Taxonomía Fungal La clasificación fungal es nueva y ha cambiado Clasificación, según Bar (1988):...

Taxonomía Fungal

La clasificación fungal es nueva y ha cambiado

Clasificación, según Bar (1988):División EumycotaSubdivisión MastigomycotaClase ChytridiomycetesOrden SpizellomycetalesFamilia Neocallimasticaceae

Género

El género es distinguido por la morfología Thallus: Monocéntrico y policéntrico. Rizoide: Filamentos y bulbos. Zoosporas: Uni- o Multiflageladas

Todos los géneros rizoides tiene filamentos, excepto las especies caecomyces.

(Trinci et al. 1994)

Especies

Son separadas por sus características morfológicas y estructurales.

Las Piromonas y Sphaeromonas se asumía que eran protozoarios por lo que fueron cambiados a:

Piromyces y Caecomyces

(Trinci et al. 1994)

Fungis Policéntricos

Neocallimastix joyonii (Breton et al. 1989) Orpinomyces joyonii (Trinci et al.

1994) debido asu patrón de crecimiento policéntrico

Ruminomyces y Anaeromyces tienen características similares al monocéntrico

Aislamiento y Enumeración Han sido aislados de: bovinos, ovinos, caballos, canguros y elefantes

En heces y tractos gastrointestinales y fluido ruminal

Orpinomyces fue aislado en charcos y pasturas de las vacas

La dieta animal tiene efectos sobre las poblaciones fungales

(Trinci et al. 1994)

La biomasa fungal es difícil determinarLa estimación:método gravimétrico con

digestión enzimática con quitinaEl conteo (103 – 107 ml) no provee una

adecuada estimación fungal Para el tamaño de las poblaciones

fungales se han utilizado diluciones en agar y otra soluciones

Condiciones para aislamiento Anaerobiosis pH de 6.5 a 6.7 T° de 39°

Materiales para aislamiento Bufer: Carbonato/Fosfato Fluido ruminal Resazurina (indicador redox) Carbohidratos Antibióticos

Almacenamiento

T° de 39° CFibra en agarNitrógeno líquido DimetilsulfóxidoEnfriamiento a 1.5°C Glicerol

Cultivos y Almacenamiento Mantenidos por transferencia frecuente ( 2 a 7 días). Algunas especies 24 a 48 horas. Otros Intervalos semanales. Isolados monocéntricos – 2 a 3 días. Isolados policéntricos – semanalmente. Mantenimiento largo en tiempo – 39 oC en fibra Sisal

embebida en agar. En nitrógeno líquido con dimetilsulfoxido como

crioprotector para “fungi” anaeróbico sirve también para largo tiempo.

Preservación 1.5 oC por minuto hasta -70 oC con glicerol como crioprotector.

Resucitados a 39 oC.Restos de esporas “fungi” ruminales, Esporas anaeróbicas de heces.Inducidas in vitro, no germinadas in

vitro (Wubah et al., 1991b).

proceso de manipulación de formación y germinación de esporas – método de conservación.

“Fungi” anaeróbicos no son listados en la ATCC (American Type Culture Collection) como “Fungi” filamentosos o Protistas.

6. Protozoarios Ruminales6.1 Introducción

Basados en el tamaño relativo Primeros microorganismos ser descubiertos Muy móviles y viables en el rúmen y retículo Inmóviles y aparentemente desintegrados en

el omaso y abomaso. Los Protozoarios celulares no identificados en

intestino delgado. Utilizados como alimento.

Explicación de SobrevivenciaEspecificidad del hábitat, esencialidad

para el huésped.Defaunación.Alta especialización al rúmen o hábitat.Actividades metabólicas (relación

bacterias y “fungi”).

Protozoas Flagelados. Baja población Zoosporas Fúngicas (decrecimiento) Limitados Esquema de Clasificación ha cambiado

algunas veces en 30 años. Terminología difícil Referencia a “Holotrichs” y “Entodiniomorphs”

Papeles en el rumen:

Clasificación de efectos

a) Medio ambiente del rumen

b) Componentes de la sangre

c) Metabolismo y digestión en el rumen

d) Sobre el animal

Fermentación de carbohidratos solubles

Holoctrichs como principal degradador

Entodinromorphs

Procurar incrementar la población de Holotrichs

Digestión de almidónEntodiniomorphs como principales

degradadoresIsotrichaUso como fuente de energía o

síntesis intracelular de polisacáridos Principales productos

Digestión de Carbohidratos Estructurales

Actividad celulolítica (orden entodiniomorfos) Epidinium caudatum, Eudiplodium maggii,

Ostrocadinium dilobum y varias Spp Entodinium

Holotricha Enzimas que degradan hemicelulosa (10

géneros, entodiniomorfos, subfamilias Diplodiniinae y Ophryoscoliceneae.

Baja actividad Orden holotricha

Monosacáridos, disacáridos y oligosacáridos

Spp de protozoarios poseen la hidrolasa glicosidica

Pectina es depolimerizada por los protozoarios (metanol, ac. Galacturónico o poligalactoranidos)

Digestión de la Proteína

Los entodiniomorfos digieren la caseína insoluble

Son importante en la degradación de proteínas insolubles

Sp isotricha (caseína soluble e insoluble)

Mayor actividad proteolítica en el citoplasma

Absorción y digestión de bacterias

-Gutierrez 1955. Isotricha. No se desarrolla sin bacterias.

-Probablemente bacterias proveen mayoría de N para crecimiento.

-Inhabilidad para biosintetizar o interconvertir aminoácidos (E. caudatum.

-Pérdida gradual de enzimas. -Compuestos preformados por crecimiento de

bacterias -Protozoarios pueden “absorber” < 1% de total

bacterial / minuto concentrados.

Productos de digestión de bacterias:Aminoácidos , 50% retenido

VFA Amonia

Amoniácidos bacterianos en el animal, digestibilidad de proteina protozoaria.

Limitado pasaje ruminal. Relacionado con normal después de

alimentación.

Cambios en población de protozoarios

Establecimiento de poblaciones:

Contacto directo en etapas jóvenes.

Presencia en la boca de la madre

Saliva en las plantas

Aerosoles entre animales

Variación en el horario

Diferencias entre entodiniomorfos y holotricosAlimentación 1 / día, entodiniomorfos 5-6

horas / gradual 20 a 22 hrs.Holotrichs, pico momentos antes o después

de alimentación / Entodiniomorfos Diluciones asociadas a

alimentación. Y cambios en crecimiento celular.

Migraciones celulares:Paredes rumen, retículo y porción

ventral.

OTROS FACTORES QUE AFECTAN LA CONCENTRACION DE PROTOZOARIOS

DIETA forraje : concentrado 20 – 40 % de concentrado maximiza la Ι

protozoariosΙ 60 % entodinium

El efecto del concentrado se puede disminuir controlando el consumo

FRECUENCIA DE ALIMENTACION

GEOGRAFICAS i.e. Polyplastron multivesiculatum

VARIACION ANIMAL i.e. Ophryoscolecidae y Caloscolex

DEFAUNACIÓN

Se han usado varios tipos de procedimientos paraobtener ruminantes libre de protozoarios ciliados.La manera más eficaz y simple de obteneranimales libres-protozoario es aislarlosinmediatamente de todos y de otros rumiantesdespués del nacimiento u obtenidos porhisterectomía normal.

Defaunacion se han establecido e intentado por medios

físicos y dietéticos:

Físicos: Involucra el vaciando y lavado del rumen, mata

los protozoarios en los volúmenes y los devuelve al

“protozoario-libre” del rumen.

Dietéticos: Han ido de inanición y han alimentado con

pura leche, alimentando hidratos de carbono altos para

inducir acidosis apacible y los compuestos del antiprotozoal

alimentando como sulfato cobrizo, ácidos, o surfactantes.

El aislamiento al nacimiento ha sido criticado en basea las mezclas de las poblaciones bacterianas yfungicas no desarrollan en el animal protozoario-libre. La efectividad de otras técnicas deldefaunación es inconstante, y los compuestosdiferentes mataban a los protozoarios pueden tenerefectos adversos en el animal, en losmicroorganismos de otros, o de ambos

ANTIBIÓTICOS

Se han usado los antibióticos ionofosforados, principalmente la

monensin y lasalocid, ampliamente como promotores del

crecimiento para el ganado de carne y corderos. Dos de estos

compuestos tienen un efecto tóxico en los ciliados del rumen y han

disminuido su concentración notablemente en volúmenes del rumen

. Sus niveles de efectividad han reducción en números de

protozoarios. La mayoría de los antibióticos comúnes, a este

niveles son bactericida, no son tóxico a los protozoarios del rumen.

Clasificación de los ProtozoariosRuminales

Identificación de Protozoos ruminales

Como nombrar las partes de un protozoo.

Parte bucal hacia delante se le marca a las 12 hrs.

La parte mas cercana al observador se le denomina superficie superior y la contraria se le denomina superficie inferior.