View
7
Download
1
Category
Preview:
Citation preview
Biološki aspekti sudskomedicinske
genetike
Malo bazične biologije
◼ Telo je izgrađeno od ćelija
◼ U našem telu ima 30x1012 ćelija.
◼ Najviše je crvenih krvnih zrnaca (25x1012)
2,5 x 1013
2,5 kg
1,4x1012
13 kg
3,3x1012
10 kg 20 kg
crvena krvna zrnca trombociti masne ćelije drugo mišići
DNK se nalazi u hromozomima
◼obmotana oko proteina i višestruko uvijena
DNK je smeštena u hromozomima
1013 ćelija7 pikograma DNK po ćeliji
DNK je sastavljena od nukleotida
DNK je dvolančani molekul
◼ lanci su “polarni” : imaju 3’ i 5’ kraj
◼ naspram 3’ kraja jednoglanca je 5’ kraj drugog
◼ lanci sadrže “komplementarne” nukleotide:
– naspram A je T
– naspram G je C
Dve vrste hemijskih veza u DNK
◼ Fosfodiesterke veze – između susednih nukleotida
◼ Vodonične veze– između naspramnih
(komplementarnih) nukleotida
Pod dejstvom temperature DNK se “topi”- DENATURACIJA
◼ dolazi do raskidanja veza između naspramnih nukleotida
◼ nastaju jednolančani molekuli
Raskidanje fosfodiestarskih veza
U jednom lancu: nema veze
U oba lanca: FRAGMENTACIJA
Na više mesta: DEGRADACIJA
DNK je negativno naelektrisana
ravnomerno, duž čitave dužine oba lanca
DNK polimerizacija je:
usmerena u 5’ → 3’ smeru
semikonzervativnau novosintetisanom molekulu jedan lanac je stari, a jedan novi.
Malo bazične genetike
✓DNK nasleđujemo po pola od svakog roditelja
✓Naša DNK je identična u svim tkivima
✓DNK se ne menja tokom života(ni nakon smrti)
Svi smo genetički jedinstveni
◼ Humani genom je dugačak 3.2 milijarde nukleotida
◼ 99.9% DNK je identična među ljudima
◼ Malo matematike0.1% od 3 mldrd ≈ nekoliko miliona nukleotida
Osnovna genetička terminologija
◼ Genski marker ≈ genki lokus ≈ gen
– Tačno određeni deo molekula DNK na hromozomu
◼ Aleli
– Različite varijante gena koje mogu postojati
◼ DNK profil
– Kombinacija alela u nizu gena kod neke osobe
DNK: polimorfizmi
Polimorfizam sekvence
adenin
timin
guanin
citozin
DNK polimorfizmi: nastavak
UzastopnoPonovljene Sekvence2-7 bp=STR10-100=VNTRPolimorfizam broja ponovaka
Short Tandem Repeat (STR) Markeri
TCCCAAGCTCTTCCTCTTCCCTAGATCAATACAGACAGAAGACAGGTGGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATATCATTGAAAGACAAAACAGAGATGGATGATAGATACATGCTTACAGATGCACAC
= 12 GATA ponovaka (“12” oznaka alela)
short tandem repeat
7 repeats
8 repeats
9 repeats
10 repeats
11 repeats
12 repeats
13 repeats
Broj ponovaka može da varira između ljudi ali ne i unutar jedne osobe
An accordion-like DNA sequence that occurs between genes
Malo genetike
◼ U sudskomedicinskoj genetici se analizira 15-25 gena
◼ Isti geni kod različitih ljudi postoje u različitim varijantama- belezima (alelima)
◼ Svaki od petnaestak gena postoji u po desetak varijanti
◼ Svaki gen postoji u po dve kopije (od majkei od oca).
Savremene metode u molekularnoj genetici
Koraci u veštačenju biološkog materijala
Krim. tehnika
• Uočavanje, dokumentovanje, fiksiranje
• Izuzimanje, pakovanje i dostavljanje
Analiza
• Izolovanje DNK, umnožavanje gena
• Genotipizacija (utvrđivanje DNK profila)
Veštačenje
• Upoređivanje DNK profila
• Biostatistička analiza i interpretacija
Podela tehnikaAnalitičke tehnike
Izolovanje DNK
Umnožavanje DNK
Enzimska digestija DNK
Rekombinovanje DNK
Kloniranje DNK
Sekvenciranje DNK
Hibridizacija DNK
Preparativne tehnike
Centrifugiranje
Elektroforeza
PCR amplifikacija
Elektroforeza
Upoređivanje
Zaključivanje
Korišćenje forenzički validiranih hemikalija
Utvrđivanje dužine amplifikovanih fragmenata
Imenovanje alela
Sa referentnim uzorkom ili
bazom
Frekvencionistički i probabilistički pristup
Genotipizacija
Izolacija DNK
Dobijanje velike količine čiste DNK
Osnovni koraci u
savremenoj
DNK analizi
Recommended