was collected from the orbitalsinus eye to be measured creatinine serum level and examined the histologicalfigure of kidney. It was analyzed statistically with One Way Anova and Scheffetest or T-test for paired sample.
Based of the result of the research, ethanol extract P. americana seedgave nephroprotective effects by reducing creatinine serum level and a relativelynormal histological figure of kidney in rats induced by carbon tetrachloride. Therewas no relation between dose and response which were seen from the greater doseof ethanol extract P. americana seed given, thus the nephroprotective was nothigher. Nephroprotective effect with dose of 350, 700 and 1400mg/kgBWsuccessively were 133.3; 133.3; and 85.7%. The effective dose of ethanol extractP.americana seed was 350mg/kgBW.
Keywords : Persea americana Mill. seed, ethanol, nephroprotective, carbontetrachloride
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
BAB IPENGANTAR
A. Latar Belakang
Ginjal merupakan sepasang organ bersimpai yang berfungsi menyaring
darah dan terletak di daerah retroperitoneum pada dinding posterior abdomen.
Ginjal menyaring darah untuk membersihkan zat-zat sisa terutama urea dan
senyawa yang mengandung nitrogen serta mengatur elektrolit ekstravaskular dan
volume intravaskular.Kategori penyakit ginjal didasarkan pada letak lesi,
misalnya glomerulopati dan penyakit tubulo interstisium atau berdasarkan sifat
faktor yang menyebabkan penyakit ginjal, misalnya imunologik, metabolik,
infiltratif, infeksi, hemodinamik, atau toksik (McPhee dan Ganong, 2007). Fungsi
homeostatik pada keadaan gagal ginjal kronik atau gagal ginjal akut akan
terganggu yang kemudian menyebabkan terjadinya abnormalitas komposisi dan
volume cairan tubuh yang berat dan cepat (Guyton dan Hall, 2006).
Penyakit ginjal menjadi masalah kesehatan, baik di negara maju maupun
negara berkembang. Selama satu dekade terakhir terjadi peningkatan insidensi dan
prevalensi penyakit ginjal di seluruh dunia (Hamer dan Nahas, 2006). Menurut
laporan World Health Report (WHO) (2002) dan proyek Global Burden of
Disease (GDB), penyakit ginjal dan saluran kemih telah menjadi salah satu
penyakit global yang mematikan. Penyakit ini menyebabkan rata-rata 850.000
kematian setiap tahun dan 15.010.167 mengalami kecacatan seumur hidup
(WHO,2002).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
Insidensi dan prevalensi gagal ginjal kronik terminal di Indonesia belum
diketahui dengan pasti. Namun diperkirakan besarnya insidensi gagal ginjal
kronik terminal di Indonesia adalah sebesar 100-150 orang tiap 1 juta penduduk
pertahun. Sedangkan besarnya prevalensi gagal ginjal kronik terminal di
Indonesia diperkirakan sebesar 200–250 orang tiap 1 juta penduduk pertahun
(Bakri,2005). Berdasarkan tingginya angka kejadian gagal ginjal, maka
dibutuhkan adanya alternatif pengobatan untuk penyakit ini.
P. americana merupakan tanaman yang dikenal mempunyai kemampuan
mengobati hipertensi (Anaka, Ozolua, dan Okpo, 2009), juga sebagai anti radang
dan menghilangkan rasa sakit (Haryanto,2009). Biji P.americana mengandung
antioksidan larut air dan dapat menangkap radikal bebas yaitu flavonoid (Arukwe,
Amadi, Duru, Agomuo, Adindu, dan Odika, 2012). Flavonoid mampu mencegah
kerusakan oksidatif sel, memiliki aktifitas perlindungan dan anti kanker yang kuat
dalam melawan tahap-tahap karsinogenesis (Salah, Miller, Pangauga, Bolwell,
Rice, dan Evans, 1995). Selain itu, Malangngi, Sangi, dan Paendong (2012)
melaporkan ekstrak etanol biji P. americana menunjukkan aktivitas antioksidan
melalui penangkapan radikal bebas DPPH.
Karbon tetraklorida merupakan salah satu senyawa model yang dapat
menginduksi terjadinya kerusakan oksidatif sel pada beberapa fungsi fisiologis
hewan uji (Ivor dan Schneider, 2005). Karbon tetraklorida akan mengalami
metabolisme oleh enzim sitokrom P-450 membentuk radikal bebas triklorometil
(•CCl3) dan triklorometilperoksida (•OOCCl3) yang lebih reaktif. Radikal bebas
yang dihasilkan dapat menyebabkan peningkatan peroksidasi lipid di hati dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
jaringan ginjal (Manna, Sinha, dan Sil, 2006). Terbentuknya ikatan kovalen antara
radikal bebas dengan makromolekul jaringan ginjal terutama menimbulkan
kerusakan pada bagian tubulus proksimal ginjal (Cotran dan Robbins, 1997).
Kosinska, Karamac, Estrella, Hernandez, Bartolome, dan Dykes (2012)
melaporkan kandungan fenolik yang tinggi serta kapasitas antioksidan dari
ekstraksi biji P.americana dengan menggunakan pelarut metanol. Aktivitas
antioksidan in vitro diperoleh dari hasil ekstraksi biji P.americana menggunakan
pelarut etil asetat, asetone dan metanol (Javier, David, María, Petri, dan Mario,
2011). Pada penelitian ini digunakan sediaan dalam bentuk ekstrak menggunakan
pelarut etanol. Hal ini didasarkan pada penelitian Marlinda, Sangi, dan Wuntu
(2012) yang memperoleh kandungan metabolit sekunder P. americanayaitu
alkaloid, triterpenoid, tanin, flavonoid dan saponin melalui ekstraksi dengan
pelarut etanol 70%. Selain itu, pemilihan pelarut etanol dilakukan untuk
memperoleh senyawa yang dapat berperan sebagai antioksidan menggunakan
pelarut yang memiliki tingkat kepolaran berbeda dengan metanol.
Penelitian mengenai khasiat bagian buah maupun daun tanaman P.
americana telah banyak dilakukan. Namun penelitian terkait biji P. americana
yang umumnya dianggap kurang bermanfaat atau hanya sebagai limbah masih
terbatas terutama terkait kemampuannya sebagai nefroprotektif. Berdasarkan hal
tersebut maka perlu dilakuan penelitian untuk membuktikan kemampuan
nefroprotektif ekstrak etanol biji P. americana pada tikus terinduksi karbon
tetraklorida.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
1. Perumusan masalah :
Berdasarkan latar belakang diatas, dapat diuraikan permasalahan sebagai
berikut :
a. Apakah pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji P.americana mempunyai
efek nefroprotektif terhadap kadar kreatinin dan gambaran histologis organ
ginjal pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida?
b. Berapa besar dosis efektif nefroprotektif ekstrak etanol biji P. americana pada
tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida?
2. Keaslian penelitian
Sejauh pengamatan penulis, penelitian terhadap P. americana pernah
dilakukan oleh Idris, Ndukwe, dan Gimba (2009) yang melaporkan kemampuan
biji P. americana sebagai antimikroba. Penelitian Anaka, dkk. (2009) melaporkan
pengaruh ekstrak biji P.americana sebagai penurun tekanan darah pada tikus
Sprague-Dawley. Arukwe, dkk. (2012) melaporkan kandungan kimia biji P.
americana yaitu saponin, flavonoid, alkaloid dan fenol. Malangngi, dkk.(2012)
juga melaporkan kandungan tanin dan aktivitas antioksidan ekstrak etanol biji P.
americana dalam menangkap radikal bebas DPPH. Kosinska, dkk. (2012)
melaporkan kandungan fenolik yang tinggi serta kapasitas antioksidan pada
ekstrak metanol kulit dan biji P. americana terhadap radikal bebas DPPH dan
ABST.
Sepanjang pengetahuan peneliti, efek nefroprotektif ekstrak etanol biji P.
americanaterhadap kadar kreatinin dan gambaran histologis organ ginjal pada
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida belum pernah
dilakukan.
3. Manfaat penelitian
a. Manfaat teoritis. Penelitian ini diharapkan dapat memberikan
sumbangan ilmu pengetahuan mengenai pengaruh pemberian jangka panjang
ekstrak etanol biji P. americana terhadap fungsi ginjal dengan parameter kadar
kreatinin dan gambaran histologis organ ginjal tikus yang terinduksi karbon
tetraklorida.
b. Manfaat praktis. Penelitian ini dapat dijadikan bahan pertimbangan
masyarakat untuk menggunakan biji P.americana sebagai proteksi terhadap
organ.
B. Tujuan Penelitian
1. Tujuan umum
Membuktikan adanya efek nefroprotektif pemberian jangka panjang
ekstrak etanol biji P.americanapada tikus yang terinduksi karbon
tetraklorida.
2. Tujuan khusus
Mengetahui dosis efektif ekstrak etanol biji P.americana sebagai
nefroprotektif pada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
BAB IIPENELAAHAN PUSTAKA
A. Persea americana Mill.
1. TaksonomiKingdom : Plantae (Tumbuhan)
Subkingdom : Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)
Super Divisi : Spermatophyta (Menghasilkan biji)
Divisi : Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)
Kelas : Magnoliopsida (berkeping dua / dikotil)
Sub Kelas : Magnoliidae
Ordo : Laurales
Famili : Lauraceae
Genus :Persea
Spesies : Persea americana Mill. (Proseanet, 2012)
2. Sinonim
Laurus persea L, Persea drymifolia Schlecht. and cham, Persea
gratissima C.F. Gaertn. Persea edulis Raf., Persea nubigena, Persea steyermarkii
C.K. Allen (Lim, 2012).
3. Nama lain
Adpukat, avokad (Indonesia), avocado (Filipina), Avocado (Amerika),
alligator pear, avocado, avocado-pear, butter fruit (Inggris), avocat, avocatier,
zabelbok, zaboka (Prancis), Alligatorbirne, Avocadobirne (Jerman),
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
apukado, avokado, buah mentega (Malaysia), aguacate, pagua (Spanyol),
awokado (Thailand) (World Agroforestry Centre, 2002).
4. Morfologi
P.americana merupakan jenis pohon berkayu menahun (perennial) dan
memiliki ukuran sedang sampai besar, dengan tinggi mencapai 20 m. Tumbuhan
ini memiliki daun tunggal dan memiliki tepi daun rata. Daun berbentuk elips
hingga lanset, bulat telur hingga bulat telur sungsang, dengan panjang daun 5-40
cm dan lebar 3-15 cm, permukaan atas daun terdapat selaput lilin. Bentuk bunga
berupa tongkol majemuk yang muncul di ujung cabang. Bunga dari P.americana
ini tergolong bunga banci tersusun atas 3 daun mahkota. Buah besar berdaging
dan berair, berbiji tunggal, permukaan buah halus, panjang 7-20 cm. Buah besar
dan bulat, dilapisi dua lapisan dan dua kotiledon besar yang melindungi embrio
kecil (Proseanet, 2012).
5. Kandungan kimia
Kandungan fitokimia pada tanaman alpukat (P.americana) memiliki
kadar yang berbeda-beda pada setiap bagiannya. Beberapa kandungan fitokimia
penting yang ditemukan dalam tanaman ini antara lain, kandungan saponin,
flavonoid, tanin, alkaloid, glikosida sianogenik, steroid dan fenol (Arukwe dkk,
2012).
6. Khasiat dan kegunaan
Di Nigeria, ekstrak biji P. americana digunakan untuk mengobati
hipertensi. Penelitian Anaka, dkk. (2009) melaporkan bahwa ekstrak biji P.
americana dapat menurunkan tekanan darah. Sedangkan ekstrak kulit kayunya
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
digunakan secara tradisional sebagai pengobatan penyakit kulit yang disebabkan
oleh parasit di Nigeria (Owolabi, Jaja, dan Coker, 2005). Penelitian Idris, dkk.
(2009) melaporkan ekstrak biji P. americana memiliki kemampuan sebagai
antimikrobia. Daun P. americanamemiliki kemampuan menyembuhkan penyakit
diabetes melitus, sedangkan biji P. americanasebagai anti radang dan
menghilangkan rasa sakit (Haryanto, 2009). Menurut penelitian yang dilakukan
Malangngi, dkk. (2012), dilaporkan ekstrak etanol biji P.americana memiliki
kandungan antioksidan yang dapat menangkap radikal bebas DPPH. Alpukat
diketahui memiliki kegunaan sebagai tanaman obat yaitu untuk menyembuhkan
luka dan menstimulasi pertumbuhan rambut, sebagai aprodisiaka, dan mengobati
disentri serta diare (DerMarderosin dan Beutler, 2002).
B. Ginjal
1. Anatomi dan fisiologi ginjal
Ginjal merupakan sepasang organ bersimpai yang berfungsi menyaring
darah dan terletak di daerah retroperitoneum pada dinding posterior abdomen.
Ginjal dialiri sekitar 25% curah jantung. Ekskresi produk sisa metabolisme,
pengendalian air dan garam, pemeliharaan keseimbangan asam dan basa, serta
sekresi berbagai hormon dan autokoid merupakan fungsi penting dari ginjal
(Robbins dan Cotran, 2007).
Ginjal memiliki sisi medial cekung, yaitu hilus yang memiliki permukaan
lateral cembung yang dilapisi oleh suatu simpai fibrosa tipis. Hilus berfungsi
sebagai tempat masuknya syaraf, keluarnya ureter serta masuk dan keluarnya
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
pembuluh darah dan pembuluh limfe. Ginjal memiliki korteks di bagian luar dan
medula di bagian dalam. Medula ginjal terdiri dari 8-15 struktur berbentuk
kerucut yang disebut piramida ginjal. Piramida ginjal ini dipisahkan oleh
penjuluran korteks yang disebut columna renalis. Setiap piramida medula dan
jaringan korteks di dasarnya dan sepanjang sisinya membentuk suatu lobus
(Gambar 1) (Mescher, 2011). Pada orang dewasa berat ginjal mencapai 150 gram
dan kira-kira seukuran kepalan tangan. Kapsul fibrosa keras melingkupi ginjal
untuk melindungi struktur dalamnya yang rapuh (Guyton dan Hall, 2006).
Gambar 1. Struktur Ginjal (Mescher, 2011 )
Satuan anatomis fungsi ginjal adalah nefron. Nefron tersusun atas
korpuskulus ginjal, tubulus kontortus proksimal, segmen tebal dan tipis ansa
Henle, tubulus kontortus distal, serta ductus colligens (Gambar 2) (Junqueira,
Carneiro, dan Kelley, 2005). Glomerulus berfungsi sebagai tempat darah disaring,
sedangkan tubulus ginjal berfungsi sebagai tempat air dan garam dalam filtrat
diserap kembali (McPhee dan Ganong, 2007). Tubulus kontortus distal
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
merupakan tempat dimana sekitar 80% elektrolit dan air diserap kembali. Ansa
henle dan tubulus kontortus distal serta ductus colligens merupakan tempat
pemekatan urin dan tempat terjadinya perubahan pada elektrolit dan air sebagai
respon terhadap pengaturan hormonal (McPhee dan Ganong, 2007).
Gambar 2. Nefron ginjal (Mescher, 2011)
Bagian-bagian dari nefron yaitu korpuskel ginjal, tubulus kontortus
proksimal, segmen tebal dan tipis ansa Henle, tubulus kontortus distal, serta
ductus colligens, akan dijelaskan sebagai berikut :
a. Kospuskel ginjal dan filtrasi darah. Pada setiap nefron terdapat sebuah
korpuskel ginjal dengan diameter sekitar 200µm dan mengandung seberkas
kapiler yang disebut glomerulus. Glomerulus ini dikelilingi oleh simpai
(Bowman) glomerular (Gambar 2) (Mescher, 2011).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
Glomerulus tersusun atas arteriol aferen dan eferen serta suatu berkas
kapiler diantaranya yang dilapisi oleh sel endotel. Glomerulus ini dibungkus oleh
sel epitel yang membentuk suatu lapisan yang berhubungan dengan lapisan yang
membentuk simpai Bowman dan tubulus ginjal. Ruang antara kapiler-kapiler di
glomerulus disebut mesangium. Di antara sel epitel dan kapiler terdapat zat yang
membentuk suatu membran basal (McPhee dan Ganong, 2007). Glomerulus
berhubungan dengan kapsula Bowman di bagian dalam melalui lapisan viseral.
Lapisan viseral ini tersusun oleh modifikasi sel-sel epitel yang disebut podosit.
Ruang Bowman dikelilingi oleh dinding luar yang tersusun oleh sel-sel epitel
skuamous simpleks yang membentuk lapisan parietal (Gartner dan Hiatt, 2007).
b. Tubulus kontortus proksimal. Epitel skuamosa pada lapisan parietal simpai
Bowman berhubungan langsung dengan epitel kuboid pada tubulus kontortus
proksimal (Gambar 3). Tubulus berlekuk ini lebih sering tampak pada potongan
korteks ginjal karena berukuran lebih panjang dari tubulus kontortus distal. Sel
tubulus proksimal berfungsi mereabsorpsi sebanyak 60-65% air yang disaring
dalam korpuskel ginjal, beserta hampir semua nutrien, ion, vitamin dan protein
plasma kecil. Dinding tubulus akan mengangkut air dan dan zat terlarut secara
langsung dan segera diambil olehkapiler peritubular( Mescher, 2011).
Adanya sejumlah besar mitokondria pada tubulus proksimal
menyebabkan sel-sel pada tubulus proksimal memiliki sitoplasma asidofilik.
Kemampuan mereabsorbsi dari tubulus kontortus proksimal didukung oleh adanya
banyak mikrovili berukuran panjang, yang membentuk suatu brush border. Pada
sediaan histologis rutin, brush border ini tampak tidak teratur dan lumennya
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
tampak terisi serabut. Kapiler dan komponen mikrovaskular lain banyak dijumpai
pada jaringan ikat sekitar ( Mescher, 2011).
Gambar 3. Sel-sel tubulus kontortus proksimal (P)dandistal (D) ( Mescher, 2011)
Sel-sel epitel tubulus sangat peka terhadap anoksia dan mudah
mengalami efek toksik. Hal ini disebabkan beberapa faktor diantaranya adalah
permukaan yang luas untuk reabsorbsi tubulus, sistem transpor aktif untuk ion
dan asam organik, dan kemampuan melakukan pemekatan secara efektif. Selain
itu kadar sitokrom P450 yang tinggi untuk mendetoksifikasi atau mengaktifkan
toksikan juga menjadi faktor penyebab efek toksik yang dialami oleh epitel
tubulus(Robbins dan Cotran, 2007; Katzung, 2002).
c. Gelung nefron (ansa Henle). Setelah tubulus kontortus proksimal akan
tampak adanya tubulus lurus yang lebih pendek dan memasuki medula
membentuk gelung nefron. Ansa Henle merupakan struktur berbentuk U dengan
segmen desendens dan asendens. Gelung nefron ini tersusun atas selapis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
epitelkuboid di dekat korteks, namun berupa epitel skuamosa di dalam medula
(Mescher, 2011).
d. Tubulus kontortus distal dan aparatus jukstaglomerulari. Saat memasuki
korteks, segmen tebal asendens gelung nefron menjadi lurus dan kemudian
berkelok-kelok membentuk tubulus kontortus distal. Selapis sel kuboid tubulus
kontortus distal berbeda dengan tubulus kontortus proksimal. Sel kuboid tubulus
ini lebih kecil dan tidak memiliki brush border (Gambar 4) ( Mescher, 2011).
Gambar 4. Perbedaan bentuk sel tubulus proksimal dan distal(Mescher, 2011)
e. Tubulus dan ductus colligens. Urin yang dihasilkan setelah melalui proses
filtrasi dan reabsorbsi akan diekskresikan. Urin tersebut mengalir melalui tubulus
kontortus distal hingga sampai ke tubulus colligens. Tubulus colligens merupakan
bagian akhir setiap nefron yang saling bergabung membentuk ductus colligens
yang berukuran lebih besar dan lebih lurus, berjalan di tepi piramidal ginjal dan
bermuara ke dalam calyx minor (Gambar 2). Epitel kuboid berdiameter sekitar 40
µm melapisi tubulus colligens. Sel-sel ductus colligens yang berkonvergensi
berbentuk kolumnar dan diameter ductus mencapai 200µm di dekat puncak
piramida medula ginjal (Gambar 5) ( Mescher, 2011).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
Gambar 5. Gambaran mikroskopik ductus colligens (CD)(Mescher, 2011)
2. Fungsi ginjal
Ginjal menjalankan berbagai fungsi dalam homeostasis sebagai berikut:
a. Ekskresi produk sisa metabolik, bahan kimia asing, obat, dan metabolit
hormon.Ginjal akan membuang berbagai macam produk sisa metabolisme yang
tidak dibutuhkan lagi oleh tubuh. Produk-produk tersebut antara lain urea (dari
metabolisme asam amino), kreatinin (dari kreatin otot), asam urat (dari asam
nukleat), produk akhir pemecahan hemoglobin (seperti bilirubin), dan metabolit
berbagai hormon.
b. Pengaturan keseimbangan air dan elektrolit.Fungsi homeostatis tubuh diatur
oleh ginjal dengan mengatur ekskresi air dan elektrolit sesuai dengan asupannya.
Asupan air dan banyak elektrolit terutama ditentukan oleh kebiasaan makan
seseorang. Dengan demikian ginjal harus mengatur kecepatan ekskresi sesuai
asupan berbagai macam zat. Pada saat terjadi kenaikan asupan kadar natrium
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
dalam tubuh, maka ginjal akan mengatasinya dengan meningkatkan ekskresi
sampai keseimbangan antara asupan dan keluaran natrium tercapai kembali.
c. Pengaturan tekanan arteri. Ginjal mengatur tekanan arteri jangka panjang
dengan mengekskresikan sejumlah natrium dan air. Selain itu ginjal juga turut
mengatur tekanan arteri jangka pendek dengan mengekskresikan faktor atau zat
vasoaktif, seperti renin, yang menyebabkan pembentukan vasoaktif lainnya,
misalnya angiotensin II.
d. Pengaturan keseimbangan asam-basa. Pengaturan keseimbangan asam-basa
oleh ginjal dilakukan bersama dengan paru dan sistem dapar cairan tubuh, dengan
cara mengekskresikan asam dan mengatur penyimpanan dapar cairan tubuh.
e. Pengaturan produksi eritrosit. Ginjal berperan dalam sekresi eritropoetin, yang
merangsang pembentukan sel darah merah. Hipoksia merupakan salah satu
rangsangan yang penting untuk sekresi eritropoetin oleh ginjal .
f. Sintesis glukosa. Ginjal mensintesis glukosa dari asam amino dan prekursor
lainnya selama masa puasa yang panjang, proses ini disebut glukoneogenesis.
Kapasitas ginjal untuk menambahkan glukosa pada darah selama masa puasa yang
panjang dapat menyaingi hati.
g. Pengaturan produksi 1,25-dihidroksivitamin D3.Ginjal menghasilkan bentuk
aktif vitamin D, yaitu 1,25-dihidroksivitamin D3(kalsitriol). Kalsitriol penting
untuk deposit kalsium yang normal dalam tulang dan reabsorpsi kalsium oleh
saluran cerna (Guyton dan Hall,2006).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
3. Kerusakan ginjal
Penyakit yang terjadi pada ginjal sangat kompleks, sehingga untuk
memahaminya dapat disederhanakan dengan membagi penyakit ginjal
berdasarkan empat komponen morfologik dasar ginjal yaitu glomerulus, tubulus,
interstisium dan pembuluh darah. Sebagian besar penyakit pada glomerulus
disebabkan oleh proses imunologik, sedangkan penyakit pada tubulus dan
interstisium sering disebabkan oleh bahan toksik atau infeksi.
a. Penyakit glomerulus. Glomerulonefritis kronis merupakan penyebab tersering
gagal ginjal kronik. Glomerulus dapat mengalami cedera sebagai akibat berbagai
faktor dalam suatu perjalanan penyakit sistemik, misalnya lupus eritematosus,
hipertensi, diabetes melitus. Penyakit glomerulonefritis dibagi menjadi sindrom
nefrotik akut, glomerulonefritis progresif cepat, sindrom nefrotik, gagal ginjal
kronik dan hematuria atau proteinuria asimtomatik.
b. Penyakit yang mengenai tubulus dan interstisium. Penyakit yang mengenai
kedua komponen ini yaitu cedera tubulus iskemik atau toksik yang menyebabkan
Nekrosis Tubulus Akut (NTA) dan gagal ginjal akut serta reaksi peradangan di
tubulus dan interstisium (nefritis tubulointerstisium).
c. Penyakit pembuluh darah. Adanya penyakit vaskular sistemik dapat
mengenai pembuluh darah ginjal. Penyakit yang menyerang bagian pembuluh
darah ginjal yaitu nefrosklerosis jinak, hipertensi maligna dan nefrosklerosis
akseleratif, steanosis arteri renalis, serta mikroangiopati trombolitik (Robbin dan
Cotran, 2007).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
Gagal ginjal akut ditandai oleh naiknya kreatinin serum dengan cepat.
Penyebab gagal ginjal akut dibagi menjadi prerenal, renal, dan postrenal. Aliran
darah cukup tinggi terjadi pada ginjal yaitu 20% curah jantung, namun ginjal
rentan terhadap iskemia. Faktor-faktor yang menyebabkan kerusakan sel ginjal
iskemik atau akibat toksin termasuk kekurangan adenosin trifosfat seluler dan
pembentukan radikal bebas. Penyebab gagal ginjal akut lainnya yaitu
glomerulonefritis dan obat-obatan nefrotoksik (Rubenstein, Wayne, dan Bradley
2007).
Pada penyakit gagal ginjal kronik atau gagal ginjal akut, fungsi
homeostatik ginjal terganggu, dan kemudian terjadi abnormalitas komposisi dan
volume cairan tubuh yang berat dan cepat. Dalam beberapa hari saja dapat terjadi
akumulasi kalium, asam, cairan, dan zat-zat lainnya dalam tubuh sehingga
menyebabkan kematian, kecuali ada intervensi klinis seperti hemodialisis untuk
memulihkan (paling tidak sebagian) keseimbangan cairan tubuh dan elektrolit
(Guyton dan Hall, 2006).
C. Kreatinin
Kreatinin merupakan hasil metabolisme kreatin. Setiap hari kreatin
disintesis terutama oleh hati dan sedikit oleh pankreas serta ginjal. Kreatin
terdapat dalam hampir semua otot rangka dan terikat secara reversibel pada fosfat
dalam bentuk fosfokreatin. Fosfokreatin ini merupakan senyawa penyimpan
energi. Sebagian kecil dari kreatin secara irreversibel berubah menjadi kreatinin
yang tidak mempunyai fungsi dan akan diangkut ke ginjal untuk diekskresikan
(Widmann, 1992).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
Kreatinin akan dilepaskan secara konstan dari otot dan ekskresi utamanya
melalui filtrasi glomerulus. Pada kegagalan ginjal kronis, ketika terjadi penurunan
kecepatan filtrasi glomerulus, kadar kreatinin akan meningkat berbanding terbalik
dengan kecepatan ekskresi (Huether, McCance, Brashers, dan Rote, 2008).
Setelah mengalami filtrasi pada glomerulus, kreatinin tidak akan direabsorpsi oleh
tubulus ginjal. Serum kreatinin dapat digunakan sebagai metode untuk
menentukan Glomerulus Filtration Rate (GFR) dan luasnya kerusakan ginjal
secara tidak langsung pada kerusakan ginjal kronis (Porth dan Matfin, 2009).
Macam metode pemeriksaan kreatinin darah yaitu :
a. Jaffe reaction. Metode ini didasarkan pada adanya reaksi antara kreatinin dan
asam pikrat dalam suasana basa akan membentuk senyawa kuning jingga. Warna
yang dihasilkan akan dibaca oleh alat photometer.
b. Kinetik. Prinsip dasar penggunaan metode ini relatif sama dengan metode
Jaffe reaction, hanya dalam pengukuran dibutuhkan sekali pembacaan. Alat
yang digunakan autoanalyzer.
c. Enzimatik. Penggunaan metode ini didasarkan pada adanya substrat dalam
sampel bereaksi dengan enzim membentuk senyawa enzim substrat dengan
menggunakan alat photometer (Price and Wilson, 1985).
D. Nefrotoksisitas
1. Faktor penyebab nefrotoksisitas
Beberapa faktor yang berkontribusi terhadap kerentanan ginjal pada
senyawa toksik yaitu :
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
a. Tingginya aliran darah pada ginjal.Aliran darah pada sebuah organ hanya
kurang dari 1% dari berat tubuh, tetapi ginjal menerima sekitar 25% aliran darah
dari jantung. Oleh sebab itu ginjal akan menerima konsentrasi toksikan yang lebih
tinggi (per gram jaringan) dibanding jaringan yang diperfusi lambat oleh darah
seperti otot skelet, kulit dan lemak. Distribusi aliran darah renal tidak merata,
dimana korteks menerima aliran darah tidak proporsional dengan yang diterima
oleh medula dan papila. Karena itu, toksikan yang terbawa oleh darah akan lebih
banyak tertuju pada bagian korteks dan berpotensi mempengaruhi fungsi kortikal
lebih besar daripada medula dan papila.
b. Konsentrasi senyawa kimia di cairan intraluminal. Proses pemekatan urin pada
ginjal berpotensi menyebabkan terjadinya pemekatan senyawa toksik pada filtat
glomerular. Proses reabsorpsi sepanjang nefron dapat meningkatkan konsentrasi
intraluminal toksikan dari 10mM menjadi 50mM pada bagian tubulus proksimal
ginjal, 66mM pada lengkung henle, 200mM pada tubulus distal, dan sebesar 2000
mM pada duktus pengumpul. Untuk senyawa toksik yang memiliki kelarutan
rendah akan mengalami presipitasi intraluminal sehingga menyebabkan gagal
ginjal akut sekunder bahkan obstruksi. Gradien konsentrasi berpotensi
menimbulkan terjadinya difusi pasif toksikan kedalam sel-sel tubulus.
c. Reabsorpsi dan /atau sekresi senyawa kimia melalui sel-sel tubulus. Proses
transpor aktif di tubulus proksimal dapat menyebabkan peningkatan konsentrasi
intraseluler dari suatu toksikan yang aktif untuk ditransportasikan. Selama proses
sekresi aktif dan/ atau reabsorpsi, substrat secara umum diakumulasikan pada sel
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
tubulus proksimal dengan kadar yang sangat tinggi dibanding dengan yang berada
di cairan luminal atau daerah peritubular.
d. Biotransformasi dari pro-toksikan menjadi intermediet yang reaktif.Nefron
memiliki kapasitas untuk memetabolisme pada segmen tertentu. Tubulus
kontortus proksimal dan tubulus kontortus distal mengandung isoenzim dari
sistem sitokrom P450 monooksigenase yang dapat memediasi bioaktivasi
intrarenal dari beberapa pro-toksikan. Ditambah lagi aktivitas sintesis
prostaglandin di sel interstitial medula dan papila dapat turut andil dalam
menyebabkan oksidasimenghasilkan kerusakan yang selektif pada papiler
(Hodgson, 2010).
2. Nefrotoksikan
Banyak senyawa memiliki implikasi sebagai nefrotoksikan seperti
terlihat pada Tabel I.
Tabel I. Senyawa-senyawa yang bersifat nefrotoksikan (Hodgson, 2010)
Glomerulus Tubulus Proksimal Tubulus Distal /duktuspengumpul
Papiler
1. Kompleks Imun2. Antibiotik
Aminoglikosida3. Puromycin
aminonukleosida4. Adriamycin
5. Penisilin
1. Antibiotika. Sefalosporinb. Aminoglikosida
2. Agen Antineoplastika. Nitrosoureab. Cisplantin dan analognya
3. Agen radiografi4. Hidrokarbon terhalogenasi
a. kloroformb. karbon tetrakloridac. trikloroetilen
5. Asam maleat6. Citrinin7. Logam
a. Merkurib. Phenacetinc. Acetaminophend. Agen NSAIDe. 2-bromoetilamin
1. Litium2. Tetrasiklin3. Ampoterisin4. Flouride5. Methoxyflurane
1. Aspirin2. Fenasetin3. Acetaminophen4. Agen NSAID5. 2-bromoetilamin
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
E. Karbon Tetraklorida
Karbon tetraklorida merupakan suatu senyawa model nefrotoksik yang
dapat menyebabkan Nekrosis Tubuler Akut (NTA). Radikal bebas yang
dihasilkan dapat mengakibatkan kerusakan pada tubulus proksimal ginjal
(Robbins dan Cotran, 1997). Kerusakan yang terjadi pada tubulus proksimal ginjal
tidak disertai dengan kerusakan membran basalis sehingga memungkinkan untuk
terjadinya regenerasi sel epitelnya. Karena itu, Nekrosis Tubular Akut (NTA)
yang disebabkan karbon tetraklorida bersifat reversibel (dapat balik) (Underwood,
2000; Cotran dan Robbin, 1994).
Gambar 6. Mekanisme biotransformasi dan oksidasi karbon tetraklorida(Timbrell, 2008)
Dalam tubuh karbon tetraklorida akan mengalami proses metabolisme
oleh enzim sitokrom P450 khususnya isoenzim CYP2E1. Enzim pemetabolisme
ini dapat mempengaruhi aktivasi metabolit dari senyawa yang terbentuk, sehingga
dapat meningkatkan atau mengurangi sifat toksik dari senyawa induk. Pada
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
metabolisme karbon tetraklorida, isoenzim CYP2E1 berfungsi sebagai agen
pereduksi dan mengkatalis adisi elekron yang mengakibatkan hilangnya satu ion
klorin sehingga terbentuk radikal bebas triklorometil (•CCl3) (Gambar 6) yang
merupakan metabolit reaktif. Radikal bebas triklorometil ini akan berubah
menjadi radikal bebas triklorometilperoksi (•OOCCl3) dengan adanya O2
(oksigen), dimana radikal bebas dalam bentuk ini menjadi lebih reaktif (Gregus
dan Klaaseen, 2001). Phosgen yang terbentuk dari reaksi pada gambar 2
merupakan suatu intermediet yang sangat reaktif dan dapat bereaksi dengan
makromolekul seluler untuk menginduksi terjadinya kerusakan sel (Hodgson,
2010).
Karbon tetraklorida juga dapat mempengaruhi fungsi mitokondria ginjal,
termasuk menyebabkan efluks kalsium melintasi membran mitokondria
(Natarajan, Basivireddy, Ramachandran, Thomas, Ramamoorthy, dan Pulimood,
2006). Radikal reaktif yang terbentuk dapat berikatan kovalen dengan dengan
makromolekul jaringan, yang menyebabkan jaringan mengalami kerusakan
(Eaton, Gallogher, Bammler, dan Kunze, 1995).
F. Antioksidan
Antioksidan merupakan suatu senyawa kimia yang dapat mencegah
oksidasi suatu substrat misalnya sel pada konsentrasi yang rendah (Halliwell,
1990). Berdasarkan sumbernya antioksidan dibagi dua yaitu antioksidan endogen
dan antioksidan eksogen. Antioksidan endogen merupakan antioksidan yang
dihasilkan oleh tubuh yang terdiri atas enzim-enzim superoksida dismutase,
glutation peroksidase atau glutation reduktase serta enzim katalase dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
23
antioksidan non enzimatik seperti glutation (GSH) dan transferin. Antioksidan
eksogen adalah antioksidan yang dibutuhkan dan diperoleh dari luar seperti
senyawa-senyawa flavonoid, vitamin C, vitamin E dan karotenoid yang banyak
ditemukan dalam sayur-sayuran dan buah-buahan (Heinonen dan Albanes, 1994).
G. Ekstraksi
Ekstrak adalah sediaan kering, kental atau cair yang dibuat dengan
menyari simplisia, diluar cahaya matahari langsung. Cairan penyari yang dapat
digunakan dalam pembuatan ekstrak yaitu air, eter, etanol, atau campuran etanol
dan air (Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2010). Pada akhir proses
ekstraksi semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang
tersisa diperlakukan sedemikian rupa hingga memenuhi baku yang telah
ditetapkan (Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2005).
Istilah maserasi berasal dari bahasa latin ”macerare” yang artinya
mengairi, melunakkan (Voigt, 1994). Metode maserasi adalah salah satu metode
ekstraksi sederhana yang dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia
dalam cairan penyari selama beberapa hari pada temperatur kamar dan terlindung
dari cahaya sambil diaduk (Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik
Indonesia, 2010). Rendaman tersebut disimpan dan harus terlindungi dari cahaya
langsung untuk mencegah reaksi yang dikatalisis cahaya atau perubahan warna,
sambil sesekali digojog. Penggojogan dilakukan untuk mencegah terjadinya
keseimbangan antara larutan zat aktif yang terdapat dalam sel dengan larutan zat
aktif yang terdapat diluar butir sel, sehingga perpindahan bahan aktif dapat terus
berlangsung(Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
24
Indonesia, 1986). Keadaan diam tanpa penggojokan selama maserasi
menyebabkan turunnya perpindahan bahan aktif. Semakin besar perbandingan
simplisia yang diekstraksi terhadap cairan ekstraksi, akan semakin baik hasil yang
diperoleh (Voight, 1994).
Dengan metode ini, cairan penyari akan masuk ke dalam sel melewati
dinding sel sehingga isi sel akan larut akibat perbedaan konsentrasi antara larutan
di dalam sel dengan di luar sel. Larutan dengan konsentrasi tinggi akan terdesak
keluar dan diganti oleh cairan penyari dengan konsentrasi rendah (proses difusi).
Peristiwa tersebut terjadi secara berulang hingga terjadi keseimbangan konsentrasi
antara larutan di luar sel dan di dalam sel. Selanjutnya endapan dipisahkan dan
filtrat dipekatkan (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik
Indonesia, 1986).
Lamanya proses maserasi adalah berbeda-beda. Farmakope
mencantumkan 4-10 hari, namun pada umumnya 5 hari. Setelah waktu tersebut
keseimbangan antara bahan yang diekstraksi pada bagian dalam sel dengan luar
sel telah tercapai. Remaserasi merupakan metode ekstraksi dengan melakukan
pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserat pertama,
dan seterusnya. Pelarut kedua ditambahkan sebanyak penambahan pelarut pertama
(Depkes RI, 2000).
Etanol dipertimbangkan sebagai penyari karena lebih selektif, kapang
dan bakteri sulit tumbuh dalam etanol 20% ke atas, tidak beracun, netral,
absorbsinya baik. Etanol dapat dicampur dengan air pada berbagai perbandingan.
Dengan menggunakan pelarut etanol, panas yang diperlukan untuk pemekatan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
25
akan lebih sedikit. Untuk meningkatkan penyarian, biasanya digunakan campuran
antara etanol dan air dalam berbagai perbandingan tergantung pada bahan yang
akan disari (Voight, 1994).
H. Landasan Teori
Ginjal merupakan organ yang berfungsi menyaring darah. Fungsi
penting ginjal antara lain dalam ekskresi produk sisa metabolisme, pengendalian
air dan garam, pemeliharaan keseimbangan asam dan basa, serta sekresi berbagai
hormon dan autokoid (Robbins dan Cotran, 2007).Ginjal menerima sekitar 20%
aliran darah dari jantung, namun ginjal rentan terhadap iskemia. Beberapa
penyebab kerusakan sel ginjal yaitu terjadinya iskemik, adanya toksin,
kekurangan adenosin trifosfat seluler(ATP seluler), dan pembentukan radikal
bebas. Penyebab gagal ginjal akut lainnya yaitu glomerulonefritis dan obat-obatan
nefrotoksik (Rubenstein dkk., 2007). Pengukuran kuantitatif kerusakan ginjal
dapat dilakukan dengan mengukur kadar kreatinin yang pada kegagalan ginjal
akan ditahan bersama unsur nitrogen non-protein darah (Baron,1992).
Karbon tetraklorida akan dimetabolisme oleh enzim sitokrom P-450
menjadi radikal bebas triklorometil (•CCl3) dan triklorometilperoksida
(•OOCCl3) yang lebih reaktif. Radikal reaktif yang terbentuk dapat berikatan
kovalen dengan makromolekul jaringan, yang menyebabkan jaringan mengalami
kerusakan (Eaton dkk., 1995).
Pemberian antioksidan dapat melindungi jaringan dari pengaruh radikal
bebas, ROS(Reactive Oxygen Species) dan peroksidasi lipid sehingga dapat
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
26
memperlambat proses perjalanan penyakit kronis seperti gagal ginjal kronis (Lai,
Chou dan Chao, 2001 ; Gulcin, Oktay, Kirecci dan Aslam, 2003). Senyawa tanin
yang yang diperoleh dari ekstraksi biji P. americana dengan pelarut etanol oleh
Malangngi dkk. (2012) menunjukkan kemampuan sebagai antioksidan yang dapat
menangkap radikal bebas DPPH. Selain itu, pada penelitian yang dilakukan
Kosinka dkk. (2012) dengan melakukan ekstraksi biji P. americana dengan
pelarut metanol diperoleh aktivitas antioksidan dari kandungan fenolik dalam
menangkap radikal bebas DPPH dan ABST. Penelitian ini dilakukan untuk
membuktikan kemampuanproteksi P. americana terhadap kerusakan ginjal akibat
adanya radikal bebas yang dihasilkan oleh karbon tetraklorida.
I. Hipotesis
Pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji P. americana memiliki efek
sebagai nefroprotektif dengan menurunkan kadar kreatinin serum dan gambaran
histologis ginjal yang normal pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
27
BAB IIIMETODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan
rancangan acak lengkap pola searah.
B. Variabel dan Definisi Operasional
1. Variabel utama
a. Variabel bebas. Variabel bebas dalam penelitian ini adalah dosis
ekstrak etanol biji P. americana.
b. Variabel tergantung. Variabel tergantung penelitian ini adalah kadar
kreatinin serum dan gambaran histologis ginjal akibat pemberian jangka panjang
ekstrak etanol biji P.americanapada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon
tetraklorida.
2. Variabel pengacau
a. Variabel pengacau terkendali. Variabel pengacau terkendali dalam
penelitian ini adalah kondisi hewan uji, yaitu tikus jantan galur Wistar dengan
berat badan 150-250 gram dan umur 2-3 bulan. Frekuensi pemberian ekstrak
etanol biji P. americanasatu kali sehari selama enam hari berturut-turut dengan
waktu pemberian yang sama, cara pemberian senyawa pada tikus dilakukan secara
peroral dan intraperitonial, dan bahan uji yang digunakan berupa serbuk biji
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
28
P.americana yang diperoleh dari daerah Padang, Sumatera Barat, diambil pada
bulan Januari 2013.
b. Variabel pengacau tak terkendali. Variabel pengacau tak terkendali
dalam penelitian ini adalah kondisi patologis dari tikus jantan galur Wistar yang
digunakan. .
3. Definisi operasional
a. Biji P.americana. Biji yang diambil dari tanaman P.americana adalah
yang berwarna kuning segar, tidak bercacat dan diambil dari buah yang telah
matang.
b. Ekstrak etanol biji P.americana. Ekstrak etanol biji P.americana
adalah ekstrak kental yang diperoleh secara maserasi dengan merendam serbuk
kering biji P.americana seberat 40,0 g dalam 200 mL pelarut etanol 70% selama
lima hari, lalu diremaserasi selama dua hari. Kemudian disaring menggunakan
corong Buchner, dievaporasilalu diuapkan dengan waterbath selama 10 jam pada
suhu 800 C, hingga diperoleh selisih bobot penimbangan adalah 0.
c. Dosis ekstrak etanol biji P. americana.Didefinisikan sebagai jumlah
(mg) ekstrak kental tiap kilogram (kg) berat badan tikus.
d. Kadar kreatinin(mg/dL). Didefinisikan sebagai jumlah kreatinin (mg)
dalam tiap satu desiliter (dL) darah subjek uji.
e. Penurunan kadar kreatinin serum. Didefinisikan sebagai kemampuan
ekstrak etanol biji P. americanapada dosis tertentu untuk menurunkan kadar
kreatinin serum pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
29
f. Pemberian jangka panjang. Didefinisikan sebagai pemberian ekstrak
etanol biji P. americana satu kali sehari selama enam hari berturut-turut secara
peroral.
g. Gambaran histologis ginjal. Didefinisikan sebagai gambaran
mikroskopik sel-sel ginjal tikus setelah perlakuan.
C. Bahan Penelitian
1. Bahan utama
a. Hewan uji yang digunakan yaitu tikus jantan galur Wistar dengan umur 2-3
bulan dan berat badan 150-250 gram yang diperoleh dari Laboratorium
Imono Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
b. Serbuk biji P.americanayang diperoleh dari daerah Padang, Sumatera Barat
pada bulan Januari 2013.
2. Bahan kimia
a. Bahan nefrotoksin yang digunakan adalah karbon tetraklorida yang diperoleh
dari laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma Yogyakarta.
b. Etanol 70% yang digunakan sebagai cairan penyari dalam proses ekstraksi
serbuk biji P.americanayang diperoleh daritoko kimia Aldrich.
c. Bahan untuk pembuatan preparat histologis ginjal adalah larutan fisiologis
NaCl 0,9% (normal saline) dan formalin 10%.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
30
d. Aqua bidestilata untuk blanko pengujian kadar kreatinin, yang diperoleh
dari Laboratorium Kimia Analisis Instrumental Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
e. Kontrol serum Kreatinin Cobas® (PreciControl ClinChem Multi 2)
Roche/Hitachi analyzer
f. Reagen serum kreatinin
Komposisi dan konsentrasi dari reagen serum kreatinin adalah sebagai
berikut :
Tabel II. Komposisi dan konsentrasi reagen serum kreatinin
g. Olive oil Bertolli ®
D. Alat atau Instrumen Penelitian
1. Alat ekstraksi
Seperangkat alat gelas berupa bekker glass, erlenmeyer, gelas ukur, labu
ukur, cawan porselen, corong Buchner, pipet tetes, batang pengaduk (Pyrex Iwaki
Glass®). Ayakan No. 40 Electric Sieve Shaker Indotest 28 Multi Lab®, alumunium
foil, timbangan analitik Mettler Toledo®, rotary vacuum evaporator IKAVAC®,
waterbath dan desikator.
2. Alat uji nefroprotektif
Seperangkat alat gelas berupa Bekker glass, tabung reaksi, labu ukur,
batang pengaduk (Pyrex Iwaki Glass®), pipet gondok, glass firn. Timbangan
elektrik Mettler Toledo®, sentrifuge Centurion Scientific®, vortex Genie
Reagen I Sodium Hidroxide 0,2mol/LReagen II Picric Acid 20 mmol/L
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
31
Wilten®, spuit per oral dan syringe 3 mL Terumo®, spuit ip. dan syringe 1 mL
Terumo®, pipa kapiler, tabung Eppendorf, Microlab 200 Merck®.
E. Tata Cara Penelitian
1. Determinasi serbuk bijiP. americana
Determinasi serbuk bijiP. americana dilakukan dengan mencocokan ciri-
ciri organoleptis dan mikrokopis serbuk biji yang diperoleh dari Padang dengan
serbuk biji dari sampel otentik tanaman P. americana yang dibuat secara mandiri
di Laboratorium Farmakognosi Fitokimia.
2. Pembuatan serbuk
Biji P. americana dicuci bersih menggunakan air mengalir dan bagian
kulit ari biji alpukat tersebut dibuang. Biji yang telah dicuci kemudian dipotong
kecil-kecil dan diangin-anginkan hingga biji tidak tampak basah. Kemudian
dilanjutkan dengan pengeringan menggunakan oven pada suhu 50˚C selama 24
jam, lalu diblender. Serbuk inilah yang akan dibandingkan dengan serbuk yang
diperoleh dari daerah Padang.
3. Pengumpulan bahan
Bahan uji yang digunakan adalah biji P. americana yang sudah dalam
bentuk serbuk berwarna kecoklatan, diperoleh dari wilayah Padang,Sumatera
Barat.
4. Penetapan kadar air serbuk biji P. americana
Penetapan kadar air dilakukan dengan alat moisture balance Halogen
moisture analyser Mettler Toledo®menggunakan metode gravimetri. Serbuk
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
32
ditimbang dan dihitung sebagai bobot sebelum pemanasan. Sebanyak 5 g serbuk
biji P.americanadimasukkan ke dalam alat moisture balance, kemudian diratakan.
Serbuk dipanaskan pada suhu 1050C selama 15 menit. Kemudian serbuk
ditimbang ulang dan dihitung sebagai bobot sesudah pemanasan. Selisih bobot
sebelum pemanasan dan sesudah pemanasan merupakan kadar air dari serbuk
yang diteliti.
5. Pembuatan ekstrak etanol biji P. americana
Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi yaitu dengan merendam 40
g serbuk biji P. americana dalam 200 mL pelarut etanol 70 % selama 5 hari
terlindung dari cahaya matahari, sambil sesekali digojog. Lalu hasil maserasi
disaring untuk memisahkan maserat dari serbuk dengan menggunakan corong
Buchner yang dilapisi kertas saring. Kemudian serbuk hasil penyaringan tersebut
diremaserasi dengan pelarut baru sebanyak 200 mL selama 2 hari lalu disaring
kembali ( Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2010). Maserat kemudian
dicampur dan dievaporasi dengan rotary evaporator. Prinsip kerja alat vaccum
evaporator adalah menguapkan pelarut pada suhu rendah dengan adanya tekanan
yang menyebabkan titik didih pelarut menjadi lebih rendah dan mudah diuapkan.
Ekstrak yang sudah diuapkan pada vaccum evaporator lalu ditempatkan dalam
cawan petri dan diuapkan kembali di atas waterbath selama 10 jam dengan suhu
80oC hingga diperoleh selisih bobot penimbangan adalah 0. Kemudian ekstrak
kental yang diperoleh disimpan di dalam desikator.
Menghitung rata-rata rendemen lima replikasi ekstrak etanol biji P.americana
kental yang telah dibuat.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
33
Rendemen ekstrak = berat cawan ekstrak kental – berat cawan kosong
− = . 1 + . 2 + . 3 + . 4 + . 556. Penetapan konsentrasi pekat ekstrak
Konsentrasi yang dapat digunakan adalah konsentrasi pekat yang dapat
dibuat, dimana pada konsentrasi tersebut suspensi ekstrak dapat dimasukkan serta
dikeluarkan dari spuit oral dengan mudah. Cara pembuatannya adalah dengan
melarutkan ekstrak kental dengan CMC Na 1%, dengan melakukan kenaikan
konsentrasi secara bertahap hingga pada konsentrasi dimana campuran ekstrak
dengan CMC Na% sudah tidak dapat dikeluarkan dengan mudah dari spuit oral.
7. Penetapan dosis ekstrak etanol biji P. americana
Penetapan peringkat dosis didasarkan pada perhitungan dengan bobot
tikus paling besar yaitu 250 gram, konsentrasi ekstrak etanol biji P.americana
yang dapat dimasukkan dan dikeluarkan melalui spuit oral yaitu 7% atau 70
mg/mL, serta volume maksimal pemberian oral yaitu 5 mL.
Maka dosis tertinggi dapat ditentukan sebagai berikut :
BB x D = C x V
Berat badan (kg) x dosis(mg/kgBB) = konsentrasi (mg/mL) x volume pemberian
(mL)
0,250 kg x D = 70mg/mL x 5 mL
D = 1400 mg/kgBB
Dosis tengah dan dosis rendah ditentukan dengan menurunkan dua dan empat
kelipatan dari dosis tertinggi sehingga diperoleh dosis 700 dan 350 mg/kgBB.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
34
8. Pembuatan larutan karbon tetraklorida
Karbon tetraklorida dibuat dalam konsentrasi 50%, dengan cara
memasukkan 50 mL karbon tetraklorida ke dalam labu ukur 100 mL, lalu
ditambahkan olive oil hingga tanda batas (Janakat dan Al-Merie, 2002).
9. Pembuatan suspending agent CMC-Na 1%
Suspending agent CMC-Na 1% dibuat dengan cara mendispersikan lebih
kurang 1,0 g CMC-Na yang telah ditimbang seksama ke dalam air sampai volume
100,0 mL. CMC-Na 1% ini akan digunakan untuk membuat suspensi ekstrak
etanol biji P.americana.
10. Uji pendahuluan
a. Penetapan dosis nefrotoksin karbon tetraklorida dan waktu
pencuplikan darah. Pemilihan dosis karbon tetraklorida dilakukan untuk
mengetahui pada dosis berapa karbon tetraklorida mampu menyebabkan
kerusakan ginjal tikus yang ditandai dengan peningkatan kadar kreatinin dalam
serum darah. Dosis nefrotoksik yang digunakan dalam penelitian ini mengacu
pada penelitian yang dilakukan oleh Moneim dan El-Deib (2012) dan hasil
orientasi, dimana pada dosis karbon tetraklorida 2 mL/kgBB dapat menyebabkan
kerusakan ginjal dengan kenaikan kadar kreatinin serum. Penentuan waktu
pencuplikan darah didasarkan pada hasil orientasi yaitu pada jam ke 48 setelah
induksi karbon tetraklorida, dimana terjadi peningkatan kreatinin paling tinggi.
11. Pengelompokan dan perlakuan hewan uji
Sejumlah tiga puluh ekor tikus dibagi secara acak ke dalam enam
kelompok perlakuan masing-masing sejumlah lima ekor tikus. Kelompok I
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
35
(kontrol negatif) diberi olive oil dosis 2 mL/kgBB secara i.p. Kelompok II
(kontrol nefrotoksik) diberi larutan karbon tetraklorida : olive oil (1:1) dosis 2
mL/kgBB secara i.p. Kelompok III (kontrol ekstrak) diberi ekstrak etanol biji P.
americana dosis 1400 mg/kgBB selama enam hari berturut-turut secara per oral,
tanpa diinduksi karbon tetraklorida. Kelompok IV, V dan VI merupakan
kelompok perlakuan yang diberi ekstrak etanol biji P. americana dengan dosis
350, 700 dan 1400mg/kgBB. Pada hari ke tujuh kelompok IV-VI diberi larutan
karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB secarai.p. Setelah 48 jam diambil darahnya
melalui sinus orbitalis mata, lalu diukur kadar kreatinin serum.
Setelah pengambilan darah untuk pengukuran kadar kreatinin serum,
tikus dikorbankan dan diambil organ ginjalnya. Organ ginjal tersebut kemudian
dicuci pada larutan saline (NaCl 0,9%) dan diawetkan dengan direndam dalam
formalin 10% untuk dibuat preparat histologis lalu diamati penampakan
mikroskopisnya. Pemeriksaan histologis dilakukan di Laboratorium Patologi
Kedokteran Hewan Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Hasil pemeriksaan
dibuat fotomikroskopik sebagai data kualitatif penunjang.
12. Pembuatan serum
Darah diambil melalui bagian sinus orbitalis mata tikus lalu ditampung
dalam tabung Eppendorf. Darah didiamkan selama kurang lebih 15 menit,
kemudian disentrifugasi selama 15 menit dengan kecepatan 10000 rpm dan bagian
supernatannya diambil. Supernatan yang diambil adalah serum yang akan diukur
kadar kreatininnya.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
36
13. Penetapan kadar serum kontrol, serum kreatinin
Alat yang digunakan untuk menganalisis kadar kreatinin serum adalah
Mikrolab 200 Merck®. Kadar kreatinin dinyatakan dalam satuan mg/dL.
Pengukuran kadar kreatinin serum dilakukan di Laboratorium Biokimia-Fisiologi
Manusia, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
a. Penetapan kadar serum kontrol. Analisis dilakukan dengan cara
mencampur 1000 μL reagen I dengan 50 μL serum kontrol, divorteks selama lima
detik lalu didiamkan selama dua menit. Setelah itu, ditambahkan 250 μL reagen
II, divorteks selama lima detik dan dibaca resapan setelah satu menit.
b. Penetapan kadar kreatinin serum. Analisis serum kreatinin dilakukan
dengan cara mencampur 1000 μL reagen I dengan 50μL serum darah tikus,
divorteks selama lima detik, lalu didiamkan selama dua menit. Setelah itu,
ditambahkan 250μL reagen II, divorteks selama lima detik dan dibaca resapan
setelah satu menit.
F. Tata Cara Analisis Hasil
Data kadar kreatinin serum diuji dengan Kolmogorov-Smirnov untuk
mengetahui distribusi data dan analisis variansi dengan Levene’s Testuntuk
melihat homogenitas antar kelompok perlakuan sebagai syarat analisis parametrik.
Data terdistribusi normal dan variansi homogen maka dilanjutkan dengan analisis
variansi pola searah (ANOVA one way) dengan taraf kepercayaan 95% untuk
mengetahui perbedaan masing-masing kelompok. Kemudian dilanjutkan dengan
uji Scheffe untuk melihat perbedaan antar kelompok bermakna (signifikan)
(p<0,05) atau tidak bermakna (tidak signifikan) (p>0,05). Bila data terdistribusi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
37
normal dan terdiri dari dua kelompok yang berpasangan, maka dilakukan uji t-
berpasangan untuk melihat kebermaknaan perbedaan pada dua kelompok tersebut.
Penentuan % efek nefroprotektif dilakukan melalui perhitungan dengan rumus
sebagai berikut :
( ) – (( ) )x 100
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
38
BAB IVHASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan adanya efek nefroprotektif
pada pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji P. americana terhadap
penurunan kadar kreatinin serum dan gambaran histologis ginjal pada tikus
terinduksi karbon tetraklorida serta memperoleh besar dosis efektifnya. Dalam
penelitian ini dilakukan beberapa tahapan yaitu determinasi serbuk P.americana,
penetapan kadar air serbuk, pembuatan ekstrak, penetapan dosis ekstrak etanol biji
P. americana, pengukuran kadar kreatinin serum, dan pemeriksaan histologis
ginjal.
A. Penyiapan Bahan
1. Hasil determinasi serbuk biji P.americana
Tujuan dilakukan determinasi serbuk P.americana adalah untuk
memastikan bahwa serbuk yang digunakan adalah benar berasal dari biji tanaman
P.americana. Determinasi dilakukan dengan mencocokkan ciri-ciri organoleptis
dan mikrokopis serbuk biji P.americana yang diperoleh dari daerah Padang
dengan serbuk biji yang dibuat secara mandiri di Laboratorium Farmakognosi
Fitokimia (Lampiran 5). Hasil determinasi yang dilakukan menunjukkan bahwa
serbuk yang digunakan adalah benar berasal dari tanaman
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
39
P.americana berdasarkan kemiripan secara organoleptis yaitu kemiripan
warna, rasa dan aroma serbuk yang dibandingkan. Selain itu juga berdasarkan
pengamatan mikroskopik serbuk, diperoleh adanya kemiripan fragmen-
fragmen antara kedua serbuk yang dibandingkan yaitu amilum dan parenkim
endosperm.
2. Penetapan kadar air sebuk biji P.americana
Penetapan kadar air serbuk biji P.americana bertujuan mengetahui
kadar air dalam serbuk yang akan digunakan. Kadar air dalam serbuk harus
kurang dari 10% untuk memenuhi persyaratan kadar air serbuk yang baik
(Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1995). Kadar air dalam
serbuk penting dilakukan dan harus memenuhi persyaratan untuk menjamin
serbuk bebas dari kemungkinan pertumbuhan mikroorganisme karena air
merupakan media pertumbuhan yang baik bagi mikroorganisme.
Penetapan kadar air serbuk P.americana dilakukan menggunakan alat
moisture balance dengan metode gravimetri. Pada penetapan kadar air ini
digunakan suhu 1050 C selama 15 menit. Hasil perhitungan rata-rata selisih
bobot sebelum dan sesudah pemanasan pada ketiga replikasi menunjukkan
bahwa kadar air dalam serbuk biji P.americana yaitu sebesar 7,40%. Kadar air
pada serbuk yang digunakan telah memenuhi persyaratan kadar air serbuk yang
baik.
3. Hasil pembuatan dan penimbangan ekstrak etanol biji P.americana
Pembuatan ekstrak etanol biji P.americana dilakukan dengan metode
maserasi. Dalam proses maserasi dilakukan perendaman serbuk dalam cairan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
40
penyari sambil sesekali digojok untuk menarik zat aktif dari dalam serbuk ke
dalam cairan penyari. Cairan penyari yang digunakan adalah etanol 70%.
Pemilihan cairan penyari didasarkan pada penelitian Malangngi, dkk. (2012)
yang memperoleh kandungan dan aktivitas senyawa antioksidan pada serbuk
biji P.americana menggunakan penyari etanol.
Proses maserasi dilakukan dengan merendam serbuk biji P.americana
pada cairan penyari selama 5 hari sambil sesekali digojog. Penggojogan
dilakukan untuk mencegah terjadinya keseimbangan antara larutan zat aktif
yang terdapat dalam sel dengan larutan zat aktif yang terdapat diluar butir sel
(Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia,
1986). Keadaan diam tanpa penggojogan selama maserasi menyebabkan
turunnya perpindahan bahan aktif dari dalam bahan yang diekstraksi ke dalam
cairan penyari (Voigt,1994). Kemudian hasil maserasi disaring dan dilakukan
remaserasi. Remaserasi ini dilakukan untuk menarik sisa zat aktif yang belum
tertarik sempurna pada cairan penyari. Remaserasi dilakukan dengan
merendam serbuk yang telah disaring menggunakan pelarut baru lalu direndam
selama 2 hari sebelum disaring kembali.
Maserat yang diperoleh kemudian diuapkan hingga diperoleh selisih
bobot pengeringan adalah 0. Hal ini bertujuan menghitung sisa ekstrak kental
setelah dilakukan pengeringan pada suhu 800C dan menjamin tidak ada lagi
cairan penyari pada ekstrak kental yang diperoleh. Ekstrak dalam cawan
dipanaskan dengan suhu 800C menggunakan waterbath dan ditimbang setiap
dua jam hingga diperoleh selisih bobot antar penimbangan adalah nol.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
41
Berdasarkan hasil pengeringan yang telah dilakukan, didapatkan selisih bobot
adalah 0 yaitu pada jam ke 8 dan 10 dimana antara penimbangan jam ke 8 dan
jam ke 10 tidak ada perubahan bobot ekstrak kental. Hal ini menunjukkan
bahwa cairan penyari sudah tidak terdapat pada ekstrak kental yang diperoleh.
Hasil proses ekstraksi menunjukkan bahwa sebanyak 320 gram serbuk kering
biji P.americana menghasilkan 13 cawan ekstrak kental. Rata-rata rendemen
setiap cawan adalah 4,45 gram ekstrak kental, sehingga dari 320 gram serbuk
kering P.americana menghasilkan 57,85 gram ekstrak kental dengan rendemen
18,08%.
B. Uji Pendahuluan
1. Penentuan dosis nefrotoksik karbon tetraklorida
Penentuan dosis nefrotoksik karbon tetraklorida dilakukan untuk
menetapkan dosis karbon tetraklorida yang dapat menyebabkan kerusakan
fungsi ginjal dengan parameter kenaikan kadar kreatinin serum. Dalam
penelitian ini, dosis karbon tetraklorida yang digunakan mengacu pada jurnal
penelitian dan hasil orientasi. Pada penelitian yang dilakukan Moneim dan El-
Deib (2012), dengan pemberian karbon tetraklorida 2 mL/kgBB terjadi
kenaikan kadar kreatinin serum tikus hingga satu setengah kali dibanding kadar
kreatinin kontrol. Hasil orientasi yang telah dilakukan juga menunjukkan
bahwa dosis karbon tetraklorida yang menyebabkan kenaikan kadar kreatinin
serum tikus adalah pada dosis 2 mL/kgBB.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
42
2. Penentuan waktu pencuplikan darah
Tujuan dilakukan penentuan waktu pencuplikan darah adalah
mengetahui waktu dimana karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB memberikan
efek nefrotoksik paling besar dengan kenaikan kadar kreatinin serum paling
tinggi dalam selang waktu tertentu. Penentuan waktu pencuplikan darah
melalui sinus orbitalis tikus jantan dilakukan pada jam ke 0, 24, 48, dan 72
setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB secara
intraperitoneal.
Hasil pengukuran kadar kreatinin serum tikus pada jam ke-0, 24, 48,
dan 72 setelah pemejanan karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB tersaji dalam
tabel III dan gambar 7.
Tabel III. Purata kadar kreatinin tikus pada jam ke 0, 24, 48 dan 72setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB (n=4)
Selang waktu (jam) Mean (mg/dL)± SE0 0,35 ± 0,0324 0,53 ± 0,0548 1,00 ± 0,07
72 0,45 ± 0,03
keterangan : Mean= Rerata kadar kreatinin (mg/dL)SEM= Standar Error
Gambar 7. Diagram batang rata-rata kadar kreatinin tikus pada jam ke 0, 24, 48dan 72 setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
43
Hasil pengujian menggunakan metode Kolmogorov-Smirnov
menunjukkan kadar kreatinin pada jam ke 0, 24, 48 dan 72 masing-masing
terdistribusi normal. Dengan demikian analisis dapat dilanjutkan dengan
variansi satu arah (One Way ANOVA). Nilai signifikansi yang diperoleh adalah
0,000 (p<0,05). Hasil ini menunjukkan bahwa terdapat perbedaan antara
keempat kelompok selang waktu pencuplikan darah yang dilakukan. Kemudian
dilanjutkan analisis untuk melihat kebermaknaan perbedaan antar kelompok
tersebut dengan uji Scheffe. Berdasarkan analisis dengan uji Scheffe diperoleh
hasil yang tertera pada tabel IV.
Tabel IV. Hasil uji Scheffe kadar kreatinin serum tikus pada jam ke 0,24,48 dan 72 setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB
Selang Waktu 0 24 48 720 TB BB TB24 TB BB TB48 BB BB BB72 TB TB BB
Keterangan :BB = Berbeda bermakna (p < 0,05) TB = berbeda tidak bermakna (p>0,05)
Nilai normal kadar kreatinin serum tikus putih adalah 0,2-0,8 mg/dL
(Malole dan Pramono, 1989). Pada tabel III, menunjukkan kadar kreatinin
serum pada jam ke 0 dan ke 24 tergolong normal dan meningkat paling tinggi
pada jam ke 48 setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB yaitu
dengan purata kadar sebesar 1,00 ± 0,07 mg/dL. Pada jam ke 48 ini terjadi
peningkatan kadar kreatinin yang berbeda bermakna terhadap jam ke 0, 24 dan
jam ke 72 (tabel IV). Kadar kreatinin serum tikus kemudian mengalami
penurunan pada jam ke 72 (0,45 ± 0,03), dimana hasilnya menunjukkan
berbeda tidak bermakna terhadap jam ke 0 (0,35 ± 0,03) dan jam ke 24 (0,53 ±
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
44
0,05). Hal ini menunjukkan bahwa kadar kreatinin pada jam ke 72 sudah
kembali normal. Berdasarkan hasil yang diperoleh tersebut, maka dalam
penelitian ini waktu pencuplikan darah tikus ditentukan pada jam ke 48 setelah
pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB.
3. Penetapan lama pemejanan ekstrak etanol biji P.americana
Pada penelitian ini dilakukan pemejanan ekstrak etanol biji
P.americana secara jangka panjang yaitu selama enam hari berturut-turut dan
pada hari yang ketujuh diberikan karbon tetraklorida. Pemilihan jangka waktu
selama enam hari berturut-turut didasarkan pada penelitian yang dilakukan
oleh Windrawati (2013), untuk melihat kemampuan hepatoprotektif ekstrak
daun Macaranga tanarius. Berdasarkan hal tersebut, pada penelitian ini juga
digunakan model pemberian jangka panjang selama enam hari berturut-turut
untuk melihat adanya kemampuan nefroprotektif ekstrak etanol biji
P.americana.
4. Penetapan dosis ekstrak etanol biji P. americana
Penetapan dosis ekstrak etanol biji P.americana bertujuan untuk
menentukan peringkat dosis ekstrak etanol biji P.americana yang akan
digunakan. Penetapan dosis didasarkan pada dosis tertinggi ekstrak etanol biji
P.americana yang dapat diberikan pada tikus. Dosis tertinggi ekstrak etanol
biji P.americana diperoleh dengan cara menentukan terlebih dahulu
konsentrasi tertinggi ekstrak etanol biji P.americana yang dapat dimasukkan
dan dikeluarkan dengan mudah melalui spuit oral.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
45
Berdasarkan hasil orientasi yang telah dilakukan, diperoleh bahwa
konsentrasi tertinggi ekstrak etanol biji P.americana yang dapat diberikan
secara oral pada tikus adalah sebesar 70 mg/mL. Dari konsentrasi pekat ekstrak
yang telah ditentukan tersebut, selanjutnya ditentukan dosis tertinggi
pemberian ekstrak etanol biji P.americana yaitu sebesar 1400 mg/kgBB.
Setelah itu ditentukan dosis tengah dan dosis rendah ekstrak etanol biji
P.americana dengan menurunkan dosis tertinggi sebesar dua dan empat
kelipatan sehingga diperoleh dosis 700 dan 350mg/kgBB.
C. Hasil Uji Nefroprotektif Ekstrak Etanol biji P. americana
Penelitian ini bertujuan membuktikan adanya efek nefroprotektif dari
pemberian ekstrak etanol biji P.americana jangka panjang yaitu selama enam
hari terhadap kadar kreatinin dan gambaran histologis organ ginjal tikus setelah
terinduksi karbon tetraklorida. Adelman, Spangler, Beasom, Ishizaki, dan
Conzelman (1981) menyatakan bahwa kadar kreatinin serum merupakan
penanda yang reliabel untuk mengukur status fungsi ginjal. Hal ini disebabkan
kadar kreatinin yang relatif normal, dimana kadarnya terkait fungsi massa otot
yang sedikit sekali mengalami perubahan. Selain itu, dibandingkan dengan
ureum, kreatinin hampir tidak dipengaruhi oleh intake protein (Baron, 1992).
Karena itulah dalam penelitian ini kadar kreatinin dijadikan parameter utama
yang akan dievaluasi untuk melihat kemampuan nefroprotektif dari ekstrak
etanol biji P.americana.Kemudian sebagai data pendukung akan diamati
gambaran histologis organ ginjal tikus.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
46
Pemberian praperlakuan ekstrak etanol biji P. americana dilakukan
selama enam hari berturut-turut secara peroral, kemudian pada hari ketujuh
tikus dipejani dengan karbon tetraklorida 2 mL/kgBB secara intraperitoneal.
Data kadar kreatinin kelompok kontrol nefrotoksin, kontrol olive oil, kontrol
ekstrak, serta kelompok dosis 350, 700 dan 1400mg/kgBB masing-masing
diolah menggunakan metode Kolmogorov-Smirnov untuk menentukan
distribusi data. Hasil pengolahan data menunjukkan bahwa data dari setiap
kelompok terdistribusi normal dan memiliki variansi yang homogen sehingga
pengolahan data dilanjutkan menggunakan analisis varian satu arah (One Way
ANOVA) untuk menentukan perbedaan antar kelompok perlakuan. Analisis
menggunakan variansi satu arah menunjukkan nilai signifikansi 0,000
(p<0,05). Nilai signifikansi yang diperoleh menunjukkan bahwa paling tidak,
terdapat perbedaan yang bermakna pada dua kelompok. Kemudian, dilanjutkan
dengan uji Scheffe untuk mengetahui kebermaknaan perbedaan antar
kelompok. Hasil pengujian berupa data Mean ± SE kadar kreatinin dengan uji
Scheffe dapat dilihat dalam tabel V dan gambar 8.
Tabel V. Kadar kreatinin serum tikus pada enam kelompok (n=5)Kelompok Perlakuan Mean (mg/dL) ± SE
I Kontrol negatif olive oil 2mL/kgBB 0,58 ± 0,02II Kontrol nefrotoksin karbon
tetraklorida 2mL/kgBB1,00 ± 0,05
III Kontrol EEPA 1400 mg/kgBB 0,56 ± 0,02IV EEPA 350 mg/kgBB + karbon
tetraklorida 2mL/kgBB0,44 ± 0,02
V EEPA 700 mg/kgBB + karbontetraklorida 2mL/kgBB
0,44 ± 0,02
VI EEPA 1400 mg/kgBB + karbontetraklorida 2mL/kgBB
0,64 ± 0,04
Keterangan : EEPA = Ekstrak Etanol biji P. americanaMean = Purata kadar kreatinin (mg/dL)SE = Standar Error
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
47
Gambar 8. Diagram batang rata-rata kadar kreatinin serum tikuspada enam kelompok
Tabel VI. Hasil uji Scheffe kadar kreatinin serum tikuspada enam kelompok
KelompokPerlakuan
Kontrolnefrotoksin
karbontetraklorida2mL/kgBB
KontrolOlive oil
2mL/kgBB
Kontrol EEPAdosis
1400mg/kgBB
EEPA350mg/kgBB
+ karbontetraklorida2mL/kgBB
EEPA700mg/kgBB +
karbontetraklorida2mL/kgBB
EEPA1400mg/kgBB
+ karbontetraklorida2mL/kgBB
Kontrolnefrotoksinkarbontetraklorida2mL/kgBB
BB BB BB BB BB
Kontrol Oliveoil 2mL/kgBB
BB TB TB TB TB
Kontrol EEPAdosis1400mg/kgBB
BB TB TB TB TB
EEPA350mg/kgBB +karbontetraklorida2mL/kgBB
BB TB TB TB BB
EEPA 700mg/kgBB +karbontetraklorida2mL/kgBB
BB TB TB TB BB
EEPA 1400mg/kgBB +karbontetraklorida2mL/kgBB
BB TB TB BB BB
Keterangan :BB = Berbeda bermakna (p<0,05) TB = Berbeda tidak bermakna (p>0,05)EEPA = ekstrak etanol biji P.americana
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
48
Hasil pengamatan gambaran histologis ginjal digunakan sebagai data
pendukung untuk menggambarkan keadaan ginjal secara mikroskopis pada
kelompok kontrol nefrotoksin, kontrol negatif olive oil, kontrol ekstrak etanol
biji P.americana, serta kelompok dosis 350, 700 dan 1400mg/kgBB. Hasil
pemeriksaan tersebut digambarkan pada tabel VII.
Tabel VII. Hasil pemeriksaan histologis ginjal pada keenam kelompokKelompok Perlakuan Gambaran Histologis Ginjal
Kontrol negatif olive oil Terdapat perubahan struktural berupa degenerasi hidropikepitel tubulus (DHET) dan intratubular hialin cast (ITC)
Kontrol Nefrotoksin Gambaran sel ginjal normal, tidak terdapat perubahanpatologik spesifik
Kontrol EEPA Terdapat degenerasi hidropik epitel tubulus (DHET) padasatu tikus sedangkan pada satu tikus lainnya gambaranhistologis ginjal normal (tidak ada perubahan patologikspesifik )
Dosis EEPA 350 mg/kgBB Terdapat degenerasi hidropik epitel tubulus (DHET) danperivaskulitis sedangkan pada satu tikus lainnyamenunjukkan gambaran histologis ginjal normal (tidak adaperubahan patologik spesifik )
Dosis EEPA 700 mg/kgBB Gambaran sel ginjal normal, tidak terdapat perubahanpatologik spesifik
Dosis EEPA 1400mg/kgBB Gambaran sel ginjal normal, tidak terdapat perubahanpatologik spesifik
Keterangan : EEPA = ekstrak etanol biji P.americana
1. Kontrol negatif olive oil dosis 2 mL/kgBB
Tujuan dilakukan pengukuran kadar kreatinin pada kelompok kontrol
negatif olive oil yang merupakan pelarut dari karbon tetraklorida adalah
membuktikan bahwa olive oil tidak memiliki potensi menyebabkan efek toksik
pada organ ginjal. Pemberian olive oil pada tikus dilakukan dengan dosis dan
rute yang sama dengan pemberian karbon tetraklorida yaitu dengan dosis
2mL/kgBB dan secara intraperitonial. Dengan demikian dapat dipastikan
bahwa kenaikan kadar kreatinin pada kelompok kontrol nefrotoksin adalah
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
49
murni disebabkan oleh pemberian karbon tetraklorida dan bukan disebabkan
oleh olive oil.
Analisis data kadar kreatinin pada kelompok kontrol negatif olive oil
diawali dengan menguji distribusi kadar kreatinin masing-masing pada jam ke
0 dan jam ke 48. Hasil pengujian memberikan hasil distribusi yang normal
pada masing-masing kelompok. Selanjutnya pengujian dilakukan dengan uji T
berpasangan untuk menentukan kebermaknaan dari kedua kelompok tersebut.
Kadar kreatinin pada kelompok kontrol negatif ini tergolong normal
yaitu pada range 0,2-0,8mg/dL (Malole dan Pramono, 1989).Berdasarkan
pengujian dengan uji T berpasangan, diperoleh hasil bahwa kadar kreatinin
tikus setelah pemejanan olive oil pada jam ke 0 berbeda bermakna dengan
kadar kreatinin pada jam ke 48 (tabel VIII dan gambar 10). Namun purata
kadar yang diperoleh masih masuk dalam range normal, sehingga perbedaan
kadar pada jam ke 0 dan 48 ini tidak menunjukkan adanya efek toksik olive oil
yang ditimbulkan terhadap ginjal.
Tabel VIII. Purata kadar kreatinin serum tikus setelah pemejananolive oil dosis 2mL/kgBB pada selang waktu 0 dan 48 jam (n=5)
Gambar 9. Diagram batang kadar kreatinin setelahpemejanan olive oil pada selang waktu 0 dan 48 jam
Selang waktu (jam) Mean± SE (mg/dL)
0 0,46 ± 0,0248 0,58 ± 0,02
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
50
Hasil gambaran histologis ginjal tikus pada kelompok kontrol negatif
olive oil dapat dilihat pada gambar 10 dan 11.
Gambar 10. Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompok perlakuan kontrol negatifolive oil yang mengalami Intratubular Hialin Cast (ITC)
Gambar 11. Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompok perlakuan kontrolnegatif olive oil yang mengalami Degenerasi Hidropik Epitel Tubulus (DHET)
Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompok perlakuan kontrol
negatif olive oil menunjukkan adanya perubahan pada sel-sel ginjal.
Perubahan tersebut berupa adanya intratubular hialin cast (Gambar 10) dan
degenerasi hidropik epitel tubulus (Gambar 11). Degenerasi hidropik ditandai
dengan adanya vakuola-vakuola berbatas kurang jelas pada sitoplasma sel-sel
tubulus. Adanya vakuola berisi cairan ini menyebabkan sitoplasma tampak
keruh (cloudy swealling). Perubahan jenis ini sifatnya masih reversibel (Reily,
Bulger, Ruth, dan Kriz, 2007). Perubahan yang terjadi pada pengamatan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
51
mikroskopis ginjal ini tidak menunjukkan kesesuaian dengan hasil pengukuran
kadar kreatinin, dimana kadar kreatinin pada kelompok kontrol negatif olive
oil adalah normal. Hal ini dapat disebabkan oleh faktor patologis dari hewan
uji tikus, dimana sebelum perlakuan pemberian olive oil dosis 2 mL/kgBB
telah dilakukan pengukuran kadar kreatinin jam ke 0, dan hasil yang diperoleh
adalah kadar kreatinin tikus tergolong normal. Hal ini didukung dengan hasil
kontrol nefrotoksin yang tidak menunjukkan adanya kerusakan struktural
akibat pemberian karbon tetraklorida, sehingga perubahan berupa degenerasi
hidropik dan intratubular hialin cast ini disebabkan oleh faktor patologis
individu hewan uji.
2. Kontrol nefrotoksin karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB
Pada penelitian ini dilakukan pengukuran kadar kreatinin serum pada
kelompok kontrol nefrotoksin karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB yang
bertujuan melihat pengaruh pemejanan karbon tetraklorida terhadap fungsi
ginjal tikus. Karbon tetraklorida memberikan efek toksik pada ginjal namun
sifatnya masih reversibel. Kadar kreatinin kelompok kontrol nefrotoksin ini
akan dibandingkan dengan kadar kreatinin kelompok perlakuan lainnya untuk
menganalisis efek proteksi ekstrak etanol biji P.americana terhadap organ
ginjal. Tikus pada kelompok kontrol nefrotoksin dipejani dengan karbon
tetraklorida secara intraperitonial lalu pada jam ke empat puluh delapan
setelah pemejanan, tikus diambil darahnya melalui sinus orbitalis untuk diukur
kadar kreatininnya dan diambil organ ginjalnya untuk pemeriksaan histologis.
Hasil pengukuran kadar kreatinin ini dapat dilihat pada tabel V, dimana
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
52
terdapat perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol nefrotoksin (1,00
± 0,05mg/dL) dan kelompok kontrol negatif olive oil (0,58 ± 0,02mg/dL). Hal
ini menunjukkan bahwa karbon tetraklorida menyebabkan penurunan fungsi
ginjal dalam mengekskresi kreatinin dari dalam tubuh tikus sehingga kadar
kreatinin dalam serum menjadi tinggi.
Hasil gambaran histologis ginjal tikus pada kelompok nefrotoksin
dapat dilihat pada gambar 12.
Gambar 12. Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompoknefrotoksin karbon tetraklorida 2mL/kgBB dengan kondisi ginjal yang normal
Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompok perlakuan kontrol
nefrotoksin dengan pemberian karbon tetraklorida 2 mL/kgBB menunjukkan
keadaan normal pada sel-sel ginjal (Gambar 12). Hal ini terlihat dari tidak
terdapatnya perubahan patologik spesifik pada glomerulus, tubulus dan
interstisium ginjal. Tidak ditemukannya perubahan secara struktural pada
organ ginjal ini dapat disebabkan kerusakan yang ditimbulkan oleh karbon
tetraklorida belum sampai menimbulkan respon histopatologi dan perubahan
struktural pada organ ginjal karena pemejanannya secara akut. Menurut
Donatus (2001), perubahan biokimia yang timbul akibat pemejanan terhadap
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
53
racun akan ditanggapi tubuh dengan berbagai respon biokimia. Perubahan
biokimia ini tidak langsung menunjukkan perubahan patologi organ dan
sifatnya reversibel (terbalikkan). Sifat terbalikkan ini berarti bahwa apabila
pemejanan senyawa toksik dihentikan maka efek toksik akan hilang.
Berdasarkan hal tersebut dapat dijelaskan kemungkinan penyebab tingginya
kadar kreatinin yang tidak disertai gambaran kerusakan pada sel-sel ginjal.
Kenaikan kadar kreatinin pada kelompok kontrol nefrotoksin ini menandakan
adanya perubahan dan respon biokimia akibat pemejanan karbon tetraklorida.
Namun dengan adanya perubahan biokimia tersebut belum sampai
menimbulkan perubahan struktural yang nyata pada pemeriksaan histologis.
3. Kontrol ekstrak etanol biji P. americana dosis 1400mg/kgBB
Pembuatan kontrol perlakuan ekstrak etanol biji P. americana dosis
1400 mg/kgBB bertujuan mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol biji
P.americana terhadap ginjal tikus yang dapat diamati melalui kadar kreatinin
serum tikus tanpa dilakukan pemberian karbon tetraklorida 2 mL/kgBB.
Perlakuan ini menggunakan dosis tertinggi dari ketiga peringkat dosis yaitu
1400 mg/kgBB, dengan tujuan hasil yang diperoleh sudah dapat
menggambarkan efek perlakuan ekstrak etanol biji P.americana dengan dosis
lebih rendah yaitu 350 dan 700mg/kgBB.
Purata kadar kreatinin kelompok kontrol ekstrak etanol biji
P.americana adalah sebesar 0,56 ± 0,02 mg/dL sedangkan pada kelompok
kontrol olive oil adalah 0,58 ± 0,02 mg/dL (tabel V). Hasil analisis dengan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
54
statistik menunjukkan bahwa ada perbedaan yang tidak bermakna antara kedua
kelompok ini (tabel VI). Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa dengan
pemberian ekstrak etanol biji P. americana selama enam hari berturut-turut dan
tanpa pemejanan karbon tetraklorida, kadar kreatinin masih tetap pada kadar
normal seperti yang terjadi pada kelompok kontrol olive oil. Namun apabila
dibandingkan antara kelompok kontrol ekstrak dengan kelompok kontrol
nefrotoksin, terdapat perbedaan yang bermakna (tabel VI).Berdasarkan hal ini
dapat disimpulkan bahwa pemberian ekstrak etanol biji P.americana tidak
memberikan efek toksik bagi ginjal dengan parameter kadar kreatinin.
Hasil pengamatan gambaran mikroskopis pada satu tikus kelompok
kontrol ekstrak etanol biji P.americana menunjukkan adanya perubahan berupa
degenerasi hidropik epitel tubulus (Gambar 11). Namun pada tikus lainnya
menunjukkan kondisi normal dengan tidak adanya perubahan patologis yang
teramati pada sel-sel ginjal (Gambar 12). Apabila dikaitkan dengan hasil
pengukuran kadar kreatinin yang normal, ada kemungkinan bahwa lokasi
pencuplikan dan pengamatan histologis yang dilakukan belum menggambarkan
keseluruhan kondisi ginjal. Ada kemungkinan bahwa pada lokasi lain pada
organ ginjal menunjukkan kondisi yang normal. Selain itu dapat pula dikaitkan
dengan kondisi patologis hewan uji yang kemungkinan telah mengalami
kerusakan pada sel-sel ginjalnya sebelum diberikan perlakuan ekstrak etanol
biji P.americana. Hal ini didasarkan pada hasil pengukuran kadar kreatinin
sebelum perlakuan kontrol ekstrak etanol biji P.americana adalah pada range
normal.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
55
4. Perlakuan ekstrak etanol biji P.americana dosis 350, 700 dan
1400mg/kgBB pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dosis 2
mL/kgBB
Efek nefroprotektif pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji
P.americana pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dapat dinilai dari
kemampuan ekstrak etanol biji P.americana dalam menurunkan kadar
kreatinin serum tikus dan penampakan histologis ginjal yang normal.
Berdasarkan hasil analisis secara statistik, tampak bahwa tidak ada hubungan
kekerabatan antara dosis dan respon yang ditimbulkan, dimana semakin besar
dosis perlakuan ekstrak etanol biji P.americana yang diberikan, tidak semakin
meningkatkan efek nefroprotektif. Hal ini menunjukkan bahwa semakin tinggi
dosis ekstrak etanol biji P.americana tidak diikuti dengan semakin besarnya
kemampuan proteksi terhadap ginjal.
Pada perlakuan kelompok dosis 350, 700 dan 1400mg/kgBB
menunjukkan nilai Mean ± SE kadar kreatinin berturut-turut adalah 0,44 ±
0,02; 0,44 ± 0,02 dan 0,64 ± 0,04 (tabel V). Purata kadar kreatinin pada ketiga
kelompok menunjukkan perbedaan yang bermakna secara statistik dengan
kelompok kontrol nefrotoksin (Tabel V dan VI). Namun apabila dibandingkan
dengan kelompok olive oil dan kelompok kontrol ekstrakberbeda tidak
bermakna. Hal ini menunjukkan bahwa ketiga dosis perlakuan ekstrak etanol
biji P.americana memiliki efek sebagai nefroprotektif sehingga dapat
menurunkan kadar kreatinin kembali normal.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
56
Ekstrak etanol biji P.americana pada dosis paling rendah (dosis
350mg/kgBB) sekalipun sudah menunjukkan kemampuan protektif terhadap
ginjal. Namun kenaikan dosis tidak disertai kenaikan kemampuan protektif,
dimana pada dosis 700mg/kgBB, efek yang ditimbulkan sama (konstan) dan
pada dosis 1400mg/kgBB mengalami penurunan. Pada dosis 1400mg/kgBB
terjadi penurunan efek proteksi, namun kadar kreatinin tikus pada kelompok ini
masih tergolong normal. Penurunan kemampuan proteksi pada pemberian dosis
1400 mg/kgBB diduga akibat aktivitas pro-oksidan yang ditimbulkan dari
penggunaan jangka panjang antioksidan dosis tinggi.
Pada perlakuan dosis 350 dan 700mg/kgBB persen nefroprotektif
yang dihasilkan konstan yaitu sebesar 133,3%. Hal ini dapat terjadi karena
adanya kejenuhan pada sistem transpor aktif pada proses absorbsi, kejenuhan
pada ikatan protein yakni pada proses distribusi obat dan sistem metabolisme
(Hakim, 2011). Kadar senyawa antioksidan yang dapat terabsorbsi atau
terdistribusi tidak mengalami peningkatan walaupun dosis yang diberikan
semakin tinggi. Dengan demikian efek proteksi yang dihasilkan menjadi
konstan.
Kelompok IV (350 mg/kgBB ) dan V (700mg/kgBB) menunjukkan
adanya perbedaan yang bermakna secara statistik dengan kelompok VI (dosis
1400mg/kgBB) (Tabel VI). Hal ini dapat disebabkan efek nefroprotektif pada
kelompok VI (dosis 1400mg/kgBB) tidak sebanding dengan kelompok IV dan
V. Berdasarkan hasil analisis kadar kreatinin pada ketiga peringkat dosis dapat
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
57
ditentukan dosis efektif nefroprotektif ekstrak etanol biji P.americana adalah
350mg/kgBB.
Hasil pemeriksaan mikroskopis organ ginjal pada kelompok perlakuan
ekstrak etanol biji P.americana pada dosis 700 dan 1400 mg/kgBB
menunjukkan kondisi sel-sel ginjal yang normal tanpa ada perubahan patologis
yang spesifik (Gambar 12). Hal ini mendukung data biokimiawi berupa kadar
kreatinin yang normal pada kelompok perlakuan dosis 700 dan 1400mg/kgBB.
Pada kelompok dosis 350mg/kgBB terdapat perubahan pada sebagian tikus
yaitu terjadi degenerasi hidropik (Gambar 11) dan perivaskulitis (Gambar 13).
Namun tikus lainnya menunjukkan kondisi sel-sel ginjal yang normal dengan
tidak ada perubahan patologi yang spesifik (Gambar 12).
Gambar 13. Gambaran mikroskopik ginjal pada kelompokperlakuan ekstrak etanol biji P.americana dosis 350 mg/kg
yang mengalami perivakulitis
Degenerasi hidropik ditandai dengan adanya vakuola dengan batas
kurang jelas pada sitoplasma serta sitoplasma tampak berkabut (cloudy
swealling). Perivaskulitis merupakan gambaran adanya infeksi disekitar
pembuluh darah. Hal ini ditunjukkan dengan adanya neutrofil di sekitar tepi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
58
pembuluh darah. Dua perubahan yang timbul pada kelompok dosis
350mg/kgBB ini bersifat individual yaitu terkait kondisi patologis hewan uji.
Hal ini didukung dengan hasil pemeriksaan histologis ginjal pada kontrol
nefrotoksin, dimana pemberian karbon tetraklorida tidak menimbulkan
perubahan struktural ginjal, sehingga dapat dikatakan bahwa perubahan berupa
degenerasi hidropik dan perivaskulitis disebabkan oleh kondisi patologis
individu hewan uji.
Hasil pengukuran kadar kreatinin dan analisis statistik serta hasil
pemeriksaan histologis organ ginjal pada enam kelompok perlakuan
menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji P.americana memiliki kemampuan
melindungi organ ginjal tikus yang terinduksi karbon tetraklorida. Efek
nefroprotektif ini dibuktikan dengan adanya perbedaan yang signifikan antara
kelompok kontrol nefrotoksin dengan kelompok perlakuan lainnya dan
gambaran histologis ginjal yang normal pada kelompok perlakuan.
Data gambaran histologis ginjal yang digunakan belum dapat
menggambarkan kondisi ginjal secara representatif. Hal ini disebabkan
pencuplikan terhadap bagian ginjal hanya dilakukan pada satu bagian. Karena
itulah dibutuhkan penelitian lebih lanjut untuk mengamati gambaran histologis
ginjal pada beberapa lokasi pencuplikan agar hasil yang diperoleh dapat
menggambarkan kondisi ginjal secara representatif.
Dalam tubuh, karbon tetraklorida akan mengalami proses metabolisme
oleh enzim sitokrom P450 khususnya isoenzim CYP2E1 sebagai agen
pereduksi dan mengkatalis adisi elekron yang mengakibatkan hilangnya satu
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
59
ion klorin sehingga terbentuk radikal bebas triklorometil (•CCl3) yang
merupakan metabolit reaktif. Radikal bebas triklorometil ini akan berubah
menjadi radikal bebas triklorometilperoksi (•OOCCl3) dengan adanya O2
(oksigen), dimana radikal bebas dalam bentuk ini menjadi lebih reaktif (Gregus
dan Klaaseen, 2001).
Menurut Tom, Fong, Woo, Prasongwatana, dan Boyde (1984),
bermacam-macam sistem enzim dan non enzim dihasilkan oleh sel untuk
menanggulangi kerusakan oksidatif yang disebabkan oleh Reactive Oxygen
species (ROS) dan radikal bebas. Namun ketika kerusakan oksidatif menjadi
sangat banyak, mekanisme pertahanan seperti antioksidan endogen menjadi
tidak cukup (Symonik, Czechowska, Stryjecka, Slomka, Madro, dan
Celinski, 2003). Tidak cukupnya antioksidan endogen yang dihasilkan tubuh
dalam menetralkan radikal bebas yang dihasilkan karbon tetraklorida
menyebabkan terjadinya gangguan fungsi ginjal yang tampak dari tingginya
kadar kreatinin pada tikus kelompok nefrotoksin. Karena itulah dibutuhkan
adanya antioksidan eksogen yang dapat menanggulangi dampak dari radikal
bebas yang dihasilkan oleh metabolisme karbon tetraklorida. Di dalam tubuh,
antioksidan eksogen tidak hanya mendonorkan elektron kepada radikal bebas,
namun juga berperan dalam meningkatkan sistem pertahanan dan memelihara
antioksidan endogen (Yordil, Pérez1, Matos dan Villares, 2012).
Pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji P.americana diduga
dapat memacu sintesis enzim-enzim yang berperan dalam mekanisme
pertahanan sebagai antioksidan endogen. Namun dalam penelitian ini belum
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
60
dapat ditentukan secara spesifik senyawa aktif dan mekanisme nefroprotektif
dari biji P.americana. Karena itulah perlu dilakukan penelitian lebih lanjut
untuk menentukan senyawa yang berperan dalam proteksi terhadap organ
ginjal dan bagaimana mekanismenya.
Arukwe, dkk. (2012) melaporkan kandungan fitokimia yang penting
ditemukan dalam biji P.americana yaitu kandungan saponin, tanin, flavonoid,
alkaloid dan fenol. Kemampuan proteksi yang dimiliki oleh ekstrak etanol biji
P.americana ini dapat disebabkan adanya kandungan antioksidan yang dapat
mendonorkan elektron kepada radikal bebas triklorometil dan triklorometil
peroksida yang dihasilkan dari metabolisme karbon tetraklorida. Kandungan
antioksidan ini menurut Malangngi, dkk. (2012) dapat disari dengan
menggunakan pelarut etanol dan menunjukkan kemampuan menetralkan
radikal bebas DPPH. Pemberian antioksidan dapat melindungi jaringan dari
pengaruh radikal bebas, reactive oxygen species(ROS), dan peroksidasi lipid
sehingga dengan cara demikian dapat memperlambat berbagai penyakit kronis
(Lai dkk, 2001 ; Gulcin dkk, 2003). Karena itulah dengan pemberian ekstrak
etanol biji P.americana jangka panjang yang dilakukan pada perlakuan dosis
350, 700 dan 1400mg/kgBB menunjukkan adanya penurunan kadar kreatinin
serum yang menunjukkan adanya kemampuan proteksi P.americana terhadap
ginjal yang dimungkinkan karena adanya mekanisme antioksidan.
D. Rangkuman Pembahasan
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian jangka panjang
ekstrak etanol biji P.americana pada tiga peringkat dosis yaitu 350, 700 dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
61
1400 mg/kgBB memberikan efek proteksi terhadap organ ginjal dengan
penurunan kadar kreatinin serum pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dan
hasil pemeriksaan histologis ginjal yang relatif normal. Kemampuan proteksi
ini dapat dilihat dengan hasil analisis statistik antara kelompok kontrol karbon
tetraklorida yang berbeda bermakna dengan kelompok dosis ekstrak etanol biji
P.americana. Berdasarkan hasil perhitungan terhadap nilai % nefroprotektif
dapat dilihat bahwa tidak terdapat kekerabatan antara dosis yang diberikan
dengan respon yang ditimbulkan. Hal ini dapat dilihat dari % nefroprotektif
yang diperoleh pada dosis 350, 700 dan 1400mg/kgBB berturut-turut adalah
133,3; 133,3; dan 85,7%.
Kadar kreatinin serum kelompok kontrol ekstrak etanol biji
P.americana dengan dosis 1400mg/kgBB menunjukkan perbedaan yang tidak
bermakna dengan kelompok kontrol negatif olive oil. Dengan demikian dapat
dikatakan bahwa ekstrak etanol biji P.americana tidak menimbulkan efek
toksik pada organ ginjal , dimana kadar kreatinin pada kelompok ekstrak tetap
pada keadaan normal seperti pada kelompok kontrol negatif olive oil. Hasil
pemeriksaan histologis sebagai data pendukung menunjukkan gambaran
mikroskopis ginjal yang relatif normal pada kelompok dosis 350,700 dan
1400mg/kgBB. Dosis yang paling efektif dalam menurunkan kadar kreatinin
adalah dosis 350 mg/kgBB.
Karbon tetraklorida yang diberikan pada tikus akan dimetabolisme
dan membentuk radikal bebas triklorometil dan triklorometil peroksida yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
62
bersifat reaktif terhadap organ ginjal. Radikal bebas ini menyebabkan
gangguan fungsi ginjal sehingga berpengaruh pada proses ekskresi kreatinin.
Kemampuan proteksi ektrak etanol biji P.americana terhadap organ
ginjal ini diduga karena adanya kandungan antioksidan yang dapat tersari pada
pelarut etanol 70%. Antioksidan ini dapat melindungi ginjal dengan
mekanisme mendonorkan elektron kepada radikal bebas triklorometil dan
triklorometilperoksida yang terbentuk dari hasil metabolisme karbon
tetraklorida, serta memacu dan memelihara sistem antioksidan endogen berupa
enzim-enzim superoksida dismutase, glutation peroksidase atau glutation
reduktase serta enzim katalase dan antioksidan non enzimatik seperti glutation
(GSH) dan transferin (Heinonen dan Albanes, 1994).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
63
BAB VKESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
1. Pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji P.americana dosis 350, 700
dan 1400mg/kgBB mempunyai efek nefroprotektif dengan penurunan kadar
kreatinin dan gambaran histologis ginjal yang normal pada tikus terinduksi
karbon tetraklorida .
2. Dosis efektif ekstrak etanol biji P.americana sebagai nefroprotektif pada
tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida adalah sebesar 350
mg/kgBB.
B. Saran
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang :
1. Senyawa aktif yang berperan dalam aktivitas proteksi dari biji P.americana
2. Mekanisme P.americana dalam memberikan efek proteksi pada ginjal.
3. Pencuplikan pada beberapa bagian ginjal untuk pemeriksaan histologis agar
diperoleh gambaran struktural ginjal yang representatif.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
64
DAFTAR PUSTAKA
Adelman, R.D., Spangler,W.L., Beasom,F., Ishizaki,G., Conzelman,G.M., 1981,Frusemide Enhancement of Neltimicin Nephrotoxicity in Dogs. The Journalof Antimicrobial Chemotherapy, 7(4), 433.
Anaka, O.N., Ozolua, R. I., Okpo, S.O., 2009, Effect of the Aqueous SeedExtract of Persea americana Mill. (Lauraceae) on the Blood Pressure ofSprague-dawley Rats, African Journal of Pharmacy and Pharmacology,3(10), 485-487.
Arukwe, U., Amadi, B., Duru, M., Agomuo,E., Adindu, E., Odika, P., Lele,K.C.,Egejuru,L., Anudike,J., 2012, Chemical Composition of Persea americanaLeaf, Fruit and Seed, IJRRAS11(2), 347.
Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2010, Acuan Sediaan Herbal, Edisi 1,Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, pp.6,7.
Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2005, Standarisasi Ekstrak TumbuhanObat Indonesia, Salah Satu Tahapan Penting dalam Pengembangan ObatAsli Indonesia, Edisi 6, Badan pengawasan Obat dan Makanan RI, pp 5.
Bakri, S., 2005. Deteksi dini dan upaya-upaya pencegahan progresifitas penyakigagal ginjal kronik, Jurnal Medika Nusantara, 26(3), 36-39.
Baron, D.N., 1992, A Short Textbook of Chemical Pathology, Edisi ke-4, EGC,Jakarta, pp. 113-116.
Cotran,R.S., Robbins., 1994, Pathologic Basis of Disease, Edisi 5, Saunders Co,USA, pp. 16 -35.
Cotran,R.S., dan Robbins., 1997, Basic Pathology, Edisi 6, Saunders Co, USA,pp. 439-441.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2000, Parameter Standar UmumEkstrak Tumbuhan Obat, Edisi I, Direktorat Jenderal Pengawasan Obatdan Makanan, Jakarta.
DerMarderosian, A., dan Beutler,J., 2002, The review of natural products: themost complete source of natural product information, Edisi 2, LippincottCo, pp. 63-64.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
65
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1995, Farmakope Indonesia,Edisi IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 46.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 1989,Materia Medika Indonesia, Edisi V, Departemen Kesehatan RepublikIndonesia, Jakarta, pp 538.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 1986,Sediaan Galenik, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 6,7-11.
Donatus, I. A., 2001, Toksikologi Dasar, Universitas Gadjah Mada Press,Yogyakarta, pp. 141,142.
Eaton, D.L., E.P, Gallogher., T.K, Bammler., K.L,Kunze., 1995, Role ofCytocrome P450IA2 in Chemical Carcinogenesis: Implication for HumanVariability in Expression and Enzyme Acticity, Pharmacogenetics, 5, 259-279.
Frankel, E. N., dan Meyer, A. S., 2000, The problems of using one dimensionalmethods to evaluate multifunctional food and biological antioxidants , FoodAgriculture, pp. 80, 1925–1928.
Gartner, J. P., Hiatt, J. L., 2007, Color Text Book of Histology, Edisi 3, ElsevierSaunders, Philadelphia , pp. 437, 439.
Gregus dan Klaaseen, C. D., 2001, Mchanism of Toxicity, in Klaaseen, C. D.,Cassarett and Doull’s Toxicology: the Basic Science Poisons, 6th edition,McGraw-Hill, New York, pp.57-64.
Gulcin, I., Oktay, M., Kirecci, E., Aslam, O., 2003, Screening of Antioxidant andAntimikrobial Activities of anise (Pimpinella anisum L.) seed extract, FoodChem, 83, 371-382.
Guyton, A.C., dan Hall,J.E., 2006, Buku Ajar Fisiologi Kedokteran, Edisi 11,Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp. 324-326.
Hakim, L., 2011, Farmakokinetik, Bursa Ilmu, Yogyakarta, pp 357.
Halliwell, B., dan Gutteridge, J., 1984, Oxygen toxycit, Oxygen radical,transition metals and disease, Biochem J, 219, 1-14.
Halliwell, B., 1990, How characterize a biological antioxidant, Free Rad. Res,Vol. 9, pp. 8.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
66
Halliwell, B. , dan Gutteridge,J., 1999, Free radical in biology and medicine,Edisi 3 , Oxford.
Hamer, R.A., dan Nahas, A.M., 2006, The burden of chronic kidney disease, BrMed J , 332:563–564
Haryanto, S., 2009, Ensiklopedi Tanaman Obat Indonesia, Palmall, Yogyakarta,pp. 25-26.
Heinonen,O.P., dan Albanes, D., 1994, The Effectof vitamin E and fJ-carotene onthe Incidence of Lung Cancer and Other Cancer in Male Smokers, J. Med.Edisi 330, pp. 1029-1031.
Hodgson, E., 2010, A textbook of ModernToxicology, Fourth Edition, JohnWiley&Sons,Inc, Canada,pp. 292- 294.
Huether, McCance, Brashers, dan Rote, 2008, Understanding Pathophysiology,Fourth Edition, Mosby Elseiver Inc, St. Louis, Missouri, pp 802.
Idris,S., Ndukwe,G.I., Gimba,C.E.,2009, Preliminary Phytochemical Screeningand Antimicrobial Activity of Seed Extracts of Persea america (AvocadoPear), Journal of Pure and Applied Science, 2(1), 173-176.
Ivor, J.B., dan Schneider, M.D., 2005,Learning from failure : congestive heartfailure in postgenomic age.review series introduction. J Clin Invest, 495-499.
Janakat, S., dan Al-Merie, H., 2002, Optimization of the dose and route ofinjection, and characterization of the time course of carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in the rat, J. Pharm. Tox. Methods, 48, 41-44.
Javier, G.R.C., David, M., María, J.A., Petri, K., and Mario, E., 2011, Avocado(Persea americana Mill.) Phenolics, In Vitro Antioxidant and AntimicrobialActivities, and Inhibition of Lipid and Protein Oxidation in Porcine Patties,J. Agric. Food Chem., 59, 5625–5635.
Junqueira, L.E., Carneiro, J., Kelley, R.O., 2005. Basic Histology, Edisi 11, McGraw-Hill, Boston, pp. 373-90.
Katzung, B. G., 2002. Farmakologi: Dasar dan Klinik, Buku 2. Edisi I, SalembaMedika, Jakarta , pp. 484-486.
Kosinska, A., Karamac,M., Estrella, I., Hernandez, T., Bartolome, B., danDykes,G., 2012, Phenolic Compound Profiles and Antioxidant Capacity ofPersea americana Mill Peels and Seed of Two Varieties,Journal ofAgricultural and Food Chemistry, 60, 4613−4619.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
67
Lai, L., Chou, S., Chao, W., 2001, Study of antioxidative activities of Hsian-tsao(Mesona procumbens Hemsl) leaf gum, J Agric Food Chem, 49, 963-968.
Lim, T.K., 2012, Edible Medical and Non-Medical Plants, Books 3, SpingersDordrecht Heidelbergh, London, New York, pp.79-81.
Malangngi, L., Sangi, M., Paendong, J., 2012, Penentuan Kandungan Tanin danUji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Buah Alpukat (Persea americanaMill), Jurnal MIPA UNSRAT , 1 (1) 5-10.
Malole, M.B.M., dan Pramono, C.S.U., 1989, Pengantar Hewan-HewanPercobaan di Laboratorium, pusat antars Universitas Bioteknologi IPB,Bogor.
Marlinda, M., Sangi,M., Wuntu, A., 2012, Analisis Senyawa Metabolit Sekunderdan Uji Toksisitas Ektrak Etanol Biji Buah Alpukat(Persea americanaMill,), Jurnal MIPA UNSRAT, 1(1) 24-28.
Manna,P., Sinha,M ., Sil, P.C., 2006, Aqueous extract of Terminalia arjunaprevents carbon tetrachloride induced hepatic and renal disorder, BMCComplementary Alternative Med, 6, 33.
McPhee, S., dan Ganong, W., 2007, Patofisiologi Penyakit: Pengantar Menujukedokteran Klinis, edisi 5, EGC, Jakarta.
Mescher,A.L., 2011, Histologi dasar Junqueira : teks &atlas, edisi 12, PenerbitBuku Kedokteran EGC, Jakarta, pp 325-334.
Moneim, A.E., dan El-Deib, K.M., 2012, The possible protective effects ofPhysalis peruviana on carbon tetrachloride-induced nephrotoxicity in malealbino rats, Life Science Journal, (3), 9.
Natarajan, S., Basivireddy, J., Ramachandran,A., Thomas,S., Ramamoorthy,P.,Pulimood, A., 2006,Renal damage in experimentally-induced cirrhosis inrats : role of oxygen free radicals, Hepatology, 43, 1248-1256.
Okwu,D.E., Okwu,M.E., 2004, Chemical composition of SpondiasmombiaLinnplant parts, J.Sustain Agric.Environ, 6, 140-147.
Owolabi, M.A., Jaja, S.I., Coker, H. A., 2005, Vasorelaxant action of aqueousextract of the leaves of Persea americanaon isolated thoracic rat aorta,Fitoterapia, 76, 567–573.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
68
Porth, C.P., Matfin,G., 2009, Pathophysiology : Concept of Altered Health States,Eight Edition, Lippincott Williams & Wilkins, USA, pp 862.
Price, S.A., and Wilson, L.M., 1985, Pathophysiology Clinical Concepts ofDisease Processes, diterjemahkan oleh Dharma, A., Penerbit KedokteranEGC, Jakarta, pp. 5-7.
Proseanet, 2012, Persea americanahttp://www.proseanet.org/prohati4/browser.php?keywords=persea+americana&do_search=Search+Now&pcategory=0, diakses tanggal 3 Maret2013.
Rechnagel, R.,Glende, E.,Dolak,J.,Waller,R., 1989, Mechanisms of carbontetrachlorida toxicity, J Pharmacol Exp Ther, 43,139-154.
Robbins dan Cotran, 2007, Pathologic Basis of Disease, Edisi 7, Elseiver Inc,New York, USA, pp. 976-981.
Rubenstein, D., Wayne, D., Bradley,J., 2007, Kedokteran Klinis, edisi keenam,Erlangga Medical Series, Jakarta.
Salah, W., Miller, N.J.,Pangauga, T., Bolwell,G.P., Rice, E., and Evans, C., 1995,Polyphenolic flavonols as scavengers of aqueous phase radicals aschainbreaking antioxidant, Arch. Biochem. Biorh,2, 339-346.
Stray, F.,1988, The national guide to medicinal herbs and plants, Tiger BooksInternational, London. pp.12-46.
Symonik,L. S., Czechowska,G., Stryjecka, Z.M., Slomka,M., Madro,A.,Celinski,K., dan Wielosz, M., 2003. Catalase, superoxide dismutase, andglutathione peroxidase activities in various rat tissues after carbontetrachloride intoxication. Journal of Hepatobiliary and Pancreatic Surgery,10, 309 – 315.
Timbrell, J. A. 2008, Principles of Biochemical Toxicology, Edisi 4, InformaHealthcare, New York, pp.308-311.
Tom,W.M., Fong, D., Woo,B., Prasongwatana,V., Boyde,T.R., 1984, Microsomallipid peroxidation and oxidative metabolism in rat liver. Chemical andBiological Interactions, 50, 361 – 363.
Underwood, 2000, Patologi Umum dan Sistematik, EGC, Jakarta, pp 639-80.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
69
Voigt, R., 1994, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, Edisi ke-5, Gadjah Mada
University Press,Yogyakarta.
Widmann, F.K., 1992, Tinjauan Klinis atas Hasil Pemeriksaan Laboratorium,edisi 9, EGC, Jakarta, pp 519.
Windrawati, T,G., 2013, Efek Hepatoprotektif Ekstrak Metanol:Air (50:50) DaunMacaranga Tanarius L. Terhadap Kadar Alt-Ast Serum Pada TikusTerinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, Universitas Sanata Dharma,Yogyakarta.
World Health Organization (WHO), 2002, Burden of disease project,http://www3.who.int/whosis/menu.cfm?path=evidence, diakses tanggal 19agustus 2013.
World Agroforestry Centre, 2002, Botanic Nomenclature to Agroforestry trees:Perseaamericana,http://www.worldagroforestry.org/sea/products/afdbases/af/asp/SpeciesInfo.asp?SpID=1274, diakses tanggal 3 Maret 2013
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
70
LAMPIRAN
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
71
LAMPIRAN
Lampiran 1. Foto serbuk biji P.americana
Lampiran 2. Foto ekstrak kental biji P.americana
Lampiran 3. Foto larutan ekstrak etanol biji P.americana
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
72
Lampiran 4. Surat pengesahan determinasi serbuk biji P.americana
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
73
Lampiran 5. Hasil Determinasi Serbuk Biji Persea americana Mill.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
74PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
75
Lampiran 6. Surat pengesahan Medical and Health Research Ethics
Committee (MHREC)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
76
Lampiran 7. Analisis statistik kadar kreatinin serum pada uji
penentuan waktu pencuplikan darah tikus setelah diinduksi
karbon tetraklorida 2mL/kgBB
NPar Tests
Descriptive Statistics
N Mean
Std.
Deviation
Minimu
m
Maximu
m
jam_0 4 .3500 .05774 .30 .40
jam_24 4 .5250 .09574 .40 .60
jam_48 4 1.0000 .14142 .90 1.20
jam_72 4 .4500 .05774 .40 .50
One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test
jam_0 jam_24 jam_48 jam_72
N 4 4 4 4
Normal Parametersa Mean .3500 .5250 1.0000 .4500
Std. Deviation .05774 .09574 .14142 .05774
Most Extreme
Differences
Absolute .307 .283 .260 .307
Positive .307 .217 .260 .307
Negative -.307 -.283 -.240 -.307
Kolmogorov-Smirnov Z .614 .567 .520 .614
Asymp. Sig. (2-tailed) .846 .905 .949 .846
a. Test distribution is Normal.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
77
Test of Homogeneity of Variances
Kreatinin
Levene Statistic df1 df2 Sig.
1.100 3 12 .387
Descriptives
Kreatinin
N Mean Std. Deviation Std. Error
95% ConfidenceInterval for Mean
Min MaxLowerBound
UpperBound
CCl4 dosis
2ml/kgBB jam
ke 0
4 .3500 .05774 .02887 .2581 .4419 .30 .40
CCl4 dosis
2ml/kgBB jam
ke 24
4 .5250 .09574 .04787 .3727 .6773 .40 .60
CCl4 dosis
2ml/kgBB jam
ke 48
4 1.0000 .14142 .07071 .7750 1.2250 .90 1.20
CCl4 dosis
2ml/kgBB jam
ke 72
4 .4500 .05774 .02887 .3581 .5419 .40 .50
Total 16 .5812 .27134 .06783 .4367 .7258 .30 1.20
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
78
Post Hoc Tests
Multiple Comparisons
KreatininScheffe
(I) kelompok (J) kelompokMean Difference
(I-J) Std. Error Sig.
95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke0
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke24
-.17500 .06693 .132 -.3916 .0416
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke48
-.65000* .06693 .000 -.8666 -.4334
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke72
-.10000 .06693 .546 -.3166 .1166
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke24
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke0
.17500 .06693 .132 -.0416 .3916
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke48
-.47500* .06693 .000 -.6916 -.2584
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke72
.07500 .06693 .743 -.1416 .2916
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke48
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke0
.65000* .06693 .000 .4334 .8666
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke24
.47500* .06693 .000 .2584 .6916
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke72
.55000* .06693 .000 .3334 .7666
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke72
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke0
.10000 .06693 .546 -.1166 .3166
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke24
-.07500 .06693 .743 -.2916 .1416
CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke48
-.55000* .06693 .000 -.7666 -.3334
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
ANOVA
Kreatinin
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups .997 3 .332 37.093 .000
Within Groups .108 12 .009
Total 1.104 15
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
79
Homogeneous Subsets
Kreatinin
Scheffe
kelompok N
Subset for alpha = 0.05
1 2
CCl4 dosis 2ml/kgBBjam ke 0
4 .3500
CCl4 dosis 2ml/kgBBjam ke 72
4 .4500
CCl4 dosis 2ml/kgBBjam ke 24
4 .5250
CCl4 dosis 2ml/kgBBjam ke 48
4 1.0000
Sig. .132 1.000
Means for groups in homogeneous subsetsare displayed.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
80
Lampiran 8. Analisis statistik kadar kreatinin serum pada enam kelompok
perlakuan ekstrak etanol biji P.americana setelah induksi karbon
tetraklorida 2 mL/kgBB
NPar Tests
Descriptive Statistics
N Mean Std. Deviation Minimum Maximum
kontrol_oliveoil 5 .5800 .04472 .50 .60
kontrol_karbontetraklorida 5 1.0000 .12247 .90 1.20
kontrol_ekstrak 5 .5600 .05477 .50 .60
dosis350 5 .4400 .05477 .40 .50
dosis700 5 .4400 .05477 .40 .50
dosis1400 5 .6400 .08944 .50 .70
One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test
kontrol_oliveoilkontrol_karbont
etraklorida kontrol_ekstrak dosis350 dosis700 dosis1400
N 5 5 5 5 5 5
Normal Parametersa Mean .5800 1.0000 .5600 .4400 .4400 .6400
Std. Deviation .04472 .12247 .05477 .05477 .05477 .08944
Most Extreme Differences Absolute .473 .300 .367 .367 .367 .349
Positive .327 .300 .263 .367 .367 .251
Negative -.473 -.207 -.367 -.263 -.263 -.349
Kolmogorov-Smirnov Z 1.057 .671 .822 .822 .822 .780
Asymp. Sig. (2-tailed) .214 .759 .510 .510 .510 .577
a. Test distribution is Normal.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
81
Oneway
ANOVA
kreatinin
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 1.071 5 .214 37.800 .000
Within Groups .136 24 .006
Total 1.207 29
Descriptives
kreatinin
N MeanStd.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval forMean
Minimum MaximumLower Bound Upper Bound
kontrol olive oil 5 .5800 .04472 .02000 .5245 .6355 .50 .60
kontrol nefrotoksin karbon
tetraklorida
5 1.0000 .12247 .05477 .8479 1.1521 .90 1.20
kontrol ekstrak EPA 5 .5600 .05477 .02449 .4920 .6280 .50 .60
dosis 350mg/kgBB 5 .4400 .05477 .02449 .3720 .5080 .40 .50
dosis 700mg/kgBB 5 .4400 .05477 .02449 .3720 .5080 .40 .50
dosis 1400mg/kgBB 5 .6400 .08944 .04000 .5289 .7511 .50 .70
Total 30 .6100 .20401 .03725 .5338 .6862 .40 1.20
Test of Homogeneity of Variances
kreatinin
Levene Statistic df1 df2 Sig.
.993 5 24 .443
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
82
Post Hoc Tests
Multiple ComparisonskreatininScheffe
(I) kelompok (J) kelompokMean
Difference (I-J) Std. Error Sig.
95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
kontrol olive oil kontrol nefrotoksin karbontetraklorida -.42000* .04761 .000 -.5923 -.2477
kontrol ekstrak EPA .02000 .04761 .999 -.1523 .1923
dosis 350mg/kgBB .14000 .04761 .166 -.0323 .3123
dosis 700mg/kgBB .14000 .04761 .166 -.0323 .3123
dosis 1400mg/kgBB -.06000 .04761 .897 -.2323 .1123
kontrol nefrotoksin karbontetraklorida
kontrol olive oil .42000* .04761 .000 .2477 .5923
kontrol ekstrak EPA .44000* .04761 .000 .2677 .6123
dosis 350mg/kgBB .56000* .04761 .000 .3877 .7323
dosis 700mg/kgBB .56000* .04761 .000 .3877 .7323
dosis 1400mg/kgBB .36000* .04761 .000 .1877 .5323
kontrol ekstrak EPA kontrol olive oil -.02000 .04761 .999 -.1923 .1523
kontrol nefrotoksin karbontetraklorida -.44000* .04761 .000 -.6123 -.2677
dosis 350mg/kgBB .12000 .04761 .309 -.0523 .2923
dosis 700mg/kgBB .12000 .04761 .309 -.0523 .2923
dosis 1400mg/kgBB -.08000 .04761 .726 -.2523 .0923
dosis 350mg/kgBB kontrol olive oil -.14000 .04761 .166 -.3123 .0323
kontrol nefrotoksin karbontetraklorida -.56000* .04761 .000 -.7323 -.3877
kontrol ekstrak EPA -.12000 .04761 .309 -.2923 .0523
dosis 700mg/kgBB .00000 .04761 1.000 -.1723 .1723
dosis 1400mg/kgBB -.20000* .04761 .016 -.3723 -.0277
dosis 700mg/kgBB kontrol olive oil -.14000 .04761 .166 -.3123 .0323
kontrol nefrotoksin karbontetraklorida -.56000* .04761 .000 -.7323 -.3877
kontrol ekstrak EPA -.12000 .04761 .309 -.2923 .0523
dosis 350mg/kgBB .00000 .04761 1.000 -.1723 .1723
dosis 1400mg/kgBB -.20000* .04761 .016 -.3723 -.0277
dosis 1400mg/kgBB kontrol olive oil .06000 .04761 .897 -.1123 .2323
kontrol nefrotoksin karbontetraklorida -.36000* .04761 .000 -.5323 -.1877
kontrol ekstrak EPA .08000 .04761 .726 -.0923 .2523
dosis 350mg/kgBB .20000* .04761 .016 .0277 .3723
dosis 700mg/kgBB .20000* .04761 .016 .0277 .3723*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
83
Homogeneous Subsets
kreatinin
Scheffe
kelompok N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3
dosis 350mg/kgBB 5 .4400
dosis 700mg/kgBB 5 .4400
kontrol ekstrak EPA 5 .5600 .5600
kontrol olive oil 5 .5800 .5800
dosis 1400mg/kgBB 5 .6400
kontrol karbon tetraklorida 5 1.0000
Sig. .166 .726 1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
84
Lampiran 9. Analisis statistik kadar kreatinin serum pada perlakuan kontrol
negatif olive oil dosis 2 mL/kgBB
NPar Tests
Descriptive StatisticsN Mean Std. Deviation Minimum Maximum
kreatinin_0 5 .4600 .05477 .40 .50kreatinin_48 5 .5800 .04472 .50 .60selisih 5 .1200 .04472 .10 .20
One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test
kreatinin_0 kreatinin_48 selisih
N 5 5 5
Normal ParametersaMean .4600 .5800 .1200
Std. Deviation .05477 .04472 .04472
Most Extreme DifferencesAbsolute .367 .473 .473
Positive .263 .327 .473
Negative -.367 -.473 -.327
Kolmogorov-Smirnov Z .822 1.057 1.057
Asymp. Sig. (2-tailed) .510 .214 .214
a. Test distribution is Normal.
T-TestPaired Samples Statistics
Mean N Std. Deviation Std. Error Mean
Pair 1 kreatinin0 .4600 5 .05477 .02449
kreatinin48 .5800 5 .04472 .02000
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
85
Paired Samples Test
Paired Differences
t df Sig. (2-tailed)Mean Std. Deviation
Std. Error
Mean
95% Confidence Interval of the
Difference
Lower Upper
Pair 1 kreatinin0 -
kreatinin48-.12000 .04472 .02000 -.17553 -.06447 -6.000 4 .004
Lampiran 10.Perhitungan efek nefroprotektif (%)
Rumus perhitungan efek nefroprotektif :( ) – (( ) )x100%
Perhitungan efek nefroprotektif kreatinin serum :
1. Perlakuan dosis 350mg/kgBB (po)+ induksi karbon tetraklorida := (1,00 − 0,58) − (0,44 − 0,58)1,00 − 0,58 100%=
, ( , ), 100 % = 133,3%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
86
2. Perlakuan dosis 700mg/kgBB (po) + induksi karbon tetraklorida :(1,00 − 0,58) − (0,4400 − 0,58)1,00 − 0,58 100% = 133,3%3. Perlakuan dosis 1400 mg/kgBB (po) + induksi karbon tetraklorida :(1,00 − 0,58) − (0,6400 − 0,58)1,00 − 0,58 100% = 85,7%
Lampiran 11. Perhitungan penetapan peringkat dosis ekstrak etanol biji
P.americana kelompok perlakuan
Penetapan peringkat dosis didasarkan pada :
Bobot tikus paling besar = 250 gram
Konsentrasi ekstrak etanol biji P.americana yang dapat dimasukkan dan
dikeluarkan melalui spuit oral yaitu 7% atau 70mg/ml
Volume maksimal pemberian oral yaitu 5 mL
Maka dosis tertinggi dapat ditentukan sebagai berikut :
BB x D = C x V
Berat badan (kg) x dosis(mg/kgBB) = konsentrasi (mg/ml) x volume pemberian
(ml)
0,250 kg x D = 70mg/mL x 5 ml
D = 1400 mg/kgBB
Dosis rendah dan dosis tengah ditentukan dengan menurunkan dua kelipatan
dari dosis tertinggi sehingga diperoleh dosis 700dan 350mg/kgBB
Perhitungan konversi dari tikus 200 gram ke manusia 70kg = 56,00
Dosis untuk tikus = 1400mg/kgBB = 1,400 g/kgBB
= 0,0014 g/gBB tikus
= 0,2800 g / 200gBB tikus
Dosis untuk manusia 70 kg = 56,00 x 0,2800 g
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
87
= 15,68 g
Dosis untuk manusia 50 kg =, 50
= 11,2 g
Lampiran 12. Perhitungan konversi dosis untuk manusia
Angka konversi tikus 200 g ke manusia 70kg = 56,00
Maka penetapan dosis ekstrak etanol biji P.americana sebagai berikut :
Ekstrak etanol biji P. americana dosis 350 mg/kgBB atau 0,350 g /kgBB
tikus:
0,350 g /kgBB = 0,00035 g/gBB = 0,07 g/ 200gBB
maka dosis konversi untuk manusia 70kgBB = 0,07 g/200gBB x 56,00
= 3,92 g /70kgBB
= 2,8 g /50kgBB
Ekstrak etanol biji P. americana dosis 700mg/kgBB atau 0,700 g /kgBB tikus:
0,700 g /kgBB = 0,0007 g/gBB = 0,14 g/ 200gBB
maka dosis konversi untuk manusia 70kgBB = 0,14 g/200gBB x 56,00
= 7, 84 g /70kgBB
= 5,6 g /50kgBB
Ekstrak etanol biji P. americana dosis 1400mg/kgBB atau 1,4 g /kgBB tikus :
1,4 g /kgBB = 0,0014 g/gBB = 0,28 g/ 200gBB
maka dosis konversi untuk manusia 70kgBB = 0,28 g/200gBB x 56,00
= 15,68 g /70kgBB
= 11,2 g /50kgBB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
88
Lampiran 13. Penetapan kadar air serbuk biji P.americana
Penetapan kadar air serbuk dilakukan dengan metode gravimetri
menggunakan alat moisture balance. Pemanasan serbuk biji P.americana
dilakukan pada suhu 1050 C selama 15 menit.
Bobot Replikasi I Replikasi II Replikasi III
Sebelum pemanasan 5,000 5,000 5,000
Setelah pemanasan 4,624 4,636 4,630Kadar air 7,52% 7,28 % 7,40 %
Rata-rata kadar air 7,40 %
Kadar air = − ℎ 100%Replikasi I =
, ,, 100% = 7,52%Replikasi II =
, ,, 100% = 7,28 %%
Replikasi III =, ,, 100% = 7,40 %
Rata-rata kadar air dari ketiga replikasi =
=, % , % , %
= 7,40 %Kadar air serbuk adalah 7,40 %. Kadar air ini sudah memenuhi persyaratan kadar
air serbuk yang baik yaitu kurang dari 10%.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
89
Lampiran 14. Hasil rendemen ekstrak etanol biji P.americana
Tabel IX. Hasil rendemen ekstrak etanol biji P.americana
Cawan 1 Cawan 2 Cawan 3 Cawan 4 Cawan 5
Cawan kosong 61,07 61,68 66,74 69,83 59,42
Cawan + ekstrak 65,38 66,45 71,10 74, 02 64,05
Rendemen 4,31 4,77 4,36 4,19 4,63
Rata-rata rendemen =
=, , , , ,
= 4,45 gram
% rendemen ektrak kental =, 100%
= 18, 08 %
Lampiran 15. Bobot pengeringan ekstrak etanol biji P.americana hinggaterbentuk ekstrak kental
Tabel X. Pengeringan ekstrak etanol biji P.americana hingga terbentuk ekstrakkental
0 2 4 6 8 10
08.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.0061,07 121,62 90,73 75,68 66,72 66,45 66,4561,68 124,03 93,7 76,3 65,59 65,38 65,3866,74 118,079 89,72 75,09 74,06 71,1 71,1
Berat cawankosong
Jam ke
beratekstrak(gram)
Lampiran 16. Pengukuran validitas dan reliabilitas
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
90
Tabel XI. Hasil validitas dan reliabilitas
Serum kontrol (range 1,09-1,71mg/dL)
x (mg/dL) x- (x- )2
1,7
1,68
0,02 0,00041,7 0,02 0,00041,7 0,02 0,00041,7 0,02 0,00041,6 -0,08 0,0064
Σ = 0,008
SD =( )( )
=,
= 0,04
Range x ± SD
= 1,68 ± 0,04= 1,64- 1,72
CV =
=,, 100%
= 2,38 %
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
91
Lampiran 17. Surat Pengesahan Hasil Pemeriksaan Histologis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
92PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
93PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
94
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi dengan judul “Efek NefroprotektifPemberian Jangka Panjang Ekstrak Etanol Biji Perseaamericana Mill. terhadap Kadar Kreatinin dan GambaranHistologis Ginjal pada Tikus Terinduksi KarbonTetraklorida” memiliki nama lengkap Rotua WinataNopelia Silitonga. Penulis lahir di Jayapura pada tanggal27 November 1991, merupakan anak pertama dari tigabersaudara. Pendidikan formal yang pernah ditempuhyaitu TK YPPK Kristus Raja (1996-1998), SD YPPK
Kristus Raja (1998-2004), SMP Negeri 1 Jayapura (2004-2007), SMA Negeri 5Jayapura (2007-2010), kemudian melanjutkan pendidikan di Fakultas FarmasiUniversitas Sanata Dharma Yogyakarta di tahun 2010. Semasa menempuhkuliah, penulis aktif dalam berbagai kepanitiaan. Penulis pernah menjadi anggotadivisi perlengkapan kegiatan Hari Anti Tembakau (2011), koordinatorkesekretariatan acara TITRASI (2011), bendahara dalam kegiatan Desa Mitra(2012). Penulis pernah menjadi asisten praktikum Botani Farmasi (2012 dan2013).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
Recommended